学术投稿

弓形虫复合基因SAG1-BAG1的构建、表达及重组抗原的免疫反应性分析

秘文婷;姚硕;钟志刚;杨培梁;吴焜;陈晓光

关键词:弓形虫, 复合基因, SAG1, Bag1, 蛋白表达
摘要:目的 构建并表达弓形虫复合基因SAG1-BAG1及分析重组抗原的免疫反应性.方法 利用PCR扩增弓形虫SAG1基因,利用RT-PCR扩增弓形虫BAG1基因,通过酶切连接分别将SAG1、BAG1基因克隆到pET28a表达载体中构建复合基因SAG1-BAG1.将质粒pET28a-SAG1-BAG1转入大肠杆菌BL21( DE3)中进行诱导表达,Western-blot分析该重组蛋白的免疫反应性.结果 复合基因SAG1-BAG1全长约1 407 bp,重组蛋白相对分子质量约为50 000,表达量约占菌体总蛋白的10%,Western-blot分析显示重组蛋白具有良好的免疫反应性.结论 成功构建并表达弓形虫复合基因SAG1-BAG1.
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    作者:王振磊;黎曙霞 刊期: 2012年第05期

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    作者:王雯;刘超;侯一丁;赵乾皓;黄雷;卢龙武;刘长晖;李越;成建定 刊期: 2012年第05期

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    作者:陈洁;丘金彩;许军;周增桓 刊期: 2012年第05期

  • 弓形虫复合基因SAG1-BAG1的构建、表达及重组抗原的免疫反应性分析

    目的 构建并表达弓形虫复合基因SAG1-BAG1及分析重组抗原的免疫反应性.方法 利用PCR扩增弓形虫SAG1基因,利用RT-PCR扩增弓形虫BAG1基因,通过酶切连接分别将SAG1、BAG1基因克隆到pET28a表达载体中构建复合基因SAG1-BAG1.将质粒pET28a-SAG1-BAG1转入大肠杆菌BL21( DE3)中进行诱导表达,Western-blot分析该重组蛋白的免疫反应性.结果 复合基因SAG1-BAG1全长约1 407 bp,重组蛋白相对分子质量约为50 000,表达量约占菌体总蛋白的10%,Western-blot分析显示重组蛋白具有良好的免疫反应性.结论 成功构建并表达弓形虫复合基因SAG1-BAG1.

    作者:秘文婷;姚硕;钟志刚;杨培梁;吴焜;陈晓光 刊期: 2012年第05期

  • 白介素32在胃癌细胞中的表达及意义

    目的 观察白介素32(IL-32)在胃癌细胞株中的表达情况,探讨其在胃癌发生、发展中的意义.方法 采用逆转录PCR、real-time PCR及Western blot法分别从基因和蛋白水平上检测IL-32在正常胃上皮细胞GES-1以及胃癌细胞株MKN-45、KATO中的表达情况.结果 逆转录PCR及real-time PCR结果均显示胃癌细胞IL-32 mRNA表达水平明显高于正常胃上皮细胞,逆转录PCR灰度比值(目的/内参)为:GES-1(0.34±0.09)、MKN-45 (0.79±0.11)、KATO( 0.90±0.17),差异有统计学意义(P<0.05).real-time PCR Ct值显示:MKN-45的IL-32基因表达量是GES-1的(5.34±1.09)倍,KATO是GES-1的(4.07±1.69)倍,差异均有统计学意义(P<0.05).Western blot结果显示IL-32在蛋白表达水平的结果与前一致,灰度比值(目的/内参)为:GES-1 (0.30±0.10)、MKN-45(0.92±0.32)、KATO(0.86±0.15),差异有统计学意义(P<0.05).结论 IL-32在胃癌细胞株中呈高表达,推测其可能在胃癌的发生、发展中起一定作用.

    作者:詹磊磊;唐保东 刊期: 2012年第05期

  • CCR5基因启动子59029位点单核苷酸多态性与HIV-1疾病进展关系的Meta分析

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    作者:朱文昌;聂军;王云芸;李建栋;陈清;俞守义 刊期: 2012年第05期

  • IL-8对OX-LDL诱导的RAW264.7株作用的研究

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    作者:刘家超;李志樑;严全能;傅强 刊期: 2012年第05期

  • 心率变异性生物反馈对高血压前期患者应激反应的干预效果

    目的 探讨心率变异性生物反馈( HRV BF)干预高血压前期患者心血管应激反应的效果.方法 比较高血压前期者与正常血压者应激反应上血压变化的差异;将36位高血压前期受试者随机分为心率变异性生物反馈(HRV BF)组、慢腹式呼吸(SAB)组和空白对照组.干预组受试者接受每次30 min,每周2次,持续2个月共15次的训练;空白对照组不予干预.实验间隔期嘱受试者每天进行不少于20 min的家庭训练.所有受试者在实验开始前及实验结束后均接受连续2d同一时间点进行的两种应激测试.结果 高血压前期者较正常血压者在应对心算应激时收缩压和舒张压反应性更大.干预2个月后,HRV BF和SAB组收缩压和舒张压平均降压幅度分别为15.4/10.2 mmHg、11.6/7.4 mmHg;空白对照组干预后血压无明显变化.HRV BF能显著降低受试者心算应激时收缩压反应性,较SAB更为明显.结论 高血压前期者应激反应性较高,HRV BF训练可以降低受试者应对心理应激时心血管的反应,并降低高血压前期者血压.

    作者:陈思娟;汪胜;林桂平;孙鹏;李平;赵妍;王庭槐 刊期: 2012年第05期

  • LAMP和PCR法检测痢疾志贺菌的特异性和灵敏性比较

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    作者:曾桂芬;龙北国;姜容;刘行超;廖韫婕;范宏英 刊期: 2012年第05期

  • 局限性肺切除对比肺叶切除治疗Ⅰ期非小细胞肺癌的Meta分析

    目的 系统评价局限性肺切除(包括肺段切除和楔形切除)与肺叶切除治疗Ⅰ期非小细胞肺癌后总生存期和复发率.方法 计算机检索Pubmed和EMBASE数据库,纳入比较局限性肺切除与肺叶切除治疗Ⅰ期非小细胞肺癌后总生存期和复发的随机临床研究和非随机研究.结果 终纳入25篇文献,病例数8 968.对于Ⅰ期非小细胞肺癌,局限性肺切除较肺叶切除术后总生存期差(HR=1.34,95%CI 1.15-1.56,P=0.0002),总体复发率(OR=1.41,95%CI 1.05-1.89, P=0.02)和局部复发率(OR=2.64,95%CI 1.77-3.93,P<0.00001)高;肺段切除与肺叶切除术后总生存期(HR=1.25,95%CI 0.98-1.58,P=0.07)和总体复发率(OR=1.20,95%CI 0.74-1.94,P=0.46)比较差异无统计学意义,但具有更高的局部复发率(OR=2.08,95%CI 1.13-3.83,P=0.02).对于Ⅰa期≤2 cm的非小细胞肺癌,局限性肺切除与肺叶切除的术后总生存期(HR=1.07,95%CI 0.93-1.23,P=0.34)、总体复发率(OR=0.55,95% CI 0.09-3.43,P=0.52)和局部复发率(OR=2.28,95%CI 0.34-15.41,P=0.40)差异无统计学意义.结论 对于Ⅰ期非小细胞肺癌,肺段切除有较好的总生存期,但面临局部复发率高的风险;对于Ⅰa期≤2 cm的非小细胞肺癌,局限性肺切除与肺叶切除总生存期和复发率相当.

    作者:陈亮;许建功;王武军 刊期: 2012年第05期

  • PTPN12在不同分子分型乳腺癌组织中的表达及其与预后的关系

    目的 观察乳腺癌组织中PTPN12的表达情况,初步探讨其可能作用的蛋白,并分析其与临床病理参数及预后的关系.方法 收集2005-2009年南方医院收治的84例乳腺癌患者的病理及临床资料,其中“三阴”乳腺癌患者50例,“非三阴”乳腺癌患者34例.采用免疫组化染色方法检测组织中PTPN12、EGFR的表达,并分析PTPN12表达与临床病理参数以及患者预后的关系.结果 “三阴”乳腺癌患者中PTPN12的缺失表达率、EGFR的阳性表达率显著高于“非三阴”乳腺癌患者(42.0% vs 20.6%,P=0.041;76.0%vs 47.1%,P=0.007).PTPN12的表达与EGFR (r,=-0.208,P=0.058)、Her-2(r,=-0.250,P=0.022)存在负相关关系.PTPN12表达阴性的患者,其生存期更短.多因素分析表明PTPN12是乳腺癌独立的预后因子.结论 PTPN12在“三阴”乳腺癌中具有更高的缺失突变,它的表达与EGFR和Her-2负相关.PTPN12是乳腺癌独立的预后因子.

    作者:李理;邓欢;吕成伟;陈元平;张军一;李荣;罗荣城 刊期: 2012年第05期

  • 肺结核患者治疗期外周血及病理切片多肽特异性CD4+T细胞的检测

    目的 应用四聚体技术研究肺结核患者治疗前后各时间点外周血中E7多肽特异性CD4+T细胞的变化及结核患者肺组织切片中特异性CD4+T细胞的分布.方法 培养能稳定分泌表达E7/HLA-DRB1*0404和E7/HLA-DRB1*1602的果蝇S2细胞株,表达纯化获得2种蛋白质单体,并制备成PE标记的相应四聚体,流式细胞分析检测肺结核患者外周血中特异性CD4+T细胞.制备FITC标记的四聚体,对肺结核患者的肺组织切片进行原位染色,观察特异性CD4+T细胞的分布.结果 肺结核患者治疗前组及治疗1~60 d组分别与治疗61 d后各组及脐带血组之间的四聚体阳性多肽特异性CD4+T细胞差异均有统计学意义(P<0.05),但治疗前组与治疗1~60 d组之间、治疗61 d后各组之间及分别与脐带血之间、2个四聚体检测组之间差异均无统计学意义(P>0.05).在肺结核患者的肺组织切片中可观察到特异性CD4+T细胞.结论 制备的2种E7/HLA-DR四聚体对于结核病的检测具有一定的意义,可以用于检测研究肺结核患者治疗前后外周血E7多肽特异性CD4+T细胞的变化及肺结核患者局部病理组织中特异性CD4+T细胞的分布.

    作者:黄利荣;李研;方毅敏;任亮亮;朱艳;赖小敏 刊期: 2012年第05期

  • HBx、MHBst155真核表达载体构建及在HepG2细胞中的表达

    目的 建立稳定、高效的HBx、羧基末端截短的中分子表面蛋白(MHBst)体外表达细胞株,以进一步研究HBx、MHBst蛋白在肝癌发生中的作用及其机理.方法 设计特异性引物,采用PCR方法从adr亚型HBV质粒pHBV DNA中扩增HBx、羧基末端截短至155位氨基酸的中分子表面蛋白(MHBst155)编码基因,并定向插入绿色荧光蛋白(GFP)表达载体pEGFP-C1的BglⅡ、Kpn Ⅰ和BglⅡ、BamH Ⅰ酶切位点,转化宿主菌DH5α,提取质粒,分别用上述内切酶酶切及DNA测序鉴定重组质粒.采用脂质体介导将空载体、重组质粒分别转染到人肝肿瘤细胞株HepG2中,G418筛选抗性细胞克隆,荧光显微镜下观察GFP表达,挑取表达GFP的抗性克隆扩大培养、传代.采用RT-PCR、蛋白印迹检测抗性细胞中HBx、MHBst155的mRNA及蛋白水平.结果 经酶切及测序鉴定成功构建了pGFP-HBx、pGFP-MHBst155重组表达载体,将空载体及重组质粒转染HepG2,经G418筛选约20 d获得抗性细胞克隆.将带有绿色荧光的抗性克隆扩大培养并经传代40次,细胞仍表达强的绿色荧光.RT-PCR及蛋白印迹检测表明转染重组体的HepG2/GFP-HBx、HepG2/GFP-MHBst155细胞有相应的条带,而空载体、空白对照组未出现条带.结论 成功构建了HBx、MHBst155真核重组表达载体pGFP-HBx、pGFP-MHBst155,获得了稳定表达融合蛋白GFP-HBx、GFP-MHBst155的HepG2细胞系,为进一步研究HBx及MHBst蛋白在肝癌发生中的作用及分子机制构建了良好的平台.

    作者:康艳红;杨林;麦丽;张绍全;胡朝霞;谢奇峰;高志良 刊期: 2012年第05期

  • 内质网应激与细胞凋亡

    内质网(ER)是细胞内重要的细胞器,参与多种细胞进程,这些进程对于维持细胞存活和发挥细胞的正常生理功能具有重要的作用.然而在多种生理病理条件下,内质网稳态会发生变化而失衡,从而诱发内质网应激(ERS),此时机体通过激活未折叠蛋白反应(UPR)来恢复内质网的正常功能.当持续的ERS状态无法恢复时,ERS就会触发细胞凋亡程序,通过不同的凋亡途径引起细胞凋亡.

    作者:王硕;孟庆华;秦秀德;刘辉;王丹丹;康立源 刊期: 2012年第05期

  • 真菌通用引物结合高分辨熔解曲线分析检测鉴定常见曲霉菌

    目的 探索一种能够快速检测鉴定临床常见侵袭性曲霉菌病原的新型分子生物学方法.方法 以真菌核糖体RNA基因的内转录间隔区2为靶基因,在5.8S、28S rRNA基因上设计泛真菌通用引物,扩增临床常见曲霉菌.同时用新生隐球菌基因组DNA、人基因组DNA及临床常见细菌基因组DNA进行引物特异性检测.将通用真菌引物扩增产物进行高分辨熔解曲线分析.以新鲜提取的烟曲霉基因组DNA为模板按照1:10的比例梯度稀释,进行敏感性检测.检测7个浓度梯度的烟曲霉基因组DNA.结果 设计的真菌通用引物可以扩增临床常见的4种曲霉菌及新生隐球菌,但与人基因组DNA和临床常见细菌基因组DNA无扩增反应,检测限可低至1.5 pg/μl,且4种曲霉菌及新生隐球菌扩增产物的熔解曲线不同.该方法敏感性和特异性均较好.结论 利用真菌通用引物的扩增产物结合高分辨熔解曲线分析可以达到检测鉴定临床常见4种曲霉菌的目的,此方法对侵袭性曲霉菌的快速检测鉴定具有重要意义.

    作者:曹楠楠;平宝红;司徒博;郑磊;曾方银;孙德华;王前 刊期: 2012年第05期

  • 英夫利昔单抗治疗难治性银屑病关节炎临床观察

    目的 探讨英夫利昔单抗(INF)治疗难治性银屑病关节炎(PsA) 22周的疗效与安全性.方法 18例接受规范的非甾体抗炎药(NSAIDs)和改善病情抗风湿药物(DMARDs)治疗6月以上病情仍活动的PsA患者,0、2、6、14周予INF 3 mg/kg静脉输注.主要疗效评价指标为第2、14、22周达到PsA疗效标准(PsARC)及PASI改善50%(PASI 50)的患者比例,次要疗效指标为第2、14、22周达到PASI 70/90的患者比例及各疗效参数(关节肿胀及压痛数、患者总体评价、健康评估问卷、医师综合评价、PASI评分、CRP)的变化.治疗前及观察期间查血常规、自身抗体、肝肾功、胸片等,记录不良反应.结果 治疗2、14、22周时,达到PsARC、PASI 50的患者比例分别为55.6%、55.6%,72.2%、83.3%,88.9%、88.9%;达到PASI 70、PASI 90的患者比例分别为33.3%、22.2%,55.6%、38.9%,77.8%、61.1%;各疗效参数均较基线有改善(P<0.05).出现3例感染,对症治疗后痊愈,无严重不良反应发生.结论 INF治疗难治性PsA有较好的疗效和安全性.

    作者:李静;李娟;朱俊卿 刊期: 2012年第05期

  • 轻微血糖升高对不良妊娠结局的影响

    目的 回顾性分析轻微血糖升高对大陆地区孕妇不良妊娠结局的影响.方法 符合以下入选标准:①年龄大于18岁;②单胎、头胎、胎龄符合孕周;③于孕24~32周行50 g GCT试验,1 h PG≥7.8 mmol/L者于1周内行75 g OGTT试验,且OGTT试验在正常范围内(FBG<5.1 mmol/L、1 h<10.0 mmol/L、2 h<8.5 mmol/L).结果 共有527例符合入选标准,根据血糖水平高低将FBG、1 h BG、2h BG等各分为4个亚组,每个亚组相差一个标准差.随着FBG、1h BG、2h BG水平升高,大于胎龄儿、新生儿高胆红素血症的发生率也随着增加;而胎儿宫腔内感染、先兆子痫、1min Apgar评分低及转儿科监护治疗的发生率并未达到差异具有统计学意义的升高.结论 对于轻微血糖升高的孕妇而言,大于胎龄儿、新生儿高胆红素血症的血糖阈值是4.6 mmol/L<FBG≤5.0 mmol/L、9.5 mmol/L<1 h BG≤9.9 mmol/L、8.0 mmol/L<2 h BG≤8.4 mmol/L,而需转新生儿监护治疗的血糖阈值是4.6 mmol/L<FBG≤5.0 mmol/L、9.5 mmol/L<1 h BG≤9.9 mmol/L.但这仍需更大规模的前瞻性研究加以证实.

    作者:潘燕飞;沈洁;韩亚娟;陈超凤;谢敏 刊期: 2012年第05期

  • 脑白质损伤早产儿血清IL-6及NSE的变化及其临床意义

    目的 了解血清白细胞介素-6(IL-6)及神经元特异性烯醇化酶(NSE)的变化对脑白质损伤早产儿早期诊断的价值.方法 观察组为脑白质损伤早产儿35例,对照组为正常早产儿35名.采用ELISA分别于生后1、7、14d检测两组血清IL-6、NSE水平.结果 对照组患儿生后第1、7及14天血清IL-6水平分别为(19.14±1.18) pg/ml、(19.14±1.14)pg/ml及(19.11±1.34) pg/ml,观察组患儿分别为(25.19±3.03)pg/ml、(24.48±2.97)pg/ml及(23.74±2.95)pg/ml,观察组显著高于对照组,差异有统计学意义(P均=0.000).对照组患儿生后第1、7及14天血清NSE水平分别为(4.70±0.36) ng/ml、(4.31±0.29) ng/ml及(4.14±0.30) ng/ml,观察组患儿分别为(6.30±0.89) ng/ml、(6.05±0.86) ng/ml及(5.64±0.75) ng/ml,观察组显著高于对照组,差异有统计学意义(P均=0.000).结论 脑白质损伤早产儿血清IL-6和NSE的浓度明显高于对照组.监测早产儿血清IL-6和NSE水平,对脑白质损伤的诊断和治疗效果的评价具有一定临床价值.

    作者:陆俊秀;陈敬国;陈海燕;林蔷;叶春华;陈简 刊期: 2012年第05期

  • 212例胃肠间质瘤的临床病理特征及预后分析

    目的 探讨胃肠间质瘤(GIST)的临床特征和分子病理学特点,分析影响GIST预后的相关因素.方法 回顾性分析2004年4月至2011年8月南方医院收治的212例GIST患者的临床病理和随访资料,应用生存分析比较不同因素对预后的影响.对接受甲磺酸伊马替尼治疗的53例患者,采用基质辅助激光解析/电离-飞行时间质谱方法检测KIT和PDGFRa基因相关位点的突变情况.结果 单因素生存分析显示肿瘤大小、核分裂数、美国国立卫生研究所(NIH)危险度分级、转移、手术及甲磺酸伊马替尼影响GIST患者的生存率.多因素生存分析提示,NIH危险度分级和甲磺酸伊马替尼是影响预后的独立因素.53例GIST患者中,KIT基因突变39例(73.6%),其中外显子11突变21例(53.8%),外显子9突变13例(33.3%).KIT外显子11突变形式主要为5'端第557-558密码子缺失常见;外显子9突变均为插入串联重复.未检测到PDGFRa基因突变的病例.结论 NIH危险度分级和甲磺酸伊马替尼治疗与GIST患者的生存密切相关,基因突变检测对指导生物靶向治疗和预测其疗效具有重要意义.

    作者:李增辉;秦岭;李荣;罗荣城 刊期: 2012年第05期

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