学术投稿

携带人PPARγ1受体基因高效真核表达载体的构建及其意义

章涛;李苌清;杨俊卿;万敬员;蒋建新;周岐新

关键词:过氧化物酶体增殖物激活受体γ1, 基因克隆, 真核表达
摘要:目的:构建高效表达人过氧化物酶体增殖物激活受体γ1(hPPARγ1)的真核表达载体,为hPPARγ1受体功能和基于hPPARγ1受体靶点的药物筛选提供分子研究平台.方法:采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从HepG2细胞总RNA克隆hPPARγ1全长基因,与经XhoⅠ、SmaⅠ相同双酶切的pIRES2-EGFP载体连接,构建重组质粒phPPARγ1-IRES2-EGFP,经酶切及测序鉴定重组质粒中hPPARγ1基因的完整性和忠实性;荧光显微镜观察重组质粒转染的293细胞GFP报告基因表达强度,并对转染细胞hPPARγ1的表达进行荧光定量PCR及免疫细胞化学检测.结果:经酶切和测序证实重组质粒构建正确,并在转染的293细胞中获得hPPARγ1的高效表达.结论:成功构建phPPARγ1-IRES2-EGFP重组质粒,为基于hPPARγ1受体靶点的药物筛选平台的建立及受体功能研究提供了高效表达载体.
中国医科大学学报杂志相关文献
  • 不同脂肪酸对肝脏胰岛素抵抗和蛋白激酶C-δ活性的影响

    目的:研究游离脂肪酸(FFA)短期增高对肝脏胰岛素抵抗及肝脏蛋白激酶C-δ(PKC-δ)活性的影响.方法:大鼠静脉输注脂肪乳,油酸,猪油和生理盐水7 h,分别为4组,行清醒状态的高胰岛素-正血糖钳夹试验,观察不同种类脂肪酸对胰岛素抑制的肝脏葡萄糖生成(HGP)和对胰岛素刺激的葡萄糖利用(GU)的影响,并取肝脏测定肝细胞膜和细胞浆PKC-δ的含量.结果:在高胰岛素-正血糖钳夹状态,所有脂肪输注组比生理盐水组FFA增高(P<0.01),脂肪乳、油酸和猪油组的HGP分别是生理盐水组的2.2,3.2和4.2倍(P<0.01),GU分别降低约22%,29%,42%(P<0.01).肝细胞膜和胞浆的PKC-δ比值在生理盐水、脂肪乳、油酸和猪油输注组分别是2,4.2,6.1,7.4(P<0.01).结论:饱和脂肪酸引起的肝脏胰岛素抵抗较单不饱和脂肪酸及多不饱和脂肪酸更明显,PKC-δ转位在不同脂肪酸引起的胰岛素抵抗中均起重要作用,FFA可介导周围胰岛素抵抗.

    作者:韩萍;卢雁;张咏言;何冰;夏菲;张微 刊期: 2007年第02期

  • bFGF经Akt信号转导通路诱导胃癌BGC-823中COX-2和NF-κB表达研究

    目的:在胃癌BGC-823细胞中,经bFGF诱导后观察COX-2和NF-κB蛋白表达,探讨bFGF通过Akt途径抑制凋亡促进细胞增殖的信号转导机制.方法:胃癌BGC-823细胞传代培养.MTT方法检测bFGF对胃癌BGC-823细胞的促增殖的作用.Western blotting检测Akt酶的活性和不同处理BGC-823中COX-2和NF-κB的表达.结果:25 ng/ml bFGF能够激活BGC-823细胞中Akt磷酸化,p-Akt在10 min表达多,进而促进COX-2和NF-κB蛋白的表达,这种表达具有时间依赖性,能够促进BGC-823细胞的增殖.Akt抑制剂wortmannin可抑制bFGF的这些作用.结论:bFGF经Akt细胞信号转导通路能够诱导BGC-823细胞中COX-2和NF-κB的表达.Akt信号转导通路、COX-2和NF-κB与BGC-823细胞的增殖密切相关.

    作者:聂海祺;孙黎光;叶丽平 刊期: 2007年第02期

  • 咯利普兰对白细胞介素1β诱导损伤的离体胰岛细胞的防护作用及其机制

    目的:观察磷酸二酯酶(PDE)抑制剂对白细胞介素1β(IL-1β)诱导损伤的离体雄性Wistar大鼠胰岛细胞的防护作用及其机制.方法:采用离体培养的雄性Wistar大鼠胰岛细胞,分别检测IL-1β(30 U/ml)及IL-1β与不同剂量特异性Ⅳ型PDE抑制剂咯利普兰(ROL)对胰岛细胞亚硝酸盐合成、胰岛素(Ins)分泌、环磷酸腺苷(cAMP)水平及细胞活性(MTT)的影响.结果:以IL-1β诱导,离体雄性Wistar大鼠胰岛细胞亚硝酸盐合成显著增加,cAMP水平、Ins分泌及MTT值显著降低(P<0.01),而ROL能阻断这些作用(P<0.01),且具有显著剂量依赖性(r2=0.56,P<0.01).结论:ROL能够保护IL-1β诱导的鼠离体胰岛细胞损伤.

    作者:张秀彬;王秋月;旷劲松 刊期: 2007年第02期

  • 碘缺乏病区学龄儿童智商、精神运动及亚临床损伤的调查

    目的:评价补碘并实施全民食盐加碘后农村原不同程度碘缺乏(ID)病区学龄儿童智商、精神运动状况及亚临床损伤的流行程度,观察全民食盐加碘对病区儿童智商(IQ)、精神运动的改善效果.方法:用中国联合型瑞文测检图册(CRT-RC2)和农村儿童智商常模(CRT-C2)测验判定儿童智商,用天津医学院精神运动成套测验(JPB)、测听仪、X线片、标准度衡器具判定学龄儿童精神运动、听力障碍和骨龄、体格发育落后.结果:将男女儿童合计,重、中、轻病区儿童IQ分别为103.16±16.64、99.70±16.19、107.82±11.83,重、中病区儿童IQ均值显著低于轻病区.病区原缺碘程度越重,儿童IQ越低;儿童年龄越小,IQ越高,且每降低1岁,IQ平均升高2.07分.重、中病区精神运动的JPB测验总T分为316.17±42.26、330.46±47.66,显著低于轻病区(341.75±48.11).原病区缺碘程度越重,儿童JPB测验总T分越低;儿童年龄越小,JPB测验总T分越高,且每降低1岁,总T分平均升高4.88分.重、中、轻病区出生儿童亚临床损伤率分别为29.96%、32.88%、20.31%,中病区显著高于轻病区(P<0.05).结论:沈阳市重、中病区出生儿童人群智商和精神运动水平比轻病区低,重、中病区更须加强补碘.全民食盐加碘对恢复碘缺乏地区儿童智力和精神运动状况起一定的作用.

    作者:唐智峰;刘万洋;董静;陈杰 刊期: 2007年第02期

  • 东北汉族人群7p14-15区域内9个STR位点的遗传多态分析

    目的:分析东北汉族人群中7p14-15区域内9个短串联重复序列(STR)位点的遗传多态性.方法:采用荧光标记PCR扩增技术和毛细管电泳方法,对7p14-15区域内9个STR多态位点在100名随机选取的无血缘关系的东北汉族人群中的遗传多态性进行分析.结果:在东北汉族人群中,7p14-15区域的D7S526、D7S690、D7S2252、D7S817、D7S683、D7S656、D7S484、D7S2250、D7S2251位点分别检测出6、6、8、6、4、6、7、8和7个等位基因,17、19、29、17、10、17、24、27和22种基因型,杂合度分别为84%、85%、79%、82%、79%、85%、89%、88%和83%.结论:7p14-15区域的9个STR位点的基因频率和基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡,并在东北汉族人群中呈现较好的遗传多态性.

    作者:娄毅;邱广蓉;辛娜;刘红波;孙桂凤;孙开来 刊期: 2007年第02期

  • 骨引导再生成骨中血管内皮生长因子的作用

    目的:分析以无机骨(Bio-oss)作为载体,血管内皮生长因子(VEGF)在骨引导再生(GBR)过程中的作用.方法:新西兰大白兔60只随机分成4组,在左右两侧股骨大转子区制备骨缺损,左侧用Bio-oss充填骨缺损,右侧不予充填;术后1、2、4、8周分别处死各组动物,取种植体周围骨作为样本离心,采用ELISA双抗体夹心法测不同时期生成骨中VEGF浓度.结果:骨引导再生生成骨中VEGF浓度值高于非骨引导再生生成骨,且术后第1周浓度值大.结论:VEGF是血管生成与骨再生协同作用的物质基础,对骨引导再生具有促进作用.

    作者:张忠提;杨晓东;艾红军 刊期: 2007年第02期

  • 人黄素化颗粒细胞中EGF受体家族的表达

    研究人黄素化颗粒细中表皮生长因子(EGF)受体家族成员的表达.收集体外受精-胚胎移植过程中的人黄素化颗粒细胞进行体外培养,应用RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测EGF受体家族的mRNA和蛋白表达.人黄素化颗粒细胞中EGF受体家族的4个成员HER1~HER4均有mRNA表达.但HER4的mRNA表达量较低,而且位于细胞核.

    作者:潘伯臣;叶莹心;王秀霞;张淑兰 刊期: 2007年第02期

  • 不同程度失神经支配后眼轮匝肌和口轮匝肌的形态学研究

    目的:探讨不同程度失神经支配后,眼轮匝肌和口轮匝肌的形态学变化.方法:制作豚鼠面神经总干压榨15 s、30 s和切断的动物模型,分别于术后1周和1个月取眼轮匝肌和口轮匝肌,应用琥珀酸脱氢酶(SDH)染色,光镜和透射电镜下观察肌肉的形态和超微结构.结果:正常状态下,眼肌中Ⅰ型纤维占29.51%,Ⅱ型纤维占70.49%;口肌中只有Ⅱ型纤维占100%.神经损伤后眼肌的Ⅰ型纤维向Ⅱ型纤维转化,当神经功能恢复时,Ⅰ型纤维百分比又逐渐恢复.同时,SDH含量随损伤加重逐渐减少,随着神经功能恢复SDH含量又逐渐恢复.结论:面肌失神经和恢复神经支配时,肌纤维分型的转化提示肌肉功能的变化;面肌与面神经之间有一致性的变化趋势,提示面肌的病理改变可以成为判断面神经功能状态的科学标准.

    作者:惠莲;闫艾慧;姜学钧;杨宁;任重 刊期: 2007年第02期

  • 美能注射液治疗小儿过敏性紫癜的临床研究

    目的:观察复方甘草酸苷(美能)注射液治疗小儿过敏性紫癜的疗效.方法:选择48例小儿过敏性紫癜患者随机分为治疗组和对照组各24例,给予治疗组美能注射液1~2 mg·kg-1·d-1(大剂量2 mg/kg·d-1);疗程10~14 d.结果:与对照组相比;治疗组有效率显著增高;差异具有显著性意义(P<0.05).结论:美能注射液可有效治疗小儿过敏性紫癜.

    作者:许静;郭英军;狄正鸿;崔乐;畅晓元;张悦;程岩峰;韩秀萍 刊期: 2007年第02期

  • 辽宁省口腔健康流行病学抽样调查结果分析

    目的:了解辽宁省城乡不同年龄组人群口腔健康现状,探讨口腔疾病患病特点和规律.方法:采用多阶段分层等容量随机抽样的方法,按照WHO《口腔健康调查基本方法》(第四版)的要求,对全省5、12、35~44岁、65~74岁4个年龄组的人群进行抽样调查.结果:5岁组乳牙患龋率为73.86%,龋均为4.38,农村明显高于城市.12岁组:患龋率为30.05%,龋均为0.51.35~44岁组:患龋率为63.13%,龋均为1.93.65~74岁组:患龋率为65.28%,龋均为2.34.城市的中老年人患龋率和龋均远高于农村.牙周健康者仅占12岁组的29.79%,35~44岁组3.03%,65~74岁组2.65%.6.69%的老年人为无牙颌.结论:辽宁省儿童和成人的患龋率与十年前相比,有了明显下降,但患龋情况仍很严重,口腔卫生状况较差.加强口腔健康教育,提高全人群的口腔保健意识,推广适宜的牙防技术十分必要.

    作者:路振富;张颖;程睿波;刘懿卿;李卫平 刊期: 2007年第02期

  • p27kip1基因在大鼠自体静脉移植中的表达

    目的:观察p27kip1基因在静脉移植模型中的动态表达及与内膜增生的关系.方法:建立大鼠自体静脉移植动物模型,分别于术后1,2,3,7,14,28 d取材.Verhoeff染色观察各时间点内膜厚度及管壁厚度;RT-PCR、原位杂交、Western blot检测p27kip1mRNA及蛋白的变化,免疫组化(SABC)法检测p27kip1、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果:术后7 d内膜明显增厚,14 d内膜增厚达到高峰(P<0.01).p27kip1蛋白在正常对照血管可见表达,术后3 d内无表达,术后7 d开始表达,14 d明显增高,28 d达到高峰(P<0.01).mRNA的表达于术后7 d出现增高,持续表达至28 d,其间各时间点之间表达无明显差异.PCNA的表达于术后7~14 d达到高峰.结论:p27kip1基因的表达可能是抑制移植静脉内膜增生的环节之一,其可能成为治疗移植血管狭窄、闭塞的目的基因.

    作者:郎晓讴;刘明辉;杨德华;冀慎泉;段志泉 刊期: 2007年第02期

  • 血清C反应蛋白水平与2型糖尿病及肥胖的相关性分析

    目的:测定2型糖尿病患者的血清C反应蛋白(CRP)水平,分析CRP与肥胖的相关性.方法:受试者精确测量身高、体质量,计算体质量指数(BMI).同步检测空腹血糖(FPG)、胰岛素(FINS),计算胰岛素抵抗指数(IR)、胆固醇(CH)、甘油三脂(TG),用免疫比浊法测定CRP水平.结果:糖尿病组CRP水平与对照组比较,差异显著(P<0.05);无论是糖尿病组还是对照组,肥胖者的CRP水平与非肥胖者的CRP比较,差异显著(P<0.05),相关分析显示CRP与BMI(r=0.191,P=0.009)FINS(r=0.146,P=0.049)FPG(r=0.132,P=0.046)IR(r=0.140,P=0.045)TG(r=0.212,P=0.003)CH(r=0.263,P=0.002)均有相关性.结论:CRP可能是肥胖和2型糖尿病之间相关的主要因素.

    作者:史亮;王露 刊期: 2007年第02期

  • 高效液相色谱法测定复方苯甲酸凝胶中苯甲酸和水杨酸的含量

    目的:研制复方苯甲酸凝胶,建立高效液相色谱(HPLC)测定制剂中苯甲酸和水杨酸含量的方法.方法:以卡波姆-940为基质,用常规方法制备.以Ultrasphere-ODS柱(5μm,4.6mm×250mm)为固定相;以甲醇-水(40∶60v/v)为流动相;检测波长227 nm.结果:制剂稳定性好,平均回收率分别为苯甲酸100.31%,相对标准偏差(RSD)1.10%;水杨酸99.75%,RSD1.53%.苯甲酸和水杨酸的线性范围分别为:16~75 mg·L-1(r=0.999 2),7.5~40 mg·L-1(r=0.999 0).结论:本制剂工艺简单、质量稳定,含量测定方法准确、快捷、适用.

    作者:邢俊家;周晖 刊期: 2007年第02期

  • p27kip1和cyclin D1在肾癌中的表达及临床意义

    目的:研究肾癌组织中p27kip1和cyclin D1蛋白的表达,探讨其与肾癌生物学特征的内在联系.方法:应用免疫组化S-P法,对53例肾癌及6例正常肾组织中p27kip1和cyclin D1蛋白进行检测.结果:在正常肾组织中p27kip1均呈阳性表达,p27kip1阳性表达率在肾癌不同临床分期,不同病理分级中差异显著(G1~G2:70.00%,G3~G4:27.27%,P<0.05;T1~T2:70.83%,T3~T4:20.69%,P<0.05).cyclinD1在正常肾组织呈阴性表达,cyclin D1阳性表达率在肾癌不同临床分期,不同病理分级中差异显著(G1~G2:51.35%,G3~G,4:27.27%,P<0.05;T1~T2:58.33%,T3~T4:20.69%,P<0.05).结论:p27kip1和cyclin D1蛋白在肾癌中的表达与肿瘤生物学行为密切相关,p27kip1和cyclin D1在肾癌的发生、发展中起重要作用.

    作者:刘学锋;吴斌 刊期: 2007年第02期

  • 64层螺旋GT血管成像对脊髓Adamkiewicz动脉的显示

    评价多层螺旋CT血管成像对脊髓Adamkiewicz动脉的显示能力,指导脊髓CTA成像应用于胸腹主动脉瘤的术前评估.

    作者:赵宇;刘静红;曲海源;王强;李延亮 刊期: 2007年第02期

  • 胸腔镜微创漏斗胸矫形术的护理

    总结1例漏斗胸患者的临床资料,阐述围手术期的术前护理,术后护理.

    作者:冯秀琴;赵树兰 刊期: 2007年第02期

  • 多西紫杉醇对MCF-7人乳腺癌细胞延迟外向钾电流的作用

    目的:探讨多西紫杉醇对MCF-7人乳腺癌细胞延迟外向钾电流(Ik)的作用.方法:采用全细胞膜片钳记录方式,设保持电位-90 mV,刺激电位为-60~+60 mV,步阶脉冲10 mV,波宽200 ms,刺激间隔3 s,刺激频率为2 Hz.结果:随着多西紫杉醇的浓度增加,MCF-7细胞Ik电流电压曲线斜率减少,多西紫杉醇对Ik通道具有关闭作用;在同一指令电压下,Ik随着多西紫杉醇浓度的增加而减少,具有剂量依赖性,当指令电压为+60 mv时,多西紫杉醇浓度从1×10-7 mol·L-1增加到1×10-5 mol·L-1时,Ik从(124.03±8.43)pa/pF,减少到(75.16±9.10)pA/pF,每个浓度的Ik与给药前相比,差异显著(P<0.01).结论:多西紫杉醇对MCF-7人乳腺癌细胞的延迟整流K+通道具有关闭作用,能够抑制乳腺癌细胞的增殖.

    作者:孙涛;姜大庆;宋志国;李金鸣 刊期: 2007年第02期

  • 高糖和脂多糖对腹膜间皮细胞己糖激酶活性的调节作用

    目的:研究高糖和脂多糖(LPS)对腹膜间皮细胞(PMC)己糖激酶(HK)活性的调节作用.方法:行PMC的原代培养及鉴定.首先将不同浓度的葡萄糖(0.10,1.50,2.50,4.25%)分别和不同剂量的LPS(0,0.1,1.0,10.0,50.0,100.0 mg/L)加入培养基;其次用含4.25%葡萄糖和10.0 mg/L LPS的培养基孵育细胞不同时间(0,1,3,6,12,24 h);6磷酸葡萄糖脱氢酶耦联比色法测定HK活性.后用含10.0 mg/L LPS的培养基孵育细胞不同时间(0,1,3,6,12,24 h);测定HK活性和细胞葡萄糖的摄入量,分析HK活性与葡萄糖摄入量的相关性.结果:高糖和LPS对HK的活性具有交互作用(F=423.55,P<0.01).高糖和LPS以剂量(P<0.01)和时间依赖的方式诱导HK活性(P<0.01);LPS以时间依赖的方式促进PMC葡萄糖净利用(P<0.01).结论:高糖和LPS对PMC己糖激酶活性的调节作用在腹膜透析失超滤的过程中发挥了重要的作用.

    作者:李志明;马健飞;赵钢 刊期: 2007年第02期

  • 基质金属蛋白酶7及其组织抑制因子在子宫内膜癌中的表达及意义

    目的:通过研究基质金属蛋白酶7(MMP-7)与其组织抑制因子2(TIMP-2)在子宫内膜癌中的表达,探讨MMP-7、TIMP-2与子宫内膜癌临床病理特征之间的关系.方法:应用免疫组化方法(S-P法)对40例子宫内膜癌、12例子宫内膜不典型增生、12例正常子宫内膜中的MMP-7、TIMP-2进行检测,并进行比较研究.结果:MMP-7在子宫内膜癌、子宫内膜非典型增生中的阳性表达率高于对照组(P<0.05);TIMP-2在子宫内膜癌中的阳性表达率高于对照组(P<0.05).随着子宫内膜癌病理分级增高及肌层浸润深度增加,MMP-7/TIMP-2比值亦增加,相互之间差异显著(P<0.05).结论:MMP-7与TIMP-2的表达与子宫内膜癌的发生、发展密切相关,MMP-7/TIMP-2比值随着子宫内膜癌病理分级的升高、肌层浸润深度的增加而增高.

    作者:阎进;生秀杰 刊期: 2007年第02期

  • 携带人PPARγ1受体基因高效真核表达载体的构建及其意义

    目的:构建高效表达人过氧化物酶体增殖物激活受体γ1(hPPARγ1)的真核表达载体,为hPPARγ1受体功能和基于hPPARγ1受体靶点的药物筛选提供分子研究平台.方法:采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从HepG2细胞总RNA克隆hPPARγ1全长基因,与经XhoⅠ、SmaⅠ相同双酶切的pIRES2-EGFP载体连接,构建重组质粒phPPARγ1-IRES2-EGFP,经酶切及测序鉴定重组质粒中hPPARγ1基因的完整性和忠实性;荧光显微镜观察重组质粒转染的293细胞GFP报告基因表达强度,并对转染细胞hPPARγ1的表达进行荧光定量PCR及免疫细胞化学检测.结果:经酶切和测序证实重组质粒构建正确,并在转染的293细胞中获得hPPARγ1的高效表达.结论:成功构建phPPARγ1-IRES2-EGFP重组质粒,为基于hPPARγ1受体靶点的药物筛选平台的建立及受体功能研究提供了高效表达载体.

    作者:章涛;李苌清;杨俊卿;万敬员;蒋建新;周岐新 刊期: 2007年第02期

中国医科大学学报杂志

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主管:辽宁省教育厅

主办:中国医科大学