学术投稿

辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的表达与多克隆抗体制备

刘戈飞;宋旭红;梁斌;杜昆;黄东阳

关键词:辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶, 基因表达, 多克隆抗体, 免疫
摘要:目的:制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)多克隆抗体.方法:应用大肠杆菌BL21-AI表达NRDR,制备NRDR包涵体,使用从SDS-PAGE凝胶中回收的重组NRDR作为免疫原,采用肩胛骨下注射作为免疫途径免疫兔.斑点杂交测定抗血清效价,HiTrap Protein G柱纯化兔IgG,免疫印迹鉴定抗体特异性.结果:BL21-AI对NRDR进行了高效表达.回收的NRDR蛋白溶液的浓度为0.36mg/ml,回收率为48.5%.所有免疫的动物在第2次追加免疫之后都产生了高效价的抗血清,血清的效价是1:500,检测极限是8ng NRDR蛋白.纯化后的NRDR抗体具有较高的免疫活性和特异性.结论:建立了高效制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶多克隆抗体的方法.
中国医科大学学报杂志相关文献
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    作者:李雪竹;严海东 刊期: 2006年第03期

  • 地塞米松对内毒素血症幼年大鼠心肌肌动蛋白及其mRNA表达的影响

    目的:通过观察地塞米松(Dex)对内毒素血症幼年大鼠心肌肌动蛋白(α-SA)及其mRNA表达的影响,探讨Dex对内毒素血症大鼠心肌收缩功能的保护途径.方法:选健康18 d Wistar大鼠121只,按腹腔注射药物不同分成:生理盐水对照组,内毒素(LPS)组、Dex组,各组于加LPS后2,4,6,24及72 h分别将大鼠断头分离心脏,RT-PCR方法测定α-SA mRNA表达水平,用免疫组化方法测定α-SA.结果:LPS和Dex组各时点α-SA及其mRNA表达均较对照组明显减弱(P<0.01);Dex组低点与LPS组一致在6~24 h,但明显高于LPS组(P<0.01).结论:α-SA及其mRNA表达在内毒素血症时明显受到抑制,心肌收缩功能受损;Dex可减轻LPS对d-SA及其mRNA表达的抑制作用.

    作者:王虹;潘静坤;陈睿;吴玉斌;高红 刊期: 2006年第03期

  • 四重原发性恶性肿瘤1例及文献复习

    随着肿瘤诊断和治疗的进展,重复癌在临床的发病率逐渐增加,本文通过对1例四重癌病人的诊治及文献的复习,探讨重复癌的临床特点和诊治要点.

    作者:赵明芳;刘云鹏 刊期: 2006年第03期

  • 辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的表达与多克隆抗体制备

    目的:制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)多克隆抗体.方法:应用大肠杆菌BL21-AI表达NRDR,制备NRDR包涵体,使用从SDS-PAGE凝胶中回收的重组NRDR作为免疫原,采用肩胛骨下注射作为免疫途径免疫兔.斑点杂交测定抗血清效价,HiTrap Protein G柱纯化兔IgG,免疫印迹鉴定抗体特异性.结果:BL21-AI对NRDR进行了高效表达.回收的NRDR蛋白溶液的浓度为0.36mg/ml,回收率为48.5%.所有免疫的动物在第2次追加免疫之后都产生了高效价的抗血清,血清的效价是1:500,检测极限是8ng NRDR蛋白.纯化后的NRDR抗体具有较高的免疫活性和特异性.结论:建立了高效制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶多克隆抗体的方法.

    作者:刘戈飞;宋旭红;梁斌;杜昆;黄东阳 刊期: 2006年第03期

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    应用免疫组化法检测抑癌基因PTEN和细胞凋亡蛋白酶Caspase-3在外阴不同组织中的表达情况,结果提示:PTEN和Caspase-3蛋白的失表达与外阴癌的发生、发展和预后不良有关.

    作者:白枫;武昕;花象锋;刘春艳 刊期: 2006年第03期

  • 细胞间黏附分子1和血管细胞黏附分子1在血管瘤组织中表达的意义

    目的:探讨细胞间黏附分子1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子1(VCAM-1)在小儿血管瘤增殖退化病理生理演变过程中的表达及作用机制.方法:应用SABC免疫组化法检测28例增殖期血管瘤及22例退化期血管瘤的ICAM-1、VCAM-1在血管内皮细胞上的表达情况,同时以血管畸形及正常皮肤为对照.结果:ICAM-1在增殖期血管瘤强阳性表达,退化期阳性表达,两时期差异十分显著(P<0.01);VCAM-1在增殖期和退化期血管瘤均为阳性表达,两时期无明显差异;ICAM-1和VCAM-1在血管畸形和正常皮肤几乎均为阴性表达,与不同时期血管瘤相比差异均十分显著(P<0.01).结论:ICAM-1可能在血管形成早期发挥作用,介导内皮细胞间黏附,参与血管瘤发病和消退的病理过程.

    作者:秦兴军;张恩礁;王绪凯;孙长伏 刊期: 2006年第03期

  • 颈内动脉海绵窦瘘病人经血管内栓塞治疗后的护理对策

    通过对35例颈内动脉海绵窦瘘的病人经血管内栓塞术后的护理及出院指导,诣在减少并发症,提高手术的成功率.

    作者:马志平;张晶;栾晓艳;王美春 刊期: 2006年第03期

  • Ag85A DNA疫苗对肠上皮内淋巴细胞FasL mRNA表达的影响

    目的:分析口服Ag85A DNA疫苗对小鼠肠上皮内淋巴细胞(iIEL)FasLmRNA表达的影响.方法:减毒伤寒杆菌运载的Ag85A DNA疫苗经口免疫小鼠,检测iIEL和脾淋巴细胞FasL mRNA的表达.结果:末次免疫后8 d,Ag85A DNA质粒组小鼠iIEL FasL mRNA平均表达水平高于正常对照组和空质粒对照组;空质粒对照组和正常对照组的iIEL FasL mRNA平均表达水平以及3组脾淋巴细胞FasL mRNA的表达水平均未见显著性差异.结论:口服Ag85A DNA疫苗可以上调小鼠iIEL FasLmRNA的表达,而对脾淋巴细胞未见有意义的影响.

    作者:王庆辉;吕昌龙;Azuma KALU;吕超;方芳;李季 刊期: 2006年第03期

  • 不同剂量匹伐他汀对小鼠缺血肢血流恢复的影响

    目的:探讨不同剂量匹伐他汀对小鼠缺血肢血流恢复的影响,为临床应用合适剂量他汀类药物提供实验依据.方法:建立小鼠下肢缺血模型并分为对照组、匹伐他汀低剂量组及高剂量组.镉还原Griess法、生化检测法测定3组实验结束后血清一氧化氮代谢产物及肝肾功能等含量.激光多普勒血流仪测定3组投药前及术后双下肢血流.蛋白印迹杂交法检测各组双下肢血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达.结果:低剂量组实验结束后肝肾功能无明显变化,一氧化氮代谢产物明显高于另外2组,术后缺血肢血流恢复明显,缺血肢VEGF蛋白表达增强.高剂量组肾功能损伤明显高于对照组和低剂量组,一氧化氮代谢产物明显低于低剂量组,术后缺血肢血流恢复不明显,缺血肢VEGF蛋白表达低于低剂量组.结论:低剂量匹伐他汀促进了小鼠缺血肢血流的恢复.

    作者:张月兰;程颖;李轶男;曾定尹;齐国先 刊期: 2006年第03期

  • 老年短暂性脑缺血发作与脂蛋白(a)和D-二聚体的关系

    目的:探讨老年短暂性脑缺血发作(TIA)与血清脂蛋白(a)[Lp(a)]和血浆D-二聚体的关系.方法:92例老年TIA患者按病程划分为A、B、C3组,所有病例在起病24 h内检测血清Lp(a)和D-二聚体的含量,观察72 h内头CT或MRI后与正常对照组进行比较.结果:老年TIA患者血清Lp(a)和D-二聚体的含量明显高于正常对照组(P<0.01),B、C组Lp(a)和D-二聚体的含量均高于A组(P<0.01),而且C组高于B组(P<0.0 5),重型TIA患者明显高于轻、中型患者.TIA各组Lp(a)与D-二聚体含量均呈显著正相关,P均<0.01.结论:Lp(a)和D-二聚体含量的升高可以对老年TIA患者的诊断、治疗和估计预后提供较可靠的实验室指标.

    作者:杨艳敏;李慎贤;毕国荣;彭扬;李慧;何平 刊期: 2006年第03期

  • 46例幼年特发性关节炎的回顾性分析

    对46例幼年特发性关节炎(JIA)患儿的临床分型、症状、实验室检查及药物治疗情况进行回顾性分析以探讨幼年特发性关节炎的临床特点及治疗方法.

    作者:姜红堃;孙桂莲;罗钢;姜红;张乾忠 刊期: 2006年第03期

  • Epworth嗜睡评价量表与多次小睡潜伏时间试验在评价白天嗜睡的相关性研究

    通过不同方法评价阻塞性睡眠呼吸暂停患者的嗜睡程度,证实Epworth嗜睡评价量表与多次小睡潜伏时间试验有良好的相关性.

    作者:章志丹;黄席珍 刊期: 2006年第03期

  • 大鼠脑出血后脑含水量的变化及水蛭素的干预作用

    目的:探讨大鼠脑出血(ICH)后脑含水量与血脑屏障(BBB)通透性之间的变化及水蛭素对ICH后脑水肿的作用.方法:采用自体动脉血注入大鼠尾状核建立脑出血模型,将75只大鼠分成:对照组、脑出血组、水蛭素组,各实验组分6 h、1 d、3d、5 d、7 d等5个时间点.采用干湿重法测定不同时间点的脑含水量;按BELAYEV法使用伊文思蓝测定BBB通透性.结果:脑水含量和BBB通透性在ICH后6 h开始升高,3 d达到高峰,5 d到7 d开始下降,二者之间存在明显的相关性(r=0.815,P<0.01).水蛭素能够降低各个时间点的脑水含量和BBB通透性.结论:BBB通透性增高与脑水肿的形成密切相关;水蛭素可抑制ICH后的脑水肿形成,抗凝血酶治疗可能成为ICH后脑水肿的一种可行治疗方法.

    作者:田力;滕伟禹;张威 刊期: 2006年第03期

  • 大肠杆菌感染对人巨噬细胞系U937凋亡的影响

    目的:探讨大肠杆菌(E.coli)感染与人巨噬细胞系U937细胞凋亡的关系.方法:以Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测及Hoechst 33258荧光染色,Giemsa染色等细胞形态学观察为指标,研究E.coli感染对U937细胞凋亡的诱导作用.结果:Giemsa染色:E.coli感染10,20 min(U937:E.coli=1:20)后偶见细胞凋亡,感染30,60及90min时可见许多细胞有典型的凋亡形态学改变,并可见凋亡小体;Annexin V FITC/PI双染可见U937细胞凋亡百分率随E.coli感染时间的延长而增高.感染30,60及90min时,细胞凋亡率与对照组相比明显增高,有显著性差异(P<0.001).Hoechst 33258荧光染色结果表明当细胞与细菌浓度比较低时(1:10)即可引起部分U937细胞发生凋亡,U937细胞凋亡百分率随E.coli感染剂量的增加而增加,且Hoechst 33258荧光染色及流式细胞仪二种方法所得结果一致.结论:E.coli以时间和剂量依赖方式诱导U937细胞凋亡.

    作者:王佳贺;周一军;何平;陈佰义 刊期: 2006年第03期

  • 热休克蛋白90在抑制细胞凋亡中的作用

    目的:探讨热休克蛋白90(HSP90)是否能够抑制肿瘤坏死因子α(TNF-α)和放线菌酮(CHX)协同诱导的细胞凋亡.方法:采用电穿孔技术建立稳定过表达HSP90的细胞克隆,应用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪观察TNF-α/CHX协同诱导的细胞凋亡.结果:在稳定过表达HSP90的小鼠成纤维细胞系NIH3T3中,HSP 90能够抑制TNF-α/CHX协同诱导的细胞凋亡;在TNF-α/CHX协同诱导的细胞凋亡中,HSP 90持续稳定存在12 h以上.结论:HSP 90能够抑制TNF-α/CHX协同诱导的细胞凋亡.

    作者:戴顺东;张秀伟;范垂峰;王恩华 刊期: 2006年第03期

  • 雄激素致不孕大鼠子宫一氧化氮含量的变化

    目的:研究雄激素致不孕大鼠(ASR)子宫一氧化氮(NO)含量的变化.方法:给出生9日龄SD雌性大鼠一次性皮下注射丙酸睾丸酮,建立ASR模型.130日龄处死,观察血清睾酮(T)、子宫NO含量及组织形态学的变化.结果:ASR模型血清T水平明显高于正常对照组(P<0.01);子宫NO含量明显低于正常对照组(P<0.05).与正常对照组比较,子宫肌层变薄、内膜萎缩、腺体减少.结论:ASR模型血清T水平增高,子宫NO含量明显降低,子宫内膜的分泌功能受损伤.ASR模型子宫的变化是引起不孕的原因之一.

    作者:宋翠淼;杜惠兰;岳华;马惠荣;段彦苍 刊期: 2006年第03期

  • 早期康复技术对脑卒中患者运动功能康复的探讨

    不科学的治疗与护理,可使脑卒中患者产生一系列的异常运动模式及偏瘫合并症,应用早期康复技术,进行有效的肢体功能训练,可大大降低脑卒中患者的致残率,促进病人运动功能的的恢复.

    作者:苏贵范;郑玉侠;刘显艳 刊期: 2006年第03期

  • 辽宁省7城市居民1988-2000年意外伤害死亡分析

    目的:探讨城市居民意外伤害死亡率变化趋势和特点.方法:对1988-2000年辽宁省7城市死亡统计年报资料进行分析.结果:城市居民意外伤害死亡率为40.48/10万,占全死因第5位.城市居民意外伤害死亡率呈波动性变化趋势,男性死亡率高于女性,性别比值为2.20.高发年龄是20~59岁组.意外伤害死亡前4位死因依次为交通事故、自杀、意外中毒和意外跌落.自杀死亡率为6.51/10万,呈下降趋势.机动车交通事故死亡率为10.07/10万,呈缓慢上升趋势,其中男性上升趋势比较明显.结论:意外伤害未得到有效控制,已成为危害城市人群的主要死因之一.积极采取有效的干预措施,对于减少意外伤害和降低意外伤害死亡率有十分重要的意义.

    作者:董光辉;于连政;刘健;冯毅平;井立滨;董千泽 刊期: 2006年第03期

  • 环氧化酶2在肾癌组织中表达及与血管生成的关系

    目的:探讨环氧化酶2(COX-2)在肾癌组织中表达的意义及其与血管生成的关系.方法:采用免疫组化法检测34例肾癌组织和癌周正常肾组织中COX-2的表达及微血管密度(MVD).结果:COX-2在肾癌组织中表达的阳性率为76.47%,癌周正常肾组织中表达的阳性率为13.33%,两者比较有统计学意义(P<0.01).COX-2的异常表达与肾癌的病理分级及临床分期之间的差异无统计学意义.COX-2表达阳性组的MVD高于COX-2表达阴性组,两者之间有显著相关性(r=0.75,P<0.01).结论:COX-2的异常表达可能与肾肿瘤的发生有关,可为肾肿瘤的治疗和预防开辟新的途径.

    作者:刘博;孙志熙;孔垂泽;刘奔;时京 刊期: 2006年第03期

中国医科大学学报杂志

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主办:中国医科大学