李佳；付士红；王力华；高晓艳；王环宇；叶旭芳；赵苏晔；刘纯婷；朱武洋；王兰；梁国栋
目的 检测慢性重型乙型肝炎患者血清中IL-23表达,探讨IL-23水平与丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)及HBV DNA载量的相关性.方法 用酶联免疫吸附法(ELISA)检测50例慢性重型乙型肝炎患者(重肝组)及18名健康人(对照组)血清中IL-23表达,并与患者ALT、AST、TBil、HBV DNA载量进行相关性分析.结果 重肝组患者血清中IL-23表达高于对照组,两组之间的差异有统计学意义(P＜0.05)；IL-23水平与ALT、AST呈正相关(P＜0.05),与TBil、HBV DNA载量无相关性(P＞0.05).结论 慢性重型乙型肝炎患者血清中IL-23表达增高,与炎症程度相关,可能参与慢性重型乙型肝炎的发病.
作者：许海霞；李学俊；潘兴飞；徐启桓 刊期： 2012年第02期
目的 了解HCOV-NL63在长沙地区急性下呼吸道感染住院儿童中的流行状况以及临床特征.方法 采集长沙地区2008年9月至2010年10月因急性下呼吸道感染住院儿童NPA样本1185份,用RT-PCR方法检测HCOV-NL63N基因,阳性扩增产物经测序确认,统计分析临床资料.结果 1185份NPA样本中,HCOV-NL63检出阳性10份,检出率为0.8％,其中春季检出1例、夏季检出6例、秋季检出2例、冬季检出1例；阳性检出病例患儿年龄大2岁半,小2个月,平均月龄12.5个月；男童7例,女童3例；临床诊断为支气管肺炎6例、毛细支气管炎3例、急性喉气管支气管炎1例；10例中有4例病情危重；4例有基础疾病；7例合并其他病毒混合感染；阳性扩增产物经测序分析与HCOV-NL63参考株同源性为97％～100％.结论 本资料HCOV-NL63阳性检出患儿年龄均在3岁以下；夏季检出率高；男童感染为主；单一基因型在长沙地区流行；HCOV-NL63可能也是我国儿童急性下呼吸道感染中的一种病原.
作者：张菲；张兵；谢志萍；高寒春；赵辛；钟礼立；周琼华；候云德；段招军 刊期： 2012年第02期
目的 利用自主研发的辛德毕斯病毒载体构建含有丙型肝炎病毒( HCV)结构蛋白E1E2的重组病毒颗粒.方法 将编码HCV包膜糖蛋白的E1 E2基因克隆至辛德毕斯病毒载体,构建重组质粒pBR-XJE1E2和pVA-XJE1E2,转染BHK-21细胞后获得重组丙肝病毒颗粒.并通过RTPCR、间接免疫荧光和Western Blot方法鉴定表达E1E2蛋白的重组病毒颗粒.结果 酶切、PCR和测序分析表明重组质粒构建成功.RT-PCR、间接免疫荧光和Western-Blot鉴定结果表明重组质粒转染细胞后能包装出表达E1E2的丙肝病毒颗粒.结论 以辛德毕斯病毒载体为基础构建的重组质粒可在真核细胞中包装出重组丙肝病毒颗粒,这为进一步研究其在动物体内免疫反应奠定了基础.
作者：付娟娟；朱武洋；李江姣；王焕琴；谭文杰；殷建忠；梁国栋 刊期： 2012年第02期
固有免疫在机体抵御HIV-1感染过程中发挥重要作用.载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide protein,APOBEC)家族的成员APOBEC3G(A3G)可以通过胞嘧啶脱氨机制抑制HIV-1的复制,发挥固有免疫的作用;病毒感染因子(virus infectivity factor,Vif)能与A3G结合并引发A3G的降解,使HIV-1的感染率增加100倍以上.该研究为以Vif-A3G为靶点的抗HIV-1药物的研究提供了新的思路.因此A3G、Vif及其相互作用机制成为HIV-1研究的热点.
作者：张文俊；乔新华；李泽琳；曾毅 刊期： 2012年第02期
目的 探讨苦参素联合甘草酸二铵对慢性乙型肝炎(CHB)患者特异性细胞免疫的影响.方法 63例CHB患者随机分为2组,苦参素联合甘草酸二铵组(联合组)32例,用苦参素葡萄糖注射液600 mg,静脉滴注,每日1次,1个月后改为苦参素胶囊200 mg口服,每日3次,2个月.甘草酸二铵注射液150 mg加入10％葡萄糖注射液250 ml中静脉滴注,每日1次,1个月后改为甘草酸二铵胶囊150 mg口服,每日3次,2个月；苦参素组(单用组)31例,只用苦参素,用法用量同治疗组.比较两组患者的HBV特异性细胞毒T细胞(CTL)、T细胞亚群、Th1、Th2水平的变化和HBV-DNA、HBeAg阴转率.结果 联合组治疗3个月后,HBV特异性CTL、CD4+、Th1高于治疗前,也高于单用组治疗后(P＜0.01).HBV-DNA和HBeAg阴转率两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 苦参素联合甘草酸二铵能进一步提高CHB患者的HBV特异性CTL、CD4+和Th1水平.
作者：顾锡炳；杨小娟；蒋祥虎；华忠；陆忠华；张波；朱银芳；吴杭源；蒋亦明；陈浩坤；裴豪；周玉麟 刊期： 2012年第02期
目的 获取有生物活性的丁肝抗原蛋白,探讨其作为诊断试剂的应用价值.方法 经密码子优化,合成人工编码的丁肝抗原基因序列；以M48作为表达载体,构建带有硫氧还蛋白的重组表达质粒；在大肠埃希氏菌中经IPTG诱导表达；以亲和层析纯化并以ELISA鉴定该蛋白.结果 酶切鉴定构建的质粒正确；SDS-PAGE结果显示表达和纯化的外源蛋白与预期相对分子质量大小一致；ELISA鉴定该蛋白有与丁肝抗体特异性结合的活性.结论 成功获得有生物活性的可供诊断用的丁肝抗原蛋白,为丁肝诊断试剂的研发奠定了基础.
作者：丁军颖；郭敏卓；伊瑶；苏秋东；卢学新；邱丰；毕胜利 刊期： 2012年第02期
目的 建立甲型肝炎病毒抗体IgM的AlphaLISA检测.方法 浓缩甲型肝炎病毒抗原并生物素化,通过dot-Blot法摸索出生物素化的甲型肝炎病毒的适量为6 × 10-8ng.优化供体珠、受体微珠、血清等实验反应条件,建立了甲型肝炎病毒的AlphaLISA的IgM检测方法.并对23份感染甲型肝炎病毒的IgM阳性患者和70份健康人的血清进行检测.结果 AlphaLISA甲型肝炎病毒的IgM方法检测:灵敏度(真阳性率)为78％；特异度(真阴性率)为98.5％；假阳性率为1％；假阴性率为22％；阳性预测值为95％；阴性预测值为93％；准确度为94％.结论 建立了均相、快速检测AlphaLISA甲型肝炎病毒IgM检测方法并得到初步应用.
作者：甘星；王颖；宋娟；崔雨；孙鹏；高晨；李朝品；韩俊 刊期： 2012年第02期
目的 研究肠道病毒71型(EV71)抵抗Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)诱导的抗病毒作用.方法 将1000 U/ml的Ⅰ型干扰素(α,β)加入HeLa细胞后,去除上清中的干扰素,感染带有GFP的重组单纯疱疹病毒(HSV-1)和EV71,观察GFP的表达和PCR检测HSV-1核酸,判断Ⅰ型干扰素对HSV-1的作用.通过RT-PCR方法检测EV71 2A基因的表达从而判断EV71病毒的复制能力.结果 Ⅰ型干扰素(α,β)诱导HeLa细胞产生抗病毒蛋白而有效地抑制重组HSV-1 GFP的表达和核酸扩增.而EV71 2A的RT-PCR结果证实EV71可在Ⅰ型干扰素(α,β)作用后的HeLa细胞中有效增殖.结论 Ⅰ型干扰素(a,β)诱导产生抗病毒蛋白；EV71可在Ⅰ型干扰素(α,β)诱导产生抗病毒蛋白的HeLa细胞中有效增殖.
作者：崔雨；宋娟；宋芹芹；孙鹏；甘星；李公启；王克霞；韩俊 刊期： 2012年第02期
目的 探讨慢性乙型肝炎患者接受聚乙二醇干扰素-2a(派罗欣)±核苷(酸)类似物(NUC)治疗前和治疗早期转氨酶明显升高者,联合双环醇(百赛诺)治疗的疗效.方法 收集HBeAg阳性/阴性慢性乙型肝炎患者,给予派罗欣180 μg,每周一次,皮下注射,疗程48周以上,治疗结束后随访26周.HBV DNA≥1×108拷贝/ml者联合NUC(阿德福韦或恩替卡韦).治疗前ALT＞ 500 U/L或派罗欣治疗第一针后ALT＞ 300 U/L者联用双环醇25 mg,每日3次,治疗1～2个月.治疗前2 × ULN＜ ALT ＜300 U/L或治疗后ALT＜ 300 U/L者单用抗病毒治疗.比较两组患者的治疗应答和不良反应状况.结果总计54例患者(HBeAg阳性44例,HBeAg阴性10例)完成治疗及随访,其中20例联用双环醇(联合治疗组),34例未联用双环醇(对照组).结果 显示双环醇联合治疗组于治疗后ALT水平逐周下降,4周后有90％( 18/20)患者ALT＜ 200 U/L,对照组为85.3％ (29/34例).随访26周时两组ALT复常率分别为80％(16/20)和85.3％ (29/34)；病毒学应答率相仿,联合治疗组较对照组HBsAg血清学转换率有明显增高(P =0.044),分别为30％ (6/20)和11.8％(4/34).结论 双环醇可明显缓解干扰素治疗诱导的转氨酶升高反应,确保干扰素治疗顺利进行,且不影响其抗病毒疗效.
作者：倪勤；谢天胜；李敏伟；刘克洲 刊期： 2012年第02期
目的 研究影响肝肾综合征预后的因素、建立预后判断模型.方法 选择126例肝肾综合征的病例,观察56项可能与本病预后有关的指标,涉及个人情况、病史、症状、体征、实验室检查等方面,用COX比例风险模型及Kaplan-Meier进行分析.结果 肝性脑病(HE)及其程度、消化道出血(GIB)、血中性粒细胞数(N1)、肌酐(Cr)是影响预后的独立因素.危险指数PI=0.711HE+0.836GIB+0.052N1+0.002Cr( N1、Cr为原测值；消化道出血,有=1,无=0；肝性脑病,无=0,Ⅰ期=1,Ⅱ期=2,Ⅲ=3,Ⅳ期=4).当PI＜1时,平均生存期42 d；1≤PI≤3,平均生存期15 d；PI＞3,平均生存期2d.结论 肝性脑病及其程度、消化道出血、血中性粒细胞数、肌酐是影响预后的独立因素,可用于建立预后判断模型,本预后模型在临床工作中有助干预后判断、疗效评价,在治疗研究中可用于设定配对对照组.
作者：严颖；麦丽；张英；江元森；徐启桓 刊期： 2012年第02期
目的 通过现代分子生物学理论与技术测定和分析了从脑炎患者脑脊液标本分离的基因Ⅰ型乙脑病毒(GZ56株)全基因组序列特征,以了解其致病性的分子基础.方法 采用RT-PCR法和核酸序列测定法获得病毒基因组全序列,并利用DNASTAR、ClustalX version 2.0.9及MEGAversion 4.1等生物学软件分析该乙型脑炎病毒核苷酸序列、氨基酸序列及系统进化等.结果 研究结果表明从病毒性脑炎患者脑脊液标本分离的基因Ⅰ型乙脑病毒(GZ56株)基因组全长为10965nt,编码3432个氨基酸.病毒全基因组分子进化分析显示GZ56株全基因组与国际上第一株从蚊虫分离的基因Ⅰ型乙脑病毒(M-28株)处于同一进化分支.GZ56株与其他基因Ⅰ型乙脑病毒核苷酸和氨基酸序列同源性分别为96.2％～98.6％和98.2％～99.7％.病毒E基因与乙脑病毒灭活疫苗株P3相比存在11个氨基酸差异位点,而与乙脑病毒减毒活疫苗株SA14-14-2相比,在E蛋白上存在14个氨基酸差异位点.结论 本研究提示,从病毒性脑炎患者标本分离的基因Ⅰ型乙脑病毒全基因组未见明显变化,从基因组水平可以推测该病毒可以被现行的乙脑疫苗所保护.
作者：李佳；付士红；王力华；高晓艳；王环宇；叶旭芳；赵苏晔；刘纯婷；朱武洋；王兰；梁国栋 刊期： 2012年第02期
目的 掌握福建省自然界蚊虫中乙型脑炎病毒感染率及基因型别特征.方法 2010年在福建省三明市、建阳市和福州市采集蚊虫标本,研磨处理后采用乙脑病毒特异性检测引物进行分子筛查.PCR产物直接进行双向测序,应用ATGC、Clustal X(1.83)、MegAlign、GeneDoc3.2和Mega4等生物学软件完成全基因组序列拼接、比对和核苷酸与氨基酸同源性分析、系统进化分析.结果 共采集6987只蚊虫标本,主要是三带喙库蚊和中华按蚊.3个监测点均检测到乙脑病毒核酸序列,三明市、建阳市和福州市蚊虫中乙脑病毒带毒率分别为1.25％、1.76％和0.65％.从建阳市采集的三带喙库蚊中扩增出1株乙脑病毒全基因序列,经鉴定所有检测到的乙脑病毒序列均属于基因Ⅰ型.结论 福建省自然界蚊虫中以基因I型乙脑病毒为主.
作者：赫晓霞；王环宇；付士红；何英；杨发柱；陈维欣；徐保海；鲁苏娜；谢汉国；哈斯苏荣；严延生；梁国栋 刊期： 2012年第02期
目的 探讨血浆脑钠素(BNP)水平在病毒性心肌炎(VMC)患者中的临床意义及预后.方法 测定48例病毒性心肌炎患者及40例非心肌炎患者BNP浓度及射血分数(EF),随访2年,观察两组患者,分析血浆BNP与心肌炎的相关性以及BNP对病毒性心肌炎患者预后的影响.结果 VMC组血浆BNP、EF值与对照组比较显著高于对照组(P＜0.01,P＜0.05).VMC组BNP显著升高患者死亡率高.结论 VMC患者中血浆BNP水平升高,BNP显著升高患者预后差.
作者：张春红；沈东；孙红岩；张丽伟；马永江；黄党生 刊期： 2012年第02期
目的 探讨呼吸道合胞病毒( RSV)感染人肺上皮A549细胞后,Toll样受体3(TLR3)的水平变化及其产生的Ⅰ型干扰素的抗病毒作用.方法 RSV感染体外培养的人肺上皮A549细胞,并给予TLR3特异性抗体处理,分别感染4、8、12、16、24h后收集各组细胞.未感染病毒的细胞作为对照组.RT-PCR法检测TLR3、IFN-α、IFN-β,RSV F蛋白的mRNA表达水平变化.结果 RSV感染A549细胞后,TLR3、IFN-α、IFN-β,RSV F蛋白的mRNA表达量均升高且有时间依赖性,TLR3 mRNA在24h表达量是基础表达量的5倍,IFN-α、IFN-β mRNA在24 h表达量是基础表达量的4倍多,RSVF蛋白的mRNA表达量近1.7倍.TLR3抗体预先处理以抑制TLR3受体,再行RSV感染,IFN-α和IFN-β mRNA表达量虽然升高,但较感染组均有所下降,mRNA表达在12 h后显著降低,且IFN-ββ的mRNA表达量下调更明显.但RSV F基因的mRNA表达在12 h、24 h升高有显著性差异.结论 RSV感染A549细胞后可上调TLR3表达,其活化细胞介导产生的Ⅰ型干扰素起抗病毒作用,在一定程度上可抑制病毒的增殖水平.
作者：杨宝顺；王丽静 刊期： 2012年第02期
目的 通过检测HCC血清中的GP73和AFP含量,探讨GP73对于肝癌检测的应用价值.方法 通过ELISA方法对81例HCC、72例CH/LC和65例正常对照血清行GP73检测,并通过ROC曲线计算GP73诊断肝癌的敏感性和特异性.结果 HCC组、CH/LC组和正常对照组GP73含量分别为( 152.67±33.59) ng/ml、(93.15±20.02) ng/ml和(58.95±17.29) ng/ml.ROC曲线分析显示以120 ng/ml为Cut-off值,GP73诊断肝癌的敏感性为77.80％,特异性为78.00％.结论 GP73可以作为诊断肝癌的血清标志物,其敏感性好于AFP,同时通过联合检查可以提高肝癌的检出率,有一定的临床意义.
作者：吴巧萍；谢服役；孟庆玲；穆银玉 刊期： 2012年第02期
趋化因子( chemokine)是一类三维结构上相似,唯一的一类通过G蛋白偶联受体超家族起作用的细胞因子.趋化因子及其受体主要介导了细胞的定向移动,参与免疫细胞和器官的发育、免疫应答过程、病原体感染与清除、肿瘤形成和转移,此外近年来还报道趋化因子可扮演神经调质和细胞凋亡促进因子的角色,发挥广泛的生理和病理作用.本文将从趋化因子及其受体的结构、分类和免疫反应中的功能展开综述,着重阐述了在病毒感染引发的病理损伤过程中趋化因子及其受体的功能,为病理诊断和相关病毒性疾病的干预提供了线索和思路.
作者：徐银胜；陈佳琛；盛望；曾毅 刊期： 2012年第02期
目的 建立甲肝病毒(HAY)特异性TaqMan荧光定量PCR检测方法,并对血清等样品中的HAV进行检测.方法 根据参考文献,选取HAV基因组保守区5'-NCR区引物和探针,建立特异性强、敏感度高、稳定性好的TaqMan HAV Real-time RT-PCR检测体系并应用于甲肝患者血清等病毒核酸的检测.结果 本研究建立的方法能够特异检测出样品中的甲肝病毒,其灵敏度介于每反应0.1CCID50至0.01CCID50之间.同一样本重复检测3次,批内样本Ct值的变异系数大2.0％,批间样本Ct值的变异系数大2.6％.急性期甲型肝炎患者血清中甲肝病毒为5.18×102～4.93×107拷贝/ml.结论 本实验建立的HAV Real-time RT-PCR检测方法具有特异、灵敏、快速等优点,可成功应用于临床样本等甲肝病毒的病原学检测.
作者：郑惠惠；邱丰；曾经瑗；毕胜利 刊期： 2012年第02期
目的 探讨运用声辐射力脉冲成像技术( ARFI)评价肝脏纤维化及早期肝硬化的价值.方法 选取66例经肝穿活检证实的病毒性肝炎患者与33例健康者正常对照组(S0),应用声辐射力脉冲成像技术测量受检者肝脏s5、s6、s7、s8段及肝包膜的剪切波速度,同时常规测量所有受检者的肝、脾大小及门静脉内径.结果 66例病毒性肝炎患者按照肝穿活检病理结果分为S1组、肝脏纤维化组(S2-S3)、早期肝硬化组(S4).早期肝硬化组(S4)的肝脏各段剪切波速度与S0组、S1组、肝脏纤维化组(S2-S3)间的相应肝段剪切波速度均存在统计学差异(P＜0.05),肝脏纤维化组(S2-S3)与S0组、S1组间的相应肝段剪切波速度也均存在统计学差异(P＜0.05),而S1组与S0组间的各肝段剪切波速度无统计学差异(P＞0.05),各组间肝包膜剪切波速度无统计学差异(P＞0.05).早期肝硬化组的脾脏厚度及门静脉内径较其他组有增加,并具统计学差异(P＜0.05).结论 声辐射力脉冲成像技术可无创评价病毒性肝炎患者肝脏纤维化及早期肝硬化程度,方法可行,适合于临床推广应用.
作者：董常峰；刘映霞；杨桂林；李汉英；黄婷；王耀 刊期： 2012年第02期
目的 建立并应用检测儿童下呼吸道感染WU多瘤病毒(WU polyomavirus)的实时荧光定量PCR( real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)方法.方法 选择WU多瘤病毒的VP2基因作为检测的目标基因,设计FQ-PCR引物和检测探针,以重组质粒为标准品建立标准曲线,并对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评价；应用该方法对温州医学院附属温岭医院收集的临床下呼吸道感染患儿的痰液、咽拭子846份及血清标本846份进行定量检测.结果 本研究建立FQ-PCR检测方法,质粒标准曲线的方差系数为0.998,灵敏度可达到50拷贝；应用该方法检测700份痰液标本,检测到7例阳性标本,146份咽试子标本中未检测到阳性标本,总阳性率为1.00％ (7/700),846份血清标本未检测到阳性标本.结论 本研究建立的FQ-PCR方法可以特异、快速、灵敏地对儿童下呼吸道感染的WU多瘤病毒进行定量检测；痰液标本较咽拭子或血清标本更适用于WU多瘤病毒感染的核酸检测.
作者：林红霞；郑昌华；郑志辉；欧阳后先；郑敏巧；吴锋；林峰；侯建毅；吕建新 刊期： 2012年第02期
目的 探讨黏液瘤病毒对大鼠动物模型体内胶质瘤细胞的作用.方法 采用立体定向法向SD大鼠颅内注射C6细胞建立大鼠额叶胶质瘤模型,明确成瘤后,随机分组,以立体定向方法往瘤腔内注射黏液瘤病毒(MV),5-FU,MV+ 5-FU及灭活黏液瘤病毒(DV),观察不同组别间大鼠体重、肿瘤大小、GFAP表达、Akt表达情况.结果 SD大鼠注射C6细胞后,额叶可见胶质瘤生长.成瘤后瘤腔内注射MV、5-FU及MV+ 5-FU,肿瘤的生长较注射DV减慢,并有缩小趋势,GFAP表达较少.MV组及MV+ 5-FU组PI3k、Akt及mTOR表达较DV组及5-FU组下降.结论 立体定向法注射C6细胞可以建立稳定的胶质瘤模型.MV可以通过调节PI3K-Akt-mTOR通路相关基因的表达,从而增加化疗药物对动物模型体内肿瘤细胞的生物学活性.
作者：张秋生；张猛；梁世杰；林恒州；纪涛；李维平 刊期： 2012年第02期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
