邓远燕；张泉；张烨；查道刚
目的 在原核系统中表达全长HIV-1 p24抗原,对其抗原性进行鉴定,探讨其对HIV早期诊断的价值.方法 利用PCR技术从含有HIV-1 gag基因质粒PTM-1中扩增p24蛋白基因,通过酶切消化后连接到表达载体pET28a上,转化大肠埃希菌BL21 (DE3),经IPTG诱导,表达p24抗原.通过ELISA和Western blotting (WB)法检测表达产物的免疫反应活性及特异性.结果 PCR产物和构建的重组质粒pET28a-p24经双酶切均显示约690 bpDNA片段,与预期p24抗原全基因片段大小一致.SDS-PAGE电泳可见纯化蛋白为1条相对分子量约26×103 Mr的外源表达蛋白带,与预期大小一致.ELISA及WB实验证实表达的p24抗原具有较好的活性及特异性.时间分辨荧光免疫双抗体夹心法显示与市售p24抗原线性一致.结论 构建了HIV-1 p24/pET28a原核高效表达系统,表达产物与市售的p24抗原具有相似的抗原性.
作者：刘华琴；李鹏；吴英松；李珍；魏威；董文其；王萍 刊期： 2013年第04期
目的 探讨霉酚酸衍生物(JU95-07B)对人外周血单个核细胞(PBMC)产生IL-17和IFN-γ的抑制作用,为临床治疗炎症及自身免疫性疾病提供依据.方法 用anti-CD3+anti-CD28刺激PBMC,酶联免疫吸附法(ELISA)检测加入不同浓度JU95-07B及作用不同时间点的IL-17和IFN-γ水平.用流式细胞术(FCM)检测JU95-07B对T细胞不同亚群表达IL-17和IFN-γ的影响.用RT-PCR法测定JU95-07B对IL-17和IFN-γ mRNA的作用.结果 JU95-07B对anti-CD3 +anti-CD28诱导PBMC产生的IL-17和IFN-γ均呈剂量依赖性的抑制,与作用时间有关,早期无明显的抑制现象,12h后开始出现有统计学意义的抑制效果(P＜0.05),培养时间越长抑制效果越明显.JU95-07B可明显降低CD4+和CD8+T细胞产生IL-17和IFN-γ的比例,对IL-17的抑制率高于IFN-γ.此外,JU95-07B抑制IL-17和IFN-γmRNA的表达.结论 JU95-07B能有效抑制T细胞产生IL-17和IFN-γ.
作者：唐泽丽；黄河；江玉霞；张燕楠；杨滨燕；吴长有 刊期： 2013年第04期
目的 研究外膜蛋白CarO的表达、序列突变与鲍曼不动杆菌对亚胺培南敏感性的关系.方法 收集鲍曼不动杆菌8株,E-test鉴定亚胺培南敏感性;用脉冲场凝胶电泳(PFGE)鉴定菌株同源性；PCR法检验CarO基因,并进行序列分析;Real time PCR法检验CarO mRNA的表达;SDS电泳法比较CarO蛋白的表达.结果 本实验发现4株耐药菌株CarO序列同源性高；所有菌株中均存在CarO基因,但亚胺培南敏感及耐药菌株基因序列相似性仅87％,敏感菌株与耐药菌株均有CarO mRNA基因表达,且两者表达水平差异无统计学意义；SDS电泳也发现其基因序列不同者CarO蛋白分子量不同.结论 CarO基因序列改变可能与鲍曼不动杆菌对亚胺培南敏感性的变化有关.
作者：范敏；梁家隐；冼盈；李志涛；孙希；吴忠道；张扣兴 刊期： 2013年第04期
目的 了解深圳市手足口病的流行特征,并为制定预防控制措施提供依据.方法 对2010-2011年深圳市报告的手足口病病例及暴发疫情进行描述性流行病学分析.结果 2010-2011年深圳市共报告手足口病48 102例,年均发病率为234.32/10万；发病主要集中在4-7月,占总病例数的56.89％；全市8个区均有病例报告,发病率高的为龙岗区(558.68/10万),低为宝安区(59.67/10万),各地区间发病率差异有统计学意义(P＜0.001)；发病主要集中在6岁以下年龄组,占总病例数的94.19％；以散居儿童为主,占总病例数的75.05％；男性发病率高于女性(P＜0.001).245名重症病例中,1～4岁年龄组发病数较多,占重症病例总数的88.57％；仍以散居儿童为主,占重症病例总数的86.12％；病原学监测结果显示,病例主要以EV71感染为主.两年间,共报告暴发疫情189起,报告高峰期出现在4-6月,幼托机构是高发场所.结论 深圳市手足口病的发生存在明显的年龄、性别、职业和季节差异,应采取有效的预防控制措施降低发病.
作者：李媛；牟瑾；廖玉学；路滟；谢旭；梅树江；周琳 刊期： 2013年第04期
以问题为基础的教学(PBL)模式具有良好教学效果,是一种能够适应当前医学模式转变的特色教学模式.本文通过将PBL模式应用于病原生物学教学的实践,对此模式所涉及的教学准备、实施及效果等问题进行了初步探讨,并对当前PBL应用于病原生物学教学所存在的问题做了分析.
作者：吴琛耘；张湘燕；吴健桦；徐大刚；王兆军 刊期： 2013年第04期
目的 研究水通道蛋白4(AQP-4)在广州管圆线虫感染大小鼠脑组织中的表达水平及其与脑水肿的关系.方法 在不同感染时期(0d、7d、14 d、21 d),用Realtime PCR法检测大鼠感染不同时间组,及米诺环素给药+感染组和单纯感染组小鼠脑组织中AQP-4的表达水平,测定各组小鼠脑组织含水量.结果 大鼠感染广州管圆线虫后脑组织中AQP-4的表达水平在7d时有升高,而其他时间都无明显变化.小鼠感染广州管圆线虫后,脑组织中的AQP-4水平明显升高,且成持续升高状态.用米诺环素抑制小胶质细胞后,给药组小鼠脑内AQP-4的水平明显下降,脑组织含水量也低于单纯感染组.结论 AQP-4与广州管圆线虫感染所致的小鼠脑水肿密切相关,小胶质细胞可能是参与调节这一过程的重要细胞.
作者：魏洁；陈炜；吴峰；梁锦仪；郑焕钦；孙希；吕志跃；张萍；吴忠道 刊期： 2013年第04期
目的 掌握本地区腹泻病的菌群分布和变化,为食源性疾病主动监测体系提供必要的监测数据.方法 分析2010-2011年龙岗区2个腹泻病监测哨点患者的粪便标本,检测沙门菌(SM)、志贺菌(SH)、霍乱弧菌(VC)、副溶血弧菌(VP)和致泻性大肠埃希菌(DEC)等病原菌结果.结果 3 271份粪便标本中,检出病原菌共797株,阳性率为24.37％,腹泻病原菌占前3位的分别为DEC、VP和SM.O25、O1和O164是DEC主要流行血清型,VP优势血清型为O3:K6和O4:K8,SM的优势血清型为肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌.VP和SM有明显季节性分布特点,主要在6-9月份阳性检出;沙门菌10岁以下儿童感染率高,VP和SM不同年龄组间差异有统计学意义(P=0.000；P=0.007).结论 本地区腹泻病原菌以DEC、VP和SM为主,肠炎沙门菌为SM主要流行血清型,初步揭示了深圳市龙岗区细菌性腹泻的病原谱及流行病学分布特征.
作者：叶晓涛；李迎惠；陈日炳；张旭；马焕丽；何国坚 刊期： 2013年第04期
目的 建立快速的检测方法对腹泻患者中的小肠结肠炎耶尔森菌进行快速检测.方法 利用析因设计试验方法建立并优化检测小肠结肠炎耶尔森菌的环介导等温扩增技术(LAMP),并与普通PCR法对临床腹泻标本进行检测比较.结果 析因设计试验确定LAMP佳反应体系:Mg2++为2.0 mmol,内引物FIP/BIP为1.6 μmol,dNTPs为1.6 mmol,时间为60 min,反应温度为63℃.对12种细菌进行LAMP扩增,仅小肠结肠炎耶尔森菌获得阳性扩增结果,小肠结肠炎耶尔森菌基因组DNA和纯培养物的检测灵敏度分别为38.05 fg和15 CFU/ml.对腹泻样本进行直接检测,检测限为150 CFU/g.539例腹泻患者粪便标本中,LAMP成功检出13例样本中含有小肠结肠炎耶尔森菌,普通PCR检出11例,灵敏度为100％,特异度为99.62％.结论 本方法检测小肠结肠炎耶尔森菌特异性强、灵敏度高,且操作简单、快速、检测成本低,适合基层单位及现场应用.
作者：罗敏红；胡婷婷；冀新凤；李美青；黄燕惠；陈慧芳；姚月娴；陈清；俞守义 刊期： 2013年第04期
目的 探讨高糖环境对大鼠肾小球系膜细胞增殖、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达及NF-κB活化的影响.方法 将体外培养大鼠肾小球系膜细胞(MC)分为4组:正常对照组(含5.6 mmol/L葡萄糖)、高糖1组(含15 mmol/L葡萄糖)、高糖2组(含20 mmol/L葡萄糖)和高糖3组(含25 mmol/L葡萄糖).MTT法检测细胞的增殖情况,ELISA法检测MCP-1的表达,Western blotting法检测IκBα以反映NF-κB的活性.结果 与正常对照组比较,高糖环境下24 h后细胞增殖明显,MCP-1表达明显增强(P＜0.01).高糖刺激30 min后,NF-κB结合蛋白IκBα明显降解,提示高糖可诱导MC NF-κB活化.结论 高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞的增殖及炎症因子MCP-1的高表达可能是通过NF-κB的活化来实现的.
作者：贾倩倩；王建成；赵艳；陈斯佳；龙海波 刊期： 2013年第04期
目的 评估江门市各辖市区脊髓灰质炎野病毒输入与传播风险,科学指导制定预防控制策略.方法 根据输入风险、AFP病例监测、人群免疫情况等指标综合分析评价,评估江门市各市区脊灰野病毒输入与传播的风险.结果 2009-2011年报告35例AFP病例,报告后48 h内调查率为97.14％；各市区脊灰疫苗接种率和脊灰疫苗快速评估接种率均≥95％;2010年随机抽查56人进行脊灰抗体检测,脊灰Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型IgG抗体阳性率分别为91.07％、94.64％、92.86％.3年麻疹平均发病率为0.51/10万,高的是蓬江区2.21/10万,其他市区均＜1/10万；开平市、江海区风险评估的综合评分为45、42分,为高风险地区.结论 江门市存在脊灰野毒株输入的风险,各市区尤其是高风险市区应完善AFP病例监测工作.
作者：黄国；叶秀华；陈成连 刊期： 2013年第04期
目的 建立登革病毒2型(DENV-2)前膜蛋白(prM)的原核稳定表达系统,并制备prM多克隆抗体,研究登革病毒特异性prM抗体的中和作用及抗体依赖性感染增强作用(ADE).方法 应用大肠杆菌表达系统表达全长DENV-2 prM蛋白,经电洗脱法纯化重组蛋白,免疫家兔,制备兔抗prM蛋白多抗；应用空斑减数中和试验(PRNT)和流式细胞术(FCM)分别检测prM兔多克隆抗体的中和作用和ADE效应.结果 重组prM蛋白在原核系统可获得高效表达,prM蛋白的表达量占大肠杆菌全菌蛋白的15％左右；其免疫血清经Western blotting法证实为登革病毒特异性prM多克隆抗体,用ELISA法检测效价为1:800 000.PRNT表明,prM抗体对成熟和不成熟DENV-2感染C6/36细胞中和作用有限,大中和程度分别为49.84％和50.22％；FCM结果表明,prM抗体能在较大的抗体稀释度范围(10-2～10-6)增强成熟和不成熟DENV-2感染,且在10-3稀释度时达到高峰.结论 重组DENV-2prM蛋白有很强的免疫原性,其诱生的prM抗体对登革病毒仅有较弱的中和活性,但却呈现出较强的ADE作用,揭示prM抗体是一种感染增强性抗体.
作者：冯俊杰；罗雅艳；周俊梅；方丹云；曾谷城；晏辉钧；江丽芳 刊期： 2013年第04期
目的 了解乙肝疫苗免疫失败者的HBV S基因的变异情况.方法 采用流行病学、ELISA与分子生物学方法,筛选乙肝疫苗免疫失败者.采用聚合酶链反应(PCR)、基因克隆和测序的方法,对乙肝疫苗免疫失败者的HBVS基因进行分析,并与HBV参考序列S基因进行比较,分析其变异情况.结果 从2 564份受检者中,筛选出2例(0.78‰)HBsAg(-)/HBeAg (+)/HBcAb(+)乙肝疫苗免疫失败者(HBs1、HBs2),经HBV DNA荧光定量PCR检测和HBV S基因PCR扩增,结果均为阳性,为B基因型.其S基因序列与参考序列(JX429908.1)相比,同源性为98.57％,且乙肝疫苗免疫失败者S基因在第363位和第467位分别南野生型的C变为A、G变为A,HBsAg 121位和156位氨基酸C和W缺失.结论 乙肝疫苗免疫失败者HBV S基因上第363位和第467位碱基存在错义突变(C→A和G→A),改变了HBsAg的结构和抗原性.
作者：蒋海青；朱平安；谢锦尧；金娴；肖娜；樊春卉；赵毅 刊期： 2013年第04期
目的 对广州市及周边地区手足口病(HFMD)的流行病学和病原学特征进行分析.方法 收集2011年广州市及其周边地区手足口病病例968份,采用荧光定量RT-PCR方法对采集的标本进行肠道病毒(EV)核酸检测,将其分为肠道病71型(EV71)、萨克奇病毒A组16型(CA16)、非EV71、CA16阳性肠道病毒(N)三类,分离部分EV71毒株并进行全基因测序和分析.并用生物信息学软件进行病毒基因特征分析,经在线比对后进行EV型别鉴定.结果 分析显示2011年广州市及周边地区HFMD的高发年龄段为年龄小于4岁的儿童,1～2岁婴幼儿发病率高；5-7月为发病高峰期；EV71和CA16为HFMD的主要病原；但有24.79％的病例由其他肠道病毒(EV)型别引起.基于全基因序列构建种系发生进化树显示,所分离的6株EV71毒株与C4亚型毒株具有近的亲缘性和高的同源性.结论 2011年EV71和CA16为广州市及周边地区流行的主要病原,EV71病毒株分离株属于C4型,且遗传性较稳定,但存在部分其他型别EV引起HFMD.
作者：关琳琳；张定梅；徐霖；汪杨；罗燕芬；郑芸；曹开源 刊期： 2013年第04期
目的 建立大鼠肝缺血再灌注模型,探讨该模型的制备及评价方法.方法 大鼠麻醉、开腹后用血管夹钳夹支配肝左叶、中叶的肝蒂,造成70％肝脏缺血,1h后放开血管夹恢复血供造成缺血再灌注损伤.根据再灌注时间不同分为2h组、4h组和24 h组,假手术组不进行钳夹肝蒂操作,观察各组肝脏生化指标及组织形态学变化.结果 整个手术过程大鼠均能耐受.与假手术组比较,缺血再灌注2、4、24 h组大鼠血清中谷丙转氨酸(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肝组织匀浆MDA水平以及肝脏病理组织学Suzuki's评分均明显升高,且在4h组达到高(P＜0.05).结论 缺血1h后再灌注4h可制备佳的肝缺血再灌注模型.该模型操作简单,为临床肝缺血再灌注损伤研究提供了基础.
作者：孙萍萍；陈杰；袁芳；黎曙霞 刊期： 2013年第04期
目的 通过研究旋毛虫感染鼠在过敏性哮喘发病时血清及支气管肺泡灌洗液中IL-4和IL-5的水平变化,探讨旋毛虫感染对过敏性哮喘的作用.方法 取雌性、8周龄BALB/c小鼠20只,随机分为4组,A组为空白对照组,B组为单纯过敏性哮喘组,C组为感染旋毛虫后哮喘组,D组为单纯感染旋毛虫组.C、D组小鼠经灌胃法感染旋毛虫囊包幼虫200～300条；4周后,以卵清白蛋白(OVA)分别对B、C组小鼠进行致敏激发,建立过敏性哮喘模型；8周后,取小鼠血清、肺泡灌洗液,用ELISA法检测IL-4和IL-5水平.结果 血清中A、B、C、D组小鼠IL-4水平分别为(136.4948±31.1670)、(209.8004±21.5652)、(162.7892± 17.6829)、(182.7092±12.0841) pg/L; IL-5水平分别为(7.3101±1.8600)、(15.9997±2.28208)、(9.2411±1.7280)、(11.4135±2.10776) ng/L;与B组比较,C组小鼠IL-4、IL-5水平均降低,差异有统计学意义(P＜0.05).肺泡灌洗液中A、B、C、D组小鼠IL-4水平分别为(169.1636±9.9997)、(232.9076± 17.9501)、(172.3508± 19.1895)、(193.0676± 16.5708) pg/L; IL-5水平分别为(12.8618±1.7799)、(23.8460±5.507)、(15.7560±4.5419)、(20.3440±3.9713) ng/L;与B组比较,C组小鼠IL-4、IL-5水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 旋毛虫感染对过敏性哮喘小鼠IL-4、IL-5的表达有抑制作用.
作者：马萍；邢杰；闫玉文 刊期： 2013年第04期
目的 分析广州市2011年登革热疫情流行病学特征,为登革热预防控制工作提供参考依据.方法 对广州市疫情监测与报告信息系统和实验室监测信息系统,以及相关的现场调查报告、疫情简报等进行统计与分析.结果 广州市201 1年报告登革热病例51例,本地感染33例,输入性病例18例,累计发病率0.4/10万,无死亡病例,输入性病例占全年报告病例的35.29％.除1、2、7月外,其余月份均有病例；共报告突发公共卫生事件1起,为海珠区龙凤街登革热暴发疫情(16例).实验室监测表明,2011年广州市病毒流行株为登革Ⅰ型病毒.结论 2011年广州市登革热流行处于散发流行状态,输入性病例或异地来广州就诊的登革热病例对广州市登革热流行存在潜在风险.
作者：曹庆；罗雷；景钦隆；李意兰；魏跃红 刊期： 2013年第04期
目的 探讨孕鼠孕期低剂量十溴联苯醚(BDE-209)暴露联合窒息对新生仔鼠海马组织丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响.方法 12周龄SD雌性大鼠自妊娠0d起随机分成A组:空白对照,B、C组:0.6、6 mg/kg BDE-209暴露组,D组:孕期窒息15 min,E、F组:0.6、6 mg/kg BDE-209暴露+孕期窒息15 min.B、C、E、F组雌鼠从孕0天开始胃灌BDE-209,A、D组胃灌等量的花生油直至孕第21天(即孕22 d),A、B、C组孕鼠行剖宫产术直接取出仔鼠,D、E、F组孕鼠行剖宫产建立孕期窒息模型后再取出仔鼠.各组随机选取10只雄性仔鼠,在出生24 h内检测海马MDA含量及SOD活性.结果 各实验组仔鼠MDA含量随BDE-209暴露剂量增加而增高,SOD活性随BDE-209暴露剂量增加而降低,在BDE-209暴露剂量相同的情况下,孕期窒息能够增加MDA含量,降低SOD活性,组间两两比较,差异有统计学意义(P=0.000).孕期低剂量BDE-209暴露联合窒息对SOD活性的影响存在交互作用(P=0.002).结论 孕期低剂量的BDE-209暴露联合窒息可以使仔鼠海马SOD活性下降,MDA含量升高,出现氧化应激状态,导致神经系统的氧化损伤.孕期低剂量BDE-209暴露与孕期窒息之间存在一定的交互作用.
作者：刘传鑫；林琳；孙斌；何玉甜；宋杰；曾洁；杜培丽；张慧丽；杜丽丽 刊期： 2013年第04期
目的 探讨白细胞总数、粒细胞计数、C反应蛋白(CRP)、血糖变化在小儿病毒性脑炎(VE)病情发展中的意义.方法 以47例VE患儿为观察组,21例化脓性脑膜炎(PM)为对照组,两组均进行白细胞计数、粒细胞计数、CRP、血糖动态监测,并对治疗前后结果进行比较.结果 观察组和对照组患儿急性期均存在白细胞、粒细胞、CRP、血糖升高,观察组经治疗后白细胞、粒细胞、CRP、血糖下降,与治疗前比较差异有统计学意义(P＜0.05),而对照组下降无统计学意义(P＞0.05).结论 动态监测白细胞、粒细胞、CRP、血糖对指导临床诊断及判断预后十分重要.
作者：邱建武；李湘玲；肖小兵；邱燕玲；何敏 刊期： 2013年第04期
目的 探讨腹腔镜诊治极早期异位妊娠的临床应用价值.方法 回顾性分析2009年3月至2012年3月嘉峪关市第二人民医院门诊收治的拟诊异位妊娠50例(未破裂型)患者实施腹腔镜诊断手术,判断术前术后诊断的符合率.结果 经腹腔镜检查明确早期非破裂输卵管妊娠47例,明确诊断率94％(47/50),其中24例为流产型,23例为未破裂型,术中不能明确诊断3例,术后经观察明确为异位妊娠,予MTX治愈.结论 腹腔镜用于极早期的异位妊娠的诊治是很好的选择,但宜选择合适的手术时机.
作者：杨宏燕；宋菁华；胡春香；吕晓梅；孙明婧 刊期： 2013年第04期
目的 观察聚氧化乙烯(PEO)对急性后肢缺血大鼠运动耐力的影响,同时探讨其可能的作用机制.方法 Wistar大鼠进行适应性跑步训练后建立大鼠双侧股动脉结扎模型,并经颈静脉留置输液导管；术后继续跑步训练并剔除静脉导管堵塞及不能学会跑步的大鼠,后进入实验大鼠64只,随机分成2组,实验组(n=32)经颈静脉以7 ml/h的速度持续泵入PEO溶液10 min,对照组(n=32)以相同速度及时间持续泵入生理盐水,大鼠跑步至力竭,观察大鼠力竭运动时间,测全血乳酸(LD)、血清一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)及腓肠肌的肌肉乳酸(LD)含量.结果 实验组力竭运动时间为(774.72±171.49)s,较对照组的(687.56±166.08)s明显延长,差异有统计学意义(P=0.043);实验组大鼠NO和SOD含量为(4.25±1.75) μmol/L、(62.97±8.70) U/ml,分别较对照组的(3.51±1.06) μmol/L、(58.79±6.75) U/ml升高或者增强,差异均有统计学意义(P=0.047、P=0.036);与对照组比较,实验组大鼠肌肉LD含量明显降低[(2.79±0.10)1g mmol/g vs (2.95±0.11)lgmmol/g,P＜0.01]；两组血清CK、LDH活力、全血LD含量则差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PEO可延长急性后肢缺血大鼠的力竭运动时间从而改善运动耐力,发挥抗疲劳作用.
作者：邓远燕；张泉；张烨；查道刚 刊期： 2013年第04期
热带医学杂志
主管:广东省科学技术协会
主办：广东省寄生虫学会 中华预防医学会
