学术投稿

荧光实时定量PCR检测铜绿假单胞菌外膜蛋白oprⅠ基因的标准品的构建

钟礼立;张兵;贺蓉;林小娟;张爱民;蔡瑞云;段贞

关键词:铜绿假单胞菌, oprⅠ基因, 荧光实时定量PCR, 标准品
摘要:目的构建荧光实时定量PCR(FQ-PCR)标准品测定铜绿假单胞菌oprⅠ基因,以此测定铜绿假单胞菌菌量.方法以铜绿假单胞菌的oprⅠ基因为目的基因设计探针引物,提取细菌基因组DNA,与pMD 18-T Vector连接并转化到大肠杆菌中.用氨卞青霉素筛选出白色菌落,提取含目的基因质粒,并用HindⅢ限制酶进行线性化处理,通过直接PCR、OD值测定及DNA片段测序鉴定其特异性.根据OD值确定浓度,制备FQ-PCR梯度浓度参考标准品,做出标准曲线,检测各样品菌菌量.结果铜绿假单胞菌oprⅠ基因的目的片段成功制备,获得稳定的重组质粒,保持了目的片段的特异性和序列完整性,并获得很好的标准曲线(相关系数0.994),成功检测了铜绿假单胞菌标准菌株、培养株的菌量,而大肠杆菌及阴性对照无扩增.结论成功构建FQ-PCR检测铜绿假单胞菌oprⅠ基因的定量参考标准,荧光实时定量法可以快速检测铜绿假单胞菌.
实用预防医学杂志相关文献
  • 2 058例0.5~9岁儿童全血铁水平调查

    目的了解0.5~9岁儿童全血铁水平,分析年龄、地区间血铁含量差异.方法2 058名儿童分成三个年龄段,采用火焰原子吸收分光光度法检测末梢血含铁量.结果2 058例0.5~9岁儿童全血铁含量为(9.23±2.51)μmol/L.儿童血铁含量存在性别差异,男高于女(P<0.01).以0.5~1岁年龄段血铁为低(7.68±1.01)μmol/L,>5~9岁儿童高(11.67±1.06)μmol/L.男、女童血铁差异在>1~5岁年龄段有显著性差异(P<0.01);城郊两地儿童血铁差异有非常显著性(P<0.01).结论本组儿童全血铁含量与其他地区报道基本一致,但应对>1~5岁年龄组儿童饮食给予足够重视.

    作者:程春香;谭浩 刊期: 2006年第02期

  • 深圳市东门菜肉市场单核细胞增生李斯特氏菌污染状况分析

    目的通过对深圳市东门菜肉市场单核细胞增生李斯特氏菌污染状况的调查,加大对冷藏食品中威胁人类健康单核细胞增生李斯特氏菌的重视.方法根据中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验总则单核细胞增生李斯特氏菌检验(GB4789.30-2003)、荧光PCR法.结果对所采的50份样品用国标方法和荧光PCR法均检出3株单核细胞增生李斯特氏菌.结论深圳市东门菜肉市场存在着单核细胞增生李斯特氏菌污染,本次调查的污染率为6%,建议管理部门和卫生部门加大卫生监督力度,预防单核细胞增生李斯特氏菌食物中毒的发生.

    作者:林一曼;石晓路;王冰 刊期: 2006年第02期

  • 湖南省工业企业职工健康检查情况调查分析

    目的了解、掌握湖南省工业企业职业健康检查情况,为开展职业病防治工作提供依据. 方法2004年由湖南省卫生厅发文在全省统一开展职业病危害企业的摸底调查,并将其职业健康检查纳入调查内容. 结果工业企业职业健康检查的体检覆盖率、体检率较低,职业病检出率较高,并在不同地区、不同经济类型企业、不同行业分布不一.结论职业健康检查力度不大,职业病危害严重,应进一步加强其工作.

    作者:曾碧霞;刘敏;肖云龙;蒋然子;余丹 刊期: 2006年第02期

  • 深圳无偿献血乙肝筛查阳性结果确证分析

    目的了解无偿献血乙肝筛查阳性样本确证实验结果,提高输血安全.方法采用进口和国产试剂酶联免疫吸附实验(ELISA)进行血液筛查,并以中和实验及分子生物学聚合酶联反应(PCR)方法对阳性结果进行确证分析,评估试剂的灵敏度.结果深圳市无偿献血人群共计检出ELISA阳性103例(含进口或国产单一试剂检测阳性),确证阳性91例.HBV阳性率为0.68%.进口试剂检出率0.68%,国产试剂0.55%,统计上无显著差异(x2=1.76,P>0.05).结论有必要提高目前国产试剂的特异性和灵敏度;为减少输血后乙肝感染,血液筛查有必要采用高灵敏度特异性较好的进口试剂.

    作者:曾健强;聂冬梅;马兰;叶贤林 刊期: 2006年第02期

  • 中山市流行性脑脊髓膜炎流行特征分析

    目的对中山市2004~2005年流行性脑脊髓膜炎病例进行流行病学的分析,为预防和控制流行性脑脊髓膜炎提供科学的依据.方法采用统一个案调查表,对辖区内流行性脑脊髓膜炎病例进行调查,并采集脑脊液用乳胶凝集法进行特异性抗原的检测,采集咽拭子标本进行细菌的培养;用Excel录入每例个案资料,运用描述流行病学方法对病例进行综合分析.结果全市报告8例流行性脑脊髓膜炎散发病例,其中1例为输入性病例,余均为本地感染病例,散发于该市4个镇区,除1例为本市籍的患者外,余均为外来流动人员;脑膜炎奈瑟菌特异性抗原的检测均为阳性,血清分型以A群为主,同时发现A+B群、B群和C群.结论应加强冬春季卫生知识的宣传教育,特别是预防流行性脑脊髓膜炎知识的教育,加强菌群监测及疫情预测预报,切实做好流脑多糖体菌苗的预防接种和应急免疫工作,定期在外来人员和易感者中开展流脑疫苗的接种.

    作者:高赛珍;罗小铭;吴宝燕;吴衍恒;李兆琦;朱远峰;欧慧 刊期: 2006年第02期

  • 160例Ⅰ期煤工尘肺患者肺功能测定结果分析

    目的探讨Ⅰ期煤工尘肺患者肺功能状态及肺通气功能损害的类型、年龄、接尘时间、工种、心肺合并症对肺功能的影响.方法采用日本美能MINATOAs-500型肺功能测定仪对160例Ⅰ期煤工尘肺及60名非粉尘作业工人进行肺通气功能测定,对所测定的结果比较分析.结果Ⅰ期煤工尘肺通气功能减退者99例,占61.9%.各项通气功能指标均明显低于对照组(P<0.001),尤以大呼气中期流速(FEF)显著.结论160例Ⅰ期煤工尘肺通气功能障碍以混合型为主,并随着接尘工龄、年龄增加以及心肺合并症加重而肺通气功能随之下降,但与工种关系不密切.

    作者:龙双才 刊期: 2006年第02期

  • 某有色金属有限责任公司铋、钼冶炼作业场所职业危害因素检测

    目的了解有色金属企业铋、钼冶炼作业场所的职业危害因素污染现况.方法职业卫生学现况调查,对铋、钼冶炼厂生产过程中的职业病危害因素进行连续3 d的现场检测.结果铋冶炼厂工作场所的铅烟高浓度为0.27 mg/m3,超过国家标准高容许浓度(MAC)9倍,砷高浓度为0.13 mg/m3,超过国家卫生标准短时间接触容许浓度(PC-STEL)6倍;钼冶炼厂麻石除尘器排污口的SO2检测结果超标;铋冶炼配料作业场所粉尘浓度高达94.10 mg/m3,钼冶炼球磨机处粉尘浓度高为16.60 mg/m3;钼冶炼球磨机处噪声超过国家卫生标准限值,高为97 dB(A).汞、氧化锌、钼、Cl2、NO2、CO、CO2等测试结果均符合国家卫生标准.结论铋、钼冶炼作业应加强铅烟、砷、粉尘、噪声等环境职业危害因素的监测与防护.

    作者:李文;杨长庚;田国彬;吴道溪 刊期: 2006年第02期

  • 加强消毒供应室质量管理预防医院交叉感染

    目的加强消毒供应室的管理,预防医院交叉感染的发生.方法对消毒供应室实行科学管理,努力提高工作人员职业素质,对各项指标进行严格监测.结果未发现因消毒供应室物品不合格而引起的医院感染.结论加强专业人员责任心,提高人员专业素质,严格质量监测是控制感染的关键.

    作者:李冬红 刊期: 2006年第02期

  • 荧光实时定量PCR检测铜绿假单胞菌外膜蛋白oprⅠ基因的标准品的构建

    目的构建荧光实时定量PCR(FQ-PCR)标准品测定铜绿假单胞菌oprⅠ基因,以此测定铜绿假单胞菌菌量.方法以铜绿假单胞菌的oprⅠ基因为目的基因设计探针引物,提取细菌基因组DNA,与pMD 18-T Vector连接并转化到大肠杆菌中.用氨卞青霉素筛选出白色菌落,提取含目的基因质粒,并用HindⅢ限制酶进行线性化处理,通过直接PCR、OD值测定及DNA片段测序鉴定其特异性.根据OD值确定浓度,制备FQ-PCR梯度浓度参考标准品,做出标准曲线,检测各样品菌菌量.结果铜绿假单胞菌oprⅠ基因的目的片段成功制备,获得稳定的重组质粒,保持了目的片段的特异性和序列完整性,并获得很好的标准曲线(相关系数0.994),成功检测了铜绿假单胞菌标准菌株、培养株的菌量,而大肠杆菌及阴性对照无扩增.结论成功构建FQ-PCR检测铜绿假单胞菌oprⅠ基因的定量参考标准,荧光实时定量法可以快速检测铜绿假单胞菌.

    作者:钟礼立;张兵;贺蓉;林小娟;张爱民;蔡瑞云;段贞 刊期: 2006年第02期

  • ER在门静脉高压症肝脏组织中的表达及其临床意义

    目的探讨ER在门静脉高压症(PHT)肝脏组织中的表达及与临床病理特征的关系.方法应用免疫组化S-P法,检测42例PHT患者肝脏组织ER的表达,并结合临床资料、组织形态学进行观察.结果PHT患者肝脏组织ER表达阳性率为69.05%(29/42),正常肝脏组织ER不表达;ER表达与病程长短,肝纤维化程度呈正相关(P<0.05),与性别、病因无关.结论ER在PHT患者的肝脏组织中有较高表达,提示PHT患者肝脏的病理改变存在雌激素依赖的可能性.

    作者:陈栋良;邓维成;郭继雄;李静;陈学金;刘佳新 刊期: 2006年第02期

  • 米非司酮与米索前列醇在利凡诺中期妊娠引产中的应用

    利凡诺羊膜腔内注射中期妊娠引产已被临床广泛应用,但由于中期妊娠宫颈不成熟,宫颈扩张不理想,因此存在着引产时间长、术中出血多、胎盘残留率高,增加患者痛苦等问题,且造成宫颈损伤的危险性增加.为了减少上述情况的发生,我院从2000年1月~2005年12月将米非司酮配伍米索前列醇应用于利凡诺中期妊娠引产术中,取得满意效果.现报告如下.

    作者:刘春芳;李向春;邓新粮;肖松舒 刊期: 2006年第02期

  • 高位胃良性溃疡41例内镜检查分析

    高位胃良性溃疡指发生于贲门下方、胃底胃体小弯垂直部以上1/2处的溃疡.我院2001~2005年9月,经内镜诊断良性高位胃溃疡41例,这41例病例均经活检病理组织学证实.现就高位溃疡内镜检查法,溃疡特点及其分布、鉴别诊断等分析如下.

    作者:康芳 刊期: 2006年第02期

  • 某烟厂污水处理站职业卫生学调查分析

    目的探讨某烟厂污水处理站存在的职业病危害因素及职业病危害防护措施的效果.方法采用职业卫生学调查及职业病危害因素测试方法.结果该污水处理站风机房噪声结果超标,毒物检测结果虽低于国家职业接触限值,但硫化氢等混合废气恶臭气味较重.结论污水处理站的职业病危害防护设施整改工作的重点是谨防硫化氢急性中毒事故的发生.

    作者:廖雍玲;王多多;刘蔼成;汤利民;董吉良;张养元;余志林;李祈;高喻红;张贻瑞 刊期: 2006年第02期

  • 贵州7个民族群体6对遗传性状的基因频率研究

    目的探讨贵州少数民族群体部分遗传性状基因频率分布特征.方法采取整群随机抽样方法对贵州2 537例(男1 372,女1 165)仡佬族、彝族、土家族、白族、回族、穿青待识别民族和汉族的发形、上眼睑皱褶、内眦褶、耳垂、鼻梁侧面观和鼻孔形状6个遗传性状进行调查,并根据Hardy-Weinberg定律计算各遗传性状的基因频率.结果贵州仡佬族、彝族、土家族、白族、回族、穿青待识别民族和汉族发形的显性基因频率分别为0.0264、0.0401、0.0640、0.0198、0.0115、0.0168和0.0317,上眼睑皱褶的显性基因频率分别为0.5286、0.4523、0.4911、0.4970、0.2318、0.5603和0.5062,内眦褶的显性基因频率分别为0.4503、0.2300、0.4470、0.0800、0.3471、0.6394和0.5080,耳垂的显性基因频率分别为0.6938、0.6349、0.3902、0.6278、0.6471、0.7418和0.5630,鼻梁侧面观的显性基因频率分别为0.1025、0.1437、0.2162、0.0321、0.1546、0.0871和0.1924,鼻孔形状的显性基因频率分别为0.4599、0.4415、0.4495、0.6278、0.7710、0.6258和0.6311.结论内眦褶性状的民族间差异较大,耳垂、鼻梁侧面观和鼻孔形状性状次之,发形和上眼睑皱褶性状较小.

    作者:余跃生;张艳丽;赵明未 刊期: 2006年第02期

  • 高效液相色谱法检测桶装饮用水中双酚A

    目的检测PC制桶装饮用水中双酚A的溶出情况.建立固相萃取-高效液相色谱的检测方法.方法桶装水用优化固相萃取条件进行萃取,HPLC法测定.结果待测物线性范围为:100~5000 ng/L,相关系数为0.9993,检出限为60 ng/L,加标回收率为84.9%~95.1%,样品检测相对标准差在2.2%~7.6%.结论本方法简便、准确、灵敏度高、分析速度快.

    作者:李丽莎;杨湘霞;汪莉 刊期: 2006年第02期

  • 436株酵母样真菌的分离鉴定及耐药性分析

    目的探讨引起医院感染常见酵母样真菌种类及其耐药性特点,为临床感染性疾病提供病原学诊断和合理使用抗真菌药物的依据.方法采集2 680份患者标本分离培养,分离出酵母样真菌436株,API-20CAUX酵母样真菌鉴定试条进行鉴定,念珠菌药敏试条(ATB-Fungus)进行念珠菌药敏试验.结果436株酵母样真菌以念珠菌为主,其中白色念珠菌305株(69.9%),热带念珠菌81株(18.6%),克柔念珠菌27株(6.1%),光滑念珠菌11株(2.5%),其他12株(2.9%);念珠菌对两性霉素B(AMB)、5-氟胞嘧啶(5-FC)、制霉菌素(NYS)、酮康唑(KTC)、益康唑(ECO)、咪康唑(MTC)的耐药率分别为8.49%、14.91%、12.39%、46.56%、38.76%、30.73%.结论目前引起我院患者真菌感染的念珠菌仍以白色念珠菌为主,其次是热带念珠菌及克柔念珠菌,这些念珠菌对两性霉素B、5-氟胞嘧啶、氟康唑较敏感,对酮康唑、益康唑、咪康唑产生了较强的耐药性.

    作者:刘秀梅 刊期: 2006年第02期

  • 卫生微生物检验质控结果分析

    目的通过参加广东省2005年疾控机构卫生微生物实验室间比对试验结果,及时发现问题,提高检测技术能力.方法2005年广东省疾控系统实验室间比对作业指导书.结果根据广东省CDC反馈结果,本中心的考核成绩为满意.结论从比对试验结果显示,本中心的总体检测能力有较大提高,同时,也增加了客户对本检测机构的信心.

    作者:杨湘霞;霍雪霞;张艳 刊期: 2006年第02期

  • 长沙市疾控系统离退休人员血糖、血脂异常调查及其相关性分析

    目的了解疾控系统离退休人员血糖、血脂水平,分析高血糖与高血脂的相关性.方法利用生化分析仪对416名50岁以上离退休人员进行血糖、血脂检测.结果血脂异常率73.08%,高脂血症罹患率66.35%,血糖升高率24.04%,85.00%血糖升高患者伴有高脂血症.结论本组人群血脂、血糖异常率较高,女性高脂血症罹患率明显高于男性.高脂血症作为糖尿病的病理基础又是易患因素,应引起高度重视.

    作者:欧新华;王艳;张兵 刊期: 2006年第02期

  • 27例左半结肠癌梗阻一期切除吻合临床体会

    目的探讨一期手术切除吻合治疗梗阻性左半结肠癌.方法回顾性分析我院过去7年对27例左半结肠癌并发梗阻病人接受一期切除肿瘤肠吻合术方法和原则.结果死亡1例,吻合口瘘2例,切口感染3例,其中1例切口裂开,肺部感染1例.结论一期切除肿瘤行肠吻合术,可缩短治疗时间,避免腹壁造瘘和多次手术的创伤,在选择性病例情况下是可行的.

    作者:王鹏 刊期: 2006年第02期

  • 盐酸氨溴索在神经外科气管切开患者中的临床应用

    目的研究盐酸氨溴索在气管切开后肺部感染中的治疗作用.方法选取神经外科重症气管切开患者50例,随机分为对照组和药物组;对照组患者呼吸道管理按抗感染、雾化吸入及负压吸痰等基本处理,药物组患者在常规处理基础上,并在雾化吸入及静脉用药中加入盐酸氨溴索.比较两组患者胸部X-ray,血氧饱和度,血气分析以及拔管时间等.结果药物组患者氧分压(9.15±0.62 Kpa)在2周后明显高于对照组(8.34±1.06 Kpa,P<0.01),胸片感染征象少于对照组,气切一月内拔管例数差别明显:药物组19例,对照组11例(x2=5.33,P<0.05).结论盐酸氨溴索有助于改善气切患者缺氧,促进排痰,控制肺部感染,缩短带管时间.

    作者:杨金福;龙烁 刊期: 2006年第02期

实用预防医学杂志

实用预防医学杂志

主管:中华人民共和国卫生部

主办:中华预防医学会 湖南省预防医学会