学术投稿

Septin 8红色荧光蛋白融合载体的构建及表达

王丹;梅柱中;刘爱华;明小燕;王达安;王旭;姜勇

关键词:septin8, 红色荧光蛋白, 载体构建, 基因表达
摘要:目的 构建在哺乳动物细胞中表达的septin 8红色荧光蛋白融合表达载体(pmCherry-C2/septin 8),并观察其在细胞内的表达和定位情况.方法 采用PCR的方法从人脑胶质细胞瘤cDNA文库中扩增获得septin 8基因编码区序列,将其克隆至红色荧光蛋白载体pmCherry-C2上,重组质粒经PCR、酶切以及序列分析正确无误后转染NIH3T3细胞,并利用Western blotting和细胞免疫化学技术分析重组蛋白在细胞内的表达和定位.结果 重组pmCherry-C2/septin 8融合蛋白在NIH3T3细胞中得到高量表达且主要分布于细胞浆.结论 成功构建了pmCherry-C2/septin 8融合表达载体,该载体能在哺乳动物细胞NIH3T3中表达,为进一步研究septin 8细胞内生物学功能打下了良好的基础.
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  • AngⅡ通过AP-1调控内皮细胞中巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的表达

    目的 明确介导AngⅡ调控人内皮细胞中巨噬细胞移动抑制因子(migration inhibitory factor,MIF)表达的转录因子.方法 构建长度依次递减的MIF基因5'调控区的荧光报告基因表达载体,并将其转化入人脐静脉内皮细胞EAhy926.利用双荧光基因报告系统检测AngⅡ诱导后MIF基因5'调控区不同区段的转录活性.通过突变转录活性高的MIF 5'调控区序列.初步确定可能的转录因子结合序列.设计针对可能的转录因子的小干扰RNA(siRNA)序列,并构建其表达载体,分别检测候选转录因子沉默的HEAY926中MIF的转录活性和表达水平.结果 双荧光基因报告检测显示,Ang Ⅱ调控MIF表达的高转录活性区段位于-507至-188之间.序列突变和荧光素酶活性分析显示,MIF基因5'调控区-350至-339问的AP-1结合序列决定了MIF基因的转录活性.AP-1沉默后的HEAY926中AngⅡ调控的MIF转录活性显著降低(P<0.05),MIF mRNA和蛋白的表达水平也显著降低(P<0.05).结论 AngⅡ通过转录因子AP-1调控内皮细胞中MIF的表达.

    作者:冯治宽;单志新;林秋雄;朱杰宁;麦丽萍;谭虹虹;邓春玉;邝素娟;余细勇 刊期: 2010年第02期

  • 葛根提取物对颈神经根性痛大鼠体感诱发电位的影响

    目的 探讨以葛根素为主要有效成分的葛根提取物对颈神经根性痛大鼠体感诱发电位的影响.方法 首先对葛根中葛根素的提取方法进行优化,确定佳提取工艺.然后通过椎管插线法建立神经根型颈椎病根性疼痛模型.将符合入组条件的大鼠随机分成5组:颈复康组,葛根提取物高、中、低剂量组,生理盐水组,每组8只.治疗前和治疗10 d后,分别对大鼠进行疼痛行为及步态评分、正中神经体感诱发电位测量.结果 葛根提取物各剂量组及颈复康组均能显著改善模型大鼠根性疼痛的相关行为,且能显著改善体感诱发电位潜伏期、波幅和传导速度,与生理盐水组相比差异有显著性意义(P<0.05).其中葛根提取物高剂量组(葛根素含量266.1 mg·kg-1·d-1)疗效佳,中剂量组(葛根素含量133.0 mg·kg-1·d-1)与高剂量组之间差异无统计学意义.结论 以葛根素为主要有效成分的葛根提取物能明显减轻颈神经根根性疼痛,并提示存在量效关系.

    作者:于林;陈宝田;谢炜;赵伟宏 刊期: 2010年第02期

  • 青芥辣对离体肝吸虫囊蚴杀灭作用的研究

    目的 研究青芥辣对离体肝吸虫囊蚴的杀灭作用.方法 采用人工消化法从淡水鱼中获取囊蚴,分组(囊蚴20个/组),将其置于定量青芥辣软膏中,分别作用不同时间,显微镜下观察囊蚴的活动情况.结果 青芥辣对肝吸虫囊蚴作用1~6 min后,囊蚴内后尾蚴活动加强;作用7~180 min后囊蚴活动力降低甚至开始死亡,死亡率范围为11.76%~100%;作用210 min以后囊蚴全部死亡,死亡率达到100%.对照组囊蚴形态和后尾蚴活动无改变.结论 青芥辣对肝吸虫囊蚴具有刺激和轻度杀灭作用,但在短时间内没有杀灭作用,所以期望用青芥辣杀灭肝吸虫囊蚴来达到预防肝吸虫感染的做法不可取.

    作者:许燕佳;崔燕玲;陈虹;沈浩贤;张惠球;麦璟莹;李小敏;何芳;朱蔚云;黎银燕;马长玲;陈代雄;陈新宇 刊期: 2010年第02期

  • 华支睾吸虫感染与肝胆疾病的关系

    本文综述了华支睾吸虫病与其他肝胆疾病的误诊情况和华支睾吸虫感染与胆囊炎、胆管炎、胆石症、其他肝胆疾病及癌症的关系.临床医生若能提高对华支睾吸虫感染与其他肝胆疾病的鉴别水平,减少误诊;人群增强自我保健意识.改变不良的饮食习惯,将可有效控制华支睾吸虫感染.

    作者:黄嘉殷;方小衡 刊期: 2010年第02期

  • 弥漫大B细胞性淋巴瘤survivin表达与其预后的关系

    目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤survivin表达与临床表现的关系.方法 收集有完整随访资料的弥漫大B细胞性淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)患者128人,均有5年以上完整的随访资料.用免疫组化sP法检测其survivin表达情况,并分析其表达与临床预后的关系.结果 128例DLBCL患者中有84例survivin蛋白表达阳性,阳性率为65.6%.表达阳性者与阴性者5年(overall survival,OS)分别为58.8%和18.7%,差异具有统计学意义.在淋巴瘤国际预后指数(international prognostic index,IPI)积分低危患者中,survivin表达阳性者5年总生存期OS及无病生存期(disease free survival,DFS)明显低于表达阴性者;在国际预后指标(international prognosis index,IPI)积分高危患者中,survivin表达阳性与阴性者5年OS无明显差异.结论 Survivin是DLBCL的一个较有价值的预后指标,与IPI联合应用可筛选出低危患者中预后不良病例.

    作者:张红雨;陈红涛;汪波;管忠震;林桐榆 刊期: 2010年第02期

  • 一种分离纯化东方田鼠肝细胞的方法改进

    目的 建立体外培养东方田鼠鼠肝细胞的实验体系.方法 采用下腔静脉插管原位灌注结合胶原酶灌注法分离纯化出肝细胞,在改良Eagle培养基(Dulbecco's Modified Earle Media,DMEM)中培养,显微镜下观察细胞形态,AO-EB染色观察测定其活率来评价细胞质量.结果 一只东方田鼠肝脏一般可获得1.5×108~3.0×108个细胞,活率达95%,完全符合实验要求.刚分离的东方田鼠肝细胞呈圆球形,大小均匀,培养3 h后,大部分肝细胞出现贴壁,形态呈扁平状.培养24 h后,伸展良好,并成片生长.结论 下腔静脉插管原位灌注结合胶原酶灌注法可以分离出高纯度和活率高的东方田鼠肝细胞.

    作者:丘继哲;邹艳;曾庆仁;刘碧源;黄旭;徐妮为 刊期: 2010年第02期

  • 广州市2008年人群麻疹抗体水平监测分析

    目的 全面了解和掌握广州市各区、县级市人群麻疹抗体水平,为实施有效的控制预防及消除麻疹提供科学依据.方法 2008年在广州市12个区、县级市中随机抽取9个区、县级市,采集孕妇、新生儿及0岁以上11个年龄组的健康人群静脉血各40人份,采用酶标ELISA法检测麻疹IgC抗体.结果 调查4043名健康者,其中抗体阳性2856人,阳性率为70.64%.所调查的9个区(县级市)中,不同区(县级市)之间的麻疹抗体阳性率差别有统计学意义(X2=400.313,P<0.05);12岁以上组则明显下降,各年龄组之间抗体阳性率差别有统计学意义(X2=267.832,P<0.05).结论 应加强计划免疫工作,使整个人群的免疫水平达到一个稳定的水平;在一定年龄组加强免疫接种是进一步控制麻疹爆发和流行的有效措施.

    作者:张伟;狄飚;吴新伟;许建雄;傅传喜;李魁彪;鲁恩洁 刊期: 2010年第02期

  • 高血压脑出血伴天幕裂孔疝手术治疗的临床研究

    目的 探讨对比标准大骨瓣开颅(Standard large craniotomy)血肿清除去大骨瓣减压并天幕裂孔疝复位术与常规大骨瓣开颅血肿清除去大骨瓣减压术对高血压脑出血伴天幕裂孔疝的治疗效果.方法 66例高血压脑出血伴天幕裂孔疝患者(格拉斯哥昏迷评分GCS≤8分)随机分成研究组(标准大骨瓣开颅)和对照组(常规大骨瓣开颅),术后记录1、3、7 d腰穿置管监测颅内压(intracranial pressure ICP)值、脑脊液细胞数、头颅CT检查并测量脑水肿范围和中线结构移位、TCD(transcranial doppler system)监测脑血管痉挛等指标,根据主要并发症比较两组疗效.结果 术后3 d研究组较对照组的颅内压、脑脊液细胞数、脑水肿范围和中线结构移位等指标改善有显著性差异(P<0.01).术后7 d研究组的上述各项指标接近正常.研究组并发症和死亡率明显少于对照组.结论 用标准大骨瓣开颅血肿清除去大骨瓣减压并天幕裂孔疝复位术治疗高血压脑出血伴天幕裂孔疝能减少并发症,降低死亡率,是手术治疗高血压脑出血伴天幕裂孔疝的有效方法.

    作者:向进;郭伟;吕文;王莉莉;陈东;赵永阳 刊期: 2010年第02期

  • 疟疾的防控现状及进展

    近年来,随着流行病学监测和实验室检测技术的进步、防蚊灭蚊措施的改进及抗疟疾药物的研究的进展,人类的疟疾防控工作也不断进步,但同时也不断面临着新的挑战.本文综述了我国及全球疟疾的流行现状、检测技术及防控措施的现状.

    作者:车河龙;林栋 刊期: 2010年第02期

  • 广州某快餐连锁店2005-2008年冷饮微生物检测结果分析

    目的 了解广州市快餐连锁店冷饮的卫生质量,为监督执法提供有力可靠的科学依据,探讨快餐连锁店冷饮微生物污染的规律.方法 对2005-2008年广州市某快餐连锁店监督抽检的冷饮样品575份进行微生物指标分析;数据采用SPSS.13.0软件包进行统计学处理.结果 冷饮样品微生物指标合格率为83.3%,其中果汁类冷饮的合格率为80.0%:总体是大肠菌群超标比菌落总数为多.结论 2005-2008年该连锁店冷饮卫生质量不稳定;上规模、管理规范的连锁经营,其卫生质量远高于散户小型饮料店.加强企业自身管理、引入HACCP概念,有利于提高食品安全质量.

    作者:成莉莉;谭铭雄;黎庆强 刊期: 2010年第02期

  • 中山市医疗机构实验室生物安全管理现状调查

    目的 了解中山市医疗机构实验室生物安全管理现状,为进一步加强和规范医疗机构实验室生物安全管理工作提供依据.方法 设计<实验室生物安全自查表>,对中山市各类医疗卫生机构共29家单位进行问卷调查,使用Excel软件对数据进行统计分析.结果 中山市医疗机构生物安全实验室在安全管理制度的制定、防护设备使用方面与生物安全管理要求尚有一定差距,尤其在菌毒种管理和运送方面存在安全隐患.结论 中山市生物安全实验室的管理工作需要加强,应尽快建立健全的实验室生物安全管理体制.

    作者:刘延;徐庆锋;黄毓文;陈宇轩;朱利;吴声穗;赵卫 刊期: 2010年第02期

  • 甲型H1N1流感双重荧光PCR快速筛查方法的研究

    目的 优化一种甲型H1N1流感的双重荧光PCR快速筛查方法.方法 根据WHO推荐的甲型H1N1流感检测方案合成、标记引物和探针.通过改进反应条件与参数,优化了甲型H1N1流感的双重荧光PCR检测方法.结果 该方法敏感度高,特异性强,重复性好.应用该方法检测患者实际样品,结果与WHO推荐方法的检测结果一致;应用该法可在4 h内完成对样品中甲型H1N1流感的检验.结论 本研究优化的甲型H1N1流感的双重荧光PCR快速筛查方法可用于甲型H1N1流感的诊断.

    作者:王佃鹏;朱玉兰;李政良;刘胜牙;董瑞玲;黄宗炎;高朝贤;胡孔新 刊期: 2010年第02期

  • 清新县流动人口血吸虫病监测效果分析

    目的 通过对清新县流动人口监测结果的分析,探讨优化输入性血吸虫病人的防控措施.方法 对清新县流动人口血吸虫病的监测结果进行统计分析.结果 2005年清新县对流动人口67045人进行调查,显示有66%的流动人口居住在该县的城乡结合部或农村地区,来自疫区的人群约占流动人口的12%.2001-2008年,采用常规主动监测1052人、选择性主动监测1456人,血吸虫血清抗体阳性率分别为2.57%(27/1052)和4.81%(70/1456),两者差异有统计学意义(X2=8.25,P<0.01);发现输入性临床诊断慢性病人分别为0例和13例(0.89%),病原确诊病人分别为0例和2例(0.14%).显示选择性主动监测对查获输入性病例的效果明显优于常规主动监测.结论 来自疫区的流动人口中存在一定数量的血吸虫病患者,为做好输入性传染源的防控工作,现阶段要重点开展选择性主动监测,同时加强被动监测,并通过选择灵敏度较高的检查方法以提高监测效果.

    作者:周志珊;黄德厚;李初升;许广才 刊期: 2010年第02期

  • CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶原核表达条件的研究

    目的 探讨重组质粒pET-28a(+)/CTX-M-3分别在大肠埃希菌ER2566和BL21(DE3)中进行原核表达的佳条件.方法 分别在不同的宿主菌、诱导温度、诱导时间和诱导剂浓度中诱导pET-28a(+)/CTX-M-3融合表达载体,目的 产物经SDS-PAGE和BandScan凝胶分析软件分析,以获得佳表达条件.结果 表达载体的佳诱导条件是重组质粒在BL21(DE3)中18℃诱导24 h,IPTG终浓度为0.8 mmol/L:表达载体在佳条件下表达时,目的 蛋白的高表达量占菌体总蛋白的33%.结论 获得pET-28a(+)/CTX-M-3在大肠埃希菌中表达CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamase,ESBLs)蛋白的佳条件,为此酶的大量纯化奠定了基础.

    作者:徐韫健;李翊泉;廖伟娇;江洁华;张东梅 刊期: 2010年第02期

  • 医学本科生微生物学实验教学新模式的实践与思考

    以近年来参与医学微生物学实验教学的实践为基础,从改革课程设置和安排、完善病例引导式问题教学法、增设综合性和设计性实验和改革考核方式这4个方面论述了对医学本科生微生物学实验教学改革的思考.基于学时数,合理安排实验内容,知识循序渐进;进一步完善病例引导式问题教学法,数量适宜,重点突出;增设综合性和设计性实验,提高实验系统性;改革考核方式,综合评价学生实际水平和能力.突出对学生创新能力的培养,使学生真正掌握相关的知识和技能,形成严谨务实的科学工作作风,获得解决实际问题的能力.

    作者:周俊梅 刊期: 2010年第02期

  • 湘潭市2001-2008年结核病控制效果分析

    目的 评价近8年来湘潭市实施结核病控制的防治效果.方法 对湘潭市2001-2008年结核病控制工作月报表、季报表、年报表及网络直报信息库资料进行分析.结果 湘潭市可疑肺结核患者就诊率、活动性肺结核病人的登记率,分别由2001年的64.1/10万和37.9/10万,上升到2008年的186.4/10万和67.6/10万.综合医院、乡镇卫生院和村医生等转诊来的病人由2001年的25.2%上升到2008年的36.5%.7年来的初治、复治涂阳肺结核病人平均治愈率分别为88.0%和80.3%.结论 通过实施结核病控制项目,发现和治愈了大批的涂阳肺结核病人,减少了结核病传染源,节省了病人医药费,收到了显著的社会效益和经济效益.

    作者:袁伟;陈有芳;李家明 刊期: 2010年第02期

  • 登革病毒E蛋白入胞机制研究现状

    登革病毒(dengue virus,DENV)属于黄病毒科黄病毒属,是具有包膜的单股正链RNA病毒.病毒可通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播,引起登革热和登革休克综合征,广泛流行于热带和亚热带地区,全球流行超过100个国家.登革病毒依赖包膜蛋白E蛋白构象的改变,从而发生病毒包膜和宿主细胞膜之间的融合将病毒核酸传递入细胞质中,但其感染人胞机理尚不十分清楚.本文就登革病毒相关E蛋白入胞机制的新研究进展作一简要综述.

    作者:李焱;时莹;徐志凯;丁天兵 刊期: 2010年第02期

  • 蒲公英提取物中总黄酮和多糖的含量分析

    目的 了解蒲公英提取物(extract from Taraxacum mogonon,ETM)中总黄酮、多糖的含量.方法 提取ETM中总黄酮和多糖成分,分光光度法测定样品中总黄酮和多糖的含量.结果 以芦丁和葡萄糖为对照品,测定波长分别选择510hm和490nm,稳定性试验显示总黄酮、多糖1 h内吸光度基本稳定,精密度和重现性较好,回收率在95.73%~102.16%之间;其中总黄酮和多糖的平均含量分别为5.51%、14.91%.结论 分光光度法测定ETM中总黄酮、多糖含量准确,并稳定、简单易行且重复性良好,可作为蒲公英中总黄酮和多糖的检测方法.

    作者:吴晓丽;蔡云清 刊期: 2010年第02期

  • 广东登革3型病毒株的分离培养和鉴定

    目的 对2009年发生于广东地区的3例家庭聚集性登革热患者血清进行登革病毒的鉴定和病毒株的培养分离.方法 用胶体金法检测患者血清中登革病毒特异性IgM、IgG抗体;C6/36细胞培养患者血清中登革病毒;RT-PCR扩增C-PrM基因序列的片段以检测患者血清中登革病毒RNA,PCR产物经序列测定后进行生物信息学分析.结果 3例患者血清学检测均为登革病毒特异性IgM阳性、IgG阴性;特异性RT-PCR产物长约290bp,经琼脂糖电泳和测序分析,证实3例患者血清中均存在登革3型病毒;从1例患者血清中培养分离到了登革病毒株,经RT-PCR和测序证实为登革3型病毒.结论 2009年发生于广东地区的3例登革热患者经病毒培养和分子生物学鉴定,证实均为登革3型病毒感染.

    作者:周伟泽;张复春;胡凤玉;王建;洪文昕 刊期: 2010年第02期

  • 1.3倍乙型肝炎病毒全基因真核表达载体的构建及其在Bewo细胞中的表达

    目的 构建1.3倍乙型肝炎病毒(HBV)全基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBV1.3,并观察其在Bewo细胞中的表达.方法 以质粒pMD18T-HBV上的HBV DNA序列为模板,构建1.3倍HBV全基因序列,将其插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),用酶切、PCR及测序鉴定,并把该载体转染Bewo细胞,以Western免疫印迹、微粒子酶免疫分析法(MEIA)和荧光定量PCR法分别检测胞内和上清中HBsAg、HBeAg蛋白的表达及HBV DNA水平.结果 通过酶切、PCR及测序鉴定,成功构建1.3倍HBV全基因表达载体,该载体可以在Bewo细胞系中表达和分泌HBsAg与HBeAg,并可检测到高水平的HBV DNA.结论 成功构建了1.3倍HBV全基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBV1.3,为研究胞内HBV宫内感染奠定了基础.

    作者:资捷;王前;郑磊;熊石龙;蔡贞 刊期: 2010年第02期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会