宫颈癌与多种病原微生物感染、细胞因子及硒元素含量相关性研究

郑曙民；张春玲；李连青；韩存芝；荆洁线；朱庆义

关键词：宫颈肿瘤, 人乳头状瘤病毒, 疱疹, 单纯, 硒, 细胞活素类

摘要：目的探讨多种病毒及支原体性病原微生物感染、细胞因子和微量元素硒(Se)含量与宫颈癌发病的相关性.方法 PCR法检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒、疱疹病毒、人巨细胞病毒、EB病毒、沙眼衣原体和解脲支原体的感染(75份非宫颈癌患者正常宫颈组织作对照);ELISA法检测血清中细胞因子IL-2R、TNF的含量;荧光光度技术检测血清中硒(Se)元素含量.结果在195份宫颈癌患者的癌组织标本中,病原微生物感染阳性者为166份(85.1%),其中16,18和35型人乳头瘤病毒感染60份(30.8%);6和11型人乳头瘤病毒感染5份(2.6%);2型单纯疱疹病毒感染60份(30.8%);1型单纯疱疹病毒感染4份(2.1%);EB病毒感染3份(1.5%);人巨细胞病毒感染6份(3.1%);沙眼衣原体感染11份(5.6%)和解脲支原体感染17份(8.7%).对照组75份正常宫颈组织中病原微生物感染阳性者为15份(20.0%),其中,16,18和35型人乳头瘤病毒感染3份(4.0%);2型单纯疱疹病毒感染5份(6.7%);EB病毒感染1份(1.3%);沙眼衣原体感染3份(4.0%)和解脲支原体感染3份(4.0%).62份宫颈癌和36份正常人血清中,白细胞介素-2受体(=356.44 U/ml)和肿瘤坏死因子(=373.48 pg/ml)浓度均比对照组明显升高(P<0.001).硒含量(=0.058 mg/ml)比对照组水平低(P<0.05).结论山西宫颈癌的发病与多种病原微生物感染有关,尤其16,18和35型人乳头瘤病毒和2型单纯疱疹病毒感染率较高,同时伴有白细胞介素-2受体和肿瘤坏死因子水平的升高与硒元素的低下.

中华实验和临床病毒学杂志相关文献

新型基因工程干扰素受体结合域的改造及其生物活性测定

目的改造干扰素功能结合域,以提高干扰素的生物学活性.方法在新型基因工程干扰素(IFNα1c/86D)AB环内通过点突变技术引入2个独立酶切位点EcoRⅤ和EstEⅡ,用聚合酶链反应(PCR)技术在干扰素cDNA水平对母体干扰素LoopAB的31位甲硫氨酸换成天冬氨酸(M-D),32位天冬氨酸换成脯氨酸(D-P),将重组基因在大肠埃希菌中表达,用滤泡口炎病毒(VSV)-人羊膜传代细胞(WISH)系统检测抗病毒活性.用比色MTT实验检测抗增殖活性.结果通过突变,31和32位氨基酸获得重组突变体3132IFNα1c/86D,经限制性内切酶图分析、DNA序列和抗病毒活性测定,初步表明3132IFNα1c/86D是母体干扰素IFNα1c/86D抗病毒活性的8倍,抗增殖作用与母体干扰素相比差异无显著性.结论改造干扰素受体结合域,可提高干扰素的抗病毒活性.

作者：胡荣；马学军；魏开坤；王虹；钱振超；薛水星；段招军；侯云德刊期： 2002年第02期
外周血TTV抗体检测及临床评价

我们根据目前国际上报道的多株TTV全序列,以Okamoto发表的序列为模板,对照选择其中同源性均在91%以上相对保守的ORF1区中一段克隆并表达,用这段表达产物作为抗原,建立了ELISA TTV IgG、IgM抗体检测方法,并检测一些人群.本院辨认健康体检人群124份,传染科各类肝炎人群55份(以慢性乙型肝炎为主),消化科胃肠病人群39份,传染科肝穿刺组织32份.

作者：王晶；唐永明；张长发；陶纪值刊期： 2002年第02期
新生儿单纯乙型肝炎血源疫苗的免疫持久性和远期保护效果

目的掌握我国新生儿单纯接种乙型肝炎血源疫苗后的免疫持久性和远期预防效果;观察新生儿免疫较长时间后是否需加强免疫.方法在湖南湘潭市等4个乙型肝炎疫苗试点区内,对1986～1988年出生并接种乙型肝炎血源疫苗的新生儿,连续14～15年按免疫儿年龄分层随机抽样采血随访,累计随访21 680人次,观察免疫儿HBsAg、抗-HBs和抗-HBc的动态变化.结果新生儿单纯乙型肝炎血源疫苗全程基础免疫后,在15年随访中没有加强免疫,各试点区免疫儿童HBsAg携带率低于1.66%,携带率没有随免疫后年限的延长而增加;阻断HBV慢性感染的效果持续在90%左右(95%可信限为:83.1%～97.2%);免疫后不同年限间HBsAg携带率、HBV感染率和保护效果差异均无显著性(P>0.05).免疫儿抗-HBs阳性率随免疫后年限延长而逐年明显下降,至第9～10年下降为40%～50%,之后数年内下降幅度不大,至免疫后13～14年抗-HBs阳性率维持在30%～42%;抗-HBs滴度下降了90%.结论新生儿单纯乙型肝炎疫苗接种后抗-HBs阳性率与滴度的下降不影响其远期预防效果;就群体而言,新生儿及时完成全程免疫后,无需加强免疫可有效阻断HBV感染后成为HBsAg慢性携带者,而很有可能终生受益.

作者：夏国良；贾志远；颜天强；李荣成；刘洪斌；徐志一；曹惠霖；刘崇柏刊期： 2002年第02期
EBVTK激酶基因在原核细胞中的表达及其在NPC诊断中的意义

目的探索以Epstein-Barr病毒(EBV)TK激酶为抗原,建立简便、快速、敏感和特异的鼻咽癌(NPC)诊断方法.方法构建原核表达载体pRSET-TK,在原核细胞BL21(DE3)中获得高效表达的TK激酶,以Western blot检测证明其抗原的特异性和应用于NPC检测的可行性.以纯化的TK激酶为抗原初步建立ELISA检测方法,检测NPC患者血清中TK/IgG抗体.结果在NPC患者血清中含有特异的针对TK激酶的IgG抗体,Western blot TK/IgG检测的敏感度和特异度均为100%.结论初步建立了ELISA TK/IgG诊断NPC方法,具有较高的敏感性和特异性.

作者：黄滨；李伯军；周为民；皮国华；唐慰萍；谷淑燕刊期： 2002年第02期
沈阳市1999年流行性感冒的监测分析

沈阳市位于我国东北,每到冬季呼吸道系统疾病高发.为探究其病因,我们开展了以流感监测为主的调查.选择6家具有代表性的、较大的综合性医院,每日统计上感门诊数,按旬汇总,同时采集疑似流感患者咽拭子,用MDCK细胞进行病毒分离.结果显示:6个检测点上感就诊量10～11月份较平稳,每旬波动在3 300～4 300例左右,12月初病例开始上升,12月末达10 069例,是门诊量的3倍,1月中旬病历数下降,2月上旬降至平时水平.调查结果表明,同期幼儿及青少年上感发病率分别为56%和48%.我们从采集的101份咽拭子中分离到29株流感病毒,阳性率为28.7%.

作者：付荣华；何雅慧；徐英俐；王萍；王作苏刊期： 2002年第02期
非复制重组痘苗病毒中白细胞介素6的表达及其对重组病毒免疫效果的影响

目的研究白细胞介素6(IL-6)在非复制型痘苗病毒中的表达及其对重组痘苗病毒免疫效果的影响.方法利用非复制型痘苗病毒表达载体pNEOCK11β75IL6和重组病毒RVJ123,通过两步重组构建能同时表达IL-6和乙型肝炎病毒(HBV)HBsAg的非复制型重组痘苗病毒RVJ123ΔCK11β75IL6.免疫动物并观察其免疫效果.结果 Southern blot证实痘苗病毒C、K片段间基因缺失的同时伴有IL-6基因的插入,IL-6和HBsAg可同时表达.鼻腔吸入分别免疫BALB/c小鼠和新西兰白兔,ELISPOT实验证实免疫后两周小鼠肺淋巴细胞的抗-HBsAg IgA、IgG抗体分泌细胞(ASC)数比对照组(RVJ123ΔCK11β75)显著增加,并可在小鼠血液、肺浸出液以及新西兰白兔血液、肺浸出液、其他分泌液样品中检测到抗-HBsAg的特异性的IgA、IgG抗体.与对照组相比,IgA、IgG抗体阳转率及抗体滴度提高.结论非复制型痘苗病毒载体中表达的IL-6可增强其诱导的免疫反应,为细胞因子IL-6作为有效的载体疫苗佐剂提供了实验基础.

作者：郭斐；陆柔剑；孙朝晖；马海伦；李军；张颖妹；马大龙；阮力刊期： 2002年第02期
引物标记与掺入标记在HBV基因多态性芯片检测中应用的研究

目的研究引物标记与掺入标记在乙型肝炎病毒(HBV)基因多态性芯片检测中的应用.方法用掺入标记或引物标记荧光分子Cy5,扩增HBV P区、前C/C区,制备含荧光分子Cy5的目的片段后,分别与HBV基因多态性芯片杂交、扫描并分析结果.结果掺入标记法信号强度略高于引物标记法,但非特异信号强度也高,两法检测42份乙型肝炎患者血清,结果完全一致,重复性均较好,批内CV 15%～20%,引物标记法用于检测HBV基因多态性灵敏度达104 copies/ml.结论引物标记法信号强度虽略低于掺入标记法,但检测灵敏度、特异性仍满足临床要求.

作者：马达；王惠民；赵建龙；王万相；郭乃洲；蒋玲；张冬雷；孙悦刊期： 2002年第02期
轮状病毒组特异性抗原VP6在重组腺病毒中的表达及其免疫学效果的研究

目的构建可表达A组轮状病毒组特异性抗原VP6的非复制型重组腺病毒载体,并对其生物学和免疫学性质进行研究.方法将人轮状病毒VP6基因插入腺病毒载体pShuttle-CMV中,通过细菌内同源重组方法获得重组腺病毒DNA,将其转染293细胞获得重组腺病毒.用聚合酶链反应(PCR)及Southern blot方法,检测目的基因在重组腺病毒中的整合,用Western blot检测VP6的表达.通过灌胃和滴鼻两种途径对小鼠进行免疫,并对免疫后小鼠体液和粘膜免疫进行分析.结果得到了重组腺病毒rvAd-VP6,VP6基因整合于腺病毒基因组中,在293细胞中可稳定表达.2次免疫后灌胃和滴鼻两组小鼠均产生明显免疫应答,血清IgG抗体滴度分别为1∶1 000和1∶10 000～1∶100 000.除了血清IgG外,小鼠还产生了较强的针对轮状病毒的血清IgA,滴度为1∶10～1∶100.滴鼻组在肺灌洗液和肠匀浆液中均可检测到分泌型IgA(sIgA),灌胃组仅在肠道检测到sIgA.滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组.结论人轮状病毒VP6基因重组腺病毒载体的成功构建及所取得的良好免疫学效果,为我国具有自主知识产权的新型轮状病毒基因工程疫苗的研制奠定了基础.

作者：何金生；王健伟；姜秀丽；王大燕；温乐英；董京芳；屈建国；洪涛刊期： 2002年第02期
泰安市职业献血员丙型肝炎病毒感染状况调查

为了解泰安市既往职业献血员人群丙型肝炎病毒(HCV)的感染状况和型别分布,以便针对性地研究制订防治对策,控制传播,我们于1996～1999年对泰安市部分既往职业献血员聚集人群进行了调查研究.

作者：石长胜；艾宪淮；刘传新；刘淑贞；高文学刊期： 2002年第02期
一氧化氮与乙型肝炎病毒感染状态的关系初探

一氧化氮(nitric oxide,NO)是一种新型的生物活性分子,在神经信息传递、心脑血管调节、抗感染免疫和抗肿瘤免疫方面起重要作用.一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,NOS)是催化L-精氨酸生成NO的酶类.

作者：张吉才；胡秀学；李海平；李文斌；孙竞刊期： 2002年第02期
丙型肝炎病毒准种多样性与病毒血症水平、疾病活动度及干扰素疗效的关系

目的了解丙型肝炎病毒(HCV)准种变异与病毒血症水平、疾病活动度及干扰素疗效的关系.方法采用针对HCV E2高变区1(HVR1)的单链构象多态性分析法(SSCP)对68例慢性丙型肝炎患者进行HCV准种检测,分析准种数目与HCV RNA、ALT、AST水平及肝组织活动指数(HAI)的相关性.对其中48例给予干扰素治疗,分析准种数目对干扰素应答效果的影响.结果 61例HVR1 SSCP阳性,HCV准种数目为(6.2±2.4)条.准种数量与HCV RNA水平显著相关(P<0.01),与ALT、AST及HAI无明显相关(P>0.05).干扰素治疗患者中,43例HVR1阳性,持续应答者治疗前HCV准种数量(3.3±1.2,n=11)显著少于获得治疗终点应答(ETR)伴复发者(6.3±2.2,n=12,P＜0.05)或无应答者(8.0±3.3,n=20,P<0.01).治疗结束时,干扰素组仍有16例检测出HCV准种,但准种条数降为(3.4±1.2)条,与未接受干扰素治疗病例的准种数目(6.8±2.5)相比差异有显著性,P<0.01),且其中10例准种模式发生了改变.结论 HCV准种多样性可引起较高的病毒血症水平,但与疾病活动度无关;准种数目可作为预测慢性丙型肝炎干扰素疗效的指标.

作者：唐小平；钱可平；袁小珍；Johnson YN LAU 刊期： 2002年第02期
病毒性肝炎患者个性特征分析

心理医学的研究表明,不仅要重视心理社会因素的致病作用,而且也要充分注意躯体疾病对患者心理活动的不良影响[1].我们采用龚氏修订的艾森克个性问卷(EPQ)调查和分析了239例病毒性肝炎患者的人格特征.

作者：王晓慧；孙慧莉；王萍；刘趁霞；张淑华刊期： 2002年第02期
乌鲁木齐地区HIV感染人群中人类疱疹病毒8型IgG抗体调查

1994年美国科学家常远等[1]从卡波西肉瘤(Kaposi's Sarcoma,KS)患者瘤组织中发现了一种新的疱疹病毒样序列,许多学者称之为KS相关疱疹病毒.经鉴定后被命名为人类疱疹病毒8型(HHV-8).近年国外已对普通人群及人HIV感染人群中HHV-8血清流行病学作了大量调查.为了解乌鲁木齐地区HIV感染人群HHV-8 IgG抗体情况,我们对56例HIV阳性者作了HHV-8 IgG的检测.

作者：孙荷；周梅；陈国敏；杜文慧；曾毅刊期： 2002年第02期
α干扰素治愈丙型肝炎合并甲状腺功能亢进和原发性血小板减少性紫癜一例

患者女性,47岁.1984年因为明显消瘦,食量增大,心率>110次/min,手颤多汗,大便次数增多,查总三碘甲状腺原氨酸(T3)685 ng/dl(正常参数值<120 ng/dl),总甲状腺素(T4)20.2 μg/dl(正常参数值<10 μg/dl),甲状腺吸131Ⅰ率增高,诊断为甲状腺功能亢进(甲亢),给予他巴唑10 mg,每日3次,2个月后逐渐减量并加用甲状腺素片20 mg,每日1次,服药2周后T3及T4正常,坚持服药3年,渐停药.

作者：朱玲；张晏；付亮；张鸿飞刊期： 2002年第02期
干扰素治疗慢性乙型肝炎对可溶性HLA-Ⅰ类分子含量的影响

干扰素治疗慢性乙型肝炎(CHB)有抗病毒和免疫调节两方面的作用,准确快速地了解患者的免疫功能状况,对判断CHB的疗效及预后有重要意义.可溶性HLA-Ⅰ(sHLA-Ⅰ)类分子的含量在多种病毒感染性疾病时会出现变化.近期的研究发现,这一含量的变化可以反映机体免疫功能受到的调节,并可用于评价抗病毒治疗的效果.本试验通过检测CHB患者血清sHLA-Ⅰ含量的变化,探讨其对CHB的治疗效果是否具有指示作用.

作者：黄文琪；裴斌刊期： 2002年第02期
HIV-1整合酶酶联免疫吸附试验及其抑制剂的研究

目的建立一种检测人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)整合酶的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,用于筛选和研究HIV-1整合酶抑制剂.方法将质粒F185K/C280S IN1-288转化到大肠埃希菌中,经IPTG诱导表达,柱亲和层析纯化,获得HIV-1整合酶融合蛋白.建立酶联免疫吸附试验方法测定其生物学活性,与32P同位素标记方法比较,并用ELISA方法筛选HIV-1整合酶的抑制剂.结果 SDS-PAGE电泳分析显示,相对分子质量30 000上方有HIV-1整合酶融合蛋白条带出现.ELISA及32P同位素标记法证实,此融合蛋白对于特异底物具有3′切割和链转移活性.ELISA反应的平均P/N值为2.836±0.161,批内及批间变异系数(CV)分别为4.63%和5.89%.检测到中药丹参提取物CEH等有抑制整合酶的活性,CEH的大孔树脂洗脱物CEHL活性提高.结论 ELISA法检测HIV-1整合酶活性技术简单,快速,重复性好,无同位素污染,可用于HIV-1整合酶为靶点的抑制剂的筛选及抗-HIV药物作用机理的研究.

作者：郭志敏；陈鸿珊刊期： 2002年第02期
人乳头瘤病毒16型E6和E7基因突变体表达蛋白的稳定性和抗原性分析

目的筛选适合于宫颈癌治疗性疫苗研制的人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6和E7突变基因.方法采用定点诱变技术对E6和E7基因进行改造,得到几种E6和E7基因的突变体;构建成表达野生型和突变型E6与E7的重组痘苗病毒,对这些重组痘苗病毒表达的E6和E7蛋白的稳定性及其免疫原性进行了比较研究.结果 E6蛋白第50位氨基酸的突变、E7蛋白第24和26位氨基酸的突变都不影响蛋白的稳定性和抗原性,但E7蛋白第91位氨基酸的突变使E7蛋白的稳定性和抗原性大大减弱.结论证实了E7蛋白C-末端的锌指结构对E7蛋白结构的完整性和稳定性是非常重要的.

作者：职慧军；韩立群；任皎；田厚文；骆卫锋；梁雨；阮力刊期： 2002年第02期
病毒性肝炎合并溶血性贫血3例分析

我们对3例不同型病毒性肝炎继发溶血性贫血(溶贫)进行了血液学、骨髓片及血清病毒标志物的检测.以进一步认识溶贫的发病机理,有助于临床及时诊断和治疗.

作者：邓晓琳；洪炜刊期： 2002年第02期
单纯疱疹病毒Ⅱ型小片段型特异基因的表达及其意义

目的为我国单纯疱疹病毒Ⅱ型的基因工程疫苗提供早期实验研究资料.方法采取PCR和蛋白质原核细胞表达方法.结果自我国病毒储备株中成功地克隆出了单纯疱疹病毒Ⅱ型小片段特异基因,并获得高效表达.采用该抗原包被,自生殖系统感染者恢复期血清中均能查到针对该重组抗原的IgG抗体.结论单纯疱疹病毒Ⅱ型小片段型特异基因的成功表达,为我国单纯疱疹病毒Ⅱ型感染者的特异性诊断和单纯疱疹病毒Ⅱ型疫苗的研究打下了基础.

作者：伊瑶；许文波；张明程；周永东；李勇；毕胜利刊期： 2002年第02期
人免疫缺陷病毒1型生物学性状变异的体外研究

高度的变异性是人免疫缺陷病毒1型的(HIV-1)显著特征之一,也是HIV-1逃脱机体免疫监视的主要原因和HIV-1疫苗研制的主要障碍.了解体外传代HIV-1基因型别、感染毒力及病毒产量等生物学形状的变异,对评估机体内环境在HIV-1变异中的作用及评价体外长期传代HIV-1毒种的实用性具有重要意义.为此,我们对军事科学院P3实验室保存的HIV-1毒种进行长期传代培养,观察CPE,分析病毒的感染毒力和病毒产量的变异,并进行了基因亚型变异鉴定.

作者：樊卫平；李敬云；王红霞；鲍作义；吕富双刊期： 2002年第02期