付荣华；何雅慧；徐英俐；王萍；王作苏
为了解泰安市既往职业献血员人群丙型肝炎病毒(HCV)的感染状况和型别分布,以便针对性地研究制订防治对策,控制传播,我们于1996～1999年对泰安市部分既往职业献血员聚集人群进行了调查研究.
作者：石长胜；艾宪淮；刘传新；刘淑贞；高文学 刊期： 2002年第02期
目的筛选适合于宫颈癌治疗性疫苗研制的人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6和E7突变基因.方法采用定点诱变技术对E6和E7基因进行改造,得到几种E6和E7基因的突变体;构建成表达野生型和突变型E6与E7的重组痘苗病毒,对这些重组痘苗病毒表达的E6和E7蛋白的稳定性及其免疫原性进行了比较研究.结果 E6蛋白第50位氨基酸的突变、E7蛋白第24和26位氨基酸的突变都不影响蛋白的稳定性和抗原性,但E7蛋白第91位氨基酸的突变使E7蛋白的稳定性和抗原性大大减弱.结论证实了E7蛋白C-末端的锌指结构对E7蛋白结构的完整性和稳定性是非常重要的.
作者：职慧军；韩立群；任皎；田厚文；骆卫锋；梁雨；阮力 刊期： 2002年第02期
为了解龙泉市男女青年婚前检查中发现的乙型肝炎(乙肝)的发病情况,特将1998年全年中来妇幼保健所进行婚检的318对男女青年乙肝三系的检查中HBsAg、大三阳(HBsAg、HBeAg、抗-HBc)、小三阳(HBsAg、抗-HBe、抗-HBc)男女青年分别进行统计,以针对性进行健康婚育指导,现报告如下.
作者：郑商联 刊期： 2002年第02期
一氧化氮(nitric oxide,NO)是一种新型的生物活性分子,在神经信息传递、心脑血管调节、抗感染免疫和抗肿瘤免疫方面起重要作用.一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,NOS)是催化L-精氨酸生成NO的酶类.
作者：张吉才；胡秀学；李海平；李文斌；孙竞 刊期： 2002年第02期
目的探索应用双杂交体系统克隆与乙型肝炎病毒(HBV)Pre S1蛋白结合的肝细胞受体的可行性.方法构建编码HBV Pre S1全序列或部分序列与酵母蛋白GAL 4 DNA结合区域融合蛋白的酵母表达质粒,应用这些质粒转化酵母报道菌株SFY526,检测β-半乳糖苷酶活性作为酵母中转录激活的指标.构建编码Pre S1全序列与GAL4 DNA结合区域融合蛋白的哺乳动物细胞表达质粒,与CAT报道质粒共转染肝癌细胞系Huh-7,使用薄层层析法检测细胞提取物的氯霉素乙酰转移酶活性.结果全序列Pre S1蛋白与GAL4 DNA结合区域的融合蛋白在酵母细胞中呈现转录激活功能,其转录激活序列被定位于Pre S1第21～47氨基酸之间.全序列Pre S1蛋白与GAL 4 DNA结合区域的融合蛋白在哺乳动物细胞中未呈现转录激活功能.结论 HBV Pre S1蛋白在酵母细胞中的转录激活功能,限制了研究人员应用酵母双杂交体系统克隆与Pre S1结合的HBV受体.然而,Pre S1蛋白在哺乳动物细胞未呈现转录激活功能.哺乳动物细胞双杂交体系统可能是克隆与Pre S1蛋白作用的肝细胞受体的可行途径.
作者：肖生祥；楚雍烈；彭宣宪；王翠玲；肖生彬；吴艳红；曹振平 刊期： 2002年第02期
目的改造干扰素功能结合域,以提高干扰素的生物学活性.方法在新型基因工程干扰素(IFNα1c/86D)AB环内通过点突变技术引入2个独立酶切位点EcoRⅤ和EstEⅡ,用聚合酶链反应(PCR)技术在干扰素cDNA水平对母体干扰素LoopAB的31位甲硫氨酸换成天冬氨酸(M-D),32位天冬氨酸换成脯氨酸(D-P),将重组基因在大肠埃希菌中表达,用滤泡口炎病毒(VSV)-人羊膜传代细胞(WISH)系统检测抗病毒活性.用比色MTT实验检测抗增殖活性.结果通过突变,31和32位氨基酸获得重组突变体3132IFNα1c/86D,经限制性内切酶图分析、DNA序列和抗病毒活性测定,初步表明3132IFNα1c/86D是母体干扰素IFNα1c/86D抗病毒活性的8倍,抗增殖作用与母体干扰素相比差异无显著性.结论改造干扰素受体结合域,可提高干扰素的抗病毒活性.
作者：胡荣；马学军；魏开坤；王虹；钱振超；薛水星；段招军；侯云德 刊期： 2002年第02期
目的了解一株再次从流感患儿中分离出禽H9N2流感毒株的基因组特性,并弄清它的来源.方法病毒在鸡胚中传代,从收获的尿囊液中提取RNA,通过逆转录合成cDNA,cDNA用PCR扩增.PCR产物用纯化试剂盒纯化,接着做核苷酸序列测定,然后用Meg Align(Version 1.03)和Editseg(Version 3.69)软件进行基因进化树分析.结果 A/广州/333/99(H9N2)毒株的基因组属于禽流感病毒,但它明显不同于A/Duck/Hong Kong/Y439/97毒株.同时不含有任何人流感病毒基因节段,其基因组中有4个基因节段(分别编码HA、NA、NP和NS蛋白)来自G9毒株基因系,而其余4个基因节段(分别编码PB2、PB1、PA和M蛋白)来自G1毒株基因系.结论 A/广州/333/99(H9N2)病毒是G9和G1毒株通过基因重配而来的重配株,它大可能性直接来自禽.进一步证实了禽H9N2毒株能感染人,同时首次证实了H9N2不同基因系毒株间,在自然界中也能发生基因重配.
作者：郭元吉；谢健屏；吴昆昱；董婕；王敏；张烨；郭俊峰；陈继明；陈稚峰；李梓 刊期： 2002年第02期
目的为我国单纯疱疹病毒Ⅱ型的基因工程疫苗提供早期实验研究资料.方法采取PCR和蛋白质原核细胞表达方法.结果自我国病毒储备株中成功地克隆出了单纯疱疹病毒Ⅱ型小片段特异基因,并获得高效表达.采用该抗原包被,自生殖系统感染者恢复期血清中均能查到针对该重组抗原的IgG抗体.结论单纯疱疹病毒Ⅱ型小片段型特异基因的成功表达,为我国单纯疱疹病毒Ⅱ型感染者的特异性诊断和单纯疱疹病毒Ⅱ型疫苗的研究打下了基础.
作者：伊瑶；许文波；张明程；周永东；李勇；毕胜利 刊期： 2002年第02期
目的探讨上海地区丙型肝炎病毒(HCV)1 b亚型慢性感染者的血清HCV非结构基因5A(NS5A)与干扰素(IFN)疗效的关系.方法收集上海地区24例HCV1 b慢性感染者在干扰素治疗前后及随访过程中的血清标本,定量检测治疗前血清HCV RNA,用逆转录-聚合酶链反应方法扩增NS5A的干扰素敏感决定区(ISDR)基因并进行测序和分析.另扩增干扰素应答类型不同的3例患者治疗前后共5株HCV病毒的NS5A全长序列,测序后作种系发生树分析及蛋白二级结构预测.结果治疗前血清HCV RNA的定量结果显示,持续应答组的病毒滴度(平均滴度4.50×104 copies/ml)明显低于复发组和无应答组(平均滴度1.82×107 copies/ml).24例慢性丙型肝炎患者干扰素治疗前血清HCV的ISDR氨基酸序列与抗干扰素的HCV-J株比较,13例为野生型,11例为中间型,无突变型.6例完全应答者3例感染的是野生型株,另3例感染的是中间型病毒株.5株HCV病毒的NS5A全长序列种系发生树显示,3种不同应答类型株在种系发生上分属3个组别,无应答株与抗干扰素的HCV-J株关系相近被归为1组.蛋白质二级结构预测显示,上述病毒株NS5A蛋白在二级结构方面基本相似,仅在2 255～2 289范围内有明显不同,这一区域与PKR结合域部分重叠.结论 HCV NS5A基因的ISDR区不能单独用于预测干扰素疗效,治疗前血清HCV RNA水平结合NS5A区的PKR结合域序列的分析,可能有助于预测干扰素疗效,指导临床用药.
作者：胡芸文；唐美芳；蒋伟伦；吴瑛；袁正宏；闻玉梅 刊期： 2002年第02期
高度的变异性是人免疫缺陷病毒1型的(HIV-1)显著特征之一,也是HIV-1逃脱机体免疫监视的主要原因和HIV-1疫苗研制的主要障碍.了解体外传代HIV-1基因型别、感染毒力及病毒产量等生物学形状的变异,对评估机体内环境在HIV-1变异中的作用及评价体外长期传代HIV-1毒种的实用性具有重要意义.为此,我们对军事科学院P3实验室保存的HIV-1毒种进行长期传代培养,观察CPE,分析病毒的感染毒力和病毒产量的变异,并进行了基因亚型变异鉴定.
作者：樊卫平；李敬云；王红霞；鲍作义；吕富双 刊期： 2002年第02期
患者女性,47岁.1984年因为明显消瘦,食量增大,心率>110次/min,手颤多汗,大便次数增多,查总三碘甲状腺原氨酸(T3)685 ng/dl(正常参数值<120 ng/dl),总甲状腺素(T4)20.2 μg/dl(正常参数值<10 μg/dl),甲状腺吸131Ⅰ率增高,诊断为甲状腺功能亢进(甲亢),给予他巴唑10 mg,每日3次,2个月后逐渐减量并加用甲状腺素片20 mg,每日1次,服药2周后T3及T4正常,坚持服药3年,渐停药.
作者：朱玲；张晏；付亮；张鸿飞 刊期： 2002年第02期
我们对3例不同型病毒性肝炎继发溶血性贫血(溶贫)进行了血液学、骨髓片及血清病毒标志物的检测.以进一步认识溶贫的发病机理,有助于临床及时诊断和治疗.
作者：邓晓琳；洪炜 刊期： 2002年第02期
为了弄清萍乡地区TT病毒(TTV)感染情况,分析本地区TTV株基因结构特点,我们对江西省萍乡地区8例TT病毒株进行了部分基因的克隆及序列测定.
作者：王长奇；陈燕萍；欧阳福桂；伍淑云；周宪明 刊期： 2002年第02期
目的探索以Epstein-Barr病毒(EBV)TK激酶为抗原,建立简便、快速、敏感和特异的鼻咽癌(NPC)诊断方法.方法构建原核表达载体pRSET-TK,在原核细胞BL21(DE3)中获得高效表达的TK激酶,以Western blot检测证明其抗原的特异性和应用于NPC检测的可行性.以纯化的TK激酶为抗原初步建立ELISA检测方法,检测NPC患者血清中TK/IgG抗体.结果在NPC患者血清中含有特异的针对TK激酶的IgG抗体,Western blot TK/IgG检测的敏感度和特异度均为100%.结论初步建立了ELISA TK/IgG诊断NPC方法,具有较高的敏感性和特异性.
作者：黄滨；李伯军；周为民；皮国华；唐慰萍；谷淑燕 刊期： 2002年第02期
1994年美国科学家常远等[1]从卡波西肉瘤(Kaposi's Sarcoma,KS)患者瘤组织中发现了一种新的疱疹病毒样序列,许多学者称之为KS相关疱疹病毒.经鉴定后被命名为人类疱疹病毒8型(HHV-8).近年国外已对普通人群及人HIV感染人群中HHV-8血清流行病学作了大量调查.为了解乌鲁木齐地区HIV感染人群HHV-8 IgG抗体情况,我们对56例HIV阳性者作了HHV-8 IgG的检测.
作者：孙荷；周梅；陈国敏；杜文慧；曾毅 刊期： 2002年第02期
目的表达庚型肝炎病毒(HGV)基因组NS5区部分基因重组抗原,分析其抗原性.方法分别亚克隆了HGV NS5a、NS5b以及NS5b与C区嵌和的基因至pThioC表达载体上,构建成3个重组表达质粒,分别转化大肠埃希菌JM109(DE3),用IPTG诱导表达重组蛋白.表达产物经纯化后采用Western blot和间接ELISA方法分析3个重组蛋白的抗原性.结果经酶切和序列分析鉴定正确,3种表达蛋白均高效表达且相对分子质量与预期大小相符.Western blot分析和间接ELISA试验表明,3种表达蛋白均能与抗-HGV阳性血清发生特异性反应.将应用重组蛋白检测的抗-HGV抗体与混合重组抗原(包括C区合成肽、NS5a合成肽、NS3区基因重组抗原)的检测结果进行了比较,在混合重组抗原阳性的22份血清中,P5a检出率为68%(15/22),P5b检出率为91%(20/22),Pc-5b检出率为73%(16/22).在70份阴性标本中,3种抗原的检出率分别为P5a:7%(5/70);P5b:1%(1/70);Pc-5b:6%(4/70).3个重组抗原单独检出阳性的标本,其中有一部分经RT-PCR检测亦为阳性.结论原核表达的NS5区蛋白所检测的抗-HGV抗体不能完全被其他区段的抗原所覆盖,是免疫诊断HGV感染所必需的抗原表位之一.
作者：丛郁；焦宏远；张文英；田瑞光；詹美云 刊期： 2002年第02期
目的探讨多种病毒及支原体性病原微生物感染、细胞因子和微量元素硒(Se)含量与宫颈癌发病的相关性.方法 PCR法检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒、疱疹病毒、人巨细胞病毒、EB病毒、沙眼衣原体和解脲支原体的感染(75份非宫颈癌患者正常宫颈组织作对照);ELISA法检测血清中细胞因子IL-2R、TNF的含量;荧光光度技术检测血清中硒(Se)元素含量.结果在195份宫颈癌患者的癌组织标本中,病原微生物感染阳性者为166份(85.1%),其中16,18和35型人乳头瘤病毒感染60份(30.8%);6和11型人乳头瘤病毒感染5份(2.6%);2型单纯疱疹病毒感染60份(30.8%);1型单纯疱疹病毒感染4份(2.1%);EB病毒感染3份(1.5%);人巨细胞病毒感染6份(3.1%);沙眼衣原体感染11份(5.6%)和解脲支原体感染17份(8.7%).对照组75份正常宫颈组织中病原微生物感染阳性者为15份(20.0%),其中,16,18和35型人乳头瘤病毒感染3份(4.0%);2型单纯疱疹病毒感染5份(6.7%);EB病毒感染1份(1.3%);沙眼衣原体感染3份(4.0%)和解脲支原体感染3份(4.0%).62份宫颈癌和36份正常人血清中,白细胞介素-2受体(=356.44 U/ml)和肿瘤坏死因子(=373.48 pg/ml)浓度均比对照组明显升高(P<0.001).硒含量(=0.058 mg/ml)比对照组水平低(P<0.05).结论山西宫颈癌的发病与多种病原微生物感染有关,尤其16,18和35型人乳头瘤病毒和2型单纯疱疹病毒感染率较高,同时伴有白细胞介素-2受体和肿瘤坏死因子水平的升高与硒元素的低下.
作者：郑曙民；张春玲；李连青；韩存芝；荆洁线；朱庆义 刊期： 2002年第02期
目的研究白细胞介素6(IL-6)在非复制型痘苗病毒中的表达及其对重组痘苗病毒免疫效果的影响.方法利用非复制型痘苗病毒表达载体pNEOCK11β75IL6和重组病毒RVJ123,通过两步重组构建能同时表达IL-6和乙型肝炎病毒(HBV)HBsAg的非复制型重组痘苗病毒RVJ123ΔCK11β75IL6.免疫动物并观察其免疫效果.结果 Southern blot证实痘苗病毒C、K片段间基因缺失的同时伴有IL-6基因的插入,IL-6和HBsAg可同时表达.鼻腔吸入分别免疫BALB/c小鼠和新西兰白兔,ELISPOT实验证实免疫后两周小鼠肺淋巴细胞的抗-HBsAg IgA、IgG抗体分泌细胞(ASC)数比对照组(RVJ123ΔCK11β75)显著增加,并可在小鼠血液、肺浸出液以及新西兰白兔血液、肺浸出液、其他分泌液样品中检测到抗-HBsAg的特异性的IgA、IgG抗体.与对照组相比,IgA、IgG抗体阳转率及抗体滴度提高.结论非复制型痘苗病毒载体中表达的IL-6可增强其诱导的免疫反应,为细胞因子IL-6作为有效的载体疫苗佐剂提供了实验基础.
作者：郭斐；陆柔剑；孙朝晖；马海伦；李军；张颖妹；马大龙；阮力 刊期： 2002年第02期
目的建立一种检测人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)整合酶的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,用于筛选和研究HIV-1整合酶抑制剂.方法将质粒F185K/C280S IN1-288转化到大肠埃希菌中,经IPTG诱导表达,柱亲和层析纯化,获得HIV-1整合酶融合蛋白.建立酶联免疫吸附试验方法测定其生物学活性,与32P同位素标记方法比较,并用ELISA方法筛选HIV-1整合酶的抑制剂.结果 SDS-PAGE电泳分析显示,相对分子质量30 000上方有HIV-1整合酶融合蛋白条带出现.ELISA及32P同位素标记法证实,此融合蛋白对于特异底物具有3′切割和链转移活性.ELISA反应的平均P/N值为2.836±0.161,批内及批间变异系数(CV)分别为4.63%和5.89%.检测到中药丹参提取物CEH等有抑制整合酶的活性,CEH的大孔树脂洗脱物CEHL活性提高.结论 ELISA法检测HIV-1整合酶活性技术简单,快速,重复性好,无同位素污染,可用于HIV-1整合酶为靶点的抑制剂的筛选及抗-HIV药物作用机理的研究.
作者：郭志敏；陈鸿珊 刊期： 2002年第02期
心理医学的研究表明,不仅要重视心理社会因素的致病作用,而且也要充分注意躯体疾病对患者心理活动的不良影响[1].我们采用龚氏修订的艾森克个性问卷(EPQ)调查和分析了239例病毒性肝炎患者的人格特征.
作者：王晓慧；孙慧莉；王萍；刘趁霞；张淑华 刊期： 2002年第02期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
