郑剑；朱珉之；张宏宇；朱珍；郑中伟；柳龙根；陈春华；王永忠
目的 探讨CXCL12/CXCR4生物轴对胰腺癌细胞增殖、侵袭等生物学行为的影响.方法 体外培养胰腺癌细胞系Miapaca-2,将其分为对照组、CXCL12组和AMD3100组.(1)采用RT-PCR检测胰腺癌细胞中CXCL12、CXCR4、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和人尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA) mRNA的表达水平;(2)采用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;(3)采用Transwell侵袭实验检测CXCL12/CXCR4对胰腺癌细胞趋化活性的影响.结果 胰腺癌细胞系Miapaca-2中CXCL12 mRNA未见表达,而CXCR4 mRNA在胰腺癌细胞中有表达.MMP-2、MMP-9和uPA mRNA在AMD3100组、对照组和CXCL12组中的表达水平呈递增趋势,差异具有统计学意义(P＜0.05).胰腺癌细胞的增殖和侵袭能力在CXCL12组明显增强,而在AMD3100组得到了有效的抑制,组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 趋化因子CXCL12及其受体CXCR4所构成的生物轴对胰腺癌细胞的增殖和侵袭能力发挥着重要的作用.
作者：沈波；郑马庆；王太洪；蒋谦；黄新恩；陆建伟 刊期： 2013年第06期
目的 了解徐州地区儿童腺病毒感染的型别及流行特点.方法 采用Real-time PCR方法对2011年1月至2012年12月共990份急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物标本进行检测;对腺病毒阳性的标本进行常规PCR扩增hexon基因并对扩增产物进行测序分型,同时用Hep-2进行细胞分离.结果 990份标本中,Real-timePCR检测腺病毒阳性数为164(16.6％);腺病毒感染全年散发,其高峰期为3-4月;以7岁以下儿童多见,感染阳性率为91.5％;对其中100例PCR阳性标本扩增产物进行测序分型,涵盖BCE三个亚种,以HAdV B3 18株(占18.0％),HAdV C2 17株(占17.0％),HAdV B7 16株(占16.0％)多见,混合HAdV B3和HAdV B7感染2例;134例PCR阳性标本中分离出毒株59株,分离率为44.0％.结论 腺病毒是徐州地区儿童急性呼吸道感染的重要病原,徐州地区腺病毒型别种类多样化,病毒重组变异概率较高,需加强对该病毒的流行监测.
作者：童晶；杨晋川；杜阳光；吴畏畏；王保安；刘廷君；张雷；唐浏英 刊期： 2013年第06期
目的 构建能稳定表达狂犬病病毒糖蛋白的CHO细胞系.方法 用RT-PCR法扩增和分离CTN-1V株狂犬病毒糖蛋白基因,测序后克隆入pCDNA5.0FRT载体,构建重组质粒pCDNA5.0FRT-G,之后与POG44质粒共转染CHO细胞,采用潮霉素B抗性筛选,挑选阳性克隆,间接免疫荧光和Western Blot进行稳定表达细胞系的鉴定.结果 经酶切和测序鉴定,获得重组表达质粒pCDNA5.0FRT-G,共转染CHO细胞后,获得肉眼可见阳性细胞克隆,刮取阳性克隆进行传代扩大培养并定义为第2代,经过10代后免疫荧光和Western Blot结果依然阳性.结论 成功建立稳定表达狂犬病病毒糖蛋白的CHO细胞系,为深入研究糖蛋白的功能奠定基础.
作者：曹守春；李玉华；李加；唐建蓉；石磊泰；刘景华；王云鹏；俞永新；董关木 刊期： 2013年第06期
目的 探讨在低浓度甲胎蛋白(AFP)肝病患者中,甲胎蛋白异质体L3(AFP-L3)的百分含量(AFP-L3％)对肝癌的早期诊断和疗效评估的临床意义.方法 收集245例血清低AFP含量(5 ～40 ng/ml)的肝病患者样本(其中肝硬化患者100例、肝癌患者145例),检测AFP-L3％,并对其中100例肝硬化患者和20例肝癌术后患者分别进行3个月和12个月的随访.结果 以AFP-L3％≥10％作为阳性判断标准,100例肝硬化患者中阳性为23例,经3个月随访后其中8例诊断为肝癌;145份肝癌患者血清AFP-L3％阳性率为46.2％ (67/145).低浓度AFP肝癌组的AFP-L3％水平显著高于低AFP肝硬化组(t=7.318,P=0.001 ＜0.01);20例肝癌患者术后有5例AFP-L3％仍为阳性,其在12个月内的生存率为0,而术后AFP-L3％阴性患者生存概率为15/15.结论 AFP-L3％在低浓度AFP肝病患者中对肝癌的早期诊断和术后疗效评估都具有一定的临床意义.
作者：李鲁平；谷海峰；陈霖；刘爱霞；刘佳；徐军；张健；郭静霞；赵静 刊期： 2013年第06期
目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者B/C混合基因型乙型肝炎病毒(HBV)感染与干扰素α(IFN-α)治疗效果的相关性.方法 经IFN-α治疗的HBeAg阳性B/C混合基因型CHB患者,采集治疗基线及治疗12周后血清,扩增HBV全基因组并进行克隆,每份标本17～ 20个克隆测序并进行序列分析及分子进化分析.结果 2例HBeAg阳性B/C混合基因型感染CHB患者,优势病毒株均为C型毒株.经IFN-α治疗后,1例发生完全病毒学应答,1例发生部分病毒学应答并且治疗后B基因型病毒株完全清除.完全应答者与部分应答者治疗前C基因型准种复杂度为0.5562 vs0.6305,部分病毒学应答者治疗后全基因组准种复杂度高于治疗前C基因型准种复杂度(0.6305 vs0.7200),全基因组核苷酸水平的平均遗传距离高于治疗前(0.00454 vs 0.00648核苷酸替换/位点).结论 (1) B/C混合基因型感染CHB患者优势病毒株为C型毒株.(2)B基因型病毒株对干扰素的敏感性高于C基因型,B/C混合基因型感染患者治疗后病毒准种复杂度及准种多样性升高.
作者：任玉莲；李明慧；刘顺爱；张禄雪；穆彩琴；张璐；路遥；华文浩；张书凤 刊期： 2013年第06期
目的 观察乙肝病毒e抗原(HBeAg)阴性与阳性慢性乙型肝炎患者在年龄、ALT、乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)定量方面的特点.方法 回顾性分析125例慢性乙型肝炎患者的临床资料,根据HBeAg表达情况分为HBeAg阴性与阳性慢性乙型肝炎两组,对两组患者的年龄、ALT和HBV DNA进行统计学分析.结果 125例慢性乙型肝炎患者中,HBeAg阴性组24例,占19.2％;HBeAg阳性组101例,占80.8％.两组在平均年龄、HBV DNA之间比较,差异具有统计学意义;ALT之间比较没有统计学意义.在HBeAg阴性组中,HBV DNA定量较低,随着病毒载量的增高,ALT异常的数量呈下降趋势;在HBeAg阳性组中,HBV DNA定量较高,随着病毒载量的增高,ALT异常的数量大致呈上升趋势.结论 HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者年龄较HBeAg阳性患者高,ALT、HBVDNA定量水平低于HBeAg阳性者.随着病毒载量的增高,ALT异常的数量呈下降趋势,而后者则相反.
作者：席宏丽；李敏然；鲍毅；徐小元 刊期： 2013年第06期
目的 探讨CVB3的蛋白酶2A对真核细胞帽样蛋白翻译和内部核糖体进入位点(IRES)翻译机制的影响.方法 构建表达载体pcDNA3.1-2A,将此表达载体分别与pEGFP-N1、pGL3(F-luc)以及pIRES-GFP载体共转染细胞后,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,检测荧光素酶蛋白的表达.Western Blot检测CVB3病毒和pcDNA3.1-2A对真核生物翻译起始因子4GI(eIF4GI)及多聚A尾结合蛋白(PABP)的影响.结果 pcDNA3.1-2A可以减少帽样依赖的GFP和荧光素酶蛋白的表达,但可以促进IRES依赖的GFP表达.CVB3 2A基因质粒转染和CVB3感染后,均可发现细胞内eIF4G的切割现象;同时CVB3对PABP也有降解作用,而CVB32A基因转染对PABP无明显作用.结论 CVB3的蛋白酶2A抑制真核细胞帽样途径蛋白翻译,促进IRES途径的翻译.
作者：卢明枝；宋娟；孙鹏；宋芹芹；盛琳君；王宝栋；迟苗苗；姚海兰；李朝品 刊期： 2013年第06期
目的 分析女性HPV感染的阳性率和各年龄段的关系及常见亚型的分布情况,探讨女性HPV DNA基因分型技术检测在宫颈癌防治方面的应用价值.方法 采用HPV基因分型技术对1448例妇科门诊就诊者进行HPV分型检测.结果 1448例样本中,检出HPV阳性者531例,总阳性率为36.7％,其中高危型HPV468例,占感染率88％,低危型HPV63例,占感染率12％,混合感染HPV122例,占感染率23％,HPV基因型单一感染为77.2％,二重感染为17.9％,三重感染为3.6％,四重感染为1.5％.高危型中未检出HPV35、73、83、MM4型,低危型中未检出HPV43、44型.患者其亚型感染率由高到低依次为HPV58、16、52、33、18、31、53、68、66、51、39、56和59型,低危型依次为HPV 11、6、42型.不同年龄组中HPV感染高峰在50 ～59岁和60 ～69岁这两个年龄段,感染率分别为78.9％和73.7％.结论 HPV感染型别普遍化,各年龄段感染的阳性率差异有统计学意义(P＜0.05),25岁前后及＞50岁的妇女更应予以重视,对阳性患者要加强定期随访,HPV基因分型及多种亚型的检测有利于宫颈癌的早期预警和早期治疗.
作者：方玉才；王秋英；杨燕飞；高晓磊 刊期： 2013年第06期
目的 探讨阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者病毒学应答与HBV特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的关系.方法 51例CHB患者,HBV DNA阳性(HBV DNA≥1×104拷贝/ml,HBeAg阳性32例(62.75％)、丙氨酸转氨酶(ALT)＞2×正常值上限(ULN)、人白细胞抗原(H LA)-A2阳性,用阿德福韦酯10 mg,口服,每日1次.观察治疗72周后HBV DNA转阴和HBeAg血清学转换与HBV特异性CTL的关系.结果 阿德福韦酯治疗72周后,HBV DNA转阴(＜500拷贝/ml)39例(76.47％),其HBV特异性CTL(0.81％ ±0.06％),高于12例(23.53％)的HBV DNA未转阴者(0.66％±0.06％),t=7.93,P＜0.01,HBeAg血清学转换8例(25％),其HBV特异性CTL(0.97％±0.07％),高于24例(75％)的无HBeAg血清学转换者(0.67％±0.07％),t=7.61,P＜0.01.结论 阿德福韦酯治疗CHB患者病毒学应答和血清学应答与HBV特异性CTL水平升高有关.
作者：周玉麟；王学才；吴寅涛；谈永飞；赵彦平；汤俊明；潘建强；杨志贤；俞萍 刊期： 2013年第06期
目的 探讨宫颈细胞DNA倍体、高危型HPV、支原体和衣原体检测结果与宫颈上皮内瘤变的相关性.方法 将265例育龄妇女宫颈细胞DNA倍体检查阳性者分为感染因素阳性(高危型HPV阳性、UU/Mh阳性、CT阳性)和感染因素阴性(高危型HPV阴性、UU/Mh阴性、CT阴性),再将感染因素阳性者分为单因素感染(包括高危型HPV感染或UU/Mh感染或CT感染),双因素感染、三因素感染.以活检结果为金标准,回顾分析和评估宫颈细胞DNA倍体阳性者中高危型HPV、UU/Mh和CT感染与宫颈上皮内瘤变之间的关系及风险性.结果 DNA倍体阳性患者中慢性炎症占52.38％、CIN Ⅰ 1级占22.02％、CINⅡ级占10.71％、CINⅢ级占14.88％;CIN Ⅰ 1级中双因素感染高占32.43％,CINⅡ级中高危型HPV感染高占50.00％,CINⅢ级中双因素感染高占56.00％、其次为高危型HPV感染占40.00％.结论 宫颈细胞DNA倍体阳性合并HPV和UU/Mh双因素感染者及高危型HPV感染者应高度警惕为癌变高危人群.
作者：张立冬；张慧敏；刘美玲；江庆萍 刊期： 2013年第06期
目的 建立扩增受阻突变检测系统(ARMS)检测乙型肝炎病毒(HBV)基因型方法,并对慢性乙型肝炎(CHB)患者HBV基因型进行分析.方法 通过对HBV全基因组序列比对分析,设计ARMS特异性引物和探针体系,建立检测HBV B和C基因型方法,对50例临床标本进行检测.结果 50例临床样本中,B型的检出率为26％(1 3例),C型为74％(37例),其实验结果与测序结果完全一致.常州及周边地区乙型肝炎病毒C基因型HBV为优势株.C基因型患者A1762T/G1764A突变率为62％,明显高于B型.结论 ARMS检测HBV基因型,快速、准确;常州及周边地区HBV基因型主要为B、C型,且C型携带A1762T/G1764A双突变率较高,与较为严重的肝病相关.
作者：郑剑；朱珉之；张宏宇；朱珍；郑中伟；柳龙根；陈春华；王永忠 刊期： 2013年第06期
目的 评价国产阿德福韦酯片治疗成人HBeAg阳性慢性乙型肝炎的有效性和安全性.方法 采用多中心、开放试验方法,入选1930例患者服用阿德福韦酯片10 mg/d.随访观察采用标准操作规程(SOP),观察12周、24周、36周、52周的生化、病毒学指标及不良反应.结果 1930例患者治疗12周、24周、36周、52周,HBV DNA阴转率分别为16.42％、28.55％、37.25％、43.32％,ALT复常率分别为29.69％、49.02％、56.42％、62.95％.治疗24周、52周HBeAg阴转率分别为12.59％、19.38％.随着疗程延长,HBV DNA阴转率、ALT复常率、HBeAg阴转率越高.治疗52周时耐药率为0.17％.不良反应率0.72％,极少数病例出现尿常规轻微异常,未发现肾功或生殖系统受损.结论 国产阿德福韦酯片治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎具有良好的有效性及安全性.
作者：臧红；丁晋彪；李进；柳芳芳；李晨；朱冰；刘婉姝；游绍莉；辛绍杰 刊期： 2013年第06期
目的 探讨Th22细胞相关性细胞因子IL-22/IL-22RA1基因单核苷酸多态性(SNP)与手足口病易感性及其转归的关系.方法 采用病例-对照研究方法,选取2012年4月至9月深圳市第三人民医院收治并确诊的手足口病住院患者296例为病例组,其中轻症手足口病患者178例,重症患者118例,对照组为同期在该医院健康体检儿童155例.应用飞行时间质谱(time of fight mass spectrum,TOF-MS)生物芯片技术,检测IL-22/IL-22RA1基因共4个SNP位点基因型(rs2227473、rs2227483、rs3795299、rs34379702),对SNP进行Hardy-Weiberg平衡检测,并计算各SNP位点在不同人群中等位基因频率,筛选与手足口病易感性、预后相关的SNP位点.结果 纳入研究的4个SNP位点的基因型分布均处于遗传平衡状态.入组人群中IL-22的基因rs2227473位点存在GG、GA和AA基因型,重症手足口病组rs222743位点A等位基因频率(13.14％,31/236)显著高于轻症组(6.18％,22/356),差异有统计学意义(x2=8.424, P＜0.001,A=2.296,95％CI=1.294-4.074).对于EV71相关性手足口病而言,重症组A等位基因频率(19.64％,22/112)显著高于轻症组(7.41％,4/54),差异有统计学意义(x2=4.129,P =0.042,A=3.056,95％CI=0.997 ～9.368).结论 IL-22基因rs2227473位点多态性与手足口病转归密切相关,尤其是EV71相关性手足口病.
作者：林益敏；张国良；刘映霞；袁静；刘威龙；李建明；赵美芬；陈川铁；刘京 刊期： 2013年第06期
目的 评价上转发光免疫层析法定量检测乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP)在乙型肝炎患者中的应用价值.方法 利用一种新的基于上转发光法的免疫层析检测技术(UPT)检测500份乙肝病毒感染患者血清样品HBV-LP含量,并采用实时荧光定量PCR法检测HBV DNA;化学发光法检测乙肝五项指标.结果 500例乙肝病毒感染患者HBV-LP与HBV DNA阳性率分别为58.0％和42.2％,两者间差异有统计学意义(P＜0.01),其中215份HBeAg阴性患者血清中,HBVDNA与HBV-LP的阳性率分别为29.3％和37.2％,两者差异无统计学意义(P＞0.05);HBeAg阳性检出率为57.0％,与HBV DNA阳性检出率差异有统计学意义(P＜0.01).结论 上转发光免疫层析法检测乙肝病毒外膜大蛋白对HBeAg阴性和HBV DNA低拷贝患者体内病毒复制及预后评价有重要价值,联合检测HBV DNA、HBV-LP和HBeAg有利于乙肝病毒复制水平的判断和抗病毒治疗终点的确定.
作者：高锦；吴欧；徐爱芳；王妙婵；薛立芝；郁文燕；钮海莺 刊期： 2013年第06期
端粒酶的新蛋白组分-端粒酶卡侯体蛋白1(telomerase Cajal body protein 1,TCAB1)[1]是一个全新蛋白,在临床肿瘤样本的表达情况国内外尚未见报道,更没有病毒感染对TCAB1表达和转录调控的报道.因此本研究探讨鼻咽癌中TCAB1表达与EB病毒感染的关联性,为阐明EB病毒调控TCAB1表达和信号传导的分子机制奠定基础,以期为鼻咽癌寻找更理想的诊断和治疗指标.
作者：苟雅萍；胡玲；孙崇奎；张平；孔祥丽；冯云；肖丽英；李燕 刊期： 2013年第06期
目的 利用TaqMan Real-time PCR技术,建立Kadipiro病毒(KDV)实时荧光定量PCR检测方法.方法 根据GenBank发表的KDV基因序列资料分析结果,在其第12片段基因区段设计KDV特异引物与探针,利用14株不同科属病毒核酸验证方法特异性,重复实验检验方法稳定性,利用体外转录的定量RNA标准品建立基因拷贝数定量分析模型.结果 引物与探针具有良好的特异性,同一样品重复检测Ct值的变异系数均＜1.8％,定量分析模型的灵敏度为100拷贝/反应.结论 建立了一种特异、灵敏、高效的KDV一步法TaqMan Real-time PCR检测方法,为今后该病毒的监测与研究工作提供技术手段.
作者：郝晓霞；何英；付士红；曹玉玺；高晓艳；王环宇 刊期： 2013年第06期
目的 回顾性分析甲型肝炎重症化临床特征.方法 收集我院2002年1月至2012年12月收治的525例甲型肝炎患者资料,分析甲型肝炎重症化原因及转归等.结果 甲型肝炎患者525例,其中普通甲型肝炎512例(512/525,97.52％),肝衰竭患者共13例(13/525,2.48％),两组平均年龄分别为(30.58±14.68)岁及(40.15±11.37)岁(P＜0.01).单纯感染甲型肝炎417例中发生肝衰竭患者4例(0.96％),重叠感染患者108例中发生肝衰竭9例(8.33％),两组比较x2=16.38,P=0.0001.13例肝衰竭患者TBil峰值平均(384.48±130.41) μmol/L;PA峰值平均25.95％±10.36％.肝衰竭合并肝性脑病、肝肾综合征患者无效死亡率均100％.结论 甲型肝炎重症化较少,主要见于重叠感染患者,有乙型肝炎肝硬化基础、晚期或伴随严重并发症患者预后较差.
作者：朱冰；刘鸿凌；臧红；荣义辉；李晨；陈婧；万志红；游绍莉；辛绍杰 刊期： 2013年第06期
目的 探讨山东省临沂地区手足口病的流行病学及临床特征,为制定本地区疾病防治措施提供依据.方法 制定手足口病观察项目表,采集2012年4-9月山东省临沂地区1426例手足口病患者的流行病学及临床特征,采用描述流行病学方法进行分析.结果 临沂地区手足口病发病高峰为5月,以3岁以下散居及幼托儿童为主,发病率男童多于女童,农村高于城镇.临床表现主要包括发热、皮疹等,重症患儿可发生多系统并发症.辅助检查可见白细胞及中性粒细胞比值增高等特征.EV71为重症病例的主要病原,占重症病例的77.21％.结论 山东省临沂地区手足口病流行具有明显季节性、人群性及地区性.针对本地区流行病特点,制定区域特异性防治措施至关重要.
作者：王经伟；高帅；高峰；杨朝晖；尹爱红；王凯 刊期： 2013年第06期
目的 比较3种不同转染方法,探索佳的拯救病毒策略.方法 3种转染方法包括:①含T7 RNA聚合酶启动子的全长肠道病毒71(EV71)感染性质粒(P-EV71)和T7RNA聚合酶真核表达质粒(VR-1a)共转染Vero细胞;②含T7RNA聚合酶启动子的EV71全长基因片段(PCR产物)与VR-1a共转染Vero细胞;③利用体外转录技术得到EV71病毒全长RNA,直接转染Vero细胞.分别观察3种方法转染后产生细胞病变效应(CPE)时间及病变情况,用RT-PCR扩增拯救病毒核酸,测序验证其正确性,用蛋白印迹方法检测拯救病毒抗原.结果 3种方法均可成功转染Vero细胞得到拯救病毒,三种转染方法转染效果比较:方法③优于②、②优于①.结论 三种转染方法均可成功拯救EV71病毒,以病毒RNA直接转染效果好.
作者：侯俊；罗生栋；胡燕；沈宏辉；白冰珂；柴燕涛；王志杰；貌盼勇 刊期： 2013年第06期
目的 比较2012与2008年深圳市重症手足口病临床和实验特征,探讨其变化趋势.方法 深圳市第三人民医院2008年及2012年共收治778例手足口病住院患儿,重点分析其中260例手足口病重症患者(2008年64例,2012年196例).通过RT-PCR检测Coxsackie A16(Cox A16,A16)及Enterovirus 71(EV71)病毒核酸,出现神经系统症状或体征者检查脑脊液常规及生化,部分患儿行头颅MRI检查,同时比较临床表现、血液生化等变化趋势.所有患者随访12个月评估再发情况.结果 与2008年相比,2012年手足口病重症患者发病高峰年龄下降,＜12月龄儿童分别占2008年和2012年重症的15％和40％.两个年度重症患者均以EV71感染为主;与2008年相比,2012年EV71感染所占比率有下降趋势;重症患者手、足皮疹出疹率下降,而口腔疱疹出疹率明显增高,疱疹性咽峡炎引起的重症病例数上升;外周血白细胞计数、中性粒细胞比值及CRP水平均明显增高;但并发脑干脑炎或神经源性肺水肿的病例数略有下降.随访1年结果显示,无论EV71或Cox A16型手足口病临床治愈后均可多次再发,轻症再发率高于重症.结论 深圳市手足口病从2008年暴发至2012年,发病呈上升趋势,重症手足口病病例临床表现具有一些新的特征,应引起广大医护人员重视.
作者：刘映霞；林益敏；袁静；李建明；张国良；陈川铁；刘京；赵美芬；周伯平 刊期： 2013年第06期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
