倪勤；谢天胜；李敏伟；刘克洲
目的 探讨慢性HBV感染者甘露糖结合蛋白(MBP)基因多态性对慢性乙型肝炎患者疾病进展的影响及与HBV DNA载量的关系.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法和实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术对244例慢性乙型肝炎患者、151例肝硬化患者和88名正常对照者的MBP基因第54号密码子多态性和血清HBV DNA载量进行检测.结果 CHB轻、中度组患者MBP基因GGC/GAC基因型频率和GAC等位基因频率与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；CHB重度组、代偿性LC组、失代偿性LC组MBP基因GGC/GAC基因型频率和GAC等位基因频率显著高于正常对照组(P＜0.05)；其中失代偿性LC组突变率高,为36.5％.慢性HBV感染者MBP基因GGC/GAC基因型频率和GAC等位基因频率不随HBV DNA载量而变化(P＞0.05).结论 MBP基因第54号密码子突变与HBV DNA载量无明显关系,而与慢性HBV感染进展有关.
作者：郑瑞丹；陈建能；高建平；庄群瑛；朱青川；卢燕辉；林震群；洪伍华；李庆端；陈哲 刊期： 2012年第02期
目的 掌握福建省自然界蚊虫中乙型脑炎病毒感染率及基因型别特征.方法 2010年在福建省三明市、建阳市和福州市采集蚊虫标本,研磨处理后采用乙脑病毒特异性检测引物进行分子筛查.PCR产物直接进行双向测序,应用ATGC、Clustal X(1.83)、MegAlign、GeneDoc3.2和Mega4等生物学软件完成全基因组序列拼接、比对和核苷酸与氨基酸同源性分析、系统进化分析.结果 共采集6987只蚊虫标本,主要是三带喙库蚊和中华按蚊.3个监测点均检测到乙脑病毒核酸序列,三明市、建阳市和福州市蚊虫中乙脑病毒带毒率分别为1.25％、1.76％和0.65％.从建阳市采集的三带喙库蚊中扩增出1株乙脑病毒全基因序列,经鉴定所有检测到的乙脑病毒序列均属于基因Ⅰ型.结论 福建省自然界蚊虫中以基因I型乙脑病毒为主.
作者：赫晓霞；王环宇；付士红；何英；杨发柱；陈维欣；徐保海；鲁苏娜；谢汉国；哈斯苏荣；严延生；梁国栋 刊期： 2012年第02期
目的 探讨聚乙二醇干扰素α治疗慢性乙型肝炎期间甲状腺疾病发生情况及其临床特点.方法 对210例应用聚乙二醇干扰素α治疗的慢性乙肝患者在治疗前、治疗中每3个月检测甲状腺功能及甲状腺抗体.结果 聚乙二醇干扰素α治疗后,6.7％(14/210)出现甲状腺疾病,其中5.2％ (11/210)甲状腺功能亢进,1.4％(3/210)甲状腺功能减退.女性发生甲状腺功能亢进及甲状腺功能减退的比例分别为11.8％ (6/51)和3.9％ (2/51),高于男性的3.1％ (5/159)和0.6％ (1/159),两组间差异有统计学意义,P＜0.05.女性、治疗前TPOAb阳性及治疗中TgAb阳性患者出现甲状腺疾病比例增高,与未出现甲状腺疾病者相比,差异有统计学意义,P＜ 0.05.结论 聚乙二醇干扰素α治疗慢性乙型肝炎可引起甲状腺疾病.女性、TPOAb及TgAb阳性患者发生甲状腺疾病的风险增高.
作者：陈学福；陈小苹；马晓军；陈文莉；黄晶；罗晓丹 刊期： 2012年第02期
目的 构建四种不同结构的1.3倍全基因乙型肝炎病毒(HBV)转基因载体,观察HBV抗原在体内外表达水平的差异.方法 克隆1.3倍的HBV基因至慢病毒转基因质粒pCS-CG并取代其中的EGFP表达盒,构建四种结构的pCS-HBV1.3质粒,体外转染Huh 7细胞和尾静脉高压水动力法注射C57BL/6小鼠后,ELISA方法分别检测细胞上清和小鼠血清中HBsAg和HBeAg的表达.结果 成功构建了四种不同结构的pCS-HBV1.3质粒,四种质粒HBV S抗原与e抗原在体内外的表达趋势一致,即乙肝抗原表达水平在正向插入的转基因质粒中高于反向插入；HBV抗原表达水平还与载体序列中RRE调控元件和cPPT调控元件前的基因序列长度有关.结论 筛选获得了可在体内外高效表达HBV抗原的转基因载体可应用于乙肝病毒体内外感染模型的建立与应用.
作者：揣侠；陈红；杨扬；王文；文波；王刚；黄保英；邓瑶；谭文杰 刊期： 2012年第02期
目的 检测慢性重型乙型肝炎患者血清中IL-23表达,探讨IL-23水平与丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)及HBV DNA载量的相关性.方法 用酶联免疫吸附法(ELISA)检测50例慢性重型乙型肝炎患者(重肝组)及18名健康人(对照组)血清中IL-23表达,并与患者ALT、AST、TBil、HBV DNA载量进行相关性分析.结果 重肝组患者血清中IL-23表达高于对照组,两组之间的差异有统计学意义(P＜0.05)；IL-23水平与ALT、AST呈正相关(P＜0.05),与TBil、HBV DNA载量无相关性(P＞0.05).结论 慢性重型乙型肝炎患者血清中IL-23表达增高,与炎症程度相关,可能参与慢性重型乙型肝炎的发病.
作者：许海霞；李学俊；潘兴飞；徐启桓 刊期： 2012年第02期
目的 建立甲型肝炎病毒抗体IgM的AlphaLISA检测.方法 浓缩甲型肝炎病毒抗原并生物素化,通过dot-Blot法摸索出生物素化的甲型肝炎病毒的适量为6 × 10-8ng.优化供体珠、受体微珠、血清等实验反应条件,建立了甲型肝炎病毒的AlphaLISA的IgM检测方法.并对23份感染甲型肝炎病毒的IgM阳性患者和70份健康人的血清进行检测.结果 AlphaLISA甲型肝炎病毒的IgM方法检测:灵敏度(真阳性率)为78％；特异度(真阴性率)为98.5％；假阳性率为1％；假阴性率为22％；阳性预测值为95％；阴性预测值为93％；准确度为94％.结论 建立了均相、快速检测AlphaLISA甲型肝炎病毒IgM检测方法并得到初步应用.
作者：甘星；王颖；宋娟；崔雨；孙鹏；高晨；李朝品；韩俊 刊期： 2012年第02期
目的 探讨呼吸道合胞病毒( RSV)感染人肺上皮A549细胞后,Toll样受体3(TLR3)的水平变化及其产生的Ⅰ型干扰素的抗病毒作用.方法 RSV感染体外培养的人肺上皮A549细胞,并给予TLR3特异性抗体处理,分别感染4、8、12、16、24h后收集各组细胞.未感染病毒的细胞作为对照组.RT-PCR法检测TLR3、IFN-α、IFN-β,RSV F蛋白的mRNA表达水平变化.结果 RSV感染A549细胞后,TLR3、IFN-α、IFN-β,RSV F蛋白的mRNA表达量均升高且有时间依赖性,TLR3 mRNA在24h表达量是基础表达量的5倍,IFN-α、IFN-β mRNA在24 h表达量是基础表达量的4倍多,RSVF蛋白的mRNA表达量近1.7倍.TLR3抗体预先处理以抑制TLR3受体,再行RSV感染,IFN-α和IFN-β mRNA表达量虽然升高,但较感染组均有所下降,mRNA表达在12 h后显著降低,且IFN-ββ的mRNA表达量下调更明显.但RSV F基因的mRNA表达在12 h、24 h升高有显著性差异.结论 RSV感染A549细胞后可上调TLR3表达,其活化细胞介导产生的Ⅰ型干扰素起抗病毒作用,在一定程度上可抑制病毒的增殖水平.
作者：杨宝顺；王丽静 刊期： 2012年第02期
目的 研究肠道病毒71型(EV71)抵抗Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)诱导的抗病毒作用.方法 将1000 U/ml的Ⅰ型干扰素(α,β)加入HeLa细胞后,去除上清中的干扰素,感染带有GFP的重组单纯疱疹病毒(HSV-1)和EV71,观察GFP的表达和PCR检测HSV-1核酸,判断Ⅰ型干扰素对HSV-1的作用.通过RT-PCR方法检测EV71 2A基因的表达从而判断EV71病毒的复制能力.结果 Ⅰ型干扰素(α,β)诱导HeLa细胞产生抗病毒蛋白而有效地抑制重组HSV-1 GFP的表达和核酸扩增.而EV71 2A的RT-PCR结果证实EV71可在Ⅰ型干扰素(α,β)作用后的HeLa细胞中有效增殖.结论 Ⅰ型干扰素(a,β)诱导产生抗病毒蛋白；EV71可在Ⅰ型干扰素(α,β)诱导产生抗病毒蛋白的HeLa细胞中有效增殖.
作者：崔雨；宋娟；宋芹芹；孙鹏；甘星；李公启；王克霞；韩俊 刊期： 2012年第02期
目的 获取有生物活性的丁肝抗原蛋白,探讨其作为诊断试剂的应用价值.方法 经密码子优化,合成人工编码的丁肝抗原基因序列；以M48作为表达载体,构建带有硫氧还蛋白的重组表达质粒；在大肠埃希氏菌中经IPTG诱导表达；以亲和层析纯化并以ELISA鉴定该蛋白.结果 酶切鉴定构建的质粒正确；SDS-PAGE结果显示表达和纯化的外源蛋白与预期相对分子质量大小一致；ELISA鉴定该蛋白有与丁肝抗体特异性结合的活性.结论 成功获得有生物活性的可供诊断用的丁肝抗原蛋白,为丁肝诊断试剂的研发奠定了基础.
作者：丁军颖；郭敏卓；伊瑶；苏秋东；卢学新；邱丰；毕胜利 刊期： 2012年第02期
目的 探讨黏液瘤病毒对大鼠动物模型体内胶质瘤细胞的作用.方法 采用立体定向法向SD大鼠颅内注射C6细胞建立大鼠额叶胶质瘤模型,明确成瘤后,随机分组,以立体定向方法往瘤腔内注射黏液瘤病毒(MV),5-FU,MV+ 5-FU及灭活黏液瘤病毒(DV),观察不同组别间大鼠体重、肿瘤大小、GFAP表达、Akt表达情况.结果 SD大鼠注射C6细胞后,额叶可见胶质瘤生长.成瘤后瘤腔内注射MV、5-FU及MV+ 5-FU,肿瘤的生长较注射DV减慢,并有缩小趋势,GFAP表达较少.MV组及MV+ 5-FU组PI3k、Akt及mTOR表达较DV组及5-FU组下降.结论 立体定向法注射C6细胞可以建立稳定的胶质瘤模型.MV可以通过调节PI3K-Akt-mTOR通路相关基因的表达,从而增加化疗药物对动物模型体内肿瘤细胞的生物学活性.
作者：张秋生；张猛；梁世杰；林恒州；纪涛；李维平 刊期： 2012年第02期
目的 建立甲肝病毒(HAY)特异性TaqMan荧光定量PCR检测方法,并对血清等样品中的HAV进行检测.方法 根据参考文献,选取HAV基因组保守区5'-NCR区引物和探针,建立特异性强、敏感度高、稳定性好的TaqMan HAV Real-time RT-PCR检测体系并应用于甲肝患者血清等病毒核酸的检测.结果 本研究建立的方法能够特异检测出样品中的甲肝病毒,其灵敏度介于每反应0.1CCID50至0.01CCID50之间.同一样本重复检测3次,批内样本Ct值的变异系数大2.0％,批间样本Ct值的变异系数大2.6％.急性期甲型肝炎患者血清中甲肝病毒为5.18×102～4.93×107拷贝/ml.结论 本实验建立的HAV Real-time RT-PCR检测方法具有特异、灵敏、快速等优点,可成功应用于临床样本等甲肝病毒的病原学检测.
作者：郑惠惠；邱丰；曾经瑗；毕胜利 刊期： 2012年第02期
目的 通过检测HCC血清中的GP73和AFP含量,探讨GP73对于肝癌检测的应用价值.方法 通过ELISA方法对81例HCC、72例CH/LC和65例正常对照血清行GP73检测,并通过ROC曲线计算GP73诊断肝癌的敏感性和特异性.结果 HCC组、CH/LC组和正常对照组GP73含量分别为( 152.67±33.59) ng/ml、(93.15±20.02) ng/ml和(58.95±17.29) ng/ml.ROC曲线分析显示以120 ng/ml为Cut-off值,GP73诊断肝癌的敏感性为77.80％,特异性为78.00％.结论 GP73可以作为诊断肝癌的血清标志物,其敏感性好于AFP,同时通过联合检查可以提高肝癌的检出率,有一定的临床意义.
作者：吴巧萍；谢服役；孟庆玲；穆银玉 刊期： 2012年第02期
固有免疫在机体抵御HIV-1感染过程中发挥重要作用.载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide protein,APOBEC)家族的成员APOBEC3G(A3G)可以通过胞嘧啶脱氨机制抑制HIV-1的复制,发挥固有免疫的作用;病毒感染因子(virus infectivity factor,Vif)能与A3G结合并引发A3G的降解,使HIV-1的感染率增加100倍以上.该研究为以Vif-A3G为靶点的抗HIV-1药物的研究提供了新的思路.因此A3G、Vif及其相互作用机制成为HIV-1研究的热点.
作者：张文俊；乔新华；李泽琳；曾毅 刊期： 2012年第02期
目的 通过现代分子生物学理论与技术测定和分析了从脑炎患者脑脊液标本分离的基因Ⅰ型乙脑病毒(GZ56株)全基因组序列特征,以了解其致病性的分子基础.方法 采用RT-PCR法和核酸序列测定法获得病毒基因组全序列,并利用DNASTAR、ClustalX version 2.0.9及MEGAversion 4.1等生物学软件分析该乙型脑炎病毒核苷酸序列、氨基酸序列及系统进化等.结果 研究结果表明从病毒性脑炎患者脑脊液标本分离的基因Ⅰ型乙脑病毒(GZ56株)基因组全长为10965nt,编码3432个氨基酸.病毒全基因组分子进化分析显示GZ56株全基因组与国际上第一株从蚊虫分离的基因Ⅰ型乙脑病毒(M-28株)处于同一进化分支.GZ56株与其他基因Ⅰ型乙脑病毒核苷酸和氨基酸序列同源性分别为96.2％～98.6％和98.2％～99.7％.病毒E基因与乙脑病毒灭活疫苗株P3相比存在11个氨基酸差异位点,而与乙脑病毒减毒活疫苗株SA14-14-2相比,在E蛋白上存在14个氨基酸差异位点.结论 本研究提示,从病毒性脑炎患者标本分离的基因Ⅰ型乙脑病毒全基因组未见明显变化,从基因组水平可以推测该病毒可以被现行的乙脑疫苗所保护.
作者：李佳；付士红；王力华；高晓艳；王环宇；叶旭芳；赵苏晔；刘纯婷；朱武洋；王兰；梁国栋 刊期： 2012年第02期
目的 建立并应用检测儿童下呼吸道感染WU多瘤病毒(WU polyomavirus)的实时荧光定量PCR( real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)方法.方法 选择WU多瘤病毒的VP2基因作为检测的目标基因,设计FQ-PCR引物和检测探针,以重组质粒为标准品建立标准曲线,并对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评价；应用该方法对温州医学院附属温岭医院收集的临床下呼吸道感染患儿的痰液、咽拭子846份及血清标本846份进行定量检测.结果 本研究建立FQ-PCR检测方法,质粒标准曲线的方差系数为0.998,灵敏度可达到50拷贝；应用该方法检测700份痰液标本,检测到7例阳性标本,146份咽试子标本中未检测到阳性标本,总阳性率为1.00％ (7/700),846份血清标本未检测到阳性标本.结论 本研究建立的FQ-PCR方法可以特异、快速、灵敏地对儿童下呼吸道感染的WU多瘤病毒进行定量检测；痰液标本较咽拭子或血清标本更适用于WU多瘤病毒感染的核酸检测.
作者：林红霞；郑昌华；郑志辉；欧阳后先；郑敏巧；吴锋；林峰；侯建毅；吕建新 刊期： 2012年第02期
目的 研究影响肝肾综合征预后的因素、建立预后判断模型.方法 选择126例肝肾综合征的病例,观察56项可能与本病预后有关的指标,涉及个人情况、病史、症状、体征、实验室检查等方面,用COX比例风险模型及Kaplan-Meier进行分析.结果 肝性脑病(HE)及其程度、消化道出血(GIB)、血中性粒细胞数(N1)、肌酐(Cr)是影响预后的独立因素.危险指数PI=0.711HE+0.836GIB+0.052N1+0.002Cr( N1、Cr为原测值；消化道出血,有=1,无=0；肝性脑病,无=0,Ⅰ期=1,Ⅱ期=2,Ⅲ=3,Ⅳ期=4).当PI＜1时,平均生存期42 d；1≤PI≤3,平均生存期15 d；PI＞3,平均生存期2d.结论 肝性脑病及其程度、消化道出血、血中性粒细胞数、肌酐是影响预后的独立因素,可用于建立预后判断模型,本预后模型在临床工作中有助干预后判断、疗效评价,在治疗研究中可用于设定配对对照组.
作者：严颖；麦丽；张英；江元森；徐启桓 刊期： 2012年第02期
在慢性淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(lymphocytic choriomeningitis virus,LCMV)小鼠模型的研究中发现,病毒特异性CD8+T淋巴细胞(cytotoxic T cell,CTL)功能的发挥需要特异性CD4 +T细胞的辅助.IL-21主要由活化的CD4+T细胞分泌,对维持病毒特异性的CTL功能具有重要的作用.本研究在体外观察不同乙肝病毒( HBV)感染状态下,血浆中IL-21的表达及产生IL-21的HBV特异性CD4+T淋巴细胞频数,探讨IL-21在HBV感染中的意义.
作者：刘梅；潘修成；陈明；傅涓涓；李丽 刊期： 2012年第02期
趋化因子( chemokine)是一类三维结构上相似,唯一的一类通过G蛋白偶联受体超家族起作用的细胞因子.趋化因子及其受体主要介导了细胞的定向移动,参与免疫细胞和器官的发育、免疫应答过程、病原体感染与清除、肿瘤形成和转移,此外近年来还报道趋化因子可扮演神经调质和细胞凋亡促进因子的角色,发挥广泛的生理和病理作用.本文将从趋化因子及其受体的结构、分类和免疫反应中的功能展开综述,着重阐述了在病毒感染引发的病理损伤过程中趋化因子及其受体的功能,为病理诊断和相关病毒性疾病的干预提供了线索和思路.
作者：徐银胜；陈佳琛；盛望；曾毅 刊期： 2012年第02期
目的 了解人偏肺病毒(hMPV)在长沙地区急性下呼吸道感染住院患儿中的流行病学特点.方法 收集2007年9月至2011年2月因急性下呼吸道感染在湖南省人民医院儿科医学中心住院儿童的鼻咽抽吸物(nasopharyngeal aspirates,NPA)样本2613份,采用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测hMPV M基因,将阳性PCR扩增产物测序并与GenBank中已知的hMPV参考株进行比对、分析.结果 2613份标本中hMPV阳性检出数135例,检出率为5.2％,男女之间的检出率比较有统计学差异(x2=8.007,P=0.003),hMPV阳性检出患儿的年龄以1岁以内多见(63.2％).hMPV阳性检出率在春季呈现高峰,从检出季节分布显示A2b型主要在冬春季节流行,而B2型主要在春夏季流行.135例hMPV长沙株分为A型和B型两个主要的基因型,其中A2b亚型在2007-2008年为优势流行型别,2009 -2010年A2b和B2型共同流行,B2亚型在2011年呈优势流行型别.135例hMPV检出阳性患儿中有66例(48.9％)存在混合病毒感染,其中与HBoV混合检出率高.结论 长沙地区部分儿童的急性下呼吸道感染与hMPV有关,且阳性检出患儿年龄主要集中在1岁以下,男多于女,主要流行季节在春季,A2b型和B2型优势基因型在长沙地区共同流行,与其他病毒混合检出率较高.
作者：赵辛；张兵；段招军；谢志萍；高寒春；肖霓光；钟礼立；周琼华；张菲；张静；曹长青 刊期： 2012年第02期
流感疫苗接种始于20世纪40年代,在人群中长期和广泛的接种数据表明流感疫苗接种是防控流感有效的手段.传统疫苗的存在形式包含全病毒灭活疫苗、裂解疫苗和亚单位疫苗.它们存在的局限性主要包括:(1)依赖于鸡胚生产,耗时较长;(2)不良反应较大;(3)匹配性依赖:若疫苗株与流行株不相匹配,会造成免疫逃脱,严重影响人群免疫效果;(4)监测干扰:机体会产生针对于病毒内部蛋白(如NP)的特异性抗体,所以全病毒疫苗的使用会干扰临床监测和检疫及流行病学调查.
作者：余慧燕；于在江；舒跃龙 刊期： 2012年第02期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
