胡荣；马学军；魏开坤；王虹；钱振超；薛水星；段招军；侯云德
目的克隆人单纯疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ(HSV-Ⅰ、Ⅱ)型共同性抗原gD基因,构建重组表达载体pMAL-c2/gD,诱导融合蛋白MBP-gD的表达.方法提取病毒DNA,PCR扩增出gD基因,克隆于原核表达载体pMAL-c2并转化大肠埃希菌DH5α.PCR、双酶切及测序证实插入的gD基因序列正确后,IPTG诱导表达融合蛋白MBP-gD,并进行免疫学鉴定.结果构建的重组表达质粒pMAL-c2/gD在大肠埃希菌中能高效表达.经SDS-PAGE分析,表达产物约占菌体总蛋白35.5%,其中39%以可溶蛋白形式存在于胞质中,61%以包涵体形式存在.结论构建了pMAL-c+2/gD表达质粒,Western blot证实,HSV-Ⅰ gD单克隆抗体DL6可特异识别表达的gD蛋白,该蛋白具有天然gD的抗原性.
作者：李梅；李晓眠；刘民 刊期： 2002年第02期
为了解泰安市既往职业献血员人群丙型肝炎病毒(HCV)的感染状况和型别分布,以便针对性地研究制订防治对策,控制传播,我们于1996～1999年对泰安市部分既往职业献血员聚集人群进行了调查研究.
作者：石长胜；艾宪淮；刘传新；刘淑贞；高文学 刊期： 2002年第02期
我们对3例不同型病毒性肝炎继发溶血性贫血(溶贫)进行了血液学、骨髓片及血清病毒标志物的检测.以进一步认识溶贫的发病机理,有助于临床及时诊断和治疗.
作者：邓晓琳；洪炜 刊期： 2002年第02期
目的了解一株再次从流感患儿中分离出禽H9N2流感毒株的基因组特性,并弄清它的来源.方法病毒在鸡胚中传代,从收获的尿囊液中提取RNA,通过逆转录合成cDNA,cDNA用PCR扩增.PCR产物用纯化试剂盒纯化,接着做核苷酸序列测定,然后用Meg Align(Version 1.03)和Editseg(Version 3.69)软件进行基因进化树分析.结果 A/广州/333/99(H9N2)毒株的基因组属于禽流感病毒,但它明显不同于A/Duck/Hong Kong/Y439/97毒株.同时不含有任何人流感病毒基因节段,其基因组中有4个基因节段(分别编码HA、NA、NP和NS蛋白)来自G9毒株基因系,而其余4个基因节段(分别编码PB2、PB1、PA和M蛋白)来自G1毒株基因系.结论 A/广州/333/99(H9N2)病毒是G9和G1毒株通过基因重配而来的重配株,它大可能性直接来自禽.进一步证实了禽H9N2毒株能感染人,同时首次证实了H9N2不同基因系毒株间,在自然界中也能发生基因重配.
作者：郭元吉；谢健屏；吴昆昱；董婕；王敏；张烨；郭俊峰；陈继明；陈稚峰；李梓 刊期： 2002年第02期
一氧化氮(nitric oxide,NO)是一种新型的生物活性分子,在神经信息传递、心脑血管调节、抗感染免疫和抗肿瘤免疫方面起重要作用.一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,NOS)是催化L-精氨酸生成NO的酶类.
作者：张吉才；胡秀学；李海平；李文斌；孙竞 刊期： 2002年第02期
沈阳市位于我国东北,每到冬季呼吸道系统疾病高发.为探究其病因,我们开展了以流感监测为主的调查.选择6家具有代表性的、较大的综合性医院,每日统计上感门诊数,按旬汇总,同时采集疑似流感患者咽拭子,用MDCK细胞进行病毒分离.结果显示:6个检测点上感就诊量10～11月份较平稳,每旬波动在3 300～4 300例左右,12月初病例开始上升,12月末达10 069例,是门诊量的3倍,1月中旬病历数下降,2月上旬降至平时水平.调查结果表明,同期幼儿及青少年上感发病率分别为56%和48%.我们从采集的101份咽拭子中分离到29株流感病毒,阳性率为28.7%.
作者：付荣华；何雅慧；徐英俐；王萍；王作苏 刊期： 2002年第02期
1994年美国科学家常远等[1]从卡波西肉瘤(Kaposi's Sarcoma,KS)患者瘤组织中发现了一种新的疱疹病毒样序列,许多学者称之为KS相关疱疹病毒.经鉴定后被命名为人类疱疹病毒8型(HHV-8).近年国外已对普通人群及人HIV感染人群中HHV-8血清流行病学作了大量调查.为了解乌鲁木齐地区HIV感染人群HHV-8 IgG抗体情况,我们对56例HIV阳性者作了HHV-8 IgG的检测.
作者：孙荷；周梅；陈国敏；杜文慧；曾毅 刊期： 2002年第02期
为了弄清萍乡地区TT病毒(TTV)感染情况,分析本地区TTV株基因结构特点,我们对江西省萍乡地区8例TT病毒株进行了部分基因的克隆及序列测定.
作者：王长奇；陈燕萍；欧阳福桂；伍淑云；周宪明 刊期： 2002年第02期
干扰素治疗慢性乙型肝炎(CHB)有抗病毒和免疫调节两方面的作用,准确快速地了解患者的免疫功能状况,对判断CHB的疗效及预后有重要意义.可溶性HLA-Ⅰ(sHLA-Ⅰ)类分子的含量在多种病毒感染性疾病时会出现变化.近期的研究发现,这一含量的变化可以反映机体免疫功能受到的调节,并可用于评价抗病毒治疗的效果.本试验通过检测CHB患者血清sHLA-Ⅰ含量的变化,探讨其对CHB的治疗效果是否具有指示作用.
作者：黄文琪；裴斌 刊期： 2002年第02期
目的研究白细胞介素6(IL-6)在非复制型痘苗病毒中的表达及其对重组痘苗病毒免疫效果的影响.方法利用非复制型痘苗病毒表达载体pNEOCK11β75IL6和重组病毒RVJ123,通过两步重组构建能同时表达IL-6和乙型肝炎病毒(HBV)HBsAg的非复制型重组痘苗病毒RVJ123ΔCK11β75IL6.免疫动物并观察其免疫效果.结果 Southern blot证实痘苗病毒C、K片段间基因缺失的同时伴有IL-6基因的插入,IL-6和HBsAg可同时表达.鼻腔吸入分别免疫BALB/c小鼠和新西兰白兔,ELISPOT实验证实免疫后两周小鼠肺淋巴细胞的抗-HBsAg IgA、IgG抗体分泌细胞(ASC)数比对照组(RVJ123ΔCK11β75)显著增加,并可在小鼠血液、肺浸出液以及新西兰白兔血液、肺浸出液、其他分泌液样品中检测到抗-HBsAg的特异性的IgA、IgG抗体.与对照组相比,IgA、IgG抗体阳转率及抗体滴度提高.结论非复制型痘苗病毒载体中表达的IL-6可增强其诱导的免疫反应,为细胞因子IL-6作为有效的载体疫苗佐剂提供了实验基础.
作者：郭斐；陆柔剑；孙朝晖；马海伦；李军；张颖妹；马大龙；阮力 刊期： 2002年第02期
患者女性,47岁.1984年因为明显消瘦,食量增大,心率>110次/min,手颤多汗,大便次数增多,查总三碘甲状腺原氨酸(T3)685 ng/dl(正常参数值<120 ng/dl),总甲状腺素(T4)20.2 μg/dl(正常参数值<10 μg/dl),甲状腺吸131Ⅰ率增高,诊断为甲状腺功能亢进(甲亢),给予他巴唑10 mg,每日3次,2个月后逐渐减量并加用甲状腺素片20 mg,每日1次,服药2周后T3及T4正常,坚持服药3年,渐停药.
作者：朱玲；张晏；付亮；张鸿飞 刊期： 2002年第02期
目的掌握我国新生儿单纯接种乙型肝炎血源疫苗后的免疫持久性和远期预防效果;观察新生儿免疫较长时间后是否需加强免疫.方法在湖南湘潭市等4个乙型肝炎疫苗试点区内,对1986～1988年出生并接种乙型肝炎血源疫苗的新生儿,连续14～15年按免疫儿年龄分层随机抽样采血随访,累计随访21 680人次,观察免疫儿HBsAg、抗-HBs和抗-HBc的动态变化.结果新生儿单纯乙型肝炎血源疫苗全程基础免疫后,在15年随访中没有加强免疫,各试点区免疫儿童HBsAg携带率低于1.66%,携带率没有随免疫后年限的延长而增加;阻断HBV慢性感染的效果持续在90%左右(95%可信限为:83.1%～97.2%);免疫后不同年限间HBsAg携带率、HBV感染率和保护效果差异均无显著性(P>0.05).免疫儿抗-HBs阳性率随免疫后年限延长而逐年明显下降,至第9～10年下降为40%～50%,之后数年内下降幅度不大,至免疫后13～14年抗-HBs阳性率维持在30%～42%;抗-HBs滴度下降了90%.结论新生儿单纯乙型肝炎疫苗接种后抗-HBs阳性率与滴度的下降不影响其远期预防效果;就群体而言,新生儿及时完成全程免疫后,无需加强免疫可有效阻断HBV感染后成为HBsAg慢性携带者,而很有可能终生受益.
作者：夏国良；贾志远；颜天强；李荣成；刘洪斌；徐志一；曹惠霖；刘崇柏 刊期： 2002年第02期
目的探索以Epstein-Barr病毒(EBV)TK激酶为抗原,建立简便、快速、敏感和特异的鼻咽癌(NPC)诊断方法.方法构建原核表达载体pRSET-TK,在原核细胞BL21(DE3)中获得高效表达的TK激酶,以Western blot检测证明其抗原的特异性和应用于NPC检测的可行性.以纯化的TK激酶为抗原初步建立ELISA检测方法,检测NPC患者血清中TK/IgG抗体.结果在NPC患者血清中含有特异的针对TK激酶的IgG抗体,Western blot TK/IgG检测的敏感度和特异度均为100%.结论初步建立了ELISA TK/IgG诊断NPC方法,具有较高的敏感性和特异性.
作者：黄滨；李伯军；周为民；皮国华；唐慰萍；谷淑燕 刊期： 2002年第02期
目的建立一种检测人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)整合酶的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,用于筛选和研究HIV-1整合酶抑制剂.方法将质粒F185K/C280S IN1-288转化到大肠埃希菌中,经IPTG诱导表达,柱亲和层析纯化,获得HIV-1整合酶融合蛋白.建立酶联免疫吸附试验方法测定其生物学活性,与32P同位素标记方法比较,并用ELISA方法筛选HIV-1整合酶的抑制剂.结果 SDS-PAGE电泳分析显示,相对分子质量30 000上方有HIV-1整合酶融合蛋白条带出现.ELISA及32P同位素标记法证实,此融合蛋白对于特异底物具有3′切割和链转移活性.ELISA反应的平均P/N值为2.836±0.161,批内及批间变异系数(CV)分别为4.63%和5.89%.检测到中药丹参提取物CEH等有抑制整合酶的活性,CEH的大孔树脂洗脱物CEHL活性提高.结论 ELISA法检测HIV-1整合酶活性技术简单,快速,重复性好,无同位素污染,可用于HIV-1整合酶为靶点的抑制剂的筛选及抗-HIV药物作用机理的研究.
作者：郭志敏；陈鸿珊 刊期： 2002年第02期
心理医学的研究表明,不仅要重视心理社会因素的致病作用,而且也要充分注意躯体疾病对患者心理活动的不良影响[1].我们采用龚氏修订的艾森克个性问卷(EPQ)调查和分析了239例病毒性肝炎患者的人格特征.
作者：王晓慧；孙慧莉；王萍；刘趁霞；张淑华 刊期： 2002年第02期
为了解龙泉市男女青年婚前检查中发现的乙型肝炎(乙肝)的发病情况,特将1998年全年中来妇幼保健所进行婚检的318对男女青年乙肝三系的检查中HBsAg、大三阳(HBsAg、HBeAg、抗-HBc)、小三阳(HBsAg、抗-HBe、抗-HBc)男女青年分别进行统计,以针对性进行健康婚育指导,现报告如下.
作者：郑商联 刊期： 2002年第02期
目的构建可表达A组轮状病毒组特异性抗原VP6的非复制型重组腺病毒载体,并对其生物学和免疫学性质进行研究.方法将人轮状病毒VP6基因插入腺病毒载体pShuttle-CMV中,通过细菌内同源重组方法获得重组腺病毒DNA,将其转染293细胞获得重组腺病毒.用聚合酶链反应(PCR)及Southern blot方法,检测目的基因在重组腺病毒中的整合,用Western blot检测VP6的表达.通过灌胃和滴鼻两种途径对小鼠进行免疫,并对免疫后小鼠体液和粘膜免疫进行分析.结果得到了重组腺病毒rvAd-VP6,VP6基因整合于腺病毒基因组中,在293细胞中可稳定表达.2次免疫后灌胃和滴鼻两组小鼠均产生明显免疫应答,血清IgG抗体滴度分别为1∶1 000和1∶10 000～1∶100 000.除了血清IgG外,小鼠还产生了较强的针对轮状病毒的血清IgA,滴度为1∶10～1∶100.滴鼻组在肺灌洗液和肠匀浆液中均可检测到分泌型IgA(sIgA),灌胃组仅在肠道检测到sIgA.滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组.结论人轮状病毒VP6基因重组腺病毒载体的成功构建及所取得的良好免疫学效果,为我国具有自主知识产权的新型轮状病毒基因工程疫苗的研制奠定了基础.
作者：何金生；王健伟；姜秀丽；王大燕；温乐英；董京芳；屈建国；洪涛 刊期： 2002年第02期
目的寻找一种能广泛用于临床快速、简便、灵敏度和特异性较好、价格低廉的乙型肝炎病毒(HBV)DNA定量诊断方法.方法以Sybr green 1作为荧光指示剂,做样品血清DNA的实时定量聚合酶链反应(PCR),并结合溶解曲线结果,与Taqman荧光定量方法结果进行了对比.结果 Taq man法较好地检出体内HBV DNA载量.Sybr法测得样品的病毒拷贝数5.3×104 copies/ml与Taqman法所得数值9.6×104 copieslml相近,但检出率偏低.结论 Sybr green 1荧光实时定量方法简便、便宜,但检出率偏低.
作者：王艳；徐小元；何为；刘志红；公维波；王勤环 刊期： 2002年第02期
目的研究引物标记与掺入标记在乙型肝炎病毒(HBV)基因多态性芯片检测中的应用.方法用掺入标记或引物标记荧光分子Cy5,扩增HBV P区、前C/C区,制备含荧光分子Cy5的目的片段后,分别与HBV基因多态性芯片杂交、扫描并分析结果.结果掺入标记法信号强度略高于引物标记法,但非特异信号强度也高,两法检测42份乙型肝炎患者血清,结果完全一致,重复性均较好,批内CV 15%～20%,引物标记法用于检测HBV基因多态性灵敏度达104 copies/ml.结论引物标记法信号强度虽略低于掺入标记法,但检测灵敏度、特异性仍满足临床要求.
作者：马达；王惠民；赵建龙；王万相；郭乃洲；蒋玲；张冬雷；孙悦 刊期： 2002年第02期
目的筛选适合于宫颈癌治疗性疫苗研制的人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6和E7突变基因.方法采用定点诱变技术对E6和E7基因进行改造,得到几种E6和E7基因的突变体;构建成表达野生型和突变型E6与E7的重组痘苗病毒,对这些重组痘苗病毒表达的E6和E7蛋白的稳定性及其免疫原性进行了比较研究.结果 E6蛋白第50位氨基酸的突变、E7蛋白第24和26位氨基酸的突变都不影响蛋白的稳定性和抗原性,但E7蛋白第91位氨基酸的突变使E7蛋白的稳定性和抗原性大大减弱.结论证实了E7蛋白C-末端的锌指结构对E7蛋白结构的完整性和稳定性是非常重要的.
作者：职慧军；韩立群；任皎；田厚文；骆卫锋；梁雨；阮力 刊期： 2002年第02期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
