李军尧；唐忠志
目的介绍一种高灵敏度的DNA甲基化分析方法,即巢式甲基化特异性PCR法(nested-MSP,nMSP),探讨该方法佳应用条件,并用该法分析新鲜癌组织、石蜡包埋组织及肿瘤患者血清中p16基因启动子的甲基化状态.方法将基因组DNA变性成为单链,用亚硫酸氢盐修饰单链DNA,所有未甲基化的胞嘧啶被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不变.设计针对甲基化和非甲基化等位基因的特异引物,进行巢式PCR扩增,后经凝胶电泳检测目的片段.结果在3种类型的标本中都检测出了p16基因启动子的甲基化,比普通的甲基化特异性PCR法具有更高的灵敏度.结论巢式甲基化特异性PCR是一种灵敏度高、特异性强的甲基化检测方法,可广泛应用于不同类型标本基因启动子甲基化分析.
作者：姚群峰；康新江；郝巧玲；唐朝晖；周宜开 刊期： 2004年第01期
目的探讨抗神经元抗体抗-Hu、抗-Yo、抗-Ri抗体的检测与副肿瘤综合征早期诊断的关系.方法采用蛋白免疫印迹分析(Western Blot)法对12例确诊为副肿瘤综合症(PNS)的患者血清及32例非PNS血清进行检测.结果 12例确诊患者血清中检测到一项或多项抗体阳性;PNS患者血清中抗-Hu、抗-Yo、抗-Ri抗体的阳性率高于非PNS对照组,差异有极显著性意义(P＜0.01);正常对照组血清抗-Hu,抗-Yo,抗-Ri抗体全部为阴性.结论抗神经元抗体抗-Hu、抗-Yo、抗-Ri抗体可作为PNS早期诊断及确诊的指标.
作者：谢俊丽；崔天盆；王小梅；王涛 刊期： 2004年第01期
目的了解重症病毒性肝炎患者肝组织Ⅰ型前胶原mRNA、血小板衍生生长因子-1(PDGF-1)mRNA及Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白的表达情况,探讨重症病毒性肝炎纤维化发生的分子机制.方法将重症病毒性肝炎肝组织标本20例,非肝病患者肝组织6例,用原位杂交法检测肝组织Ⅰ型前胶原和PDGf-1 mRNA的表达,用免疫组化法观察肝组织Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白的沉积、分布和含量,用天狼红染色观察肝组织总的胶原含量.结果与正常肝组织相比,重症病毒性肝炎患者的肝组织Ⅰ型前胶原和PDGF-1 mRNA的表达显著增加,Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白大量沉积.PDGF-1mRNA的表达与Ⅰ型前胶原mRNA的表达呈显著正相关,和总的胶原含量,Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白的表达也呈显著正相关,Ⅰ型前胶原mRNA的表达和Ⅰ型胶原蛋白的表达呈显著正相关.结论 PDGF-1 mRNA与Ⅰ型前胶原mRNA表达的增加是导致肝组织胶原蛋白合成增加,重症病毒性肝炎发展成肝纤维化乃至肝硬化的原因之一.
作者：张志安；黄元成；石淑仙 刊期： 2004年第01期
目的从细胞凋亡的角度探讨老年慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)的发病机制.方法用流式细胞仪检测了8例老年人慢性ITP患者治疗前后T淋巴细胞(CD3+)、B淋巴细胞(CD19+)Fas蛋白和Fas-L蛋白的表达.结果治疗前T淋巴细胞的Fas蛋白表达明显低于正常(P＜0.01),Fas-L蛋白表达明显高于正常(P＜0.01);B淋巴细胞的Fas和Fas-L蛋白表达与正常对照相比差异无显著性意义.经治疗血小板恢复正常的患者T淋巴细胞的Fas蛋白表达上调和Fas-L蛋白表达下调,与治疗前相比差异有极显著性意义,与正常对照相比差异无显著性意义.结论治疗前老年慢性ITP患者体内Fas/Fas-L途径介导的T淋巴细胞凋亡异常,经治疗后T淋巴细胞的Fas蛋白表达上调,有助于抗原活化的B淋巴细胞的凋亡.
作者：高清平；杨年兰；陈友华；敖绪斌；陈伦华 刊期： 2004年第01期
目的研究错配修复基因hMLH1和hMSH2在不同肾组织中的表达水平及其对肾癌预后的预测.方法 采用免疫组织化学方法检测71例肾癌组织及其癌周正常组织,31例肾良性病变组织石蜡标本中hMLH1、hMSH2的表达水平,同时收集所有标本的详细病理学资料,将蛋白表达水平与病理结果进行对比.结果hMLH1和hMSH2的表达水平在肾良性病变中均明显高于癌组织和癌周正常组织,在高分化肾癌中均明显高于低分化肾癌,1年内无复发组显著高于1年内复发组;hMSH2在无转移组中的表达显著高于有转移组,而hMLH1在有无转移组的表达差异无显著性意义.结论 hMLH1、hMSH2两种修复蛋白在肾癌和肾良性病变组织中的表达水平有明显差异,且与肿瘤分化程度和肿瘤复发密切相关;hMSH2与肾癌转移有关,hMLH1与转移的关系不明显.hMSH2和hMLH1蛋白表达水平对肾癌预后有一定的预测作用.
作者：徐伟；刘成倍；王祥林；庞桂建；毕新生 刊期： 2004年第01期
目的探讨胚胎玻璃化冷冻技术的临床应用效果.方法运用玻璃化冷冻技术保存75例患者的397个胚胎,复苏13例69个胚胎,并根据患者的情况进行胚胎移植.结果 69个胚胎中,丢失3个,存活26个,存活率为39.4%.复苏后8例患者因胚胎质量差未移植,另外5例患者共移植了14个胚胎,其中1例获得单胎妊娠,分娩1名健康女婴.结论玻璃化冷冻技术简便、经济,并能够有效地冻存人类早期胚胎,可成为胚胎冷冻方法的另一个选择.
作者：王俊霞；朱桂金；魏玉兰 刊期： 2004年第01期
目的了解血液系统疾病合并抑郁症的患病率,进而探讨其患病危险因素.方法用汉密尔顿抑郁量表对92例血液系统疾病患者(血液系统疾病组)和82例正常对照组进行评分,并建立回归模型,对合并抑郁症的患者进行回归分析,在α=0.10水平分析并确定其患病危险因素.结果①血液系统疾病患者合并抑郁症的患病率(45.65%)明显高于正常对照组抑郁症的患病率(8.54%).②血液系统疾病患者中,抑郁症的发生与性别、文化程度、家庭人均月收入、疾病分类、病程和治疗方案有关.结论抑郁症在血液系统疾病患者中有较高的患病率,性别、文化程度、家庭人均月收入、疾病分类、病程和治疗方案是血液系统疾病患者合并抑郁症的可能危险因素.
作者：王红祥；邹萍；赵湜 刊期： 2004年第01期
目的评价羟基喜树碱对人肝癌BEL-7402细胞的细胞毒性.方法将羟基喜树碱以不同终浓度作用于人肝癌BEL-7402细胞.用MTT比色法观察其细胞毒性,荧光显微镜、透射电镜检测凋亡细胞的形态改变并记数凋亡指数,流式细胞仪定量分析细胞凋亡率.结果羟基喜树碱以剂量依赖的方式抑制BEL-7402细胞的生长;荧光显微镜和透射电镜观察到细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂、细胞起泡以及凋亡小体形成等凋亡特征性的形态学改变;流式细胞仪直方图上可见亚二倍体峰;以浓度为12.5、25、50、100、200μg/ml的羟基喜树碱处理48 h后,细胞凋亡率分别为(14.68±2.17)%、(21.24±3.76)%、(31 54±4.58)%、(40.21±5.26)%和(48.35±6.70)%,与对照组(2.09±0.42)%比较差异均有极显著性意义(P＜0.01).结论羟基喜树碱既能抑制人肝癌BEL-7402细胞增殖,又能诱导其凋亡,显示出较强的细胞毒性.
作者：李军尧；唐忠志 刊期： 2004年第01期
目的体外实验探讨人类巨细胞病毒(HCMV)与细胞表面硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPGs)结合后对人类白细胞抗原Ⅰ(HLA-Ⅰ)表达的影响.方法流式细胞仪检测不同干预条件细胞表面HLA-Ⅰ的表达.免疫组织化学法检测不同干预条件细胞内HCMV pp65蛋白的表达.结果流式细胞仪检测的结果表明人胚肺成纤维细胞(HELF)表面HLA-Ⅰ的表达HCMV感染组低于对照组;紫外线灭活HCMV(UvHCMV)组高于对照组;肝素和氯酸钠干预HELF细胞后再用UV-HCMV感染的HELF细胞,其表面HLA-Ⅰ的表达低于UV-HCMV组.免疫组织化学法检测结果显示:HCMV感染HELF 24 h,HCMV pp65蛋白呈阳性表达;UV-HCMV感染HELF 24 h,HCMV pp65蛋白呈阴性表达.结论 HSPGs可能参与影响HLA-Ⅰ在HCMV感染的HELF细胞表面上的表达,对HCMV逃避宿主的免疫监视起间接调节作用.
作者：何超蔓；闻良珍 刊期： 2004年第01期
目的克隆和表达HLA Ⅰ类分子轻链(β2m)基因,为人工制备HLA Ⅰ类分子提供基础.方法利用逆转录PCR技术从Jeg-3细胞株中克隆β2m基因,与质粒pET22b(+)重组,构建原核表达载体pET22b(+)-β2m,转化宿主菌E coli BL21(DE3),诱导β2m基因高效表达,并采用双抗体夹心ELISA法对表达产物进行抗原性和功能鉴定.结果酶切和测序证实β2m基因克隆和载体构建成功,目的蛋白在宿主菌中高效表达于包涵体中;通过包涵体的分离和纯化获得初步纯化的β2m,所制备的β2m能够与特异性抗体结合,并能与HLA Ⅰ类分子重链形成具有天然构象的HLA Ⅰ类分子.结论人β2m基因能够在原核宿主中高效表达,表达产物具有形成HLA Ⅰ类分子的功能.
作者：陈浩；翁秀芳；吴雄文；梁智辉；韩军艳；黄亚非；龚非力 刊期： 2004年第01期
我院1990年～2002年共收治因肠石阻塞肠腔,导致完全或不完全肠梗阻4例,现报告如下.
作者：喻晓 刊期： 2004年第01期
目的探讨氧化修饰的低密度脂蛋白(ox-LDL)是否诱导培养的平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1(VCAM-1).方法采用原位杂交和免疫组化的方法检测ox-LDL刺激后,原代培养小鼠主动脉中膜平滑肌细胞表达VCAM-1 mRNA和蛋白的情况.结果 ox-LDL作用后,平滑肌细胞VCAM-1 mRNA经原位杂交显色,细胞平均吸光度(A)值为0.200 5±0.019 0,与对照组(0.144 6±0.005 5)相比差异有极显著性意义(F=137.12,P＜0.01).平滑肌细胞VCAM-1蛋白表达经免疫组化显色后,细胞平均吸光度值为0.129 5±0.024 0,较对照组(0.068 7士0.008 5)亦有所增加,方差分析显示差异有极显著性意义(F=94.58,P＜0.01).结论 ox-LDL能够诱导动脉中膜平滑肌细胞表达高水平的VCAM-1 mRNA和蛋白,从而在动脉粥样硬化斑块形成过程中起重要作用.
作者：杨丽敏；瞿智玲；宗义强 刊期： 2004年第01期
目的探讨细胞周期检测点对不同放射剂量射线的耐受性及咖啡因对细胞周期检测点的影响.方法对数生长期的急性早幼粒白血病细胞株(HL-60)细胞经不同剂量的X射线照射,并加入终浓度为5 mmol/L的咖啡因培养4 h后,用亚G1峰法检测细胞凋亡,用DNA链缺口标记法(TdT)分析凋亡细胞的细胞周期特异性.结果不同剂量X射线照射均可诱导HL-60细胞凋亡,2 Gy X射线的照射主要诱导G1期细胞凋亡,20 Gy X射线照射诱导的细胞凋亡由G1期发展至以S期和G2期为主.加入咖啡因能使射线诱导的细胞凋亡减少,其中2 Gy X射线照射的细胞表现为G1期细胞凋亡减少,而20 Gy X射线照射的细胞主要表现为以S期和G2期为主的细胞凋亡的减少.结论细胞对放射剂量的反应性与细胞周期检测点之间存在一定的关系,咖啡因对射线诱导的细胞凋亡及检测点的影响与射线的剂量有关.
作者：冷彦；陶德定；申漫里；覃吉超；陈元；龚建平 刊期： 2004年第01期
目的研究甲基化抑制剂5-氮-2′-脱氧胞苷对胆管癌细胞株生长周期及凋亡的影响,初步探讨其应用于临床治疗的可能性.方法应用MTT法检测不同浓度的5-氮-2′-脱氧胞苷对胆管癌细胞株QBC939存活率的影响,应用流式细胞术检测5-氮-2′-脱氧胞苷对QBC939细胞生长周期及凋亡率的影响.结果 5-氮-2′-脱氧胞苷在浓度为0.5μmol/L时即可以抑制胆管癌细胞QBC939的增殖,24 h半数致死量为5.0 μmo1/L,细胞周期中处于G0/G1期的细胞比例增多,凋亡的发生率增高,而且以上作用与药物浓度及作用时间在一定范围内呈正相关.结论 5-氮-2′-脱氧胞苷可能通过消除某些抑癌基因的启动子甲基化状态,使其重新表达而抑制胆管癌细胞的生长,并促进其凋亡.
作者：唐启彬；孙华文；邹声泉 刊期： 2004年第01期
目的探讨β-连环素(β-cat)、上皮钙粘附素(E-cd)和Wnt-1蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)的表达及其与临床病理特征的关系.方法应用免疫组织化学(SP法)检测63例NSCLC肿瘤组织中β-cat、E-cd和Wnt-1蛋白的表达.结果低分化组中βcat、E-cd的异常表达率均高于高分化组(P＜0.01);在伴有淋巴结转移的原发灶Ecd异常表达率高于无转移的原发灶(P＜0.05);E-cd膜表达下降和正常的两组病例中,前者β-cat的异常表达率高于后者(P＜0.01);细支气管肺泡癌中Wnt-1的表达率高于鳞状细胞癌和腺癌(P＜0.01),高分化组中Wnt-1的表达高于低分化组(P＜0.05).结论βcat、E-cd和Wnt-1在NSCLC的发生、分型、分化程度、浸润和转移中起重要作用,β-cat和E-cd的协同作用可能影响着NSCLC的发生、发展.
作者：李钫；吴翠环；吴人亮；刘丽芳；龚战 刊期： 2004年第01期
目的探讨异种动物蛋白所致家兔免疫性血管炎的病理特点,为建立川崎病动物模型提供实验依据.方法 用牛血清白蛋白重复静脉注射复制兔的免疫性血管炎模型,25只幼兔作为实验A组,10只成年兔作为实验B组,10只幼兔为正常对照组.分别做冠状动脉造影、冠状动脉组织病理分析和相关免疫学检查.结果经大体标本肉眼观察和冠状动脉造影证实:实验A组中有6只发现有冠状动脉扩张,实验B组均未出现冠状动脉扩张.病理检查:光镜下见实验A、B组均出现不同程度内皮细胞肿胀、坏死、内皮下组织水肿、血管壁炎性细胞浸润和弹力纤维断裂等改变,实验B组的病理改变较轻,且实验A组中冠脉扩张者比无冠脉扩张者病理损伤重;电镜检查:实验A组冠状动脉组织出现不同程度内皮细胞肿胀、坏死、脱落、染色质浓聚、平滑肌细胞轻度变性、线粒体肿胀及内质网扩大等改变.实验B组仅见内皮细胞肿胀和轻度平滑肌细胞变性.结论首次发现用牛血清白蛋白诱导幼兔免疫性血管炎,可导致冠状动脉扩张,其病理改变与川崎病相似,可作为建立川崎病的实验动物模型方法;提供了免疫性血管炎可引起幼龄动物冠状动脉扩张的实验依据.
作者：韦卫中；陈绍军；王宏伟；胡秀芬 刊期： 2004年第01期
目的探讨影响辅助生殖技术(ART)手术成功率的临床因素.方法回顾分析1994年到2002年2014个ART手术中,患者的年龄、病因、手术方式和获卵数对辅助生殖技术成功率的影响.结果①女性年龄是影响试管婴儿妊娠率的独立因素,随着年龄的增长,不仅获卵数和可移植的胚胎数下降,而且胚胎质量降低,导致妊娠率降低和流产率升高;②男性因素不孕和附睾或睾丸穿刺取精行卵母细胞内单精子注射手术的妊娠率较高,而原因不明不孕症的妊娠率较低,但都可能与年龄的影响有关;③获卵数超过30个,虽然患者年轻,妊娠率反而下降,其原因不明.结论女性年龄是影响ART手术成功率的重要因素,在比较分析其它因素时都必须首先排除年龄的影响.
作者：朱桂金；靳镭；章汉旺；刘群；李舟；魏玉兰 刊期： 2004年第01期
目的了解武汉城区部分居民支气管哮喘的发病情况及可能的相关因素,为支气管哮喘发病的流行病学研究提供参考.方法采用随机抽样的方法,抽取武汉城区一居委会700余户居民进行问卷调查.结果调查样本1082人,支气管哮喘的患病人数35人,现患率3.23%.男性患病率3.59%,女性患病率2.77%.0～14岁年龄组患病率4.76%,15～24岁年龄组患病率2.10%,25～59岁年龄组患病率2.52%,60岁以上年龄组患病率7.89%.有哮喘家族史是发病的高危因素(OR=9.62),同时患有其他过敏性疾病也是发病的重要危险因素(OR=8.27).一楼居民相对其他楼层发病率高(OR=2.81)结论武汉城区部分居民的支气管哮喘的发病率为3.23%,其中老年人的发病率高,儿童次之.发病的危险因素包括遗传背景、居住条件等.
作者：刘光辉；祝戎飞；王忠喜；黄爱霞；李文静；陈欢；张威 刊期： 2004年第01期
目的研究氯胺酮对小鼠吗啡戒断症状和脊髓星形胶质细胞活性的影响.方法昆明种小鼠30只,随机分为5组(n=6),A组:皮下剂量递增法给药建立吗啡依赖模型;B组:对照组,给予等容积的生理盐水;C、D、E3组:吗啡用药均同A组,后一次吗啡注射30 min后分别腹腔注射0、8、16 mg/kg氯胺酮.观察纳络酮催瘾后戒断症状的改变;用免疫组化方法测定各组脊髓星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫反应阳性产物的变化.结果与C组相比,D组可缓解吗啡戒断症状(P＜0.05),而E组则明显缓解(P＜0.01);D组和E组吗啡戒断所致的体重下降显著减轻(P＜0.01).脊髓GFAP免疫反应阳性产物表达相对面积,A组与B组比较,D、E组与C组比较差异均无显著性意义(均为P＞0.05).结论氯胺酮可缓解小鼠吗啡戒断症状,脊髓星形胶质细胞GFAP活性可能未参与介导吗啡依赖和戒断反应.
作者：项红兵；田玉科；孙怡 刊期： 2004年第01期
目的体外研究氟、硒对人肝细胞DNA损伤的影响.方法体外培养的人肝细胞分别接触一定剂量的氟和(或)硒12 h后,用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测人肝细胞DNA的损伤率.结果氟组人肝细胞DNA损伤率明显高于对照组和氟+硒组(均为P＜0.05),硒组DNA损伤率与对照组相比,差异无显著性意义(P＞0.05).结论体外氟可导致人肝细胞DNA损伤,适量的硒对氟所致DNA损伤有一定的拮抗作用.
作者：夏涛；邓淑凯；王爱国；陈学敏 刊期： 2004年第01期
华中科技大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：华中科技大学
