学术投稿

Septin 8红色荧光蛋白融合载体的构建及表达

王丹;梅柱中;刘爱华;明小燕;王达安;王旭;姜勇

关键词:septin8, 红色荧光蛋白, 载体构建, 基因表达
摘要:目的 构建在哺乳动物细胞中表达的septin 8红色荧光蛋白融合表达载体(pmCherry-C2/septin 8),并观察其在细胞内的表达和定位情况.方法 采用PCR的方法从人脑胶质细胞瘤cDNA文库中扩增获得septin 8基因编码区序列,将其克隆至红色荧光蛋白载体pmCherry-C2上,重组质粒经PCR、酶切以及序列分析正确无误后转染NIH3T3细胞,并利用Western blotting和细胞免疫化学技术分析重组蛋白在细胞内的表达和定位.结果 重组pmCherry-C2/septin 8融合蛋白在NIH3T3细胞中得到高量表达且主要分布于细胞浆.结论 成功构建了pmCherry-C2/septin 8融合表达载体,该载体能在哺乳动物细胞NIH3T3中表达,为进一步研究septin 8细胞内生物学功能打下了良好的基础.
热带医学杂志相关文献
  • 不同温度对广州管圆线虫感染期幼虫的杀灭作用

    目的 探究广州管圆线虫感染期幼虫(第Ⅲ期幼虫)在不同温度不同时间下的生存及死亡情况(死亡率).方法 采用人工消化法,从自然感染的褐云玛瑙螺中提取广州管圆线虫感染期幼虫,将其放入不同温度(35~90℃)的热水中,分别作用不同时间(1~20 min).取出置解剖镜下观察虫体的变化情况.结果 在1~20 min内,45℃以下温度对感染期幼虫不具有杀灭作用,死亡率为0;50~55℃温度对感染期幼虫有轻度的杀灭作用,死亡率为12.00%~97.33%;60~65℃温度对感染期幼虫有一定强度的杀灭作用,死亡率为57.39%~100.00%:70~75℃温度对感染期幼虫有很强的杀灭作用,死亡率为97.22%~100.00%;在80℃以上温度时感染期幼虫迅速死亡,死亡率为100.00%.结论 45℃以下温度,20 min内对广州管圆线虫感染期幼虫没有杀灭作用;50~75℃温度,1~20 min,对大多数广州管圆线虫感染期幼虫具有杀灭作用,温度越高,时间越长,杀灭作用越强:80℃以上温度,1~20 min,对广州管圆线虫感染期幼虫具有完全杀灭作用.

    作者:田旭岩;卢勤声;周丽芬;黄丽云;陈戊荣;沈浩贤;何芳;李小敏;麦璟莹;张惠球;黎银燕;朱蔚云 刊期: 2010年第02期

  • 一种分离纯化东方田鼠肝细胞的方法改进

    目的 建立体外培养东方田鼠鼠肝细胞的实验体系.方法 采用下腔静脉插管原位灌注结合胶原酶灌注法分离纯化出肝细胞,在改良Eagle培养基(Dulbecco's Modified Earle Media,DMEM)中培养,显微镜下观察细胞形态,AO-EB染色观察测定其活率来评价细胞质量.结果 一只东方田鼠肝脏一般可获得1.5×108~3.0×108个细胞,活率达95%,完全符合实验要求.刚分离的东方田鼠肝细胞呈圆球形,大小均匀,培养3 h后,大部分肝细胞出现贴壁,形态呈扁平状.培养24 h后,伸展良好,并成片生长.结论 下腔静脉插管原位灌注结合胶原酶灌注法可以分离出高纯度和活率高的东方田鼠肝细胞.

    作者:丘继哲;邹艳;曾庆仁;刘碧源;黄旭;徐妮为 刊期: 2010年第02期

  • Septin 8红色荧光蛋白融合载体的构建及表达

    目的 构建在哺乳动物细胞中表达的septin 8红色荧光蛋白融合表达载体(pmCherry-C2/septin 8),并观察其在细胞内的表达和定位情况.方法 采用PCR的方法从人脑胶质细胞瘤cDNA文库中扩增获得septin 8基因编码区序列,将其克隆至红色荧光蛋白载体pmCherry-C2上,重组质粒经PCR、酶切以及序列分析正确无误后转染NIH3T3细胞,并利用Western blotting和细胞免疫化学技术分析重组蛋白在细胞内的表达和定位.结果 重组pmCherry-C2/septin 8融合蛋白在NIH3T3细胞中得到高量表达且主要分布于细胞浆.结论 成功构建了pmCherry-C2/septin 8融合表达载体,该载体能在哺乳动物细胞NIH3T3中表达,为进一步研究septin 8细胞内生物学功能打下了良好的基础.

    作者:王丹;梅柱中;刘爱华;明小燕;王达安;王旭;姜勇 刊期: 2010年第02期

  • 弥漫大B细胞性淋巴瘤survivin表达与其预后的关系

    目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤survivin表达与临床表现的关系.方法 收集有完整随访资料的弥漫大B细胞性淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)患者128人,均有5年以上完整的随访资料.用免疫组化sP法检测其survivin表达情况,并分析其表达与临床预后的关系.结果 128例DLBCL患者中有84例survivin蛋白表达阳性,阳性率为65.6%.表达阳性者与阴性者5年(overall survival,OS)分别为58.8%和18.7%,差异具有统计学意义.在淋巴瘤国际预后指数(international prognostic index,IPI)积分低危患者中,survivin表达阳性者5年总生存期OS及无病生存期(disease free survival,DFS)明显低于表达阴性者;在国际预后指标(international prognosis index,IPI)积分高危患者中,survivin表达阳性与阴性者5年OS无明显差异.结论 Survivin是DLBCL的一个较有价值的预后指标,与IPI联合应用可筛选出低危患者中预后不良病例.

    作者:张红雨;陈红涛;汪波;管忠震;林桐榆 刊期: 2010年第02期

  • 葛根提取物对颈神经根性痛大鼠体感诱发电位的影响

    目的 探讨以葛根素为主要有效成分的葛根提取物对颈神经根性痛大鼠体感诱发电位的影响.方法 首先对葛根中葛根素的提取方法进行优化,确定佳提取工艺.然后通过椎管插线法建立神经根型颈椎病根性疼痛模型.将符合入组条件的大鼠随机分成5组:颈复康组,葛根提取物高、中、低剂量组,生理盐水组,每组8只.治疗前和治疗10 d后,分别对大鼠进行疼痛行为及步态评分、正中神经体感诱发电位测量.结果 葛根提取物各剂量组及颈复康组均能显著改善模型大鼠根性疼痛的相关行为,且能显著改善体感诱发电位潜伏期、波幅和传导速度,与生理盐水组相比差异有显著性意义(P<0.05).其中葛根提取物高剂量组(葛根素含量266.1 mg·kg-1·d-1)疗效佳,中剂量组(葛根素含量133.0 mg·kg-1·d-1)与高剂量组之间差异无统计学意义.结论 以葛根素为主要有效成分的葛根提取物能明显减轻颈神经根根性疼痛,并提示存在量效关系.

    作者:于林;陈宝田;谢炜;赵伟宏 刊期: 2010年第02期

  • 高血压脑出血伴天幕裂孔疝手术治疗的临床研究

    目的 探讨对比标准大骨瓣开颅(Standard large craniotomy)血肿清除去大骨瓣减压并天幕裂孔疝复位术与常规大骨瓣开颅血肿清除去大骨瓣减压术对高血压脑出血伴天幕裂孔疝的治疗效果.方法 66例高血压脑出血伴天幕裂孔疝患者(格拉斯哥昏迷评分GCS≤8分)随机分成研究组(标准大骨瓣开颅)和对照组(常规大骨瓣开颅),术后记录1、3、7 d腰穿置管监测颅内压(intracranial pressure ICP)值、脑脊液细胞数、头颅CT检查并测量脑水肿范围和中线结构移位、TCD(transcranial doppler system)监测脑血管痉挛等指标,根据主要并发症比较两组疗效.结果 术后3 d研究组较对照组的颅内压、脑脊液细胞数、脑水肿范围和中线结构移位等指标改善有显著性差异(P<0.01).术后7 d研究组的上述各项指标接近正常.研究组并发症和死亡率明显少于对照组.结论 用标准大骨瓣开颅血肿清除去大骨瓣减压并天幕裂孔疝复位术治疗高血压脑出血伴天幕裂孔疝能减少并发症,降低死亡率,是手术治疗高血压脑出血伴天幕裂孔疝的有效方法.

    作者:向进;郭伟;吕文;王莉莉;陈东;赵永阳 刊期: 2010年第02期

  • 广东登革3型病毒株的分离培养和鉴定

    目的 对2009年发生于广东地区的3例家庭聚集性登革热患者血清进行登革病毒的鉴定和病毒株的培养分离.方法 用胶体金法检测患者血清中登革病毒特异性IgM、IgG抗体;C6/36细胞培养患者血清中登革病毒;RT-PCR扩增C-PrM基因序列的片段以检测患者血清中登革病毒RNA,PCR产物经序列测定后进行生物信息学分析.结果 3例患者血清学检测均为登革病毒特异性IgM阳性、IgG阴性;特异性RT-PCR产物长约290bp,经琼脂糖电泳和测序分析,证实3例患者血清中均存在登革3型病毒;从1例患者血清中培养分离到了登革病毒株,经RT-PCR和测序证实为登革3型病毒.结论 2009年发生于广东地区的3例登革热患者经病毒培养和分子生物学鉴定,证实均为登革3型病毒感染.

    作者:周伟泽;张复春;胡凤玉;王建;洪文昕 刊期: 2010年第02期

  • 广州某快餐连锁店2005-2008年冷饮微生物检测结果分析

    目的 了解广州市快餐连锁店冷饮的卫生质量,为监督执法提供有力可靠的科学依据,探讨快餐连锁店冷饮微生物污染的规律.方法 对2005-2008年广州市某快餐连锁店监督抽检的冷饮样品575份进行微生物指标分析;数据采用SPSS.13.0软件包进行统计学处理.结果 冷饮样品微生物指标合格率为83.3%,其中果汁类冷饮的合格率为80.0%:总体是大肠菌群超标比菌落总数为多.结论 2005-2008年该连锁店冷饮卫生质量不稳定;上规模、管理规范的连锁经营,其卫生质量远高于散户小型饮料店.加强企业自身管理、引入HACCP概念,有利于提高食品安全质量.

    作者:成莉莉;谭铭雄;黎庆强 刊期: 2010年第02期

  • 深圳市酒店三文鱼和北极贝生食中致病菌污染状况调查

    目的 了解酒店、日韩料理餐厅冰鲜海产品(三文鱼、北极贝)的微生物污染状况,为预防病原微生物食物中毒提供科学依据.方法 抽取酒店、日韩料理餐厅、超市商场等冰鲜海产品共168份,依照国家标准方法和荧光PCR方法对样品进行检测.结果 168份样品中共检出不合格大肠菌群101份,阳性率为60.12%;菌落总数29份,阳性率为17.26%;致病菌:检出副溶血性弧菌5份,阳性率为2.98%;金黄色葡萄菌38份,阳性率为22.62%.沙门氏菌和志贺氏菌致病菌未检出.结论 冰鲜海产品三文鱼和北极贝受到病原微生物的污染相当严重,各部门要加强监管监测,积极做好预防控制工作,减少食原性食物中毒发生的危险.

    作者:吴平芳;贺连华;石晓路;扈庆华;王冰;冼慧霞;陈妙玲 刊期: 2010年第02期

  • 广州市2008年人群麻疹抗体水平监测分析

    目的 全面了解和掌握广州市各区、县级市人群麻疹抗体水平,为实施有效的控制预防及消除麻疹提供科学依据.方法 2008年在广州市12个区、县级市中随机抽取9个区、县级市,采集孕妇、新生儿及0岁以上11个年龄组的健康人群静脉血各40人份,采用酶标ELISA法检测麻疹IgC抗体.结果 调查4043名健康者,其中抗体阳性2856人,阳性率为70.64%.所调查的9个区(县级市)中,不同区(县级市)之间的麻疹抗体阳性率差别有统计学意义(X2=400.313,P<0.05);12岁以上组则明显下降,各年龄组之间抗体阳性率差别有统计学意义(X2=267.832,P<0.05).结论 应加强计划免疫工作,使整个人群的免疫水平达到一个稳定的水平;在一定年龄组加强免疫接种是进一步控制麻疹爆发和流行的有效措施.

    作者:张伟;狄飚;吴新伟;许建雄;傅传喜;李魁彪;鲁恩洁 刊期: 2010年第02期

  • 清新县流动人口血吸虫病监测效果分析

    目的 通过对清新县流动人口监测结果的分析,探讨优化输入性血吸虫病人的防控措施.方法 对清新县流动人口血吸虫病的监测结果进行统计分析.结果 2005年清新县对流动人口67045人进行调查,显示有66%的流动人口居住在该县的城乡结合部或农村地区,来自疫区的人群约占流动人口的12%.2001-2008年,采用常规主动监测1052人、选择性主动监测1456人,血吸虫血清抗体阳性率分别为2.57%(27/1052)和4.81%(70/1456),两者差异有统计学意义(X2=8.25,P<0.01);发现输入性临床诊断慢性病人分别为0例和13例(0.89%),病原确诊病人分别为0例和2例(0.14%).显示选择性主动监测对查获输入性病例的效果明显优于常规主动监测.结论 来自疫区的流动人口中存在一定数量的血吸虫病患者,为做好输入性传染源的防控工作,现阶段要重点开展选择性主动监测,同时加强被动监测,并通过选择灵敏度较高的检查方法以提高监测效果.

    作者:周志珊;黄德厚;李初升;许广才 刊期: 2010年第02期

  • 蒲公英提取物中总黄酮和多糖的含量分析

    目的 了解蒲公英提取物(extract from Taraxacum mogonon,ETM)中总黄酮、多糖的含量.方法 提取ETM中总黄酮和多糖成分,分光光度法测定样品中总黄酮和多糖的含量.结果 以芦丁和葡萄糖为对照品,测定波长分别选择510hm和490nm,稳定性试验显示总黄酮、多糖1 h内吸光度基本稳定,精密度和重现性较好,回收率在95.73%~102.16%之间;其中总黄酮和多糖的平均含量分别为5.51%、14.91%.结论 分光光度法测定ETM中总黄酮、多糖含量准确,并稳定、简单易行且重复性良好,可作为蒲公英中总黄酮和多糖的检测方法.

    作者:吴晓丽;蔡云清 刊期: 2010年第02期

  • 甲型H1N1流感双重荧光PCR快速筛查方法的研究

    目的 优化一种甲型H1N1流感的双重荧光PCR快速筛查方法.方法 根据WHO推荐的甲型H1N1流感检测方案合成、标记引物和探针.通过改进反应条件与参数,优化了甲型H1N1流感的双重荧光PCR检测方法.结果 该方法敏感度高,特异性强,重复性好.应用该方法检测患者实际样品,结果与WHO推荐方法的检测结果一致;应用该法可在4 h内完成对样品中甲型H1N1流感的检验.结论 本研究优化的甲型H1N1流感的双重荧光PCR快速筛查方法可用于甲型H1N1流感的诊断.

    作者:王佃鹏;朱玉兰;李政良;刘胜牙;董瑞玲;黄宗炎;高朝贤;胡孔新 刊期: 2010年第02期

  • 日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32的构建及其在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达

    目的 构建日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,分析该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达情况.方法 超声粉碎日本血吸虫成虫提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得Sj26GST和Sj32抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Sj26GST和Sj32,得到Sj26GST-Sj32融合基因,克隆至原核表达载体pET32α(+),构建重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,转化人大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析和鉴定.结果 基因拼接法扩增出约1991 bp的Sj26GST-Sj32融合基因;双酶切和PCR鉴定证实Sj26GST-Sj32融合基因成功插入pET32a(+)中,SDS-PAGE分析显示表达产物为分子质量约82000 Mr的重组蛋白,与预期结果一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的22%;Westem-blot鉴定重组蛋白能被日本血吸虫感染的兔血清识别.结论 成功构建了日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,该质粒在大肠埃希菌BL21中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原性.

    作者:李文桂;肖邦忠;罗兴建;陈雅棠;吴成果 刊期: 2010年第02期

  • 血培养常见菌株的分布及金黄色葡萄球菌耐药性的分析

    目的 调查同济医院2006年1月至2008年12月血培养中常见非重复分离菌株的构成;分析金黄色葡萄球菌对常用抗菌药物的耐药性.方法 采用WHONET5.4软件分析连续3年血培养中的非重复分离菌株的分布;采用K-B纸片法测定金黄色葡萄球菌对常用抗菌药物的敏感性.结果 2006年1月至2008年12月共分离细菌1336株,其中革兰阳性球菌占58.5%(781/1336)、革兰阴性杆菌占37.2%(497/1336)、真菌占4.27%(57/1336).分离的前10位菌株依次为凝周酶阴性葡萄球菌(CNS,40.42%)、大肠埃希菌(13.47%)、肠球菌属(5.54%)、克雷伯菌属(4.94%)、金黄色葡萄球菌(4.34%)、草绿链球菌(4.34%)、真菌(4.27%)、沙门菌属(3.59%)、铜绿假单胞菌(3.29%)、嗜麦芽窄食单胞菌(3.14%).金黄色葡萄球菌共58株,其中甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)占44.8%(26/58).MRSA对头孢菌素类、氨苄西林/舒巴坦、红霉素、克林霉索、复方新诺明、庆大霉素和左氧氟沙星、磷霉素、利福平耐药率明显高于甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(methicillin-susceptible Staphylococcus aureus,MSSA),且差异具有统计学意义(P<0.001).未发现对万古霉素和替考拉宁不敏感的菌株.结论 本院血培养分离株中,凝同酶阴性葡萄球菌仍占据第一位.金黄色葡萄球菌占分离菌株第五位,其中MRSA检出率较高,且耐药性严重.MRSA病区的分布及耐药谱分析提示可能存在MRSA的克隆传播.

    作者:石祖亮;简翠 刊期: 2010年第02期

  • 医学本科生微生物学实验教学新模式的实践与思考

    以近年来参与医学微生物学实验教学的实践为基础,从改革课程设置和安排、完善病例引导式问题教学法、增设综合性和设计性实验和改革考核方式这4个方面论述了对医学本科生微生物学实验教学改革的思考.基于学时数,合理安排实验内容,知识循序渐进;进一步完善病例引导式问题教学法,数量适宜,重点突出;增设综合性和设计性实验,提高实验系统性;改革考核方式,综合评价学生实际水平和能力.突出对学生创新能力的培养,使学生真正掌握相关的知识和技能,形成严谨务实的科学工作作风,获得解决实际问题的能力.

    作者:周俊梅 刊期: 2010年第02期

  • 糖化血红蛋白在糖代谢异常患者中的改变及其与血糖的关系

    目的 探讨糖化血红蛋白(HbA1c)检测在不同糖代谢异常状态的临床价值.方法 选取254名受试者(其中男149人,女105人)进行口服糖耐量试验(OGTT)和HbA1c检测.根据OGTT结果分为正常糖耐量(NGT)、单纯空腹血糖受损(I-IFG))、单纯糖耐量受损(I-IGT)、IFG合并IGT(IFG/IGT)和糖尿病(DM)5组,通过单因素方差分析比较各组HbA1c值,对各组HbAlc与空腹血糖(FPG)和OGTT 2 h血糖(2hPG)进行线性相关和回归分析.结果 ①HbA1c水平(%,下同)DM组(7.41±1.94)明显高于其余4组(以上P均<0.01),I-IFG组(6.06±0.37)、I-IGT组(5.91±0.39)、IFG/IGT组(6.12±0.38)3组间差异无统计学意义(P>0.05),但分别明显高于NGT组(P<0.05).②DM组HbA1c分别与FPG(r=0.934,P<0.01)和2hPG(r=0.760,19<0.01)存在着明显的正相关,回归方程为:HbA1c=2.957+0.458(FPG)+0.05(2hPG);IFG/IGT组(r=0.326,P<0.01)、I-IGT组(r=0.254,P<0.05)HbA1c只与2hPG存在正相关;I-IFG组HbA1c只与FPG存在正相关(r=0.404,P<0.01);NGT组HbA1c与FPG(r=0.157)和2hPG(r=-0.006)均不存在相关性.结论 糖化血红蛋白水平能够正确地反映正常糖代谢、糖调节受损和糖尿病3种不同糖代谢状态的血糖水平,是区分3种糖代谢状态的有用指标.

    作者:伍绍国;黄钰君;陈波;李志海;鲍蓓 刊期: 2010年第02期

  • 新生隐球菌墨汁染色检查实验的改进

    目的 为消除生物安全隐患,让学生能安全高效地完成新生隐球菌墨汁染色检查实验.方法 分别用10%甲醛或56℃水浴5 min对腹腔液、脑脊液中的新生隐球菌进行灭活处理,使其不再具有活性和致病性,镜下观察其形态的改变.结果 用10%甲醛处理过的新生隐球菌,其荚膜形态已不能观察,而经56℃水浴灭活的新生隐球菌,其荚膜形态没有发生变化.结论 新生隐球菌腹腔液或脑脊液采用56℃水浴5 min即可灭活而不影响其荚膜形态,为学生安全高效地完成新生隐球菌墨汁染色检查实验提供了条件.

    作者:梁昌盛;周红;罗海华;李美玉;梁天文 刊期: 2010年第02期

  • 阳春市中学生单纯性肥胖症流行病学调查

    目的 研究阳春市中学生超重、肥胖的流行现状及其影响因素.方法 采用分层整群随机抽样的方法,对该市中学生进行现场调查.结果 阳春市中学生超重发生率为6.98%,肥胖率为2.81%;男生超重、肥胖检出率显著高于女生.父母肥胖、进食快、喜吃蔬菜是肥胖的影响因素.结论 中学生肥胖的发生主要与不良饮食习惯、生活方式密切相关,还与父母因素有关.

    作者:陈华政;曾永红 刊期: 2010年第02期

  • 疟疾的防控现状及进展

    近年来,随着流行病学监测和实验室检测技术的进步、防蚊灭蚊措施的改进及抗疟疾药物的研究的进展,人类的疟疾防控工作也不断进步,但同时也不断面临着新的挑战.本文综述了我国及全球疟疾的流行现状、检测技术及防控措施的现状.

    作者:车河龙;林栋 刊期: 2010年第02期

热带医学杂志

热带医学杂志

主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会