李惠卿；陈日炳；唐万兵
目的 利用实时荧光定量RT-PCR建立快速检测人腺病毒(HADV)、人博卡病毒(HBoV)、人偏肺病毒(HMPV)、人呼吸道合胞病毒(HRSV)等四种呼吸道病毒的方法.方法 寻找四种呼吸道病毒的相对保守序列,针对该序列分别设计4对引物对及其相应的Taqman探针,将此保守序列作为目的基因片段,使用一步法RT-PCR试剂盒建立、优化反应体系;采用10倍稀释体外转录RNA,检测建立的体系的灵敏度和重复性并建立反应体系标准曲线;通过临床样本检验体系的特异性.结果 HADV、HBoV、HMPV、HRSV四种病毒的检测灵敏度均为10 copies/μl,标准曲线的决定系数分别为:HADV R2=0.9998,HBoV R2=0.9981,HMPV R2=0.9981,HRSV R2=0.9947和0.9965,扩增效率分别为:HADV 105.08％,HBoV 107.81％,HMPV 102.08％,HRSV FAM荧光106.38％及CY5荧光107.95％.荧光RT-PCR反应体系检测体外转录的RNA的各个拷贝数浓度的变异系数均较低,对临床样本检验的特异性为100％.结论 本研究建立的实时荧光定量RT-PCR体系可快速、准确地检测人HADV、HBoV、HMPV、HRSV等四种呼吸道病毒,且重复性较好,特异性高.
作者：向蕾；陈仕菊；王昕；吕星；陆家海；房师松 刊期： 2014年第04期
目的 分别构建带有绿色荧光GFP标签和带有FLAG标签的细胞珠蛋白(CYGB)真核表达载体,观察其在人肝星状细胞(LX-2)的表达定位情况,探讨细胞珠蛋白经不同载体介导表达的定位差异.方法 提取人肝癌细胞(HepG2)总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得CYGB的cDNA,以cDNA为模板采用PCR法扩增得到CYGB编码序列.将其酶切后分别连接至带有GFP标签和FLAG标签的载体上,酶切与测序鉴定阳性克隆.随后将重组质粒分别瞬时转染LX-2细胞,Western blot鉴定表达情况.利用细胞免疫荧光定位,在荧光显微镜下观察两组定位差异.结果 双酶切和测序鉴定表明pEGFP-N1-CYGB和pcDNA3.0-CYGB-FLAG真核表达载体构建成功;经Western blot鉴定,转染的两个载体都能够在LX-2细胞中表达融合蛋白;通过荧光显微镜发现,pEGFP-N1-CYGB和pcDNA3.0-CYGB-FLAG介导的表达产物分别定位在整个细胞和细胞质中.结论 可能由于GFP分子量大等多种原因,导致带GFP标签的融合蛋白定位与带FLAG标签的定位不同,带FLAG标签的融合蛋白定位结果更加可信.
作者：邹珊珊；王萍；魏威；李珍；董文其 刊期： 2014年第04期
目的 探讨自然杀伤细胞(NK)在急性肝衰竭进展过程中的作用.方法 40只Balb/c小鼠随机分为实验组和对照组,实验组腹腔注射四氯化碳诱导急性肝衰竭,对照组则注射橄榄油.分离小鼠外周血、肝脏、脾脏的淋巴细胞,用流式细胞仪检测其NK细胞的比例及相关受体表达情况.结果 急性肝衰竭小鼠肝脏NK细胞比例较对照组明显升高,差异有统计学意义[(37.2±2.8)％vs(15.3±1.5)％,P=0.0004],外周血以及脾脏中NK细胞比例均较对照组下降.急性肝衰竭小鼠肝脏活化性受体NKP46较抑制性受体NKG2A表达升高更明显,差异有统计学意义[(18.7±1.5)％vs(4.9±2.3)％;t=3.95,P=0.016)].结论 肝脏局部NK细胞在药物诱导的急性肝衰竭中发挥重要的作用.
作者：熊静；翁伟镇；陈俊峰；曹会娟；曾慧敏；高志良；林炳亮 刊期： 2014年第04期
目的 探讨胰岛素强化治疗对初诊2型糖尿病(T2DM)患者胰腺β细胞及血管内皮细胞功能的影响.方法 选取初诊T2DM患者196例,随机分为观察组(n=98)与对照组(n=98).对照组给予口服降糖药治疗,观察组给予胰岛素强化治疗,即于早、中、晚餐15 min前皮下注射门冬胰岛素,睡前皮下注射甘精胰岛素,总疗程均为8周.于治疗前后观察两组患者的血糖、HbA1c和胰岛素水平,计算胰腺β细胞功能指数(Homa-β)和胰岛素抵抗指数(Homa-IR),检测血清一氧化氮(NO)和内皮素(ET),超声测定内皮依赖性血管舒张功能(FMEDD)和非内皮依赖性舒张功能(NIEID).结果 治疗后,两组FBG、2hPPG、HbA1c、Homa-IR、ET水平均降低,Homa-β、NO均增高(P＜0.05或P＜0.01);且观见察组FBG、2hPPG、HbA1c、Homa-IR、ET水平均低于对照组,Homa-β、NO、FMEDD高于对照组(P＜0.05),血糖达标时间少于对照组(P＜0.05).结论 短期速效胰岛素联合长效胰岛素强化治疗初诊T2DM有效控制了血糖水平,保护了胰腺β细胞及血管内皮细胞功能,对控制T2DM进展和并发症的发生具有积极的作用.
作者：周卫东；任伟；韩金荣；刘慕华 刊期： 2014年第04期
目的 掌握重庆市布鲁氏菌病疫情及流行趋势,为布鲁氏菌病防治策略提供依据.方法 选择畜牧业发达,畜牧饲养量较大的区域作为监测点对重点职业人群进行病情监测;收集重庆市畜牧部门2008-2012年期间的畜间感染布鲁氏菌的资料.人群和动物血样均采用试管凝集试验进行检测.结果 2005-2012年共主动搜索重点职业人群18 521人,未发现符合布鲁氏菌病诊断标准的临床症状、体征的病例;重点人群采集血清标本3 727份,血清学阳性率为0.94％;以2011、2012年血清阳性率较高,随着年份的增加,阳性率呈上升趋势(x2趋势=14.04,P＜0.01).男性血清学阳性率(1.16％)高于女性(0.38％)(x2=4.90,P＜0.05);阳性者以青壮年为主;不同职业间感染率比较,差异有统计学意义(x2=42.86,P＜0.01),以奶牛饲养员高(2.31％).共调查68 181头牲畜,血清阳性率为0.83％,均为奶牛,以2012年为高(1.83％),2009年低(0.01％);随着年份的增加,畜间布鲁氏菌病感染率呈上升趋势(x2趋势=453.49,P＜0.01).结论 重庆市人间和畜间布鲁氏菌病感染呈上升趋势,奶牛是人间布鲁氏菌病感染的主要传染源,应加强牲畜检疫和人群监测,及时发现疫情.
作者：黄文利；黄诚；吴成果；李心术 刊期： 2014年第04期
目的 研究近年来东莞市不明原因夜间睡眠猝死综合征(SUNDS)的流行病学特征,探寻有关的病因学线索.方法 收集东莞市2007-2013年SUNDS死亡病例,并在资料库中按年龄、性别和死亡时间相接近、1∶1匹配死因明确者作为对照组,同时对两组病例按年龄、性别、籍贯、死亡月份、死亡时刻及职业划分亚组,对病例资料数据进行统计分析,研究该病的流行病学特征.结果 2007-2013年东莞市SUNDS死亡病例共计565例;男女性别比为14.7∶1;2007-2013年各年发病率分别为0.68/10万、0.79/10万、0.60/10万、1.24/10万、1.20/10万、1.65/10万、0.93/10万;年龄分布在17～55岁,中位年龄为35岁,与全死因组年龄分布差异有统计学意义;发病例数高峰出现在3-6月份,低在10-12月份,与当地全年月平均气温变化趋势存在相关性;死亡高峰时段为凌晨0-1点,例数较低时段(凌晨3-4点)高出20多倍;病例籍贯来源多为湖南省(93例),有发病“聚集性”的是云南省(病例组/对照组4.25倍)、香港(3.67倍)及海南(2倍);SUNDS病例主要发生于劳动强度大、文化程度低的工厂一线工人、保安、清洁员等人群中.结论 近年来东莞市SUNDS的年均发病率未见下降,提示发病的高危因素依然存在,须作进一步流行病学调查查明高危因素.
作者：余彬彬；翟李俊；徐伦武；郑金祥；黄二文；唐双柏；刘超；成建定 刊期： 2014年第04期
当今神经系统感染性疾病发病呈现散发趋势,但神经型布氏杆菌病有增多趋势.其表现多样,以脑膜炎、脑膜脑炎、脊髓炎和脊髓病多见,而以脊髓压迫症发病的还未见报道.回顾性分析保定市第一医院2013年3日诊断明确的1例神经布氏杆菌病的临床表现、辅助检查结果以及诊断与治疗经过,并结合文献分析其发病特点.
作者：赵智江；高凤国；贾思琪 刊期： 2014年第04期
目的 分析2007-2012年东莞市不同文化程度的无偿献血者的5项血液检测结果,了解无偿献血者血液感染情况,从中找出献血的主体人群,为招募低危献血者提供依据.方法 收集2007年1月至2012年12月的无偿献血者资料(文化程度)及其血液ALT、HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP检测结果,分析两者间的关系.结果 高中和初中文化程度的献血者,约占总体人群的66.35％(229 443/345 809).不同文化程度的血液检测指标的总阳性率差异有统计学意义(x2=338.27,P＜0.05),以“大学本科及以上”及“不详”为低阳性率组,随着文化程度的降低,血液检测指标的阳性率有逐渐增高的趋势.结论 重视血源招募工作,招募的对象集中在学历相对较高的人群,同时尽量组织动员在校大学生积极参与无偿献血.
作者：费亚涛；黄志森；王德文 刊期： 2014年第04期
目的 应用激光扫描共聚焦显微镜三维重建技术观察1-磷酸鞘氨醇(S1P)刺激下S1P受体2(S1PR2)的表达变化,并探讨共聚焦三维重建技术与普通单层扫描技术在生物组织功能和形态学研究中的应用价值.方法 S1P(10μmol/L)刺激脐静脉内皮细胞(HUVECs)6 h,Western blot检测S1PR2的表达变化;对细胞进行免疫荧光染色后,采用激光扫描共聚焦显微镜分别进行多层层切扫描和单层扫描,层切扫描之后对图像进行三维重建,比较两种技术的优劣.结果 Western blot结果显示S1P刺激6h后S1PR2表达显著性增高(P＜0.05).荧光图像显示,单层扫描时S1P 6 h组荧光强度与对照组比较差异无统计学意义;而层切之后三维重建图像中,S1P刺激后S1PR2荧光强度显著高于正常对照组和单层扫描所得图像,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 激光扫描共聚焦显微镜三维重建技术,可以获得三维重构图像,并且具有三维立体及图像信息量更全的特点,更能客观的表现出整个细胞特定分子荧光强度的变化.
作者：萧艳；王立群；黄巧冰 刊期： 2014年第04期
目的 探讨外源性细胞因子IL-15、IL-21对HIV-1感染者T淋巴细胞增殖的影响.方法 研究对象为24例已接受高效抗逆转录病毒治疗(HAART)及25例未经HAART的HIV-1感染者(HAART组及HAART-na(i)ve组).以HIV-1P24编码区的氨基酸序列人工合成的12个肽段组成的肽段库作为特异性抗原表位,另添加外源性细胞因子IL-15或者IL-21,对两组研究对象的外周血单个核细胞(PBMC)进行体外刺激培养,采用羧乙基锗倍半氧化物(CFSE)对PBMC进行示踪染色;流式细胞仪检测刺激后的淋巴细胞的增殖情况.结果 HAART-na(i)ve组和HAART组中CD4+CD8+T细胞的增殖百分率,两组的组内比较可见,IL-21刺激的实验组(IL-21组)和IL-15刺激的实验组(IL-15组)均显著高于相应对照组(P均为0.000);HAART组CD8+T细胞增殖水平,IL-15组及IL-21组均明显高于HAART-na(i)ve组(Z=-2.394,P=0.017;Z=-2.130,P=0.033);HAART组与HAART-na(i)ve组中实验分组IL-15组及IL-21组CD4+细胞增殖情况比较差异均无统计学意义.结论 外源性IL-15、IL-21均能促进HIV-1感染者HARRT治疗前及治疗后CD4+及CD8+T淋巴细胞的增殖;且两种因子对CD8+T淋巴细胞增殖的作用HAART治疗后大于HAART治疗前.
作者：平岖；姚细安；李玉枝；赵令斋；唐漾波 刊期： 2014年第04期
目的 探讨孟鲁司特联合沙丁胺醇治疗咳嗽变异性哮喘患者的临床疗效.方法 回顾深圳市龙岗区坪地人民医院2011年6月至2013年6月间收治的192例咳嗽变异性哮喘小儿病例.按照随机分组法分为观察组(n=103)和对照组(n=89).对照组患者采用沙丁胺醇进行治疗,一天2次;观察组患者在对照组的基础上加用孟鲁司特进行治疗,每晚1次,口服,每次5 mg.对两组患者的治疗效果、咳嗽缓解时间、预后复发率以及不良反应等进行统计和分析.结果 观察组患者治疗的总有效率为92.2％ (95/103),高于对照组的77.5％ (69/89),差异有统计学意义(x2=5.381,P＜0.05).观察组患者咳嗽缓解时间和半年复发率分别为(6.3±0.6)d和4.8％(5/103),均显著低于对照组的(10.2±1.1)d和11.2％(10/89),差异有统计学意义(P＜0.05).两组患者在临床治疗中均无明显不良反应.结论 孟鲁司特联合沙丁胺醇在临床上能有效治疗咳嗽变异性哮喘,具有安全可控、快速有效和复发率低的优点,值得推广.
作者：罗海涛 刊期： 2014年第04期
目的 探讨冠心病患者血清降钙素原(PCT)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)表达量与冠状动脉粥样硬化病变程度的相关性.方法 118例冠状动脉造影术患者按造影结果分为冠心病组(n=89)和正常对照组(n=29),随即,采用改良Censini评分方法将冠心病组患者分为＜30分组(n=24)、30～60分组(n=37)和＞60分组(n=28),分别检测各组患者PCT和hs-CRP的含量.结果 冠心病患者PCT和hs-CRP含量均显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);同时,冠心病患者PCT和hs-CRP含量随Gensini评分增加而逐渐上升,相关系数分别为0.88和0.90,呈正相关性(P＜0.05).结论 PCT、hs-CRP的含量与冠状动脉粥样硬化病变程度呈正相关,联合检测PCT和hs-CRP的含量有助于早期诊断冠状动脉粥样硬化引起的冠心病.
作者：刘志祥；谢飞；吴玉竹；李文兵 刊期： 2014年第04期
目的 研究热休克处理小鼠肥大细胞瘤细胞P815对细胞Qa-1表达变化的影响.方法 将体外培养的小鼠肥大细胞瘤细胞P815分为四组,热休克组(共三组)及对照组,至于43℃水浴箱中0.5、1、1.5 h,然后恢复37℃、5％CO2恒温培养,4h后收集细胞,经RT-PCR技术及流式细胞技术,对Qa-1在RNA水平的变化和细胞表面表达进行分析.结果 热休克处理的三组细胞其Qa-1的表达均显著高于对照组,其中1h组升高明显;经热休克处理的靶细胞表面Qa-1表达0.5、1、1.5 h分别为(11.22±2.49)％、(14.22±3.32)％、(12.71±2.28)％,均高于对照组相应时间的(7.99±1.28)％、(7.84±2.28)％、(8.01±3.32)％,差异均有统计学意义(P＜0.05).其中1h引起Qa-1表达升高明显.结论 热休克可引起小鼠肥大细胞瘤细胞P815 Qa-1表达水平升高,热休克1 h Qa-1表达水平升高明显.
作者：程子禾；熊伟；李敏；刘甜甜 刊期： 2014年第04期
目的 调查广州北部(从化区、增城区、龙门县、新丰县)山区淡水螺、淡水蟹感染并殖吸虫尾蚴、囊蚴的情况,了解并殖吸虫流行分布状况.方法 采集山溪螺蛳、溪蟹,检查并殖吸虫尾蚴、囊蚴,鉴定并殖吸虫虫种.结果 从化区良口镇螺蛳尾蚴感染率0.32％,螺种为放逸短沟蜷;溪蟹囊蚴感染率100％,蟹种为平和华溪蟹.吕田镇螺蛳尾蚴感染率0.32％,螺种为拟钉螺;溪蟹感染率为36.73％,蟹种为平远南海溪蟹.龙门县南昆山尾蚴感染率0.15％,螺种为放逸短沟蜷;溪蟹囊蚴感染率为100％,溪种为平和华溪蟹.增城区、新丰县各调查点收集的螺蛳、溪蟹均未检测到尾蚴及囊蚴.结论 广州北部山区从化区良口镇、南昆山为卫氏并殖吸虫超高度疫源地(Ⅰ级).吕田镇为斯氏狸殖吸虫中度疫源地(Ⅲ级).
作者：赵太平；陆予云；沈浩贤；龙小山；魏桂芬；罗健留 刊期： 2014年第04期
目的 克隆表达恶性疟原虫网状细胞结合蛋白同源体5(PfRh5)F2片段,并评价其抗原性.方法 PCR扩增目的基因片段,克隆到表达载体pTGub21b中,构建PfRh5F2/pTGub21b原核表达载体.IPTG诱导表达目的基因,SDS-PAGE电泳分析表达产物,并用Western blot检测其抗原性.结果 成功构建了PfRh5F2/pTGub21b原核表达系统,并在大肠杆菌中可溶性高效表达,表达产物能被恶性疟患者血清识别,而重组抗原免疫鼠血清也能识别恶性疟患者血样中的相应抗原.结论 恶性疟原虫PfRh5 F2片段在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性和免疫原性.
作者：程莎莎；郝文波；罗树红；廖小青 刊期： 2014年第04期
目的 制备抗肺炎链球菌(S.pn)丝氨酸-苏氨酸激酶(STKP)基因的特定区域的免疫血清,为疫苗研究奠定基础.方法 PCR扩增S.pn STKP蛋白C末端314个氨基酸区域的基因,将其克隆入pMD19-T载体,将鉴定正确的STKP基因从pMD19-T载体亚克隆至PET-32a(+)原核表达载体进行诱导表达;获得的可溶性蛋白经Ni2+柱纯化及Western blot鉴定后,免疫家兔制备抗STKP血清,间接EHSA鉴定抗体效价,Western blot鉴定免疫血清特异性.结果 成功将STKP基因特定序列克隆入PET-32a(+)原核表达载体并诱导表达,形式以可溶性表达为主,经Ni2+柱层析法纯化STKP,纯度达92％,免疫家兔制备出STKP免疫血清,间接ELISA检测抗体效价为1∶100 000,Western blot证实免疫血清能与目的蛋白特异结合.结论 获得STKP重组蛋白及免疫血清,重组表达产物具有免疫原性,为S.pn多价联合蛋白疫苗研制奠定了基础.
作者：刘美玲；李有强；陈东成；屈平华；张轩；张汉运；陈兴文 刊期： 2014年第04期
目的 分析玉林市2005-2012年非结防机构网络直报肺结核患者转诊、追踪及到位后活动性与涂阳肺结核检出情况及对发现活动性/涂阳患者的贡献率,为进一步做好该项工作提供科学依据.方法 对玉林市网络报告患者转诊追踪工作相关数据进行分析.结果 玉林市非结核防治机构网络直报肺结核及疑似患者转诊到位率、追踪到位率及总体到位率呈逐年上升趋势(P＜0.001);到位后活动性肺结核及涂阳肺结核检出率分别为59.01％(16 725/28 345)和25.87％(7 333/28 345),未到位患者未到位原因主要是外出,非结核防治机构对发现活动性和涂阳肺结核患者的贡献率为53.13％和50.47％.结论 玉林市肺结核及疑似患者报告、转诊和追踪工作取得显著成效.
作者：陈晓 刊期： 2014年第04期
目的 探讨2,4-二硝基苯肼(DNPH)柱前衍生高效液相色谱法测定水产品及水发产品中甲醛的方法.方法 采用超声法提取样品,提取液于60℃水浴中衍生20 min,用环己烷提取,后于液相色谱仪进行分析定量.结果 甲醛在0～20 μg/ml浓度范围内,标准曲线线性关系良好,相关系数r为0.9998,相对标准偏差为0.9％～4.5％,加标回收率为93.00％～99.16％;检测结果与国标方法比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 本方法具有灵敏度高、选择性好、精密度和准确度好等优点,而且简便、快捷,适合分析大批量样品.
作者：刘昶 刊期： 2014年第04期
刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)导致脑弓形虫病或全身其他器官的损害.其中,肺损害的发生率排在弓形虫病脑外器官损害的第二或第三位.肺弓形虫病临床表现严重,且病程发展快,病死率高.本文就肺弓形虫病的感染方式、高发人群、临床症状、免疫病理机制及诊断方法做一综述.
作者：刘晋锋；吕芳丽 刊期： 2014年第04期
目的 探究miR-143、miR-145及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在人冠状动脉粥样硬化斑块中的表达情况.方法 采用12例冠状动脉粥样硬化解剖病例的硬化冠状动脉及斑块和13例非心源性死因病例的冠状动脉血管的石蜡包埋组织,提取组织RNA,逆转录后运用qPCR技术检测miR-143、miR-145在病变冠脉组织和正常冠脉组织中的表达情况,同时运用免疫组织化学染色技术半定量AngⅡ在病变冠脉组织和正常冠脉组织中的表达情况.结果 冠状动脉粥样硬化组中miR-143、miR-145的表达量分别为(1.16±0.36)、(3.22±1.30),较对照组的(5.21±2.86)、(13.09±6.06)下降,差异均有统计学意义(P＜0.01).AngⅡ主要表达于粥样硬化冠状动脉的巨噬细胞及成纤维细胞中,其表达量在冠状动脉粥样硬化组中为(7.09±0.71),较对照组的(42.75±29.59)下降,差异有统计学意义(P＜0.01).对照组不同死因病例间miR-143、miR-145和AngⅡ表达差异无统计学意义.结论 miR-143、miR-145及AngⅡ在人冠状动脉粥样硬化斑块中表达下调.
作者：郝理；游盛中；马素华；张东川；罗斌；权力 刊期： 2014年第04期
热带医学杂志
主管:广东省科学技术协会
主办：广东省寄生虫学会 中华预防医学会
