学术投稿

抑制消减杂交技术分析牙龈卟啉单胞菌基因差异初探

林莉;潘亚萍;李琛;赵戬

关键词:牙龈卟啉单胞菌, 抑制性消减杂交, 牙周病, 基因差异
摘要:目的:对比牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)低毒力株标准参考菌ATCC 33277与高毒力株W83之间的差异核苷酸序列,查找高毒力株W83缺失基因.方法:抑制消减杂交技术对比牙龈卟啉单胞菌低毒力株标准参考菌ATCC 33277与高毒力株W83的基因差异.以低毒力株ATCC 33277为tester,高毒力株W83株为driver,将提取的基因组DNA用内切酶Rsa Ⅰ酶切,连接特殊设计的adaptor进行两次消减杂交和PCR扩增,并与TA克隆载体连接,转化到JM109中,建立差异消减文库,经PCR筛选鉴定阳性克隆,进而对部分片段进行测序和同源分析.结果:经SSH筛选鉴定得到62个片段大小为125~632 bp的阳性克隆基因片段.结论:这些差异基因为研究牙周病的发生和发展提供重要线索.
中国医科大学学报杂志相关文献
  • 急性肠系膜上静脉血栓形成的围手术期观察及护理

    总结急性肠系膜上静脉血栓形成的围手术期护理经验.提出加强有针对性的围手术期护理,对急性肠系膜上静脉血栓形成的治疗及预后至关重要.

    作者:佟盛艳;赵华 刊期: 2007年第06期

  • 金黄色葡萄球菌α毒素对肺水通道蛋白表达的影响

    目的:观察金黄色葡萄球菌α毒素(α-toxin)对Balb/c小鼠肺微血管内皮细胞(LMEC)水通道蛋白1(AQP1)表达的影响.方法:将实验组小鼠15只腹腔注入α-toxin后根据6 h、10 h、24 h取材时间,随机将它们分为α-toxin 6 h组、α-toxin 10 h组和α-toxin 24 h组.取左肺行病理HE染色和免疫组化染色,检测肺组织病理变化情况和AQP1表达的变化.结果:α-toxin各组肺泡间隔增宽、水肿,炎性细胞浸润,肺泡结构破坏,以α-toxin 10 h组为明显.免疫组化α-toxin各组AQP1表达下降(P<0.05).其中以α-toxin 10 h组为明显.α-toxin 6 h组和α-toxin 10 h组及α-toxin 10h组和α-toxin 24 h组均有显著性差异(P<0.05).结论:AQP1表达于LMEC.金葡菌α毒素可致小鼠肺LMEC的AQP1表达下降,随着炎症的减轻,AQP1也随之表达增加,进而恢复正常.

    作者:李玲;李尔然;夏淑杰;林庶茹;李艳杰;才丽萍;王秋月;康健 刊期: 2007年第06期

  • 抑制消减杂交技术分析牙龈卟啉单胞菌基因差异初探

    目的:对比牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)低毒力株标准参考菌ATCC 33277与高毒力株W83之间的差异核苷酸序列,查找高毒力株W83缺失基因.方法:抑制消减杂交技术对比牙龈卟啉单胞菌低毒力株标准参考菌ATCC 33277与高毒力株W83的基因差异.以低毒力株ATCC 33277为tester,高毒力株W83株为driver,将提取的基因组DNA用内切酶Rsa Ⅰ酶切,连接特殊设计的adaptor进行两次消减杂交和PCR扩增,并与TA克隆载体连接,转化到JM109中,建立差异消减文库,经PCR筛选鉴定阳性克隆,进而对部分片段进行测序和同源分析.结果:经SSH筛选鉴定得到62个片段大小为125~632 bp的阳性克隆基因片段.结论:这些差异基因为研究牙周病的发生和发展提供重要线索.

    作者:林莉;潘亚萍;李琛;赵戬 刊期: 2007年第06期

  • ACE、AT1受体及TGF-β1在肌营养不良中的表达

    目的:探讨肾素-血管紧张素系统(RAS)和转化生长因子β1(TGF-β1)在肌营养不良(MD)中的表达及与肌肉纤维化的关系.方法:应用Western印迹分析和三免疫荧光标记检测杜氏肌营养不良(DMD)、Becker型肌营养不良(BMD)和先天性肌营养不良(CMD)患者肌肉活检标本中血管紧张素转移酶(ACE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型(AT1)受体和TGF-β1的表达及共同定位.结果:Western印迹分析结果显示在MD的萎缩肌肉中ACE、AT1受体和TGF-β1的免疫反应明显增强;三免疫荧光标记显示DMD和CMD肌肉的肌内膜和肌束膜中大多数激活的成纤维细胞表达ACE和TGF-β1,ACE和TGF-β1在萎缩肌肉内也共同定位.结论:病变局部ACE、AT1受体和TGF-β1表达增加,表明肌肉组织中RAS在MD时被激活,可能与TGF-β1共同参与MD的发病,并在肌肉纤维化中起重要作用.

    作者:孙桂莲;江雅静;姜伟;杨志亮 刊期: 2007年第06期

  • 回肠黏膜上皮细胞内β-葡糖醛酸酶免疫电镜定位研究

    采用低温包埋、紫外线照射、抗β-葡糖醛酸酶抗体、胶体金探针及免疫电镜技术与方法,标记β-葡糖醛酸酶(β-Glu)的金颗粒定位于人体回肠黏膜上皮细胞内的内质网和溶酶体内.为研究回肠各种疾病和肿瘤β-葡萄糖醛酸酶活性及定量的变化,建立了正常的形态学研究模型.

    作者:宦大为;张文竹;杨波;刘树立;方长青;张弘 刊期: 2007年第06期

  • DNA拓扑异构酶Ⅱα、Ki-67、PGNA在人脑胶质瘤中的表达及与生存状况的相关性研究

    目的:研究DNA拓扑异构酶Ⅱα(Topo-Ⅱα)、Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)在人脑胶质瘤中的表达,探讨其与肿瘤恶性程度及生存状况的关系.方法:应用SABC免疫组化技术,检测32例胶质瘤Topo-Ⅱα、Ki-67、PCNA的表达,并对其与肿瘤恶性程度及预后生存状况的关系比较进行统计学分析.结果:胶质瘤Topo-Ⅱα、Ki-67、PCNA的表达在低度恶性组与高度恶性组之间的差异有统计学意义(P<0.01);Log-rank检验及Kaplan-Meier生存曲线分析显示,Topo-Ⅱα、Ki-67、PCNA的表达强度与胶质瘤的预后生存时间呈显著的负相关性,Topo-Ⅱα、Ki-67、PCNA的表达水平反映了胶质瘤患者的预后情况.结论:Topo-Ⅱα、Ki-67、PCNA在人脑胶质瘤中的表达与其恶性程度相关,与患者的预后生存相关.联合检测三者的表达水平对判断肿瘤的恶性程度有一定的参考意义,同时,这3个因子可作为判断与预测人脑胶质瘤患者预后的重要指标.

    作者:赵宏宇;蔡炜嵩;王成林;陈铎;关俊宏 刊期: 2007年第06期

  • 重症肝炎患者血sIgA和肝脏分泌片的变化

    目的:研究重症肝炎患者血清IgA、sIgA和肝脏IgA、分泌片(SC)的变化,了解重症肝炎患者血清sIgA升高的原因.方法:血清IgA采用免疫速率比浊法,血清sIgA采用放射免疫分析法,采用免疫组化方法检测肝脏IgA、SC的变化.结果:与对照组相比,血清IgA、sIgA明显升高,肝脏IgA沉积,但肝脏SC无明显变化.结论:重症肝炎时血中sIgA可能是肝脏SC脱落进入胆汁与其内的pIgA结合返流入血形成.

    作者:刘冬妍;鲁学恒;刘沛 刊期: 2007年第06期

  • 沈阳市部分中老年人群血尿酸水平的现况分析

    目的:探讨沈阳市部分中老年人群中高尿酸血症、代谢综合征的发病率及血清尿酸水平与高血压、冠心病及代谢综合征危险因素的关系.方法:选取2006年沈阳市部分省直机关单位在我院进行健康体检的中老年干部人群共1 154例,按统一方法测量物理及生化指标,对得出的数据进行统计分析.结果:高尿酸血症及代谢综合征的患病率分别为25.6%、31 5%.不同血清尿酸水平4组的比较、尿酸高组与尿酸低组的比较均揭示随血尿酸水平的升高,代谢综合征及各组分的患病率也随之增高.结论:血清尿酸浓度是代谢综合征危险因素的独立相关因素.即使在尿酸正常范围内,随着浓度的增加,代谢综合征的发病危险也会随之增加.控制血尿酸水平是代谢综合征治疗中的重要环节之一.

    作者:邓娓娓;张倩;王晓非;曹翠平;孙光;孟洁;徐锦春;郑玉华 刊期: 2007年第06期

  • 铝暴露对大鼠海马CA1区长时程增强及α-CaMK Ⅱ活性的影响

    目的:探讨慢性铝暴露对海马CA1区长时程增强(LTP)及钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(α-CaMKⅡ)活性的影响.方法:选择断乳后Wistar大鼠,分别以含有0.2%、0.4%、0.6%(W/V)的氯化铝(AlCl3)蒸馏水饲养.3个月后,测定脑铝、血铝的含量;用电极刺激海马的CA1区,记录单脉冲刺激引起的峰电位(PS),观察高频刺激前后各组的变化;用Western blot方法,检测α-CaMKⅡ活性.结果:高频刺激后,铝暴露组PS幅值明显低于对照组(P<0.01);铝暴露组α-CaMKⅡ的活性和对照组相比明显降低(P<0.01).结论:慢性铝暴露抑制大鼠CA1区LTP的形成,这种抑制可能与其抑制α-CaMKⅡ的活性有关.

    作者:宗志红;陈井阳;孟晓娜;王彪;时利德;邢伟 刊期: 2007年第06期

  • 不同途径接种乙脑毒prME蛋白编码基因DNA疫苗所致BALB/c鼠的细胞免疫

    目的:研究经不同途径接种乙脑病毒prME蛋白编码基因DNA疫苗所诱导的细胞免疫.方法:将乙脑病毒prME蛋白编码基因DNA疫苗(命名为 pJME)分别以肌注、滴鼻两种免疫方式免疫BALB/c鼠,流式细胞仪检测脾脏CD4+/CD8+T淋巴细胞亚群,乳酸脱氢酶释放实验测定脾脏特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性.结果:pJME肌注组与滴鼻组免疫鼠CD4+T淋巴细胞百分比(30.91+0.72)%、(27.89+0.42)%,均高于灭活疫苗与载体肌注组(23.73+0.17)%、(23.78+0.21)%(P<0.05),肌注组显著高于滴鼻组(P<0.05);而CD8+T淋巴细胞百分比(14.62+0.25)%、(13.73+0.50)%,也均高于灭活疫苗和载体肌注组(10.80+0.39)%、(11.97+0.06)%(P<0.05),肌注组与滴鼻组无显著差异(P>0.05);两组有明显CTL效应(pJME肌注组29.1%,pJME滴鼻组17.1%),明显高于载体肌注组6.0%,pJME肌注组明显优于滴鼻组.结论:pJME以两种途径免疫鼠时可诱导明显细胞免疫反应.

    作者:周言;张琳;翟永贞;李喜梅;王占英;冯国和 刊期: 2007年第06期

  • 体动感知与体动+QT间期双感知频率适应性起搏器应答频率的比较

    目的:比较体动感知频率适应性起搏器与体动+QT间期双感知频率适应性起搏器的应答频率.方法:受试者被分为三组,第一组为应用体动感知频率适应性起搏器的患者;第二组为应用体动+QT间期双感知频率适应性起搏器的患者;第三组为对照者.通过动态心电图监测或起搏器的Holter监测获得各人群在静息和睡眠时低心率,比较其变异程度.结果:第一组与对照组静息及睡眠时心率变异性比较有显著差异(P<0.001),第二组与对照组静息及睡眠时心率变异性比较无显著差异(P>0.01).结论:体动+QT间期双感知传感器的频率适应性功能较体动感知单传感器更接近于窦房结功能,它的生理性更好,但不能完全模拟窦房结的功能.

    作者:李学渊;齐国先 刊期: 2007年第06期

  • p38丝裂素活化蛋白激酶信号传导通路对低氧预处理后心脏成纤维细胞血红素氧化酶-1基因表达的影响

    目的:探讨p38丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号传导对低氧预处理(HPC)的细胞保护作用以及HPC后血红素氧化酶-1(HO-1)mRNA表达的影响.方法:选用新生Wistar大鼠心脏选行成纤维细胞培养,给予HPC及低氧/复氧处理(HR).药物处理组在HPC和HR处理过程中向培养液中加入SB203580.测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)浓度和细胞HO-1mRNA表达量.结果:低氧/复氧后,HPC/SB组LDH浓度显著高于HPC/NSB组(P<0.05).HR组低氧/复氧后各亚组LDH浓度均显著升高(P<0.01,P<0.01);低氧/复氧处理前HPC组中NSB亚组于低氧预处理后HO-1 mRNA表达显著上升(P<0.001),低氧/复氧处理后其表达有所下降;SB亚组其表达也显著上升(P<0.01).HR组中各亚组于低氧/复氧处理后HO-1 mRNA表达也显著上升(P<0.01).结论:对培养的心脏成纤维细胞给予低氧预处理能够减轻其后低氧/复氧对细胞的损伤,低氧预处理较低氧/复氧处理更能够显著诱导心脏成纤维细胞HO-1 mRNA的表达.

    作者:林杰;吴岚;王嫘;张海燕;杨禹娟 刊期: 2007年第06期

  • 细胞芯片技术在急性白血病免疫分型中的应用

    目的:通过构建一种新型的细胞芯片,对急性白血病患者的外周血进行免疫分型,从而快速诊断白血病的类型.方法:将单克隆抗体点在醛基玻片上,细胞悬液滴于芯片,那些有相应CD抗原的细胞只能与相应的单克隆抗体的点结合,经荧光染色、扫描,还可进行Wright's染色.结果:25例AML的患者在芯片上均表达髓系的抗原:CD13,CD15,CD33;M4,M5表达CD14,M3不表达HLA-DR.5例ALL患者中2例表达B-ALL:CD10,CD19;3例T-ALL表达:CD5,CD7.结论:通过对细胞芯片的扫描实现了高通量的分析,其结果也可以通过普通显微镜观察.细胞芯片是一种快速、简便、低成本的技术,会得到广泛的应用.

    作者:李冬梅;赵雨杰;侯伟健;吴广平;杨华 刊期: 2007年第06期

  • 高效液相色谱法测定心脉宁胶囊中丹酚酸B含量

    采用高效液相色谱法对心脉宁胶囊中丹酚酸B进行含量测定方法的研究.丹酚酸B在0.194~0.970 μg范围内线性关系良好,回归方程为Y=818657.7X-1549.8.样品的平均回收率为99.9%.相对标准偏差(RSD)为1.67%.

    作者:陈再兴;罗濛;李丽红;全艳晖;孟繁浩 刊期: 2007年第06期

  • 砷与紫外线联合作用对人黑色素瘤G361细胞系色素代谢的影响

    目的:探讨单纯紫外线(UV)暴露与砷(As)和紫外线联合暴露间在色素代谢方面有无差异.方法:采用体外细胞培养法将细胞分为9组(As:0,0.1,1 μmol/L;UV:5,10 mJ/cm2;As+UV:0.1μmol/L+5 mJ/cm2,1μmol/L+5 mJ/cm2,0.1μmol/L+10 mJ/cm2,1 μmol/L+10 mJ/cm2),UV照射后,培养72 h,测定黑色素水平、酪氨酸酶(Tyr)活力及TyrmRNA表达水平.结果:10 mJ/cm2UV组、0.1μ(mol/L+10 mJ/cm2组及1μmol/L+10 mJ/cm2组的黑色素水平分别显著高于5 mJ/cm2组、0.1μmol/L+5 mJ/cm2组、1μmol/L+5 mJ/cm2组及对照组;各组Tyr活力及mRNA表达水平与对照组相比无显著差异.结论:单纯UV作用对黑色素产生水平的影响与亚砷酸纳(NaAsO2)和UV联合作用对黑色素产生水平的影响无差异,砷对紫外线的促黑素化作用没有协同效应.

    作者:李昕;李冰;孙贵范 刊期: 2007年第06期

  • 小儿肠套叠术后小肠套叠6例

    总结分析1994~2006年收治的6例小儿肠套叠术后小肠套叠患儿临床资料,探讨小儿肠套叠术后小肠套叠的临床特点和诊治经验.

    作者:白玉作;陈辉;周新;曲日斌;张可仞;吕良英;王维林 刊期: 2007年第06期

  • AMY1基因编码α淀粉酶在体外培养大鼠颌下腺细胞中的表达

    目的:检测大鼠颌下腺(SMG)AMY1基因编码α淀粉酶(α-Amy)在体外培养颌下腺细胞中的表达,鉴定细胞来源和检测体外培养细胞的功能.方法:分别进行培养大鼠细胞RT-PCR检测淀粉酶的基因表达;免疫印迹法(Western blotting)检测淀粉酶蛋白质.结果:大鼠SMG组织和培养细胞检测在474 bp处显示有一相同的带.表明大鼠培养SMG细胞RT-PCR产物与大鼠SMG组织α-淀粉酶mRNA表达相同.免疫印迹结果显示大鼠SMG组织与培养细胞分别出现了一单独的α-淀粉酶免疫活性蛋白电泳带,其分子大小为50 kDa,两者免疫活性蛋白泳带一致.结论:大鼠SMG组织和培养细胞淀粉酶mRNA表达相同,大鼠培养SMG细胞与大鼠SMG组织具有同源性.体外培养SMG细胞通过AMY1基因编码α-淀粉酶表达.

    作者:周青;隋承光;王玉新 刊期: 2007年第06期

  • 雌激素受体β基因多态性与原因不明月经过少的关系

    目的:探讨西南地区雌激素受体β(ER-β)基因多态性与原因不明月经过少的关系.方法:选择西南地区100名原因不明月经过少患者为实验组,100名正常月经者作为对照组.应用分子生物学的方法研究ER-β基因RsaI和AluI限制性片段长度多态性和5号内含子的高变区CA重复序列多态性在实验组与对照组中分布.结果:RsaI和AluI限制性片段长度多态性在两组中均呈多态性分布.分离出9种CA重复序列等位基因,正常组和实验组的等位基因的分布频率差异无显著性.以重复次数n≤20作为SS型,n>20为LL型,再比较两组病人SS型和LL型等位基因的分布频率,差异有显著性.结论:ER-β基因多态性与原因不明月经过少有关,R等位基因可能是其保护因素,SS型等位基因可能是原因不明月经过少的危险因素.

    作者:乐爱文;袁瑞;夏恩兰;耿力;周晓曦;姚珍薇 刊期: 2007年第06期

  • 腰段连续硬膜外阻滞对妊娠期高血压疾病大鼠血清NO、SOD的影响

    目的:观察腰段连续硬膜外阻滞对妊娠期高血压疾病大鼠血清NO、SOD的影响.方法:参照OLSON等介绍的方法复制妊娠期高血压疾病大鼠模型.实验动物分为4组:对照组A组孕鼠从妊娠的第14 d起,每日皮下注射0.5 ml生理盐水;实验组B组孕鼠从妊娠的第14 d起,每日皮下注射L-NAME 50 mg;假手术组C组孕鼠从妊娠的第14 d起,行硬膜外腔置管术,但不给药;治疗组D组孕鼠从妊娠的第14 d起,行硬膜外腔置管术,每日注入0.125%Bupivicaine 25 μl.观察腰段连续硬膜外阻滞后大鼠血清NO、SOD含量的变化.结果:在妊娠第20 d A、B、C、D各组血清NO、SOD含量的变化,B、C组较A、D组明显降低(P<0.05),A、D组与B、C组相比无显著性差异(P>0.05).结论:腰段连续硬膜外阻滞可增加妊娠期高血压疾病大鼠血清NO、SOD的水平,这可能是其对妊娠期高血压疾病具有防治作用的机制之一.

    作者:高琳琳;董有静;崔健君 刊期: 2007年第06期

  • 免疫活性地龙肽的制备及其对小鼠NK细胞活性的影响

    目的:提取低分子量免疫活性地龙肽,并就其对自然杀伤(NK)细胞活性的影响进行体外研究.方法:采用粗分离、凝胶过滤层析和阴离子交换层析等方法分离纯化地龙肽;采用乳酸脱氢酶法测定NK细胞活性.结果:用凝胶过滤层析分离得到地龙肽T(分子量8 000~20 000,含有7种蛋白).用离子交换层析又将地龙肽T分为A、B两部分,地龙肽A由5种蛋白组成,其中有4种分子量在13 000以下;地龙肽B仅由一种蛋白构成,分子量约11 000;地龙肽A和T可明显提高NK细胞的活性;地龙肽A、B和T皆可减弱环磷酰胺和地塞米松的免疫抑制作用,提高NK细胞的杀伤率.结论:地龙肽T、A单独应用即可以增强NK细胞的活性,并与IL-2具有协同作用;地龙肽T、A和B还可以拮抗地塞米松、环磷酰胺等免疫抑制剂.

    作者:傅炜昕;董占双;李铁英;许静;纪晓莉;贾秀坤;梁再赋 刊期: 2007年第06期

中国医科大学学报杂志

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主办:中国医科大学