王艳；徐小元；何为；刘志红；公维波；王勤环
目的改造干扰素功能结合域,以提高干扰素的生物学活性.方法在新型基因工程干扰素(IFNα1c/86D)AB环内通过点突变技术引入2个独立酶切位点EcoRⅤ和EstEⅡ,用聚合酶链反应(PCR)技术在干扰素cDNA水平对母体干扰素LoopAB的31位甲硫氨酸换成天冬氨酸(M-D),32位天冬氨酸换成脯氨酸(D-P),将重组基因在大肠埃希菌中表达,用滤泡口炎病毒(VSV)-人羊膜传代细胞(WISH)系统检测抗病毒活性.用比色MTT实验检测抗增殖活性.结果通过突变,31和32位氨基酸获得重组突变体3132IFNα1c/86D,经限制性内切酶图分析、DNA序列和抗病毒活性测定,初步表明3132IFNα1c/86D是母体干扰素IFNα1c/86D抗病毒活性的8倍,抗增殖作用与母体干扰素相比差异无显著性.结论改造干扰素受体结合域,可提高干扰素的抗病毒活性.
作者：胡荣；马学军；魏开坤；王虹；钱振超；薛水星；段招军；侯云德 刊期： 2002年第02期
目的了解一株再次从流感患儿中分离出禽H9N2流感毒株的基因组特性,并弄清它的来源.方法病毒在鸡胚中传代,从收获的尿囊液中提取RNA,通过逆转录合成cDNA,cDNA用PCR扩增.PCR产物用纯化试剂盒纯化,接着做核苷酸序列测定,然后用Meg Align(Version 1.03)和Editseg(Version 3.69)软件进行基因进化树分析.结果 A/广州/333/99(H9N2)毒株的基因组属于禽流感病毒,但它明显不同于A/Duck/Hong Kong/Y439/97毒株.同时不含有任何人流感病毒基因节段,其基因组中有4个基因节段(分别编码HA、NA、NP和NS蛋白)来自G9毒株基因系,而其余4个基因节段(分别编码PB2、PB1、PA和M蛋白)来自G1毒株基因系.结论 A/广州/333/99(H9N2)病毒是G9和G1毒株通过基因重配而来的重配株,它大可能性直接来自禽.进一步证实了禽H9N2毒株能感染人,同时首次证实了H9N2不同基因系毒株间,在自然界中也能发生基因重配.
作者：郭元吉；谢健屏；吴昆昱；董婕；王敏；张烨；郭俊峰；陈继明；陈稚峰；李梓 刊期： 2002年第02期
目的研究白细胞介素6(IL-6)在非复制型痘苗病毒中的表达及其对重组痘苗病毒免疫效果的影响.方法利用非复制型痘苗病毒表达载体pNEOCK11β75IL6和重组病毒RVJ123,通过两步重组构建能同时表达IL-6和乙型肝炎病毒(HBV)HBsAg的非复制型重组痘苗病毒RVJ123ΔCK11β75IL6.免疫动物并观察其免疫效果.结果 Southern blot证实痘苗病毒C、K片段间基因缺失的同时伴有IL-6基因的插入,IL-6和HBsAg可同时表达.鼻腔吸入分别免疫BALB/c小鼠和新西兰白兔,ELISPOT实验证实免疫后两周小鼠肺淋巴细胞的抗-HBsAg IgA、IgG抗体分泌细胞(ASC)数比对照组(RVJ123ΔCK11β75)显著增加,并可在小鼠血液、肺浸出液以及新西兰白兔血液、肺浸出液、其他分泌液样品中检测到抗-HBsAg的特异性的IgA、IgG抗体.与对照组相比,IgA、IgG抗体阳转率及抗体滴度提高.结论非复制型痘苗病毒载体中表达的IL-6可增强其诱导的免疫反应,为细胞因子IL-6作为有效的载体疫苗佐剂提供了实验基础.
作者：郭斐；陆柔剑；孙朝晖；马海伦；李军；张颖妹；马大龙；阮力 刊期： 2002年第02期
沈阳市位于我国东北,每到冬季呼吸道系统疾病高发.为探究其病因,我们开展了以流感监测为主的调查.选择6家具有代表性的、较大的综合性医院,每日统计上感门诊数,按旬汇总,同时采集疑似流感患者咽拭子,用MDCK细胞进行病毒分离.结果显示:6个检测点上感就诊量10～11月份较平稳,每旬波动在3 300～4 300例左右,12月初病例开始上升,12月末达10 069例,是门诊量的3倍,1月中旬病历数下降,2月上旬降至平时水平.调查结果表明,同期幼儿及青少年上感发病率分别为56%和48%.我们从采集的101份咽拭子中分离到29株流感病毒,阳性率为28.7%.
作者：付荣华；何雅慧；徐英俐；王萍；王作苏 刊期： 2002年第02期
目的建立小儿人巨细胞病毒(HCMV)感染的分子诊断方法.方法采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法测定45例疑诊HCMV感染的患儿,并与常规PCR及酶联免疫吸附试验(ELISA)比较.对确诊为HCMV肝炎的25例分别在5个时点(治疗前、出院时、3个月、6个月及9个月)监测其外周血白细胞中HCMV DNA拷贝(copies)数.结果常规PCR、ELISA和FQ-PCR的阳性率分别为60.00%,33.33%和66.67%,灵敏度分别为84.38%,46.88%和93.75%.HCMV肝炎治疗组和对照组的HCMV DNA量在5个时点的差异有非常显著意义(P<0.001).以103 copies/ml的FQ-PCR值为临界值(≥103有症状,<103无症状)可预测活动性HCMV感染的出现.结论 FQ-PCR可作为小儿HCMV感染的有效诊断方法之一,动态检测HCMV DNA含量有助于指导治疗、估计疾病的发展和预后.
作者：陈奋华；何政贤；潘思年；宁方芹；王清文；肖作源 刊期： 2002年第02期
目的构建可表达A组轮状病毒组特异性抗原VP6的非复制型重组腺病毒载体,并对其生物学和免疫学性质进行研究.方法将人轮状病毒VP6基因插入腺病毒载体pShuttle-CMV中,通过细菌内同源重组方法获得重组腺病毒DNA,将其转染293细胞获得重组腺病毒.用聚合酶链反应(PCR)及Southern blot方法,检测目的基因在重组腺病毒中的整合,用Western blot检测VP6的表达.通过灌胃和滴鼻两种途径对小鼠进行免疫,并对免疫后小鼠体液和粘膜免疫进行分析.结果得到了重组腺病毒rvAd-VP6,VP6基因整合于腺病毒基因组中,在293细胞中可稳定表达.2次免疫后灌胃和滴鼻两组小鼠均产生明显免疫应答,血清IgG抗体滴度分别为1∶1 000和1∶10 000～1∶100 000.除了血清IgG外,小鼠还产生了较强的针对轮状病毒的血清IgA,滴度为1∶10～1∶100.滴鼻组在肺灌洗液和肠匀浆液中均可检测到分泌型IgA(sIgA),灌胃组仅在肠道检测到sIgA.滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组.结论人轮状病毒VP6基因重组腺病毒载体的成功构建及所取得的良好免疫学效果,为我国具有自主知识产权的新型轮状病毒基因工程疫苗的研制奠定了基础.
作者：何金生；王健伟；姜秀丽；王大燕；温乐英；董京芳；屈建国；洪涛 刊期： 2002年第02期
目的探索以Epstein-Barr病毒(EBV)TK激酶为抗原,建立简便、快速、敏感和特异的鼻咽癌(NPC)诊断方法.方法构建原核表达载体pRSET-TK,在原核细胞BL21(DE3)中获得高效表达的TK激酶,以Western blot检测证明其抗原的特异性和应用于NPC检测的可行性.以纯化的TK激酶为抗原初步建立ELISA检测方法,检测NPC患者血清中TK/IgG抗体.结果在NPC患者血清中含有特异的针对TK激酶的IgG抗体,Western blot TK/IgG检测的敏感度和特异度均为100%.结论初步建立了ELISA TK/IgG诊断NPC方法,具有较高的敏感性和特异性.
作者：黄滨；李伯军；周为民；皮国华；唐慰萍；谷淑燕 刊期： 2002年第02期
目的了解丙型肝炎病毒(HCV)准种变异与病毒血症水平、疾病活动度及干扰素疗效的关系.方法采用针对HCV E2高变区1(HVR1)的单链构象多态性分析法(SSCP)对68例慢性丙型肝炎患者进行HCV准种检测,分析准种数目与HCV RNA、ALT、AST水平及肝组织活动指数(HAI)的相关性.对其中48例给予干扰素治疗,分析准种数目对干扰素应答效果的影响.结果 61例HVR1 SSCP阳性,HCV准种数目为(6.2±2.4)条.准种数量与HCV RNA水平显著相关(P<0.01),与ALT、AST及HAI无明显相关(P>0.05).干扰素治疗患者中,43例HVR1阳性,持续应答者治疗前HCV准种数量(3.3±1.2,n=11)显著少于获得治疗终点应答(ETR)伴复发者(6.3±2.2,n=12,P＜0.05)或无应答者(8.0±3.3,n=20,P<0.01).治疗结束时,干扰素组仍有16例检测出HCV准种,但准种条数降为(3.4±1.2)条,与未接受干扰素治疗病例的准种数目(6.8±2.5)相比差异有显著性,P<0.01),且其中10例准种模式发生了改变.结论 HCV准种多样性可引起较高的病毒血症水平,但与疾病活动度无关;准种数目可作为预测慢性丙型肝炎干扰素疗效的指标.
作者：唐小平；钱可平；袁小珍；Johnson YN LAU 刊期： 2002年第02期
目的探讨多种病毒及支原体性病原微生物感染、细胞因子和微量元素硒(Se)含量与宫颈癌发病的相关性.方法 PCR法检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒、疱疹病毒、人巨细胞病毒、EB病毒、沙眼衣原体和解脲支原体的感染(75份非宫颈癌患者正常宫颈组织作对照);ELISA法检测血清中细胞因子IL-2R、TNF的含量;荧光光度技术检测血清中硒(Se)元素含量.结果在195份宫颈癌患者的癌组织标本中,病原微生物感染阳性者为166份(85.1%),其中16,18和35型人乳头瘤病毒感染60份(30.8%);6和11型人乳头瘤病毒感染5份(2.6%);2型单纯疱疹病毒感染60份(30.8%);1型单纯疱疹病毒感染4份(2.1%);EB病毒感染3份(1.5%);人巨细胞病毒感染6份(3.1%);沙眼衣原体感染11份(5.6%)和解脲支原体感染17份(8.7%).对照组75份正常宫颈组织中病原微生物感染阳性者为15份(20.0%),其中,16,18和35型人乳头瘤病毒感染3份(4.0%);2型单纯疱疹病毒感染5份(6.7%);EB病毒感染1份(1.3%);沙眼衣原体感染3份(4.0%)和解脲支原体感染3份(4.0%).62份宫颈癌和36份正常人血清中,白细胞介素-2受体(=356.44 U/ml)和肿瘤坏死因子(=373.48 pg/ml)浓度均比对照组明显升高(P<0.001).硒含量(=0.058 mg/ml)比对照组水平低(P<0.05).结论山西宫颈癌的发病与多种病原微生物感染有关,尤其16,18和35型人乳头瘤病毒和2型单纯疱疹病毒感染率较高,同时伴有白细胞介素-2受体和肿瘤坏死因子水平的升高与硒元素的低下.
作者：郑曙民；张春玲；李连青；韩存芝；荆洁线；朱庆义 刊期： 2002年第02期
患者女性,47岁.1984年因为明显消瘦,食量增大,心率>110次/min,手颤多汗,大便次数增多,查总三碘甲状腺原氨酸(T3)685 ng/dl(正常参数值<120 ng/dl),总甲状腺素(T4)20.2 μg/dl(正常参数值<10 μg/dl),甲状腺吸131Ⅰ率增高,诊断为甲状腺功能亢进(甲亢),给予他巴唑10 mg,每日3次,2个月后逐渐减量并加用甲状腺素片20 mg,每日1次,服药2周后T3及T4正常,坚持服药3年,渐停药.
作者：朱玲；张晏；付亮；张鸿飞 刊期： 2002年第02期
我们根据目前国际上报道的多株TTV全序列,以Okamoto发表的序列为模板,对照选择其中同源性均在91%以上相对保守的ORF1区中一段克隆并表达,用这段表达产物作为抗原,建立了ELISA TTV IgG、IgM抗体检测方法,并检测一些人群.本院辨认健康体检人群124份,传染科各类肝炎人群55份(以慢性乙型肝炎为主),消化科胃肠病人群39份,传染科肝穿刺组织32份.
作者：王晶；唐永明；张长发；陶纪值 刊期： 2002年第02期
目的探索应用双杂交体系统克隆与乙型肝炎病毒(HBV)Pre S1蛋白结合的肝细胞受体的可行性.方法构建编码HBV Pre S1全序列或部分序列与酵母蛋白GAL 4 DNA结合区域融合蛋白的酵母表达质粒,应用这些质粒转化酵母报道菌株SFY526,检测β-半乳糖苷酶活性作为酵母中转录激活的指标.构建编码Pre S1全序列与GAL4 DNA结合区域融合蛋白的哺乳动物细胞表达质粒,与CAT报道质粒共转染肝癌细胞系Huh-7,使用薄层层析法检测细胞提取物的氯霉素乙酰转移酶活性.结果全序列Pre S1蛋白与GAL4 DNA结合区域的融合蛋白在酵母细胞中呈现转录激活功能,其转录激活序列被定位于Pre S1第21～47氨基酸之间.全序列Pre S1蛋白与GAL 4 DNA结合区域的融合蛋白在哺乳动物细胞中未呈现转录激活功能.结论 HBV Pre S1蛋白在酵母细胞中的转录激活功能,限制了研究人员应用酵母双杂交体系统克隆与Pre S1结合的HBV受体.然而,Pre S1蛋白在哺乳动物细胞未呈现转录激活功能.哺乳动物细胞双杂交体系统可能是克隆与Pre S1蛋白作用的肝细胞受体的可行途径.
作者：肖生祥；楚雍烈；彭宣宪；王翠玲；肖生彬；吴艳红；曹振平 刊期： 2002年第02期
Prion疾病是一组由于正常膜蛋白PrPC因各种原因发生构象改变、聚集并在脑组织沉积,引起中枢神经系统的慢性退行性病变.Prion疾病可表现为散发性、家族性及传播性三种形式[1],尤其以传播性疾病极大威胁人类的健康,给农牧业生产和社会经济带来巨大损失.与其他传染性疾病不同,传播性的Prion疾病不引起免疫系统的应答,但是免疫系统却是Prion疾病的重要参与者.多年来,对Prion疾病的免疫学研究不仅为它的诊断和发病机制的研究做出贡献,更为预防和治疗Prion疾病带来新的希望.
作者：周晓勃；高晨；董小平 刊期： 2002年第02期
一氧化氮(nitric oxide,NO)是一种新型的生物活性分子,在神经信息传递、心脑血管调节、抗感染免疫和抗肿瘤免疫方面起重要作用.一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,NOS)是催化L-精氨酸生成NO的酶类.
作者：张吉才；胡秀学；李海平；李文斌；孙竞 刊期： 2002年第02期
目的研究引物标记与掺入标记在乙型肝炎病毒(HBV)基因多态性芯片检测中的应用.方法用掺入标记或引物标记荧光分子Cy5,扩增HBV P区、前C/C区,制备含荧光分子Cy5的目的片段后,分别与HBV基因多态性芯片杂交、扫描并分析结果.结果掺入标记法信号强度略高于引物标记法,但非特异信号强度也高,两法检测42份乙型肝炎患者血清,结果完全一致,重复性均较好,批内CV 15%～20%,引物标记法用于检测HBV基因多态性灵敏度达104 copies/ml.结论引物标记法信号强度虽略低于掺入标记法,但检测灵敏度、特异性仍满足临床要求.
作者：马达；王惠民；赵建龙；王万相；郭乃洲；蒋玲；张冬雷；孙悦 刊期： 2002年第02期
目的为我国单纯疱疹病毒Ⅱ型的基因工程疫苗提供早期实验研究资料.方法采取PCR和蛋白质原核细胞表达方法.结果自我国病毒储备株中成功地克隆出了单纯疱疹病毒Ⅱ型小片段特异基因,并获得高效表达.采用该抗原包被,自生殖系统感染者恢复期血清中均能查到针对该重组抗原的IgG抗体.结论单纯疱疹病毒Ⅱ型小片段型特异基因的成功表达,为我国单纯疱疹病毒Ⅱ型感染者的特异性诊断和单纯疱疹病毒Ⅱ型疫苗的研究打下了基础.
作者：伊瑶；许文波；张明程；周永东；李勇；毕胜利 刊期： 2002年第02期
目的表达庚型肝炎病毒(HGV)基因组NS5区部分基因重组抗原,分析其抗原性.方法分别亚克隆了HGV NS5a、NS5b以及NS5b与C区嵌和的基因至pThioC表达载体上,构建成3个重组表达质粒,分别转化大肠埃希菌JM109(DE3),用IPTG诱导表达重组蛋白.表达产物经纯化后采用Western blot和间接ELISA方法分析3个重组蛋白的抗原性.结果经酶切和序列分析鉴定正确,3种表达蛋白均高效表达且相对分子质量与预期大小相符.Western blot分析和间接ELISA试验表明,3种表达蛋白均能与抗-HGV阳性血清发生特异性反应.将应用重组蛋白检测的抗-HGV抗体与混合重组抗原(包括C区合成肽、NS5a合成肽、NS3区基因重组抗原)的检测结果进行了比较,在混合重组抗原阳性的22份血清中,P5a检出率为68%(15/22),P5b检出率为91%(20/22),Pc-5b检出率为73%(16/22).在70份阴性标本中,3种抗原的检出率分别为P5a:7%(5/70);P5b:1%(1/70);Pc-5b:6%(4/70).3个重组抗原单独检出阳性的标本,其中有一部分经RT-PCR检测亦为阳性.结论原核表达的NS5区蛋白所检测的抗-HGV抗体不能完全被其他区段的抗原所覆盖,是免疫诊断HGV感染所必需的抗原表位之一.
作者：丛郁；焦宏远；张文英；田瑞光；詹美云 刊期： 2002年第02期
干扰素治疗慢性乙型肝炎(CHB)有抗病毒和免疫调节两方面的作用,准确快速地了解患者的免疫功能状况,对判断CHB的疗效及预后有重要意义.可溶性HLA-Ⅰ(sHLA-Ⅰ)类分子的含量在多种病毒感染性疾病时会出现变化.近期的研究发现,这一含量的变化可以反映机体免疫功能受到的调节,并可用于评价抗病毒治疗的效果.本试验通过检测CHB患者血清sHLA-Ⅰ含量的变化,探讨其对CHB的治疗效果是否具有指示作用.
作者：黄文琪；裴斌 刊期： 2002年第02期
目的掌握我国新生儿单纯接种乙型肝炎血源疫苗后的免疫持久性和远期预防效果;观察新生儿免疫较长时间后是否需加强免疫.方法在湖南湘潭市等4个乙型肝炎疫苗试点区内,对1986～1988年出生并接种乙型肝炎血源疫苗的新生儿,连续14～15年按免疫儿年龄分层随机抽样采血随访,累计随访21 680人次,观察免疫儿HBsAg、抗-HBs和抗-HBc的动态变化.结果新生儿单纯乙型肝炎血源疫苗全程基础免疫后,在15年随访中没有加强免疫,各试点区免疫儿童HBsAg携带率低于1.66%,携带率没有随免疫后年限的延长而增加;阻断HBV慢性感染的效果持续在90%左右(95%可信限为:83.1%～97.2%);免疫后不同年限间HBsAg携带率、HBV感染率和保护效果差异均无显著性(P>0.05).免疫儿抗-HBs阳性率随免疫后年限延长而逐年明显下降,至第9～10年下降为40%～50%,之后数年内下降幅度不大,至免疫后13～14年抗-HBs阳性率维持在30%～42%;抗-HBs滴度下降了90%.结论新生儿单纯乙型肝炎疫苗接种后抗-HBs阳性率与滴度的下降不影响其远期预防效果;就群体而言,新生儿及时完成全程免疫后,无需加强免疫可有效阻断HBV感染后成为HBsAg慢性携带者,而很有可能终生受益.
作者：夏国良；贾志远；颜天强；李荣成；刘洪斌；徐志一；曹惠霖；刘崇柏 刊期： 2002年第02期
高度的变异性是人免疫缺陷病毒1型的(HIV-1)显著特征之一,也是HIV-1逃脱机体免疫监视的主要原因和HIV-1疫苗研制的主要障碍.了解体外传代HIV-1基因型别、感染毒力及病毒产量等生物学形状的变异,对评估机体内环境在HIV-1变异中的作用及评价体外长期传代HIV-1毒种的实用性具有重要意义.为此,我们对军事科学院P3实验室保存的HIV-1毒种进行长期传代培养,观察CPE,分析病毒的感染毒力和病毒产量的变异,并进行了基因亚型变异鉴定.
作者：樊卫平；李敬云；王红霞；鲍作义；吕富双 刊期： 2002年第02期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
