李梅；李晓眠；刘民
沈阳市位于我国东北,每到冬季呼吸道系统疾病高发.为探究其病因,我们开展了以流感监测为主的调查.选择6家具有代表性的、较大的综合性医院,每日统计上感门诊数,按旬汇总,同时采集疑似流感患者咽拭子,用MDCK细胞进行病毒分离.结果显示:6个检测点上感就诊量10～11月份较平稳,每旬波动在3 300～4 300例左右,12月初病例开始上升,12月末达10 069例,是门诊量的3倍,1月中旬病历数下降,2月上旬降至平时水平.调查结果表明,同期幼儿及青少年上感发病率分别为56%和48%.我们从采集的101份咽拭子中分离到29株流感病毒,阳性率为28.7%.
作者：付荣华；何雅慧；徐英俐；王萍；王作苏 刊期： 2002年第02期
为了解泰安市既往职业献血员人群丙型肝炎病毒(HCV)的感染状况和型别分布,以便针对性地研究制订防治对策,控制传播,我们于1996～1999年对泰安市部分既往职业献血员聚集人群进行了调查研究.
作者：石长胜；艾宪淮；刘传新；刘淑贞；高文学 刊期： 2002年第02期
我们根据目前国际上报道的多株TTV全序列,以Okamoto发表的序列为模板,对照选择其中同源性均在91%以上相对保守的ORF1区中一段克隆并表达,用这段表达产物作为抗原,建立了ELISA TTV IgG、IgM抗体检测方法,并检测一些人群.本院辨认健康体检人群124份,传染科各类肝炎人群55份(以慢性乙型肝炎为主),消化科胃肠病人群39份,传染科肝穿刺组织32份.
作者：王晶；唐永明；张长发；陶纪值 刊期： 2002年第02期
目的了解丙型肝炎病毒(HCV)准种变异与病毒血症水平、疾病活动度及干扰素疗效的关系.方法采用针对HCV E2高变区1(HVR1)的单链构象多态性分析法(SSCP)对68例慢性丙型肝炎患者进行HCV准种检测,分析准种数目与HCV RNA、ALT、AST水平及肝组织活动指数(HAI)的相关性.对其中48例给予干扰素治疗,分析准种数目对干扰素应答效果的影响.结果 61例HVR1 SSCP阳性,HCV准种数目为(6.2±2.4)条.准种数量与HCV RNA水平显著相关(P<0.01),与ALT、AST及HAI无明显相关(P>0.05).干扰素治疗患者中,43例HVR1阳性,持续应答者治疗前HCV准种数量(3.3±1.2,n=11)显著少于获得治疗终点应答(ETR)伴复发者(6.3±2.2,n=12,P＜0.05)或无应答者(8.0±3.3,n=20,P<0.01).治疗结束时,干扰素组仍有16例检测出HCV准种,但准种条数降为(3.4±1.2)条,与未接受干扰素治疗病例的准种数目(6.8±2.5)相比差异有显著性,P<0.01),且其中10例准种模式发生了改变.结论 HCV准种多样性可引起较高的病毒血症水平,但与疾病活动度无关;准种数目可作为预测慢性丙型肝炎干扰素疗效的指标.
作者：唐小平；钱可平；袁小珍；Johnson YN LAU 刊期： 2002年第02期
Prion疾病是一组由于正常膜蛋白PrPC因各种原因发生构象改变、聚集并在脑组织沉积,引起中枢神经系统的慢性退行性病变.Prion疾病可表现为散发性、家族性及传播性三种形式[1],尤其以传播性疾病极大威胁人类的健康,给农牧业生产和社会经济带来巨大损失.与其他传染性疾病不同,传播性的Prion疾病不引起免疫系统的应答,但是免疫系统却是Prion疾病的重要参与者.多年来,对Prion疾病的免疫学研究不仅为它的诊断和发病机制的研究做出贡献,更为预防和治疗Prion疾病带来新的希望.
作者：周晓勃；高晨；董小平 刊期： 2002年第02期
目的构建可表达A组轮状病毒组特异性抗原VP6的非复制型重组腺病毒载体,并对其生物学和免疫学性质进行研究.方法将人轮状病毒VP6基因插入腺病毒载体pShuttle-CMV中,通过细菌内同源重组方法获得重组腺病毒DNA,将其转染293细胞获得重组腺病毒.用聚合酶链反应(PCR)及Southern blot方法,检测目的基因在重组腺病毒中的整合,用Western blot检测VP6的表达.通过灌胃和滴鼻两种途径对小鼠进行免疫,并对免疫后小鼠体液和粘膜免疫进行分析.结果得到了重组腺病毒rvAd-VP6,VP6基因整合于腺病毒基因组中,在293细胞中可稳定表达.2次免疫后灌胃和滴鼻两组小鼠均产生明显免疫应答,血清IgG抗体滴度分别为1∶1 000和1∶10 000～1∶100 000.除了血清IgG外,小鼠还产生了较强的针对轮状病毒的血清IgA,滴度为1∶10～1∶100.滴鼻组在肺灌洗液和肠匀浆液中均可检测到分泌型IgA(sIgA),灌胃组仅在肠道检测到sIgA.滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组.结论人轮状病毒VP6基因重组腺病毒载体的成功构建及所取得的良好免疫学效果,为我国具有自主知识产权的新型轮状病毒基因工程疫苗的研制奠定了基础.
作者：何金生；王健伟；姜秀丽；王大燕；温乐英；董京芳；屈建国；洪涛 刊期： 2002年第02期
目的建立小儿人巨细胞病毒(HCMV)感染的分子诊断方法.方法采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法测定45例疑诊HCMV感染的患儿,并与常规PCR及酶联免疫吸附试验(ELISA)比较.对确诊为HCMV肝炎的25例分别在5个时点(治疗前、出院时、3个月、6个月及9个月)监测其外周血白细胞中HCMV DNA拷贝(copies)数.结果常规PCR、ELISA和FQ-PCR的阳性率分别为60.00%,33.33%和66.67%,灵敏度分别为84.38%,46.88%和93.75%.HCMV肝炎治疗组和对照组的HCMV DNA量在5个时点的差异有非常显著意义(P<0.001).以103 copies/ml的FQ-PCR值为临界值(≥103有症状,<103无症状)可预测活动性HCMV感染的出现.结论 FQ-PCR可作为小儿HCMV感染的有效诊断方法之一,动态检测HCMV DNA含量有助于指导治疗、估计疾病的发展和预后.
作者：陈奋华；何政贤；潘思年；宁方芹；王清文；肖作源 刊期： 2002年第02期
为了弄清萍乡地区TT病毒(TTV)感染情况,分析本地区TTV株基因结构特点,我们对江西省萍乡地区8例TT病毒株进行了部分基因的克隆及序列测定.
作者：王长奇；陈燕萍；欧阳福桂；伍淑云；周宪明 刊期： 2002年第02期
目的研究引物标记与掺入标记在乙型肝炎病毒(HBV)基因多态性芯片检测中的应用.方法用掺入标记或引物标记荧光分子Cy5,扩增HBV P区、前C/C区,制备含荧光分子Cy5的目的片段后,分别与HBV基因多态性芯片杂交、扫描并分析结果.结果掺入标记法信号强度略高于引物标记法,但非特异信号强度也高,两法检测42份乙型肝炎患者血清,结果完全一致,重复性均较好,批内CV 15%～20%,引物标记法用于检测HBV基因多态性灵敏度达104 copies/ml.结论引物标记法信号强度虽略低于掺入标记法,但检测灵敏度、特异性仍满足临床要求.
作者：马达；王惠民；赵建龙；王万相；郭乃洲；蒋玲；张冬雷；孙悦 刊期： 2002年第02期
目的筛选适合于宫颈癌治疗性疫苗研制的人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6和E7突变基因.方法采用定点诱变技术对E6和E7基因进行改造,得到几种E6和E7基因的突变体;构建成表达野生型和突变型E6与E7的重组痘苗病毒,对这些重组痘苗病毒表达的E6和E7蛋白的稳定性及其免疫原性进行了比较研究.结果 E6蛋白第50位氨基酸的突变、E7蛋白第24和26位氨基酸的突变都不影响蛋白的稳定性和抗原性,但E7蛋白第91位氨基酸的突变使E7蛋白的稳定性和抗原性大大减弱.结论证实了E7蛋白C-末端的锌指结构对E7蛋白结构的完整性和稳定性是非常重要的.
作者：职慧军；韩立群；任皎；田厚文；骆卫锋；梁雨；阮力 刊期： 2002年第02期
目的改造干扰素功能结合域,以提高干扰素的生物学活性.方法在新型基因工程干扰素(IFNα1c/86D)AB环内通过点突变技术引入2个独立酶切位点EcoRⅤ和EstEⅡ,用聚合酶链反应(PCR)技术在干扰素cDNA水平对母体干扰素LoopAB的31位甲硫氨酸换成天冬氨酸(M-D),32位天冬氨酸换成脯氨酸(D-P),将重组基因在大肠埃希菌中表达,用滤泡口炎病毒(VSV)-人羊膜传代细胞(WISH)系统检测抗病毒活性.用比色MTT实验检测抗增殖活性.结果通过突变,31和32位氨基酸获得重组突变体3132IFNα1c/86D,经限制性内切酶图分析、DNA序列和抗病毒活性测定,初步表明3132IFNα1c/86D是母体干扰素IFNα1c/86D抗病毒活性的8倍,抗增殖作用与母体干扰素相比差异无显著性.结论改造干扰素受体结合域,可提高干扰素的抗病毒活性.
作者：胡荣；马学军；魏开坤；王虹；钱振超；薛水星；段招军；侯云德 刊期： 2002年第02期
目的建立一种检测人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)整合酶的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,用于筛选和研究HIV-1整合酶抑制剂.方法将质粒F185K/C280S IN1-288转化到大肠埃希菌中,经IPTG诱导表达,柱亲和层析纯化,获得HIV-1整合酶融合蛋白.建立酶联免疫吸附试验方法测定其生物学活性,与32P同位素标记方法比较,并用ELISA方法筛选HIV-1整合酶的抑制剂.结果 SDS-PAGE电泳分析显示,相对分子质量30 000上方有HIV-1整合酶融合蛋白条带出现.ELISA及32P同位素标记法证实,此融合蛋白对于特异底物具有3′切割和链转移活性.ELISA反应的平均P/N值为2.836±0.161,批内及批间变异系数(CV)分别为4.63%和5.89%.检测到中药丹参提取物CEH等有抑制整合酶的活性,CEH的大孔树脂洗脱物CEHL活性提高.结论 ELISA法检测HIV-1整合酶活性技术简单,快速,重复性好,无同位素污染,可用于HIV-1整合酶为靶点的抑制剂的筛选及抗-HIV药物作用机理的研究.
作者：郭志敏；陈鸿珊 刊期： 2002年第02期
肠道病毒(enterovirus,EV)71型在不同地区伴有不同的临床表现,以手、足、口腔病、脑膜炎、脊髓灰质炎为主,可引起瘫痪甚至死亡[1,2].我们对52例EV-71感染者进行了分析.
作者：谢若男；林祥伟；费选文；向晓光 刊期： 2002年第02期
目的表达庚型肝炎病毒(HGV)基因组NS5区部分基因重组抗原,分析其抗原性.方法分别亚克隆了HGV NS5a、NS5b以及NS5b与C区嵌和的基因至pThioC表达载体上,构建成3个重组表达质粒,分别转化大肠埃希菌JM109(DE3),用IPTG诱导表达重组蛋白.表达产物经纯化后采用Western blot和间接ELISA方法分析3个重组蛋白的抗原性.结果经酶切和序列分析鉴定正确,3种表达蛋白均高效表达且相对分子质量与预期大小相符.Western blot分析和间接ELISA试验表明,3种表达蛋白均能与抗-HGV阳性血清发生特异性反应.将应用重组蛋白检测的抗-HGV抗体与混合重组抗原(包括C区合成肽、NS5a合成肽、NS3区基因重组抗原)的检测结果进行了比较,在混合重组抗原阳性的22份血清中,P5a检出率为68%(15/22),P5b检出率为91%(20/22),Pc-5b检出率为73%(16/22).在70份阴性标本中,3种抗原的检出率分别为P5a:7%(5/70);P5b:1%(1/70);Pc-5b:6%(4/70).3个重组抗原单独检出阳性的标本,其中有一部分经RT-PCR检测亦为阳性.结论原核表达的NS5区蛋白所检测的抗-HGV抗体不能完全被其他区段的抗原所覆盖,是免疫诊断HGV感染所必需的抗原表位之一.
作者：丛郁；焦宏远；张文英；田瑞光；詹美云 刊期： 2002年第02期
心理医学的研究表明,不仅要重视心理社会因素的致病作用,而且也要充分注意躯体疾病对患者心理活动的不良影响[1].我们采用龚氏修订的艾森克个性问卷(EPQ)调查和分析了239例病毒性肝炎患者的人格特征.
作者：王晓慧；孙慧莉；王萍；刘趁霞；张淑华 刊期： 2002年第02期
患者女性,47岁.1984年因为明显消瘦,食量增大,心率>110次/min,手颤多汗,大便次数增多,查总三碘甲状腺原氨酸(T3)685 ng/dl(正常参数值<120 ng/dl),总甲状腺素(T4)20.2 μg/dl(正常参数值<10 μg/dl),甲状腺吸131Ⅰ率增高,诊断为甲状腺功能亢进(甲亢),给予他巴唑10 mg,每日3次,2个月后逐渐减量并加用甲状腺素片20 mg,每日1次,服药2周后T3及T4正常,坚持服药3年,渐停药.
作者：朱玲；张晏；付亮；张鸿飞 刊期： 2002年第02期
为了解龙泉市男女青年婚前检查中发现的乙型肝炎(乙肝)的发病情况,特将1998年全年中来妇幼保健所进行婚检的318对男女青年乙肝三系的检查中HBsAg、大三阳(HBsAg、HBeAg、抗-HBc)、小三阳(HBsAg、抗-HBe、抗-HBc)男女青年分别进行统计,以针对性进行健康婚育指导,现报告如下.
作者：郑商联 刊期： 2002年第02期
目的克隆人单纯疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ(HSV-Ⅰ、Ⅱ)型共同性抗原gD基因,构建重组表达载体pMAL-c2/gD,诱导融合蛋白MBP-gD的表达.方法提取病毒DNA,PCR扩增出gD基因,克隆于原核表达载体pMAL-c2并转化大肠埃希菌DH5α.PCR、双酶切及测序证实插入的gD基因序列正确后,IPTG诱导表达融合蛋白MBP-gD,并进行免疫学鉴定.结果构建的重组表达质粒pMAL-c2/gD在大肠埃希菌中能高效表达.经SDS-PAGE分析,表达产物约占菌体总蛋白35.5%,其中39%以可溶蛋白形式存在于胞质中,61%以包涵体形式存在.结论构建了pMAL-c+2/gD表达质粒,Western blot证实,HSV-Ⅰ gD单克隆抗体DL6可特异识别表达的gD蛋白,该蛋白具有天然gD的抗原性.
作者：李梅；李晓眠；刘民 刊期： 2002年第02期
目的探索以Epstein-Barr病毒(EBV)TK激酶为抗原,建立简便、快速、敏感和特异的鼻咽癌(NPC)诊断方法.方法构建原核表达载体pRSET-TK,在原核细胞BL21(DE3)中获得高效表达的TK激酶,以Western blot检测证明其抗原的特异性和应用于NPC检测的可行性.以纯化的TK激酶为抗原初步建立ELISA检测方法,检测NPC患者血清中TK/IgG抗体.结果在NPC患者血清中含有特异的针对TK激酶的IgG抗体,Western blot TK/IgG检测的敏感度和特异度均为100%.结论初步建立了ELISA TK/IgG诊断NPC方法,具有较高的敏感性和特异性.
作者：黄滨；李伯军；周为民；皮国华；唐慰萍；谷淑燕 刊期： 2002年第02期
目的为我国单纯疱疹病毒Ⅱ型的基因工程疫苗提供早期实验研究资料.方法采取PCR和蛋白质原核细胞表达方法.结果自我国病毒储备株中成功地克隆出了单纯疱疹病毒Ⅱ型小片段特异基因,并获得高效表达.采用该抗原包被,自生殖系统感染者恢复期血清中均能查到针对该重组抗原的IgG抗体.结论单纯疱疹病毒Ⅱ型小片段型特异基因的成功表达,为我国单纯疱疹病毒Ⅱ型感染者的特异性诊断和单纯疱疹病毒Ⅱ型疫苗的研究打下了基础.
作者：伊瑶；许文波；张明程；周永东；李勇；毕胜利 刊期： 2002年第02期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
