学术投稿

mTOR反义RNA真核表达载体的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达

胡新华;杨军;张志深;刘程伟;刘戈飞;张强

关键词:雷帕霉素靶蛋白, 反义技术, 基因表达载体
摘要:目的:构建哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的反义RNA真核表达载体,观察其对血管平滑肌细胞(VSMC)功能的影响.方法:提取人VSMC总RNA,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增mTOR基因cDNA序列,经pGEM-T载体克隆后双酶切,将cDNA序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGP-C1,构建mTOR基因反义RNA真核表达载体.转染VSMC,采用Westem blot法检验反义表达载体对mTOR蛋白表达的影响,流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果:经RT-PCR获得664 bp产物,T载体克隆后,经DNA测序,确定该片段为mTOR基因cDNA,进而构建反义RNA真核表达载体pEGFP-C1-mTOR,测序证明序列正确后转染VSMC,证实其能够显著抑制mTOR蛋白产物表达,VSMC的分裂、增殖过程受阻.结论:已经成功构建mTOR基因的反义RNA真核表达载体.
中国医科大学学报杂志相关文献
  • 视网膜下液促使视网膜色素上皮细胞膜上蛋白激酶C变化的机制分析

    目的:研究视网膜下液(SRF)能否引起体外培养的视网膜色素上皮(RPE)细胞浆内蛋白激酶C(PKC)的激活和转位,探讨SRF与RPE细胞中PKC信号系统变化的关系.方法:实验对象为体外培养的RPE细胞;不同的刺激因素分别在不同的时间刺激RPE细胞,通过细胞裂解和离心获取细胞浆和细胞膜蛋白粗提液,用同位素32P标记和液体闪烁计数法检测细胞浆和细胞膜PKC活性水平.结果:SRF和佛波酯(PMA)都可以激活RPE细胞浆中的PKC(c-PKC),并使其由胞浆向胞膜转位,但胞膜上PKC(m-pKC)活性峰值水平和出现的时间不同.结论:SRF可引起RPE细胞膜上PKC的活性发生变化,变化的幅度与增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)的分级呈正相关.

    作者:孙兆义;洪晶 刊期: 2006年第04期

  • 右冠状动脉缺如1例临床报告

    本文报告1例先天性右冠状动脉缺如

    作者:王远鹤;齐国先;杨光 刊期: 2006年第04期

  • 鹅膏蕈的氧化损伤及白藜芦醇的抗损伤作用观察

    目的:探讨鹅膏蕈的氧化损伤及白藜芦醇的抗损伤作用.方法:将4组SD大鼠分别给予不同剂量的鹅膏覃毒素(腹腔注射),其中2组给予不同剂量的白藜芦醇(腹腔注射).观察各组染毒后不同阶段的血液生化酶、脏器系数和氧化损伤指标.结果:与空白对照组比较,鹅膏蕈高剂量组超氧化物歧化酶(SOD)活力与丙二醛(MDA)含量变化有显著差异(P<0.05),动物肝脏脏器系数明显增大变化有显著差异(P<0.05),肝脏功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)、心肌损伤特异性标志物天冬氨酸转氨酶(AST)活力水平变化有显著差异(P<0.05).给予白藜芦醇可减轻指标改变的程度.结论:鹅膏蕈毒素可引起氧化损伤作用,白藜芦醇可减轻这种损害程度.

    作者:李玉白;周继;刘劭钢 刊期: 2006年第04期

  • 参附注射液对肝缺血再灌注大鼠微循环的影响

    目的:应用大鼠肝缺血再灌注(IR)损伤模型探讨参附注射液对肝微循环的影响.方法:12只Wistar大鼠随机分为IR组和SF组.SF组给予参附注射液10 ml/kg.IR组大鼠给予相同剂量的生理盐水.两组均采用Pringle法阻断肝门缺血15min再灌注3 h,测定血清生化酶ALT、AST、LDH和血浆TXB2、6-keto-PGF1α,及观察肝组织形态学改变.结果:SF组血清ALT、AST、LDH水平低于IR组;血浆TXB2低于IR组,6-keto-PGF1α高于IR组,二者比值TXB2/6-keto-PGF1α低于IR组;SF组肝实质细胞和肝窦内皮细胞损伤明显减轻,肝窦形态的改变和肝窦内的瘀血、白细胞聚集也明显减轻.结论:参附注射液通过保护肝窦内皮细胞,降低TXA2/PGI2比值及减轻肝窦内炎性反应,改善肝脏微循环灌注.

    作者:彭松林;戴朝六;黄勇;赵阳;顾玺 刊期: 2006年第04期

  • 斑蝥素通过MAPK途径对肺癌A549细胞周期阻滞及其分子机制的研究

    目的:探讨斑蝥素对人肺癌A549细胞的周期阻滞作用及其分子机制.方法:采用MTT法检测斑蝥素对A549细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;以蛋白印迹法分析斑蝥素作用后细胞周期蛋白B1(cyclinB1)、p34cdc2、phos-p34cdc2、p21、survivin、ERK1/ERK2、phos-ERK1/phos-ERK2等蛋白表达或活性的改变.结果:斑蝥素能抑制A549细胞的增殖;斑蝥素作用于A549细胞后引起G2/M期阻滞;斑蝥素处理后,p34cdc2、phos-p34cdc2表达量没有改变,cyclinB1、survivin蛋白表达量减少,p21蛋白表达量增加.ERK1/ERK2、phos-ERK1/phos-ERK2表达量降低.结论:斑蝥素通过调节cyclinB1、p21、survivin、ERK1/ERK2、phos-ERK1/phos-ERK2等蛋白表达或活性的改变引起G2/M期阻滞.

    作者:张卫东;赵惠儒;于秉治;王晓华;宗志红;刘莹 刊期: 2006年第04期

  • 某医科大学新生人格健康调查问卷分析

    目的:探讨医科大学新生心理健康状况的影响因素及应对策略.方法:采用大学生人格健康调查问卷(UPI)对某医科大学2004年入学新生进行调查.结果:一类学生占19.17%;二类学生占31.58%;三类学生占49.25%.结论:医科大学新生心理健康程度总体状况良好,但潜在影响因素较多,因此,需要切实加强大学生的心理健康教育.

    作者:郭淑英;杜天骄;于娜 刊期: 2006年第04期

  • 静磁场对牙周炎组织中骨形成蛋白2 mRNA作用的实验研究

    目的:检测静磁场对牙周炎大鼠牙周膜组织中骨形成蛋白2(BMP-2)mRNA的影响.方法:选健康雌性Wistar大鼠,通过牙周结扎、高糖喂食法制备牙周炎动物模型,5周后,分别在牙周炎对照组和牙周炎磁治疗组大鼠双侧颊部皮下组织区埋入不充磁和充磁的永磁体,于术后的第2,4,7 d时,切取牙周炎患牙及其周围牙周组织,采用原位杂交法检测病变区牙周膜组织中BMP-2 mRNA的变化.结果:牙周膜的成纤维细胞、成牙骨质细胞、成骨细胞及胶原纤维的胞浆及部分胞核中均可见BMP-2 mRNA阳性杂交信号.牙周炎磁治疗2 d组BMP-2 mRNA阳性杂交信号明显,部分切片的牙槽骨表面成骨细胞有强阳性杂交信号表达.结论:静磁场促进牙周炎牙周膜细胞分泌BMP-2 mRNA,临床可参考将其作为牙周炎治疗的辅助手段.

    作者:仇丽鸿;张凌;汤旭娜;钟鸣 刊期: 2006年第04期

  • 血气分析在危重病人抢救中的临床意义

    通过分析危重患者动脉血气及电解质测定结果,认为对危重病人及时监测动脉血气各值,尽早地控制酸碱紊乱的发生,尤其是混和型酸碱紊乱,对降低危重病人的死亡率,有一定的临床指导意义.

    作者:肖莉;宋玉;李振华 刊期: 2006年第04期

  • 兔肺内、外源性急性呼吸窘迫综合征血清和支气管肺泡灌洗液中炎性介质的表达

    目的:比较肺内、外源性急性呼吸窘迫综合征(ARDS)兔血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性介质的表达.方法:健康新西兰家兔24只,随机分为肺内源性ARDS(ARDSp)组和肺外源性ARDS(ARDSexp)组,每组12只.稀盐酸气管内滴入法制作ARDSp动物模型,静脉注射油酸法制作ARDSexp模型.测定基础状态和注药后静脉血及肺泡灌洗液肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素1β(IL-1β),IL-6水平.结果:两组动物均在注药后3 h内达到ARDS诊断指标;损伤后两组动物血清及BALF炎性介质水平均有增高,ARDSp组动物以BALF中炎性介质表达为主,ARDSexp组动物以血清炎性介质表达为主.结论:由不同原因引起的ARDS由于其发病机制和损伤部位不同,其炎性介质表达和病理改变是不同的,ARDSp的炎性介质表达以BALF为主,病理改变以肺泡水肿、炎细胞浸润为主;ARDSexp的炎性介质表达以血清为主,病理改变以肺间质水肿为主.

    作者:穆恩;张小娟;马晓春 刊期: 2006年第04期

  • 改良Blandy法经尿道前列腺切除术治疗高危重度前列腺增生症

    目的:探讨改良Blandy法经尿道前列腺切除术(TURP)治疗高危重度前列腺增生症(BPH)的临床效果.方法:高危重度BPH 49例,在有效治疗原有内科疾病基础上,Blandy法TURP治疗17例,改良Blandy法TURP治疗32例,对两组病例的手术时间、切除腺体重量、术中出血量、术中输血量等进行比较.结果:全部病例治疗过程顺利,效果良好.Blandy法TURP切除腺体平均56 g,平均手术时间85 min,术中平均出血282 ml,术中输血10例,平均输血400 ml.改良Blandy法TURP切除腺体平均57 g,平均手术时间70 min,术中平均出血210 ml,术中输血15例,平均输血300 ml.结论:改良Blandy法TURP治疗高危重度BPH手术时间短、术中出血少,安全、可行.

    作者:宋永胜;杜强;吴斌;霍军;王顺 刊期: 2006年第04期

  • 叠氮钠对心肌细胞活力影响的研究

    目的:观察叠氮钠对原代培养大鼠心肌细胞活力的影响.方法:研究不同浓度叠氮钠在不同时间内对原代培养的大鼠心肌细胞活力的影响.结果:叠氮钠对心肌细胞活力的抑制作用随浓度增加以及作用时间延长明显增加.1 mmol/L叠氮钠孵育细胞3 h,细胞发生可逆的早期凋亡,大于6 h,细胞发生不可逆的死亡.结论:低剂量叠氮钠可诱导原代培养的大鼠心肌细胞发生可逆的早期凋亡.

    作者:关付;于波;齐国先;罗佳 刊期: 2006年第04期

  • 扁平苔藓皮损中浸润淋巴细胞的研究

    目的:探讨淋巴细胞浸润在扁平苔藓(LP)发病机制中的作用.方法:免疫组织化学SP法对32例LP患者及30例正常人皮肤CD3,CD4,CD8,CD20进行检测.结果:表皮中浸润细胞以CD3+T,CD8+T细胞为主,真皮以CD3+T,CD4+T,CD8+T细胞为主,真皮乳头浸润细胞多于表皮突.随病程延长,浸润细胞数减少(P<0.01),真皮CD4+/CD8+值下降(P<0.05),CD20+B细胞百分率上升(P<0.05).有过度增殖性改变的皮损中CD20+B细胞明显增多.结论:CD8+T细胞与LP皮损的基底细胞损伤以及皮损的持续存在有关.皮损局部CD4+T,CD8+T细胞功能失衡.CD20+B细胞可能与疾病的持续存在及局部过度增殖性改变有关.

    作者:狄正鸿;许静 刊期: 2006年第04期

  • 磁性附着体覆盖义齿的临床效果评价

    目的:评价采用磁性固位改善覆盖义齿固位的远期应用效果.方法:对21位患者采用磁性附着体覆盖义齿修复,并对义齿的固位、咀嚼、修复体使用情况的满意度以及义齿应用后出现的问题进行0.5~2.5年的随访.结果:磁性附着体可为覆盖义齿提供长期稳定的固位力且有助于基牙健康;21例义齿均正常使用,美观,咀嚼效能好,患者总体满意度高;应用磁力固位的覆盖义齿戴用后并发症较少.结论:磁性附着体能明显改善覆盖义齿的固位及咀嚼效率,具有良好的远期效果.

    作者:刘琳琳;赵奇;战德松 刊期: 2006年第04期

  • 缺血缺氧新生鼠肺超微结构变化及 TNF-α和I-κBα表达的研究

    目的:探讨围产期缺血缺氧对新生大鼠肺超微结构和肿瘤坏死因子α(TNF-d)及核因子κB抑制蛋白(I-κBα)表达的影响.方法:结扎孕鼠一侧子宫角血管(另一侧宫内胎鼠作为对照),建立围产期缺血缺氧动物模型.电镜下观察肺组织超微结构变化并分别采用ELISA、RT-PCR和Western blot杂交法观察不同程度缺血缺氧新生大鼠肺组织TNF-α蛋白和mRNA及I-κBα表达的变化.结果:宫内急性缺血缺氧20 min时,新生大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞和毛细血管内皮细胞受损;肺组织TNF-α蛋白和mRNA表达明显增强(P均<0.01),I-κBα表达明显减弱(P<0.05),并随缺血缺氧时间延长病变加重.结论:围产期急性缺血缺氧致新生大鼠肺损伤,I-κBα和TNF-α的异常表达可能是肺损伤的重要原因.

    作者:蔡栩栩;杜悦;刘春峰;韩晓华;尚云晓;韩玉昆 刊期: 2006年第04期

  • 宫颈横裂皱褶处上皮病理学改变分析

    目的:研究宫颈外口横裂皱褶处上皮组织的病理学改变.方法:分析83例Reid阴道镜评分(RCI)为0分的宫颈横裂处上皮的组织病理学结果,并以这83例宫颈的RCI 0分非皱褶处上皮组织作为对照组,将两组结果进行比较.结果:83例RCI 0分的皱褶处上皮中,22例(26.5%)存在宫颈上皮内瘤变(CIN),其中CIN Ⅰ 18例,CIN Ⅱ 4例;83例RCI 0分的非皱褶处上皮中,6例(7.2%)存在CIN,其中CIN Ⅰ 4例,CIN Ⅱ 2例.两组比较,差异显著(P<0.005).结论:宫颈外口横裂的皱褶处更易发生病变,该处的组织病理学结果常高于阴道镜拟诊,活检时应常规检取皱褶处上皮.

    作者:陆春雪;杜丽敏;梁美艳;姜涛;张淑兰 刊期: 2006年第04期

  • 合并大左室瓣膜病围手术期的护理体会

    总结1998年4月至2004年7月共为28例合并大左室的心脏瓣膜病人施行了机械瓣膜置换术.术后实施重症监护72 h.术后治愈出院25例,早期死亡3例.合并症22例,心律失常20例,低心排出量综合征2例.加强大左室心脏瓣膜病患者的术前护理,术后严密监护,可提高护理成功率.

    作者:葛晓丽;葛静玲 刊期: 2006年第04期

  • caspase-3在骨肉瘤中表达的研究

    应用SP免疫组织化学方法分别检测caspase-3在38例骨肉瘤及20例骨软骨瘤中的表达.caspase-3在骨肉瘤中表达阳性率为52.6%,骨软骨瘤中为85.0%,差异显著(P<0.05).骨肉瘤组织中caspase-3的表达降低与骨肉瘤的发生有关.

    作者:吕刚;黄涛;王岩峰;顾海伦;高文;安贵峰;于德水;马旭 刊期: 2006年第04期

  • 颈前两个动脉岛状肌皮瓣在口腔癌术后缺损修复中的应用

    目的:寻求口腔癌扩大切除术后缺损修复较理想的组织瓣,以恢复功能和外形,提高病人的生存质量.方法:收集颏下动脉岛状肌皮瓣修复44例,皮瓣面积为9.0 cm×6.5 cm~5.0 cm×3.5 cm;舌骨下肌群肌皮瓣修复10例,面积为9.0 cm×6.0 cm~6.0 cm×5.0 cm.结果:颏下动脉岛状瓣成活率为93.36%;舌骨下肌群瓣成活率近100%.结论:颈前两个动脉岛状肌皮瓣具有成活率高、操作简单、技术难度小、可与颈清扫手术同期完成、供区可直接拉拢缝合、动脉蒂长,肌皮瓣转移灵活等优点,是口腔癌扩大切除术后中小组织缺损修复较理想的组织瓣.

    作者:葛淑芬;李瑞武;孙长伏;谭学新 刊期: 2006年第04期

  • 老年慢性阻塞性肺疾病合并自发性气胸78例临床分析

    通过对老年慢性阻塞性肺疾病合并自发性气胸与老年特发性气胸比较,前者气胸类型复杂,治疗困难预后较差.

    作者:吴兆音;孔灵菲 刊期: 2006年第04期

  • 宫内生长发育受限胎鼠脑发育及生后学习记忆能力变化的研究

    目的:研究宫内生长受限(FGR)胎鼠脑发育及生后远期学习记忆能力的变化.方法:利用子宫动脉钳夹法制作FGR胎鼠模型.将孕鼠分为2组,每组又分实验组(FGR组)和对照组(非FGR组).第1组于妊娠21 d剖宫取胎,比较FGR胎鼠和非FGR胎鼠脑组织S100B mRNA表达.第2组自然分娩,于生后50 d后行水迷宫法进行学习记忆能力的测定.结果:第1组FGR胎鼠脑组织S100B mRNA表达量为1.204±0.145,非FGR组为0.967±0.179(P<0.01).第2组新生鼠出生后定位航行试验和空间探索试验显示FGR组子鼠学习记忆和空间定位能力较非FGR组显著下降(P<0.01;P<0.01).结论:FGR胎鼠在宫内即可有神经系统损伤,并对出生后远期的学习记忆能力产生影响.

    作者:杜鹃;谷文升;尚涛;高红 刊期: 2006年第04期

中国医科大学学报杂志

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主办:中国医科大学