学术投稿

巢式PCR法检测不同类型标本中p16基因启动子过甲基化

姚群峰;康新江;郝巧玲;唐朝晖;周宜开

关键词:甲基化, p16 基因, 聚合酶链反应
摘要:目的介绍一种高灵敏度的DNA甲基化分析方法,即巢式甲基化特异性PCR法(nested-MSP,nMSP),探讨该方法佳应用条件,并用该法分析新鲜癌组织、石蜡包埋组织及肿瘤患者血清中p16基因启动子的甲基化状态.方法将基因组DNA变性成为单链,用亚硫酸氢盐修饰单链DNA,所有未甲基化的胞嘧啶被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不变.设计针对甲基化和非甲基化等位基因的特异引物,进行巢式PCR扩增,后经凝胶电泳检测目的片段.结果在3种类型的标本中都检测出了p16基因启动子的甲基化,比普通的甲基化特异性PCR法具有更高的灵敏度.结论巢式甲基化特异性PCR是一种灵敏度高、特异性强的甲基化检测方法,可广泛应用于不同类型标本基因启动子甲基化分析.
华中科技大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 老年患者机械瓣膜替换术后合理抗凝治疗研究

    目的探讨老年患者机械瓣膜替换术后合理抗凝治疗.方法将129例患者分为2组,A组年龄≥65岁(30例),B组年龄<65岁(99例),随访2~79个月,比较不同年龄组在不同抗凝强度下血栓栓塞和出血发生率,观察抗凝效果.结果随访期间共发生与抗凝有关的出血16例,血栓栓塞6例,其中A组分别为4例(13.3%)和2例(6.7%),B组12例(12.1%)和4例(4.0%).死亡4例(3.1%),A组1例(3.3%),B组3例(3.0%).在同一抗凝水平下,A、B两组血栓栓塞和出血发生率差异无显著性意义,抗凝治疗期间国际标准化比值(INR)长时间低于1.65或高于2.50者,血栓栓塞和出血发生率高于INR 1.65~2.50水平者.结论老年患者机械瓣膜替换术后维持INR为1.65~2.50,可有效减少抗凝并发症.

    作者:郑向阳;杜心灵;张凯伦;胡志伟;罗军;蓝鸿均 刊期: 2004年第01期

  • 氧化修饰的低密度脂蛋白促进平滑肌细胞表达VCAM-1

    目的探讨氧化修饰的低密度脂蛋白(ox-LDL)是否诱导培养的平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1(VCAM-1).方法采用原位杂交和免疫组化的方法检测ox-LDL刺激后,原代培养小鼠主动脉中膜平滑肌细胞表达VCAM-1 mRNA和蛋白的情况.结果 ox-LDL作用后,平滑肌细胞VCAM-1 mRNA经原位杂交显色,细胞平均吸光度(A)值为0.200 5±0.019 0,与对照组(0.144 6±0.005 5)相比差异有极显著性意义(F=137.12,P<0.01).平滑肌细胞VCAM-1蛋白表达经免疫组化显色后,细胞平均吸光度值为0.129 5±0.024 0,较对照组(0.068 7士0.008 5)亦有所增加,方差分析显示差异有极显著性意义(F=94.58,P<0.01).结论 ox-LDL能够诱导动脉中膜平滑肌细胞表达高水平的VCAM-1 mRNA和蛋白,从而在动脉粥样硬化斑块形成过程中起重要作用.

    作者:杨丽敏;瞿智玲;宗义强 刊期: 2004年第01期

  • 体重指数正常的多囊卵巢综合征与胰岛素抵抗

    目的探讨体重指数(BMI)正常的多囊卵巢综合征(PCOS)与胰岛素抵抗(IR)之间的关系.方法 对53例PCOS患者按BMI分为正常体重PCOS组(PCOS Ⅰ组,BMI<24 kg/m2)31例与超重/肥胖PCOS组(P-COSⅡ组,BMI≥24 kg/m2)22例,同时选取BMI正常的非PCOS妇女30例为对照组,采集静脉血检测空腹血清胰岛素(FINS)和空腹血糖(FPG),稳态模式评估法(HOMA)的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)评价胰岛素抵抗程度.结果①PCOS Ⅰ组FINS、黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平及HOMA-IR值高于对照组,差异有极显著性意义(P<0.01);②PCOSⅡ组FINS水平和HOMA-IR值高于PCOS Ⅰ组,差异有极显著性意义(P<0.01);③LH水平和BMI与HOMA-IR值显著相关,但前两者与HOMA-IR不存在交互影响(均P>0.05);IR在PCOS患者中的暴露率显著高于对照组.结论 BMI正常的PCOS患者存在IR;肥胖可加重PCOS的高胰岛素血症和IR;IR为PCOS发病的独立重要危险因素.

    作者:李旻;邱红玉;孙永玉;李红发 刊期: 2004年第01期

  • 不同工艺制备的补肾益气活血汤治疗小鼠胚胎着床障碍效果比较

    目的比较2种工艺制备的补肾益气活血汤治疗小鼠胚胎着床障碍的疗效,评价工艺的合理性.方法将妊娠小鼠随机分成4组,从妊娠第1 d开始,传统组、改进组分别灌服不同工艺制备的补肾益气活血汤,模型组、正常组则灌服等量生理盐水,除正常组外,其余3组小鼠于第3、4 d每天皮下注射吲哚美辛溶液(44 mg/kg)2次,各组于第5d各取3只小鼠制作子宫切片,观察子宫内膜腺体上皮、间质及血管的组织形态和超微结构,于第8d,观察胚胎着床率和着床位点数.结果传统组组织形态与模型组相似,而改进组则与正常组相似;改进组胚胎着床率和着床位点数明显高于模型组(P<0.05),且胚胎着床率高于传统组.结论改进工艺制备的汤剂作用效果明显高于传统工艺制备的汤剂.

    作者:徐丽君;龚萍;黄光英;陆付耳 刊期: 2004年第01期

  • 三种羟基磷灰石义眼座植入术式的比较

    目的观察采用不同方式植入羟基磷灰石(HA)义眼座的临床效果.方法对27例患者根据眼部的不同条件,分别以全镂空巩膜壳内植入式、半巩膜壳内植入式及肌锥内植入式等手术方法植入义眼座,并对其效果进行分析比较.结果 3种术式义眼座活动度有明显不同,全镂空巩膜壳内植入式活动度好且并发症少.结论义眼座植入全镂空巩膜壳内能获得理想的手术效果.

    作者:张虹 刊期: 2004年第01期

  • 咖啡因对X射线诱导的HL-60细胞凋亡的影响

    目的探讨细胞周期检测点对不同放射剂量射线的耐受性及咖啡因对细胞周期检测点的影响.方法对数生长期的急性早幼粒白血病细胞株(HL-60)细胞经不同剂量的X射线照射,并加入终浓度为5 mmol/L的咖啡因培养4 h后,用亚G1峰法检测细胞凋亡,用DNA链缺口标记法(TdT)分析凋亡细胞的细胞周期特异性.结果不同剂量X射线照射均可诱导HL-60细胞凋亡,2 Gy X射线的照射主要诱导G1期细胞凋亡,20 Gy X射线照射诱导的细胞凋亡由G1期发展至以S期和G2期为主.加入咖啡因能使射线诱导的细胞凋亡减少,其中2 Gy X射线照射的细胞表现为G1期细胞凋亡减少,而20 Gy X射线照射的细胞主要表现为以S期和G2期为主的细胞凋亡的减少.结论细胞对放射剂量的反应性与细胞周期检测点之间存在一定的关系,咖啡因对射线诱导的细胞凋亡及检测点的影响与射线的剂量有关.

    作者:冷彦;陶德定;申漫里;覃吉超;陈元;龚建平 刊期: 2004年第01期

  • 4例小儿肠石性肠梗阻的诊治体会

    我院1990年~2002年共收治因肠石阻塞肠腔,导致完全或不完全肠梗阻4例,现报告如下.

    作者:喻晓 刊期: 2004年第01期

  • 锌盐对培养的人视网膜色素上皮细胞增生的影响

    目的探讨硫酸锌盐对体外培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增生及Caspase-3表达的影响.方法采用MTT法检测不同浓度硫酸锌盐对RPE细胞生长的影响,用TUNEL技术检测RPE细胞凋亡,免疫细胞化学染色观察Caspase-3表达.结果锌盐浓度高于0.001μmol/L就可抑制RPE细胞的增生;当锌盐浓度高于10μmol/L后对RPE细胞的增生抑制率与药物剂量成正比.不同浓度锌盐均可诱导RPE细胞表达Caspase-3增加,且当锌盐浓度高于0.01μmol/L就可诱导RPE细胞凋亡.结论锌盐可诱导RPE细胞表达Caspase-3增加,从而可引发RPE细胞的凋亡.因此对于不缺乏锌的年龄相关性黄斑变性(age-related maculardegeneration,ARMD)患者锌剂治疗未必有益.

    作者:王智;陈雯;张缨 刊期: 2004年第01期

  • 老年慢性特发性血小板减少性紫癜患者淋巴细胞凋亡蛋白的表达

    目的从细胞凋亡的角度探讨老年慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)的发病机制.方法用流式细胞仪检测了8例老年人慢性ITP患者治疗前后T淋巴细胞(CD3+)、B淋巴细胞(CD19+)Fas蛋白和Fas-L蛋白的表达.结果治疗前T淋巴细胞的Fas蛋白表达明显低于正常(P<0.01),Fas-L蛋白表达明显高于正常(P<0.01);B淋巴细胞的Fas和Fas-L蛋白表达与正常对照相比差异无显著性意义.经治疗血小板恢复正常的患者T淋巴细胞的Fas蛋白表达上调和Fas-L蛋白表达下调,与治疗前相比差异有极显著性意义,与正常对照相比差异无显著性意义.结论治疗前老年慢性ITP患者体内Fas/Fas-L途径介导的T淋巴细胞凋亡异常,经治疗后T淋巴细胞的Fas蛋白表达上调,有助于抗原活化的B淋巴细胞的凋亡.

    作者:高清平;杨年兰;陈友华;敖绪斌;陈伦华 刊期: 2004年第01期

  • 抗神经元抗体对副肿瘤综合征早期诊断的临床意义

    目的探讨抗神经元抗体抗-Hu、抗-Yo、抗-Ri抗体的检测与副肿瘤综合征早期诊断的关系.方法采用蛋白免疫印迹分析(Western Blot)法对12例确诊为副肿瘤综合症(PNS)的患者血清及32例非PNS血清进行检测.结果 12例确诊患者血清中检测到一项或多项抗体阳性;PNS患者血清中抗-Hu、抗-Yo、抗-Ri抗体的阳性率高于非PNS对照组,差异有极显著性意义(P<0.01);正常对照组血清抗-Hu,抗-Yo,抗-Ri抗体全部为阴性.结论抗神经元抗体抗-Hu、抗-Yo、抗-Ri抗体可作为PNS早期诊断及确诊的指标.

    作者:谢俊丽;崔天盆;王小梅;王涛 刊期: 2004年第01期

  • 羟基喜树碱对人肝癌BEL-7402细胞毒性的评价

    目的评价羟基喜树碱对人肝癌BEL-7402细胞的细胞毒性.方法将羟基喜树碱以不同终浓度作用于人肝癌BEL-7402细胞.用MTT比色法观察其细胞毒性,荧光显微镜、透射电镜检测凋亡细胞的形态改变并记数凋亡指数,流式细胞仪定量分析细胞凋亡率.结果羟基喜树碱以剂量依赖的方式抑制BEL-7402细胞的生长;荧光显微镜和透射电镜观察到细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形成等凋亡特征性的形态学改变;流式细胞仪直方图上可见亚二倍体峰;以浓度为12.5、25、50、100、200μg/ml的羟基喜树碱处理48 h后,细胞凋亡率分别为(14.68±2.17)%、(21.24±3.76)%、(31 54±4.58)%、(40.21±5.26)%和(48.35±6.70)%,与对照组(2.09±0.42)%比较差异均有极显著性意义(P<0.01).结论羟基喜树碱既能抑制人肝癌BEL-7402细胞增殖,又能诱导其凋亡,显示出较强的细胞毒性.

    作者:李军尧;唐忠志 刊期: 2004年第01期

  • 脑出血灶周缺氧诱导因子-1α、热休克蛋白70的表达

    目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、热休克蛋白70(HSP70)在脑出血灶周脑组织中的表达及其意义.方法应用免疫组织化学技术检测37例脑出血灶周脑组织中HIF-lα、HSP70的表达.结果 37例脑出血灶周脑组织中HIF-1α阳性率为40.5%,其中出血量>60 ml者HIF-lα阳性率为88.9%,与其他出血量者(30~45 m1,46~60 ml比较差异有显著性意义(P<0.05).HIF-1α表达与血肿作用时间明显相关,随着出血后手术时间的推迟而增加(P<0.05).HIF-1α与HSP70的表达呈正相关(n=15,r=0.82,P<0.01).结论脑出血后HIF-1α的表达与出血量及血肿作用时间相关,为判断脑出血灶周缺血半暗带的存在提供了依据;HSP70有神经细胞保护及抑制凋亡的作用.

    作者:唐洲平;郭守刚;彭岚;朱遂强;方思羽;张苏明 刊期: 2004年第01期

  • 胚胎玻璃化冷冻技术的临床应用(附成功分娩1例报道)

    目的探讨胚胎玻璃化冷冻技术的临床应用效果.方法运用玻璃化冷冻技术保存75例患者的397个胚胎,复苏13例69个胚胎,并根据患者的情况进行胚胎移植.结果 69个胚胎中,丢失3个,存活26个,存活率为39.4%.复苏后8例患者因胚胎质量差未移植,另外5例患者共移植了14个胚胎,其中1例获得单胎妊娠,分娩1名健康女婴.结论玻璃化冷冻技术简便、经济,并能够有效地冻存人类早期胚胎,可成为胚胎冷冻方法的另一个选择.

    作者:王俊霞;朱桂金;魏玉兰 刊期: 2004年第01期

  • 巨细胞病毒吸附穿入人胚肺成纤维细胞对HLA-Ⅰ抗原表达的影响

    目的体外实验探讨人类巨细胞病毒(HCMV)与细胞表面硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPGs)结合后对人类白细胞抗原Ⅰ(HLA-Ⅰ)表达的影响.方法流式细胞仪检测不同干预条件细胞表面HLA-Ⅰ的表达.免疫组织化学法检测不同干预条件细胞内HCMV pp65蛋白的表达.结果流式细胞仪检测的结果表明人胚肺成纤维细胞(HELF)表面HLA-Ⅰ的表达HCMV感染组低于对照组;紫外线灭活HCMV(UvHCMV)组高于对照组;肝素和氯酸钠干预HELF细胞后再用UV-HCMV感染的HELF细胞,其表面HLA-Ⅰ的表达低于UV-HCMV组.免疫组织化学法检测结果显示:HCMV感染HELF 24 h,HCMV pp65蛋白呈阳性表达;UV-HCMV感染HELF 24 h,HCMV pp65蛋白呈阴性表达.结论 HSPGs可能参与影响HLA-Ⅰ在HCMV感染的HELF细胞表面上的表达,对HCMV逃避宿主的免疫监视起间接调节作用.

    作者:何超蔓;闻良珍 刊期: 2004年第01期

  • 重症病毒性肝炎肝组织胶原蛋白和血小板衍生生长因子-1的表达

    目的了解重症病毒性肝炎患者肝组织Ⅰ型前胶原mRNA、血小板衍生生长因子-1(PDGF-1)mRNA及Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白的表达情况,探讨重症病毒性肝炎纤维化发生的分子机制.方法将重症病毒性肝炎肝组织标本20例,非肝病患者肝组织6例,用原位杂交法检测肝组织Ⅰ型前胶原和PDGf-1 mRNA的表达,用免疫组化法观察肝组织Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白的沉积、分布和含量,用天狼红染色观察肝组织总的胶原含量.结果与正常肝组织相比,重症病毒性肝炎患者的肝组织Ⅰ型前胶原和PDGF-1 mRNA的表达显著增加,Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白大量沉积.PDGF-1mRNA的表达与Ⅰ型前胶原mRNA的表达呈显著正相关,和总的胶原含量,Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白的表达也呈显著正相关,Ⅰ型前胶原mRNA的表达和Ⅰ型胶原蛋白的表达呈显著正相关.结论 PDGF-1 mRNA与Ⅰ型前胶原mRNA表达的增加是导致肝组织胶原蛋白合成增加,重症病毒性肝炎发展成肝纤维化乃至肝硬化的原因之一.

    作者:张志安;黄元成;石淑仙 刊期: 2004年第01期

  • 乙型肝炎患者血清中分泌型IgA水平与HBV DNA含量的关系

    目的研究乙型肝炎患者血清中分泌型IgA(SIgA)水平与乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量的关系,为临床提供一个新的评价HBV复制状态及肝细胞损伤的指标.方法 100份经ELISA检测并确诊为乙型肝炎的患者血清用荧光定量PCR检测HBV DNA的拷贝数,用ELISA并经酶标仪定量其SIgA的量.结果 SIgA的含量与HBV DNA的拷贝数的对数呈正相关(r=0.69,P<0.01),在HBsAg(+)/HBeAg(+)/HBcAb(+)组和HBsAg(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+)组中SIgA含量差异无显著性意义(P>0.05),而HBV DNA拷贝数前者明显高于后者(P<0.01).结论乙型肝炎患者血清SIgA的含量在评价HBV的传染性及肝细胞损伤程度方面比乙型肝炎血清学标志物(HBV-M)更灵敏、准确.

    作者:朱振华;周发为;黄汉菊 刊期: 2004年第01期

  • 免疫性血管炎致冠状动脉损伤的实验研究

    目的探讨异种动物蛋白所致家兔免疫性血管炎的病理特点,为建立川崎病动物模型提供实验依据.方法 用牛血清白蛋白重复静脉注射复制兔的免疫性血管炎模型,25只幼兔作为实验A组,10只成年兔作为实验B组,10只幼兔为正常对照组.分别做冠状动脉造影、冠状动脉组织病理分析和相关免疫学检查.结果经大体标本肉眼观察和冠状动脉造影证实:实验A组中有6只发现有冠状动脉扩张,实验B组均未出现冠状动脉扩张.病理检查:光镜下见实验A、B组均出现不同程度内皮细胞肿胀、坏死、内皮下组织水肿、血管壁炎性细胞浸润和弹力纤维断裂等改变,实验B组的病理改变较轻,且实验A组中冠脉扩张者比无冠脉扩张者病理损伤重;电镜检查:实验A组冠状动脉组织出现不同程度内皮细胞肿胀、坏死、脱落、染色质浓聚、平滑肌细胞轻度变性、线粒体肿胀及内质网扩大等改变.实验B组仅见内皮细胞肿胀和轻度平滑肌细胞变性.结论首次发现用牛血清白蛋白诱导幼兔免疫性血管炎,可导致冠状动脉扩张,其病理改变与川崎病相似,可作为建立川崎病的实验动物模型方法;提供了免疫性血管炎可引起幼龄动物冠状动脉扩张的实验依据.

    作者:韦卫中;陈绍军;王宏伟;胡秀芬 刊期: 2004年第01期

  • 铝对大鼠海马CA3区诱发电位的抑制作用与胆碱能、GABA系统的关系

    目的研究铝对大鼠海马CA3区诱发电位的抑制作用与胆碱能、GABA系统的关系.方法实验用SD大鼠68只,单个脉冲刺激穿通纤维(PP),记录海马CA3区诱发的群体峰电位(PS).待PS稳定后,向海马cA3区微量注射药物,观察铝对海马CA3区诱发电位的影响及某些中枢递质对铝抑制PS效应的影响.结果①海马CA3区局部微量给予0.5 mol/L AlCl3,记录的PS幅值1 min时下降幅度达峰值,为给药前的(33.8士11.0)%(n=6).AlCl3的这种抑制作用持续120 min.②预先CA3区微量注入1×10-9 mol/L Tacrine(胆碱酯酶抑制剂),1 min后再注入AlCl3,结果1~30 min内拮抗了AlCl3抑制PS幅值的效应(n=8),给予1×10-8 mol/L Tacrine(n=6),则拮抗作用延长至60 min,而给予1×10-10 mol/L Tacrine(n=6),拮抗作用在3~5 min弱于1×10-9mol/L组.③海马cA3区先给予1×10-3mol/L Bicuculline,1 min后再注入AlCl3,在1~20 min内Bicuculline部分减弱了AlCl3的作用(n=9).结论一定浓度的铝可抑制海马CA3区的诱发PS幅值;Tacrine能拮抗这种作用,且可能与剂量有关,提示铝的抑制作用可能与损害了ACh递质系统有关;应用GABAA受体阻断剂Bicuculline也使铝对PS抑制效应减弱,表明铝对PS的抑制也可能部分通过GABA途径起作用.

    作者:胡剑峰;肖鸿美;李艾 刊期: 2004年第01期

  • 错配修复蛋白表达水平与肾细胞癌预后

    目的研究错配修复基因hMLH1和hMSH2在不同肾组织中的表达水平及其对肾癌预后的预测.方法 采用免疫组织化学方法检测71例肾癌组织及其癌周正常组织,31例肾良性病变组织石蜡标本中hMLH1、hMSH2的表达水平,同时收集所有标本的详细病理学资料,将蛋白表达水平与病理结果进行对比.结果hMLH1和hMSH2的表达水平在肾良性病变中均明显高于癌组织和癌周正常组织,在高分化肾癌中均明显高于低分化肾癌,1年内无复发组显著高于1年内复发组;hMSH2在无转移组中的表达显著高于有转移组,而hMLH1在有无转移组的表达差异无显著性意义.结论 hMLH1、hMSH2两种修复蛋白在肾癌和肾良性病变组织中的表达水平有明显差异,且与肿瘤分化程度和肿瘤复发密切相关;hMSH2与肾癌转移有关,hMLH1与转移的关系不明显.hMSH2和hMLH1蛋白表达水平对肾癌预后有一定的预测作用.

    作者:徐伟;刘成倍;王祥林;庞桂建;毕新生 刊期: 2004年第01期

  • 武汉城区部分居民支气管哮喘患病调查与危险因素分析

    目的了解武汉城区部分居民支气管哮喘的发病情况及可能的相关因素,为支气管哮喘发病的流行病学研究提供参考.方法采用随机抽样的方法,抽取武汉城区一居委会700余户居民进行问卷调查.结果调查样本1082人,支气管哮喘的患病人数35人,现患率3.23%.男性患病率3.59%,女性患病率2.77%.0~14岁年龄组患病率4.76%,15~24岁年龄组患病率2.10%,25~59岁年龄组患病率2.52%,60岁以上年龄组患病率7.89%.有哮喘家族史是发病的高危因素(OR=9.62),同时患有其他过敏性疾病也是发病的重要危险因素(OR=8.27).一楼居民相对其他楼层发病率高(OR=2.81)结论武汉城区部分居民的支气管哮喘的发病率为3.23%,其中老年人的发病率高,儿童次之.发病的危险因素包括遗传背景、居住条件等.

    作者:刘光辉;祝戎飞;王忠喜;黄爱霞;李文静;陈欢;张威 刊期: 2004年第01期

华中科技大学学报(医学版)杂志

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主办:华中科技大学