付康；程首超；刘收；陈孝平；陆婕；柳欣；陈正望
目的 研究大鼠移植动脉新生内膜平滑肌细胞Sry基因的表达,探讨骨髓细胞在移植物动脉硬化中的作用.方法 采集雄性Wistar大鼠的骨髓细胞,将其移植到经γ射线照射预处理的雌性Wistar大鼠体内,制备嵌合体大鼠;4周后建立大鼠腹主动脉移植慢性排斥反应模型,分为4组:雌性同系移植组、雌性异系移植组、雄性异系移植组、嵌合体异系移植组.术后8周,制备移植动脉组织标本进行病理组织学观察,分析移植动脉硬化情况;用抗平滑肌α-肌动蛋白(α-SMA)单抗进行SABC法免疫组化染色,检测移植动脉新生内膜细胞α-SMA的表达情况;采用显微切割技术收集移植动脉冰冻切片新生内膜平滑肌细胞,用PCR检测其Sry基因的表达,分析移植动脉新生内膜平滑肌细胞是否来源于骨髓细胞.结果 异系移植组移植动脉新生内膜中α-SMA表达阳性平滑肌细胞大量增生,致动脉内膜显著增厚,血管管腔明显狭窄;动脉壁新生内膜面积及新生内膜/中膜面积比均显著高于同系移植组(P＜0.01),而异系移植组之间差异无显著性意义(P＞0.05).PCR扩增显示,嵌合体异系移植组和雄性异系移植组一致,在相对分子量为225 bp处均有一条特异性扩增条带,而雌性异系移植组则无相应的核酸扩增条带;结果提示移植物动脉新生内膜平滑肌细胞来源于骨髓细胞.结论 在动脉移植慢性排斥反应中,骨髓细胞分化为血管新生内膜平滑肌细胞,参与移植物动脉硬化的发生和发展.
作者：宋自芳；郑启昌；李伟；舒晓刚；尚丹；管思明；胡青钢 刊期： 2007年第05期
目的 探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂Celebrex对人胆囊癌GBC-SD细胞系血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 采用RT-PCR、免疫细胞化学技术以及Western blot联合检测Celebrex对GBC-SD细胞系VEGF mRNA和蛋白表达的影响,并观察量效和时效关系.结果 随着药物浓度的增加(0、40、80、120、160 μmol/L)和作用时间的延长(0、12、24、48、72 h),VEGF mRNA和蛋白表达均呈现出了相应的下降趋势.结论 Celebrex可以有效地抑制人胆囊癌GBC-SD细胞系VEGF的表达.
作者：胡均；王敏；程旋；刘文松；陈敏；秦仁义 刊期： 2007年第05期
目的 构建缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1alpha,HIF-1α)基因的表达质粒,转染肺癌细胞系A549后,观察其对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)敏感性的变化.方法 采用RT-PCR方法扩增A549细胞内HIF-1α基因功能区片段,克隆至真核表达载体pcDNA3上,经脂质体Lipofectamine TM2000转染A549细胞后,G418筛选.Western blot检测转染前后多药耐药蛋白(MDR1)的表达变化.加入化疗药物5-Fu(0.1 mg/ml),用生长曲线观察A549细胞的生长情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡指数,用Western blot检测Caspase3的活性变化.结果 转染HIF-1α后,MDR1表达上调.转染HIF-1α组的细胞增殖抑制、凋亡指数、Caspase3的活性均低于单独加5-Fu组.结论 HIF-1α能够增加肺癌细胞A549凋亡的阈值,从而增加细胞对化疗药物的耐受性.
作者：张惠兰；郦俊；张珍祥；徐永健 刊期： 2007年第05期
目的 调查武汉市社区获得性腹泻患者中志贺菌感染和流行状况,分析志贺菌血清型分布及耐药性,为社区获得性腹泻治疗和该菌的基因分型提供客观依据.方法 菌株来自2004年夏秋季武汉市4所大型医院门诊腹泻患者的粪便标本;药物敏感试验采用琼脂稀释法和纸片扩散法;结果分析采用WHONET5.3软件和SPSS 12.0软件;基因分型采用重复基因外回文序列-聚合酶链式反应(REP-PCR).结果 5 079份粪便标本分离出29株志贺菌,占所检出病原菌总数的23%,血清分型涉及B群和D群,D群占59%.志贺菌对头孢他啶和头孢吡肟的敏感率高,为100%;其次为氨曲南、呋喃妥因和氟喹诺酮(诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星和莫西沙星),敏感率为93.1%～96.6%;对头孢曲松、头孢噻肟、卡那霉素和庆大霉素的敏感率为75.0%～82.8%;对氯霉素、氨苄西林、萘啶酸、四环素和大观霉素的敏感率均小于50%;未发现复方新诺明敏感株.耐药模式多达20种,多为12种联合耐药;各群有各自的优势耐药模式.REP-PCR基因分型结果提示16株D群志贺菌有7种指纹图谱,12株B群志贺菌有2种指纹图谱.结论 武汉地区因志贺菌感染导致社区获得性腹泻的比例较低,D群感染占优势.头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南和氟喹诺酮有较好的抗菌活性.B群和D群对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸和氯霉素的敏感性差异有极显著性意义.多重耐药普遍存在,耐药模式繁多.武汉市志贺菌有相同或相似的克隆,血清型单一的D群有多种基因型,B群中f2a比f4c的遗传多样性高.
作者：游升荣；孙自镛 刊期： 2007年第05期
目的 研究诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在兔碱烧伤角膜的表达与角膜新生血管形成的关系.方法 将33只家兔分为正常组(3只,6眼)、烧伤组(30只,60眼),以2 mol/L NaOH制备双眼角膜重度碱烧伤模型,用裂隙灯图像分析系统记录角膜新生血管(CoNV)生长情况.碱烧伤组分批(n=5)于伤后第1、4、7、14、21、28天处死家兔,分别取角膜组织行病理学检查和iNOS的免疫组织化学检测.结果 iNOS在正常兔角膜上皮层及基质层仅有少量表达,在烧伤组表达明显增强(P＜0.05),表达范围主要在基质层炎性细胞、角膜上皮细胞及新生血管内皮细胞,表达峰值在术后第7天,随后下降,在第21天时又有所回升.结论 碱烧伤后角膜组织中iNOS的表达明显增加,其变化趋势与碱烧伤后角膜新生血管的生长曲线相一致且高峰期提前2～3 d,提示INOS水平与无菌性炎症性新生血管形成有明显的相关性.
作者：陈芳；杨红；张新芳 刊期： 2007年第05期
目的 研究抗Fas锤头状核酶对T细胞Fas表达及其凋亡的影响,探讨增强供者淋巴细胞输注时移植物抗白血病(graft versus leukemia,GVL)效应的新策略.方法 构建可有效切割Fas mRNA的锤头状核酶真核质粒,电穿孔法将其导入小鼠细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)细胞株CTLL-2中,借助RT-PCR和Western blot检测细胞Fas的表达,同时检测转染前后细胞Caspase-3活性的改变和细胞凋亡(Annexin Ⅴ-FITC法).MTT法检测空白对照组、转染空载体组及转染pU6-RZ596组CTLL-2细胞的增殖情况和体外杀伤粒-单核白血病细胞(WEHI-3)的活性.结果 构建的U6嵌合型锤头状核酶RZ596在细胞内能有效切割Fas,RT-PCR电泳检测其与β-actin条带的灰度比值:CTLL-2细胞空白对照组为(1.06±0.12),转染空载体组为(0.98±0.15),转染pU6-RZ596组为(0.43±0.11)(n=3);Fas蛋白的Western blot检测显示:以空白对照组灰度值为1,转染空载体组和转染pU6-RZ596组电泳条带的灰度比值分别为(0.98±0.13)和(0.45±0.08)(n=3),提示抗Fas锤头状核酶可明显降低小鼠活化CTLL-2的Fas水平.与高表达Fas配体(FasL)的WEHI-3细胞共孵育,CTLL-2细胞的存活率和体外杀伤活性明显增加,空白对照组、转染空载体组和转染pU6-RZ596组的细胞凋亡率分别为88%、84%和37%,对WEHI-3细胞杀伤活性分别为32%、31%和67%.结论 抗Fas锤头状核酶能显著降低小鼠活化CTLL-2细胞的Fas表达,使其免于Fas途径的凋亡.
作者：黎纬明；刘凌波；邹萍；何伟；张敏 刊期： 2007年第05期
目的 探讨穿心莲对实验性肝硬化大鼠肠道细菌移位的作用,为其临床应用提供依据.方法 将30只肝硬化模型大鼠随机分为4组:穿心莲(AN)组[n=8,穿心莲0.5 g/(kg·d)],诺氟沙星(NF)组[(n=8,诺氟沙星0.3 g/(kg·d)],穿心莲+诺氟沙星(AN+NF)组[n=8,穿心莲0.5 g/(kg·d)+诺氟沙星0.3 g/(kg·d)],肝硬化对照(CN)组[n=6,生理盐水2 ml/(kg·d)],治疗2周后结束.比较各组大鼠死亡率,取外周静脉血检测血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)水平;取肠系膜淋巴结、血液、肝、脾和回肠内容物做细菌培养;采用高压液相色谱法检测肠黏膜通透性;部分肝脏和回肠组织作病理切片检查.结果 与CN组相比,AN、NF和AN+NF组的TNF-α、NO浓度显著降低(均P＜0.05),回肠细菌计数和细菌移位发生率显著下降(均P＜0.05),AN和NF组的肠道通透性显著下降(均P＜0.05).病理检查发现CN组肝硬化大鼠回肠绒毛变短、破坏,炎症细胞浸润增多,而其他3组的肠绒毛结构改变不明显.结论 穿心莲能有效阻断肝硬化大鼠的肠道细菌移位.
作者：吴春明；覃慧敏；李洪涛；宋建新 刊期： 2007年第05期
目的 确定巨细胞病毒(CMV)体外能否直接攻击肝细胞,并建立肝细胞感染模型.方法 ①人肝细胞系感染:用人CMV(HCMV)AD169毒株感染正常人肝细胞系(L-02)和人胚肺成纤维细胞(HELF)与L-02共培养细胞,HC-MV感染的HELF细胞为阳性对照;②原代鼠肝细胞(PML)感染:用重组鼠CMV(MCMV)感染PML细胞.光镜观察细胞病变(CPE),电镜观察病毒颗粒,间接免疫荧光(IFA)法检测HCMV抗原;原位杂交法检测MCMV IE基因.PML性质经观察其特征性超微结构和检测培养上清白蛋白水平予以鉴定.结果 在PML细胞纯度＞95%(培养第8天)时感染病毒,3 d后＞80%细胞出现典型CPE;电镜下胞核和胞质内见大量病毒颗粒;病毒IE基因检测呈阳性.HELF细胞可被HCMV感染;而L-02细胞无论是单独,还是与HELF共培养,其病毒标志物均呈阴性,细胞结构保持正常.结论 原代鼠肝细胞体外可受到MCMV直接感染,为CMV肝炎的体外研究提供成功的肝细胞感染模型;而正常人肝细胞系不能感染HCMV,推测其表面HCMV受体发生改变或丢失.
作者：聂兴草；方峰；李红；董永绥；甄宏；李革 刊期： 2007年第05期
目的 研究武汉同济医院2004～2005年检出的表皮葡萄球菌的耐药情况,分析耐药趋势.方法 对检出菌株复苏、培养,进行常用抗生素的药物敏感性试验,分析药敏结果.结果 共检出表皮葡萄球菌61株,全部复苏、培养成功.苯唑西林耐药41株(占67.21%),苯唑西林敏感20株(占32.79%).苯唑西林耐药的表皮葡萄球菌(MRSE)组的多重耐药率及总耐药率均显著高于苯唑西林敏感的表皮葡萄球菌(MSSE)组.在体外药敏试验中,对头孢唑啉、头孢呋新、庆大霉素及氨苄-舒巴坦保持较低的耐药率(＜30%),而对SMZ-TMP、青霉素、红霉素、克林霉素及左氧沙星耐药率较高(＞50%),没有发现对万古霉素耐药的菌株.结论 表皮葡萄球菌耐药情况严重,MRSE的多重耐药率、总耐药率较高.
作者：邢铭友；田德英；刘莉娜；朱旭慧；孙自镛；黄加权；齐俊英 刊期： 2007年第05期
目的 观察丙酮酸乙酯(EP)对急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)大鼠全身毛细血管渗漏(SCL)的影响,探讨下调血清高迁移率族蛋白1(HMGB1)水平在AHNP治疗中的作用.方法 采用胰管逆行灌注人工胆汁的方法复制大鼠AHNP模型.随机分为正常对照组(Normal组,n=8)、假手术组(Sham组,n=8)、AHNP组(n=16)、EP组(n=16).EP组建模12 h开始使用EP治疗.建模24 h取材,检测与水分渗漏相关的肺系数、肺湿/干比、腹水量.使用伊文氏蓝(EBD)尾静脉注射,检测与蛋白渗漏相关的腹水、肺、胰腺、空肠、回肠、耳廓组织EBD含量;Western blot法检测血清中HMGB1的含量.结果 建模后24 h,EP组血清HMGB1浓度明显低于AHNP组[(87±16)ng/ml vs.(154±22)ng/ml,P＜0.05].EP组大鼠腹水量、肺系数、肺湿/干比明显低于AHNP组,均P＜0.05.EP组大鼠胰腺、空肠、回肠和耳廓组织EBD含量明显低于AHNP组.结论 下调血清HMGB1水平可有效减轻AHNP大鼠SCL的程度.
作者：杨智勇；陶京；周峰；熊炯炘；吴河水；王春友 刊期： 2007年第05期
目的 观察盐酸戊乙奎醚(长托宁)作为术前用药对阿曲库铵肌肉松弛作用的影响.方法 选择90例无脑、心、肺、肝、肾和神经及肌肉代谢性疾病的男性全麻患者,随机分为阿托品0.5 mg组(A组)、盐酸戊乙奎醚0.5 mg组(B组)和盐酸戊乙奎醚1.0 mg组(C组).插管前30 min按分组术前用药,观察肌肉松弛药的起效时间、临床作用时间、恢复指数、95%恢复时间及T4∶T1≥0.75恢复时间.结果 C组和A、B组比较阿曲库铵起效时间显著缩短,差异有显著性意义(P＜0.05);临床作用时间、T4∶T1≥0.75时间及25%～75%恢复时间无明显差异,95%恢复时间C组较A和B组延长,但差异无显著性意义(P＞0.05).A和B组间各项观测指标差异均无显著性意义.结论 盐酸戊乙奎醚作为术前用药更适合仅使用非去极化肌肉松弛剂作为肌肉松弛诱导的全麻患者.
作者：罗辉宇；李樊生；彭勃 刊期： 2007年第05期
目的 探讨经阴道超声检查(TVS)结合多变量Logistic回归分析法对早期异位妊娠(EP)的诊断价值.方法 运用TVS检测和观察97例确诊的早期EP患者的子宫内膜厚度、对称性、回声、形态等二维声像图特征,进行单、多因素Logistic回归分析和ROC曲线分析,找出有意义的变量和建立预测方程.结果 子宫内膜三线状改变及内膜厚度≤9mm是有意义的超声诊断变量,OR值分别为299.59和34.139,多变量Logistic预测方程的建立比单独应用单一变量拥有更大的曲线下面积,能够更好地鉴别诊断EP.结论 TVS对EP的早期诊断敏感性较高.TVS结合多变量Logistic回归分析能克服用单一变量指标作为诊断和鉴别诊断标准时敏感性较低的问题,能更准确地预测EP.
作者：陈智毅；谢明星；柳建华；梁伟翔；梁琨 刊期： 2007年第05期
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)信号转导通路下游信号分子Smad2、Smad3在TGF-β1促进大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化中的作用.方法 采用RT-PCR、Western blot检测TGF-β1促MSCs成骨分化过程中Smad2、Smad3 mRNA和蛋白表达的变化;脂质体介导稳定转染Smad3△C,间接免疫荧光试验鉴定;采用RT-PCR检测转染细胞中碱性磷酸酶(ALP)和核心结合因子(cbfa1)mRNA的表达,用对硝基苯磷酸盐(PNP)法检测细胞ALP活性,用茜素红染色法检测细胞矿化能力,观察Smad3△C对MSCs成骨分化的影响.结果 在TGF-β1刺激后24 h,MSCs中Smad3的mRNA和蛋白表达量明显减少(P＜0.01),而整个刺激过程中,Smad2的mRNA和蛋白表达量无明显变化(P＞0.05);稳定转染细胞中c-Myc抗原阳性表达;受TGF-β1刺激后,MSCs和V-MSCs(空载体转染组)中ALP、cbfa1 mRNA的表达水平、矿化能力明显高于Smad3△C-MSCs;随TGF-β1刺激时间延长,Smad3△C-MSCs中ALP活性增加缓慢,仅于48 h有明显增加(P＜0.05),但与同时段MSCs和V-MSCs中ALP活性相比,差异有极显著性意义(P＜0.01).结论 TGF-β1促进MSCs成骨分化这一生物学效应的输出受Smad3特异性和选择性的调节.
作者：王运涛；郑启新；吴小涛；郭晓东；茅祖斌；陈辉；赵梓汝 刊期： 2007年第05期
目的 总结86例主动脉窦瘤破裂合并主动脉瓣关闭不全的外科治疗经验.方法 86例主动脉窦瘤破裂合并主动脉瓣关闭不全患者,合并室间隔缺损64例,感染性心内膜炎8例,右室流出道狭窄或右室双腔心10例.瘤破口和室缺均采用Dcron补片修补,主动脉瓣整形15例,主动脉瓣置换28例.余合并症均同期予以处理.结果 围手术期死亡1例,远期死亡4例.再次手术3例,其中急诊二次手术1例.主动脉窦瘤破裂修补术后残余分流2例,室缺修补术后残余分流2例.其余病例心功能明显改善,主动脉瓣关闭不全减轻,临床效果良好.结论 主动脉窦瘤破裂合并主动脉瓣关闭不全是少见的心脏疾病,手术是唯一有效的治疗方法.采用主动脉及心腔双切口利于心肌保护和确切修补主动脉窦瘤,纠正合并畸形.
作者：吴龙；孙宗全；张凯伦；蒋雄刚；周诚 刊期： 2007年第05期
目的 研究血吸虫肝纤维化小鼠肝组织中交感神经递质去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)及其受体(adrenal receptor,AR)的表达.方法 应用腹部敷贴尾蚴法使小鼠感染血吸虫.30只昆明种小鼠随机分成正常对照组(N组)和肝纤维化模型组(M组).采用光镜及电镜观察肝组织病理学改变,高效液相色谱-电化学(HPLC-ECD)法检测肝组织中NE的含量,同时应用Western blot方法检测肝脏组织中AR的表达水平.结果 血吸虫肝纤维化小鼠的肝组织中NE的含量明显低于正常小鼠,而AR的含量明显高于正常组,其差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 小鼠血吸虫肝纤维化时肝组织中去甲肾上腺素表达减少,这可能是肝纤维化时交感神经促进肝纤维化发展的作用机制之一.
作者：刘红艳；段瑞娴；郭燕；高潇；唐望先 刊期： 2007年第05期
目的 探讨牛磺酸在体外冲击波碎石术(ESWL)致肾损伤中的保护作用及机制.方法 40只家兔随机分为:生理盐水对照组、牛磺酸组.分别测定ESWL前后外周血中损伤相关因子内皮素(ET-1)、丙二醛(MDA)及保护相关因子一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量.并观察肾脏组织形态及细胞超微结构变化.结果 两组在ESWL后外周血ET-1、MDA含量均升高,NO和SOD的含量则均降低,同期牛磺酸组ET-1、MDA升高幅度明显低于对照组,同期牛磺酸组SOD、NO降低幅度也明显低于对照组.结论 牛磺酸可能通过减少肾组织氧自由基的产生,调节ET-1、NO水平之间平衡的机制,保护肾脏,缓解ESWL引起的肾脏损伤
作者：朱伟；曾甫清；刘聪；何延瑜 刊期： 2007年第05期
目的 建立大鼠卵巢过度刺激综合征(OHSS)模型,研究囊性纤维化跨膜转导调节器(CFTR)在OHSS大鼠卵巢中表达的变化及意义.方法 未成年Wistar雌鼠,随机分为过度刺激组和常规刺激组,建立OHSS模型;比较两组间卵巢重量,血雌二醇水平;并分别通过免疫组织化学和免疫印迹法比较两组间卵巢组织中CFTR蛋白表达量的变化.结果 过度刺激组大鼠卵巢重量、血雌二醇水平显著高于常规刺激组;免疫组化方法检测到CFTR呈棕黄色颗粒表达于大鼠卵巢黄体细胞以及未排卵泡的黄素化颗粒细胞和卵泡膜细胞胞质,免疫组化和免疫印迹定量分析均显示过度刺激组卵巢CFTR蛋白表达量显著高于常规刺激组.结论 注射过量促性腺激素致大鼠血雌二醇水平异常升高,使卵巢内CFTR表达量显著增加,卵巢形成多发性滤泡囊肿和黄体囊肿,间质水肿,体积和重量增加,参与诱发OHSS.
作者：靳镭；汤瑞玲 刊期： 2007年第05期
目的 观察核转录因子-κB(NF-κB)圈套寡核苷酸对NF-κB活性的影响,研究Survivin在其诱导肝癌细胞HepG2凋亡中的作用.方法 将异硫氰酸荧光素(FITC)标记的NF-κB圈套寡核苷酸转染至HepG2细胞中,荧光倒置显微镜和共聚焦显微镜进行核内定位观察,凝胶迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测转染前后NF-κB活性变化;流式细胞仪和TUNEL检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡抑制蛋白Survivin的改变.结果 NF-κB圈套寡核苷酸转染后定位于细胞核内,EMSA显示转染后NF-κB活性明显下降.与未处理组、转染错义组相比,转染NF-κB圈套寡核苷酸组的HepG2细胞凋亡率增加,Survivin蛋白表达下调[(39.8±1.9)、(42.7±2.5)vs(20.1±3.1)].结论 NF-κB圈套寡核苷酸具有促进肝癌细胞HepG2凋亡的作用,其机制可能与下调Survivin的表达有关.
作者：张万广；杨盛力；李哲夫；张峰；徐宗全；王其；张志伟 刊期： 2007年第05期
目的 采用转化生长因子-β1(TGF-β1)转基因小鼠,研究高水平的TGF-β1对巩膜厚度以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)水平的影响,以探讨TGF-β在巩膜重塑中的作用及可能的机制.方法 应用Alb/TGF-β1(Cys223,225Ser)转基因小鼠模型作为实验对象,同窝出生的C57BL/6J野生型小鼠作为对照组.ELISA法测定血浆TGF-β1浓度.Western blot法测定巩膜组织TGF-β1、MMP-2及TIMP-2浓度,应用Whatman Biometria凝胶分析软件分析Western blot结果.对全眼球经视神经乳头正中石蜡切片进行数码图像分析测定后极部巩膜厚度.结果 TGF-β1转基因小鼠血浆TGF-β1浓度约为野生型对照小鼠的1.68倍(P＜0.01),转基因小鼠巩膜组织中TGF-β1的表达水平是野生型小鼠的2.68倍(P＜0.01),MMP-2的表达水平和野生型小鼠差异无显著性意义,TIMP-2的水平是野生型小鼠的3.15倍(P＜0.01),转基因小鼠后极部巩膜厚度较野生型小鼠显著增厚(P＜0.01).结论 TGF-β1浓度增高会导致巩膜增厚.TGF-β1通过升高TIMP-2的水平抑制MMP-2的活性,从而抑制胶原的降解导致巩膜增厚.
作者：刘海霞；杨坤禹；项楠；张虹 刊期： 2007年第05期
目的 构建人同种异体移植炎症因子-1(allograft inflammatory factor-1,AIF-1)基因的真核表达载体并在小鼠成纤维细胞系(NIH3T3)中表达,为进一步研究AIF-1蛋白的功能奠定基础.方法 利用基因重组技术,构建带有AIF-1基因的2种重组真核表达载体:pcDNA3.1(-)/AIF-1与pEGFP-C1/AIF-1.利用脂质体法将2种重组质粒分别转染NIH3T3细胞,用荧光倒置显微镜及Western blot方法观察及鉴定AIF-1在细胞中的稳定表达及瞬时表达.结果 酶切分析及DNA序列测定证实,AIF-1基因片段被分别克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-)与pEGFP-C1.荧光显微镜观察到NIH3T3细胞中有绿色荧光分布.Western blot结果表明,转染重组质粒的NIH3T3细胞中,AIF-1表达量明显增高.结论 成功构建了2种重组真核表达载体:pcDNA3.1(-)/AIF-1与pEGFP-C1/AIF-1,经转染NIH3T3细胞株获得了AIF-1蛋白的瞬时表达及稳定表达.
作者：付康；程首超；刘收；陈孝平；陆婕；柳欣；陈正望 刊期： 2007年第05期
华中科技大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：华中科技大学
