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无血清微载体培养对永生化人肝细胞增殖及其凝血因子生成的影响

陈斌焕;门秀丽;罗杏英;李盼;娄晋宁;许诚;李宓

关键词:无血清微载体培养, 永生化人肝细胞, 凝血因子
摘要:目的 观察无血清微载体培养对永生化人肝细胞(IHH)凝血因子mRNA和蛋白表达的影响,以进一步提高生物人工肝的安全性.方法 实验分为有血清微载体培养IHH组和无血清微载体培养IHH组,分别培养0、5、10、15、20 d后观察两组细胞的增殖情况;应用RT-PCR和Western-blot方法检测两种培养方式对IHH凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ的mRNA和蛋白表达的影响.结果 经0、5、10、15、20 d培养后,镜下两组细胞同时间点细胞密度相似,细胞活力差异无统计学意义(P>0.05).RT-PCR结果显示两组细胞均能表达FⅠ、FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅧ、FⅨ、FⅩ、FⅪ的mRNA,无血清培养组mRNA表达量相对较高(P<0.05).Western-blot结果显示两组细胞均可表达以上8种凝血因子蛋白,两组细胞的FⅠ、FⅡ、FⅧ、FⅩ、FⅪ蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05),无血清培养组FⅤ、FⅦ、FⅨ的蛋白表达量相对增高(P<0.05).结论 成功建立无血清微载体培养IHH体系,且无血清微载体培养对IHH凝血因子的产生影响不大.
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    作者:张梅霞;康丽娜;李文东;满开茹;宋双芬 刊期: 2017年第04期

  • iPSC-MSCs抑制ApoE(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块形成及其机制

    目的 探究诱导性多能干细胞源性间充质干细胞(iPSC-MSCs)对高脂饲养的ApoE(-/-)小鼠的动脉粥样硬化抑制作用及其相关机制.方法 40只8周的ApoE-/-小鼠随机分为4组,每组10只:普通饲料组:给予普通饲料喂养,高脂饲料组:给予高脂饲料喂养,干细胞组:给予高脂喂养同时尾静脉注射iPSC-MSCs,PBS组:给予高脂喂养同时尾静脉注射PBS.12周后观察小鼠主动脉粥样硬化斑块形成情况、血脂水平、炎症因子水平以及Nothc1蛋白的表达情况.结果 高脂喂养后,高脂组ApoE(-/-)小鼠的斑块面积较普通饲料组明显增多,且小鼠总胆固醇(CHOL)、低密度脂蛋白(LDL)、TNF-α、IL-6分别为(32.02±2.32) mmol/L、(20.36±0.90) mmol/L、(534.30±89.51)p~ml、(32.69±1.86)pg/ml均较普通饲料组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01);注射iPSC-MSCs后斑块面积明显减小,小鼠的CHOL、LDL、TNF-α、IL-6水平分别为(24.98±1.18) mmol/L、(15.34±1.54) mmol/L、(230.6±13.31) pg/ml、(8.54±2.02) pg/ml,较高脂组明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05).且高脂组中ApoE(-/-)小鼠的Notch1蛋白水平要明显高于普通饲料组(P<0.01),iPSC-MSCs干预后Notch1蛋白表达水平要明显低于高脂组(P<0.05),PBS对于ApoE(-/-)小鼠Notch1蛋白表达无影响(P>0.05).结论 iPSC-MSC可以抑制ApoE(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块形成,可能与iPSC-MSCs可以减轻ApoE(-/-)小鼠TNF-a、IL-6等炎症因子水平,降低胆固醇含量,下调Notch1的蛋白表达有关.

    作者:石卉;梁美玲;杨至圣;尹思宇;曾武涛 刊期: 2017年第04期

  • 小儿轮状病毒感染性腹泻血清CK、CK-MB水平及其与脱水酸中毒的关系

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    作者:温娜娜;祁伯祥 刊期: 2017年第04期

  • 凝血及纤溶功能指标对妊高征的联合诊治价值

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    作者:胡彬;傅晓冬 刊期: 2017年第04期

  • 沃尔巴克氏体wPip诱导白纹伊蚊胞质不相容的研究

    目的 分析评估感染沃尔巴克氏体wPip株的白纹伊蚊(命名为GM)与广州本地白纹伊蚊(命名为GUA)和四环素去除GUA株Wolbachia感染的白纹伊蚊(命名为GT)正反杂交诱导产生胞质不相容(CI)的程度,为基于Wolbachia的蚊媒防治策略提供有应用价值的蚊株.方法 设置不同时间点,观察GM株、GUA株、GT株三种蚊株的生长发育周期,成蚊后通过三种蚊株正反杂交,血餐,放置产卵杯,收集并计数蚊卵,分析不同杂交组合的蚊卵孵化率,评估GM株的CI程度.结果 PCR检测得出GUA株携带wAlbA、wAlbB,感染率100%;GM株单感染wPip,感染率100%;GT株未携带任何Wolbachia.三种蚊虫的生殖发育周期差异无统计学意义,GUA株的蚊卵孵化率与GT株和GM株相比较,差异有统计学意义(P<0.05),GM株和GT株差异无统计学意义(P>0.05).诱导CI实验中GM(♀)×GUA(♂)、GUA(♀)×GM(♂)、GT(♀)×GM(♂)的蚊卵孵化率极低,CI强度接近100%.GM×GT具有一定的蚊卵孵化率.结论 白纹伊蚊GUA株、GM株两者携带的Wolbachia类型不同,二者杂交可产生双向CI,并且CI强度接近100%,是种群压制技术良好的候选蚊株.

    作者:徐晓晗;李永军;吴瑜;奚志勇;郑小英 刊期: 2017年第04期

  • 靶向抑制KIAA1199基因的表达对人结肠癌细胞SW620生长的影响

    目的 探讨靶向沉默KIAA1199基因的表达对人结肠癌SW620细胞生长能力的影响.方法 运用RNA干扰(shRNA)技术构建携带靶向抑制KIAA1199分子的慢病毒载体LV3-KIAA1199-shRNA并感染人结肠癌细胞株SW620为实验组(shKIAA1199),携带无义序列的对照慢病毒载体LV3-NC-shRNA为阴性对照组(shNC),未转染的细胞为空白对照组(MOCK).72 h后用荧光显微镜观察慢病毒的感染效率,RT-PCR法验证慢病毒感染后KI-AA1199 mRNA在MOCK、shNC和shKIAA1199各组细胞中的表达水平,并用嘌呤霉素筛选KIAA 1199静默和阴性对照的稳转细胞.用MTT法检测MOCK、shNC和shKIAA1199各组细胞活力,流式细胞仪分别检测三组细胞的凋亡率和细胞周期的变化.结果 携带靶向干扰KIAA1199基因的慢病毒感染人结肠癌细胞株SW620后,能有效下调KIAA1199在细胞内的表达水平并成功筛选KIAA 1199静默的SW620稳转细胞;与MOCK和shNC组比较,shKIAA1199组细胞活力减少(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),处于细胞周期中G1期的细胞数量比例明显下降(P<0.05),G2/M期细胞比例增加(P<0.05).结论 下调KIAA 1199基因的表达可抑制SW620细胞的增殖,促进该细胞的凋亡,使该肿瘤细胞的生长周期受到阻滞.

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  • 中国老年冠心病患者抑郁症状检出率的Meta分析

    目的 探讨中国老年冠心病患者抑郁症状检出率.方法 检索中国知网(CNKI)、万方数据库(WanfangData)、维普(VIP)、Pubmed及Web of Science中英文数据库,收集国内老年冠心病患者抑郁症状/情绪文献.应用STATA软件,对所提取的数据进行异质性检验,由检验结果选定随机效应模型对数据进行合并分析.结果 终纳入15篇文献,分析报告数量19个,总样本量为2 402人.老年冠心病患者抑郁症状合并检出率为48.1%(95%CI:41.2%~54.9%),男性患者检出率低于女性,且差异有统计学意义(40.2% vs.54.8%,P<0.05);轻中度患者的检出率高于重度患者,且差异有统计学意义(30.5% vs.13.8%,P<0.05);两种抑郁量表的检出率大致相同(GDS量表:47.9% vs.HAMD量表:49.3%).结论 老年冠心病患者的抑郁症状检出率存在性别和抑郁程度差异,女性患者检出率明显高于男性,轻中度抑郁症状高于重度.

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    目的 观察无血清微载体培养对永生化人肝细胞(IHH)凝血因子mRNA和蛋白表达的影响,以进一步提高生物人工肝的安全性.方法 实验分为有血清微载体培养IHH组和无血清微载体培养IHH组,分别培养0、5、10、15、20 d后观察两组细胞的增殖情况;应用RT-PCR和Western-blot方法检测两种培养方式对IHH凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ的mRNA和蛋白表达的影响.结果 经0、5、10、15、20 d培养后,镜下两组细胞同时间点细胞密度相似,细胞活力差异无统计学意义(P>0.05).RT-PCR结果显示两组细胞均能表达FⅠ、FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅧ、FⅨ、FⅩ、FⅪ的mRNA,无血清培养组mRNA表达量相对较高(P<0.05).Western-blot结果显示两组细胞均可表达以上8种凝血因子蛋白,两组细胞的FⅠ、FⅡ、FⅧ、FⅩ、FⅪ蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05),无血清培养组FⅤ、FⅦ、FⅨ的蛋白表达量相对增高(P<0.05).结论 成功建立无血清微载体培养IHH体系,且无血清微载体培养对IHH凝血因子的产生影响不大.

    作者:陈斌焕;门秀丽;罗杏英;李盼;娄晋宁;许诚;李宓 刊期: 2017年第04期

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  • 河南省2011-2015年克山病监测

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    作者:张李霞;徐景武;高平明 刊期: 2017年第04期

  • 乙型肝炎患者血清中IL-37水平变化

    目的 探讨血清白细胞介素37(IL-37)在慢性乙型肝炎(CHB)、乙型慢加急性肝衰竭(ACHBLF)和乙型肝炎后肝硬化(PHBC)中的意义.方法 分别选取2015年10月至2016年10月中山大学附属第三医院门诊和住院部就诊的CHB患者49例、ACHBLF患者20例和PHBC患者18例,健康对照组34例为本院健康志愿者,检测各组血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)、HBV-DNA、IL-37、TNFα的水平.结果 CHB、ACHBLF和PHBC组患者中,血清IL-37的表达水平明显高于对对照组,且HBeAg阳性患者血清IL-37较HBeAg阴性患者明显升高,差异均有统计学意义(P均<0.05).HBV感染者中,HBV DNA阳性患者血清IL-37明显高于HBV DNA阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05).CHB和ACHBLF组患者血清IL-37与ALT、AST、HBV DNA呈正相关(R=0.608 4,R=0.5744,R=0.649 2,P均<0.05;R=0.636 8,R=0.678 2,R=0.978 5,P均<0.05);CHB、ACHBLF和PHBC患者血清IL-37与TBil、TNFα无相关性(P>0.05).结论 CHB、ACHBLF和PHBC患者血清IL-37的表达可能与HBV DNA水平和HBeAg血清学转换有关,并能够反映CHB、PHBC患者肝脏炎症程度.IL-37可作为乙型肝炎治疗的一个新指标.

    作者:钟权涛;冉枭;张烨琼;赵琳珊;李刚 刊期: 2017年第04期

  • 可溶型DC-SIGN对LPS诱导THP-1细胞炎性应答的调控作用

    目的 探讨可溶型树突状细胞特异性的结合细胞间粘附分子的非整合素(sDC-SIGN)对脂多糖(LPS)刺激的单核细胞炎症反应的调节作用.方法 以人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1)为研究对象,分为空白组、200 ng/ml sDC-SIGN单独处理组、LPS单独刺激组、LPS刺激同时加100 ng/ml sDC-SIGN处理组和LPS刺激同时加200 ng/ml sDC-SIGN处理组,刺激后不同时间点收集上清和细胞.ELISA检测细胞上清中细胞因子含量、Q-PCR检测细胞内细胞因子的mRNA表达并利用Western blot方法检测细胞内细胞外调节蛋白激酶(ERK)和核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的活化状况.结果 不同浓度的sDC-SIGN均可抑制LPS刺激炎性细胞因子TNF-α、IL-6和IFN-α的mRNA表达和蛋白分泌,同时促进抑炎细胞因子IL-10的mRNA表达和蛋白分泌,且sDC-SIGN的抑制效果与浓度呈依赖关系;研究结果亦显示,sDC-SIGN减弱LPS刺激THP-1细胞诱导ERK和NF-κBP65的磷酸化水平.结论 sDC-SIGN蛋白对LPS诱导的单核细胞炎症应答具有负向调控作用.

    作者:李静;唐媛;周璟;李延利;左大明;陈政良 刊期: 2017年第04期

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