江朝富；傅涌水；罗广平；简少文
目的增强造血细胞对化疗药物的耐药表型,探讨逆转录病毒介导的基因转移效率及耐药基因的特性和在造血细胞保护性基因治疗中的作用和意义.方法应用RT-PCR从人肝组织中获得编码六氧甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)cDNA,将其克隆于pGEM-T质粒载体并构建了逆转录病毒载体G1Na-MGMT,应用脂质体Lipofect AMINE基因转移法将后者导入GP+E86和PA317病毒包装细胞,以BCNU加压筛选后的阳性克隆上清经乒乓效应后继而感染K562细胞和人造血细胞.应用PCR,Southern blot,RT-PCR,Western blot及MTT法检测人MGMT基因在细胞中的转移和表达.结果酶切鉴定及DNA测序证实其MGMT cDNA克隆的正确性,脂质体介导方法成功将其导入病毒包装细胞,BCNU加压筛选和乒乓感染法使病毒效价达8.6×106 CFU/ml,逆转录病毒载体介导的MGMT基因在K562细胞及人造血细胞中获得有效转移和表达.结论 MGMT耐药基因的成功克隆并导入骨髓造血细胞且获高效表达对开展肿瘤基因治疗的临床研究奠定了实验基础.
作者：王季石；夏学鸣；陈子兴；阮长耿 刊期： 2001年第03期
目的观察慢性肝炎、重型肝炎患者血清脂多糖结合蛋白(Lipopolysaccharide binding protein,LBP)的变化.方法用酶联免疫吸附法检测16例慢性肝炎患者,15例肝炎肝硬化患者,12例重型肝炎和17例健康对照者血清中LBP水平.结果慢性肝炎组患者血清LBP含量35 166.25 μg/L,显著高于健康对照组18 590.00 μg/L,而慢性肝炎组与重型肝炎组比较,慢性肝炎>肝炎肝硬化>重型肝炎,各组间差异显著,血清LBP含量与血浆PTA水平呈正相关(r=0.395 8,P<0.01),而与血清ALT TBiL水平无明显相关性(r分别为0.164 5和0.189 4,P值均>0.05).结论血清LBP可能作为了解肝脏代偿能力指标之一.
作者：尹彪；于敏；曾争；田庚善 刊期： 2001年第03期
目的探讨巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)在肾移植受者中的感染状况.方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组化方法及聚合酶链反应技术测定167例肾移植受者的CMV抗体、抗原和CMV DNA.结果肾移植受者的抗CMV IgG和抗CMV IgM阳性率分别为98.8%和1.8%;CMV抗原阳性细胞数平均为(3.2±3.1)/5×104WBC,阳性率为47.3%;CMV DNA的阳性率为50.9%.结论肾移植受者术后存在不同程度的CMV感染.临床上开展CMV抗体、抗原及核酸的检测对早期诊断肾移植受者术后CMV感染具有重要意义.
作者：范骏；钱景；何强；马伟杭；陈江华；周琳；蔡挺 刊期： 2001年第03期
1 一种新的病毒性脑炎1998年9月马来西亚的Perak州发生病毒性脑炎的流行,许多成年人出现高热、脑炎等临床症状,病例急剧增加,截至1999年5月,共发病265例,死亡105例,死亡率达40%.由于该病发病凶险,死亡率高,且病因不清,震惊世界[1].1999年初,与马来西亚毗邻的新加坡也发现同样的脑炎病人,经医院确诊的病例为11例,死亡1例.同年3月马来西亚大学的研究人员从Perak 州Nipah镇的病毒性脑炎的尸解标本中分离到1株病毒,该病毒颗粒为160～300 nm,符合副粘病毒(Paramyxovirus)形态特征[2].经血清学证实该病毒为马来西亚和新加坡两地新发现的病毒性脑炎的病原体,由于分离病毒的标本来自于Nipah镇,因此取名为尼巴病毒(Nipah virus,NiV),该病毒引起的脑炎称尼巴病毒性脑炎.
作者：邓娟；梁国栋 刊期： 2001年第03期
目的研究乙型肝炎的远期免疫效果.方法采用单纯随机方法连续13年对1986年出生并接种乙型肝炎疫苗的儿童进行隔年随访,采血检测HBsAg、抗-HBs、抗-HBc.结果 13年间HBsAg阳性率在0.46%～0.97%之间,未随免疫时间的延长而上升,乙型肝炎疫苗的远期保护效果为81.67%,与近期免疫效果相当.结论免疫后13年仍无需加强免疫.
作者：吴维寿；孙超美；姜铭波；徐元；张国华；刘崇柏；曹惠霖；林曦敏；徐志一 刊期： 2001年第03期
目的研究山东省丙型肝炎病毒(HCV)流行株的基因型别.方法用反转录套式聚合酶链反应(PCR)方法分别扩增山东省HCV流行株C区(432 bp)NS5区(319 bp)的两个基因片段,将其克隆入T载体上并自动测序,进行同源性分析及基因型别鉴定.结果 4株HCV C区基因片段有3株为1b基因亚型,1株为2a基因亚型,10株NS5区的基因片段分析均为1b基因亚型,并且与GenBank中多个1b亚型代表株核苷酸序列同源性达90%以上.结论山东省HCV流行株以1b亚型为主,兼有2a亚型.同一亚型中也有较大的变异,NS5区1b亚型中基因离散率可达5%以上.
作者：张文卿；于红；王笑峰；王芹；吕锐；王海青；邵济钧 刊期： 2001年第03期
目的掌握中国单纯乙型肝炎疫苗免疫后携带者和未免疫携带者表面抗原基因变异的流行状况及特点.方法以直接测序和特异基因序列固相聚合酶链反应(SS-SPPCR)方法,分别检测97例单纯乙型肝炎疫苗免疫后携带者、88例未免疫育龄妇女和95例未免疫儿童携带者,乙型肝炎病毒α抗原决定簇氨基酸置换的流行率.结果直接测序检测的乙型肝炎疫苗免疫后携带者氨基酸置换流行率显著高于未免疫育龄妇女和儿童携带者对照,流行率分别为30.9%(30/97),10.2%(9/88)和5.3%(5/95).145、126和133是常见的氨基酸酸置换位点.应用更为敏感的SS-SPPCR法分别检测145和126位氨基酸点突变的流行率,各组间差异不明显,其中145位氨基酸置换的流行率分别为39.2%,33.0%和32.6%.经直接测序法检测,免疫后携带者基因变异流行率高于未免疫携带者5.41倍.按基因型和血清亚型分层分析,基因型B和adw2血清亚型携带者受免疫选择后出现基因变异的风险显著较高,分别为34.55和33.39;而基因型C和adr血清亚型携带者基因变异风险较低,分别为2.73和2.45.结论单纯乙型肝炎疫苗具有免疫选择表面抗原基因变异株的作用;基因变异株在未免疫携带者中主要是弱势准种;基因变异风险与病毒基因型和血清亚型有关.
作者：夏国良；贾志远；王继杰；刘洪斌；李荣成；曹惠霖；刘崇柏 刊期： 2001年第03期
目的探讨乙型肝炎肝硬化患者脑组织中乙型肝炎病毒(HBV)感染的状况及意义.方法应用免疫组织化学链霉菌亲生物素蛋白-过氧化物酶连接法(S-P法)对70例乙型肝炎肝硬化死亡患者脑组织进行了HBsAg、HBcAg检测,分析HBV抗原的表达与临床、病理的关系.结果 HBV抗原患者30例(42.89%),其中HBsAg阳性24例(34.29%),HBcAg阳性18例(25.71%).抗原主要定位于细胞质,分布于神经元、神经胶质细胞及血管内皮细胞内.阳性细胞呈单个、散在或灶性、小片状分布.HBV抗原的表达与血清HBV水平无关,而与肝性脑病(HE)的有无及HE患者脑组织病理损害的程度相关.结论乙型肝炎肝硬化患者脑组织中存在HBV感染,并可能存在复制.脑组织中HBV感染,可能对乙型肝炎肝硬化患者HE的发生发展具有重要作用.
作者：商庆华；张光曙；徐传镇；陈崇兴；于建国；闫承玉 刊期： 2001年第03期
目的研究散发性戊型肝炎(HE)肝组织病理特征、病毒分布及复制,探讨戊型肝炎病毒(HEV)致肝损伤机制.方法对36例发病急性期(20例)和恢复期(16例)穿刺肝组织,及18例慢性乙型肝炎(CHB)近期重叠HEV感染肝组织,作光、电镜组织学观察,原位杂交HEV RNA检测,Kupffer细胞免疫组化观察.结果 HE急性期肝组织病变有其相对特征:易见肝细胞羽毛状变性(100.0%)、毛细胆管内淤胆(75.0%)及双核、多核肝细胞(65.0%),肝细胞凋亡小体偏大且不整,Kupffer细胞增生突出等.HEV RNA分布于肝细胞胞质近核周处,急性期肝组织HEV RNA阳性率(100.0%)明显高于恢复期(12.5%,P<0.001),且阳性肝细胞及病毒拷贝数较多,恢复期肝组织趋于复常.CHB重叠HEV感染者肝组织炎症活动度较单纯CHB为重.结论散发性HE相对于其他病毒性肝炎有其病理学特征;HEV感染肝细胞并主要于发病急性期复制活跃;急性散发性HE恢复后转归良好;细胞免疫性肝损伤可能为HEV的主要致肝损伤机制,但不能排除存在病毒直接致肝损伤作用.
作者：赵景民；王松山；张泰和；刘平；周光德；孙燕铃；尹铁勇 刊期： 2001年第03期
目的以特异性单克隆抗体为基础建立丙型肝炎病毒(HCV)抗原检测的酶联免疫吸附(ELISA)法,探索从血浆或血清中检测HCV抗原的可能性.方法利用我们制备的抗-HCV核心及NS3区单克隆抗体(McAbs),进行多种交叉组合模式的分析,确立实验室模式,并测定348份义务献血员血样,确定此方法的Cut offf值,并分析146份抗-HCV阳性及225份抗-HCV阴性血浆,阳性结果用套式PCR试剂盒确证.结果构建了以抗-HCV核心区单抗C39及NS3区单抗C7-6为包被抗体,以C39及NS3区C7-57为标记抗体的夹心ELISA检测模型,以C7为抗原,其检出灵敏度为5 ng/ml,其Cut off值为阴性对照均值±0.25.146份抗-HCV阳性样本中,11份为抗原反应阳性,225份抗-HCV阴性样本中,16份为抗原阳性,这些阳性样本经PCR检测后,23份为HCV RNA阳性.结论用单抗构建的HCV抗原检测方法分别从抗-HCV阳性及阴性样本中检测出HCV抗原反应阳性样本,并经PCR确证,表明直接从血浆样本中检测HCV抗原是可能的,这将对于HCV和基础研究及控制HCV的传播有重要意义.
作者：孟淑芳；李秀华；尹红章；李德富 刊期： 2001年第03期
目的对HIV-1感染者进行病毒分离.方法采集福建艾滋病病毒感染者肝素抗凝血10份,分离外周血单核细胞(PBMC),用共培养方法分离HIV,用P24抗原ELISA试剂盒做检测.结果分离到9株HIV-1,分离率达90%,将其中的4株感染MT4细胞,均可引起细胞融合.3株表现为一过性感染MT4细胞,属慢/低病毒,1株为持续性感染MT4细胞,已传至15代,属快/高病毒.结论成功分离到HIV-1病毒.
作者：王惠榕；严延生；陈舸 刊期： 2001年第03期
本院自1997年10月至2000年4月收治老年戊型病毒性肝炎154例,现分析如下:1 一般资料以年龄60岁以上患者为老年组,154例患者中男性105例,女性49例,高年龄84岁,平均年龄65.4岁.对照组患者年龄33～50岁,平均年龄42岁;120例中男性82例,女性38例.诊断与分型参照1995年北京第五次全国传染病与寄生虫病学术会议修订的标准.老年组诊断为急性无黄疸型3例,急性黄疸型115例,淤胆型肝炎30例,重症肝炎6例;对照组诊断为急性无黄疸型7例,急性黄疸型109例,淤胆型肝炎2例,重症肝炎2例.老年组中HBV重叠感染24例,肝炎肝硬化5例,酒精性肝病4例.对照组有HBV重叠12例,HAV重叠6例,酒精性肝病1例,肝炎肝硬化1例.2 临床表现老年组有发热69例,乏力146例,纳差137例,腹胀124例,厌油37例,恶心68例,呕吐41例,腹泻32例,皮肤瘙痒56例,肝肿大72例,脾肿大54例.对照组发热89例,乏力104例,纳差110例,腹胀83例,厌油52例,恶心82例,呕吐48例,腹泻12例,皮肤瘙痒6例,肝肿大83例,脾肿大65例.
作者：梁晓岳；周加新 刊期： 2001年第03期
目的提出慢性和重型肝炎临床诊断标准和分型意见.方法参照病毒性肝炎防治方案,对895例重型肝炎、慢性肝炎和肝炎后肝硬化临床和病理对照结果进行综合研究.结果①慢性肝炎临床仍可分为轻、中、重三型,但其PTA值相应改为正常～71、70～61、60～51;A/G值改为正常、1.5～1.3、1.2～1.0;ALT、BIL、γ球蛋白值可以保持不变;白蛋白值可以从慢性肝炎临床分型的参考指标中删除.②急性重型肝炎可分为早期(水肿变性为主型)、晚期(坏死为主型);亚急性重型可分为腹水型、昏迷型和混合型.针对既无昏迷又无腹水,PTA在60%、50%左右者可添加前期型.③亚急性和慢性重型仍可同时分为早、中、晚三期.④将亚急性重型的病程期限延长至半年.⑤慢性重型肝炎可分为Ⅰ(典型慢性肝炎型)、Ⅱ(肝硬化型)、Ⅲ型(慢性肝炎或携带者基础上急性肝衰竭型).结论原1995年的方案基本可行.
作者：郭雁宾；刘德恭；汪俊韬；常德成；孟欣；郎振为 刊期： 2001年第03期
我们主要探讨了HFRS并发严重心动过缓和治疗经验.1 临床资料 1994～1998年收治HFRS并发严重心动过缓53例,全部患者均按1997年全国HFRS学术会议标准进行诊断、分型和分期,且经HFRS病毒lgM检测证实.心电图检测窦性心律、心率小于40次/min诊断为严重心动过缓[2].其中男45例,女8例;年龄23～69岁,平均40岁;否认有高血压病、冠心病病史,经X线胸片、心脏B超检查未发现器质性心血管疾病.临床分型:轻型25例,中型16例,重例10例,危重型2例.发生于少尿期5例,移行期10例,多尿期38例.3例有阿-斯综合征发生,40例有不同程度的头昏、乏力、胸闷、心前区不适等症状,10例无明显自觉症状.血电解质测定血钠、钾、氯、钙等离子正常,肾功能正常者28例,有肾功能异常者25例.53例作阿托品激发试验或食道调搏测定.2 治疗方法 1例老年患者有阿-斯综合征发作、食道调搏提示窦房结功能不全,给予紧急安装右心室临时心脏起搏器,5 d后心率恢复正常.另2例阿-斯综合征发作及部分自觉症状明显患者给予阿托品3 mg/d和地塞米松10 mg/d,静脉滴注,维持心率60～80次/min,治疗4 d,改用阿托品片口服维持心率60～80次/min,3～7 d后减量至停药,所有患者同时给予病毒唑、平衡液等冶疗.
作者：陈华忠；陈丽娟；张剑波；王赓歌 刊期： 2001年第03期
来源于维多利亚水母(Aequorea victoria)的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)是近年来发现的一种新的报告基因,由于其具有产生荧光不需任何底物或辅助因子、可以活体观察等特点,因此在目前的基因转移、基因治疗研究中得到了广泛的应用[1].重组腺病毒伴随病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)具有安全性好、可介导外源基因长期稳定表达等特点,是目前比较理想的基因治疗载体.构建表达GFP的rAAV载体(rAAV-GFP)对于应用rAAV进行基因转移和基因治疗研究非常必要,如评估rAAV生产系统的生产效率、估计rAAV的转导效率、研究rAAV进入体内后的分布及表达情况等.
作者：伍志坚；吴小兵；曹晖；牛东滨；王宏；侯云德 刊期： 2001年第03期
目的探讨小柴胡汤(XCT)分解剂在体外抗CoxB3病毒(CVB3m)及保护细胞的作用.方法采用微量细胞培养技术和中性红摄入法,以细胞病变及细胞活性为判定药物细胞毒性及病毒增殖的指标,观察不同浓度的XCT及分解1、2号抗CVB3m的作用及对细胞活性的影响.结果低于大无毒剂量浓度的XCT和分解1号、2号对细胞活性未见明显影响,并在一定浓度范围内有促细胞生长、增强细胞活性的作用.治疗组,XCT及其分解1、2号对CVB3m增殖均有明显抑制作用,尤以分解1号作用明显,抑制率为107.6%;同等浓度下,预防治疗组药物抑病毒率明显高于治疗组,高可达128.1%;抑病毒吸附组也有明显抑病毒作用.结论通过比较XCT及其分解1、2号作用细胞与病毒的不同环节,提示XCT具有保护细胞减轻病毒感染功能及直接杀伤CVB3m的作用.
作者：王雪峰；刘芳；王永梅；魏克伦 刊期： 2001年第03期
目的观察疗效确切的抗病毒药物和免疫调节剂,叠加伍用对慢性乙型肝炎病人HBV复制和变异的影响.方法应用拉米夫定、干扰素α-2b、黄芪注射液三联叠加疗法,对慢性乙型肝炎病人进行抗病毒治疗,并与单独应用拉米夫定的抗HBV效果进行比较评价.检测HBV DNA阴转率和HBeAg-抗HBe血清转换率;血清HBV DNA浓度;HBV DNA的YMDD变异率和前C区变异率.结果 A组(叠加用药组)与B组(拉米夫定单药组)比较,HBV DNA阴转率分别在第12周、36周及48周差异有显著性(P<0.05),HBeAg阴转率在第36周、48周差异有显著性(P<0.05),抗HBe阳转率仅在第48周差异有显著性(P<0.05);两组患者血清HBV DNA浓度比较,治疗12周时降低程度差异有显著性(P<0.05),治疗第36周和48周时差异有非常显著性(P<0.01);治疗后12周,A组出现前C区BCP变异;疗后24周、36周和48周,两组均出现YMDD和前C区变异.结论与拉米夫定单独用药比较,三联叠加疗法可增加慢性乙型肝炎患者HBV DNA阴转率和HBeAg-抗HBe血清转换率,更显著降低血清HBV DNA浓度,并减少YMDD变异,故其抗HBV疗效优于拉米夫定单独用药.
作者：吴力克；刘宏；薛佩莲；吕志国；杜奎芳 刊期： 2001年第03期
因为病程超过半年即为慢性肝炎,但起病不到半年的重型病毒性肝炎,判断为急性还是慢性,有一定的困难.由于两者的临床特点及预后,有较大的差别,有必要将他们加以区别.基于以上考虑,特将302医院1997年至1999年收治的起病不到半年的,后诊断为慢性重型病毒性肝炎120例患者的临床特点进行分析,供临床医师参考.
作者：邹正升；陈菊梅；辛绍杰；邢汉前；李建宇；沈宏辉；刘艳萍 刊期： 2001年第03期
目的了解Bcl-2对HSV-1感染原代培养神经元的调节作用.方法用流式细胞术(FCM)和Western blot(WB)方法检测正常组、病毒组、山梨醇组及山梨醇加病毒组在不同时间、不同条件下Bcl-2变化情况.结果病毒组较正常组、山梨醇加病毒组较山梨醇组Bcl-2蛋白表达上调,且与病毒毒力有关.正常组随培养时间延长,Bcl-2蛋白表达含量降低.结论 HSV-1感染培养小鼠皮层神经元时,Bcl-2蛋白表达上调,阻止细胞凋亡并延长细胞寿命.
作者：王佳伟；王得新；冯子敬；王瑞金；卢炎；沈静；徐雍 刊期： 2001年第03期
1998年7月～1999年11月,我们应用腺苷蛋氨酸治疗病毒性肝炎,现将临床疗效报告如下.1 材料和方法1.1 病例选择本组病例包括急性黄疸型肝炎39例,慢性黄疸型肝炎30例,肝炎肝硬化46例,均为住院治疗的患者.男85例,女30例;年龄20～78岁(40.9±11.4)岁.诊断按1995年北京全国传染病和寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎防治方案进行.病例随机分为腺苷蛋氨酸治疗组和茵栀黄注射液,两组病例情况相近,有可比性(t检验,P均>0.05).
作者：李莉；段学章；金波；夏杰 刊期： 2001年第03期
中华实验和临床病毒学杂志
主管:实验和临床病毒学杂志
主办：中国科学技术协会
