学术投稿

TRAIL诱导乙型肝炎病毒转染细胞株凋亡的实验研究

唐永玮;吴晓蔓

关键词:TRAIL, HepG2.2.15细胞, 细胞凋亡
摘要:目的 探讨人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对HBV稳定转染的肝癌细胞株HepG2.2.15的凋亡诱导效果.方法 应用MTT法了解TRAIL对HepG2.2.15细胞的诱导效果.琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术和Caspase-3酶活性分析TRAIL诱导HepG2.2.15细胞凋亡过程.结果 TRAIL(0.1μg/mL)作用于HepG2.2.15细胞株12、24、36 h后,细胞抑制率分别为17.91%、41.26%、59.85%;PI单染亚二倍体含量12 h后为21.8%,高于对照组的8.7%;24 h后DNA电泳200 bp处出现特异性条带;6 h后Caspase-3酶活性为对照组的4.76倍.结论 TRAIL诱导后,HBV稳定转染的肝癌细胞株HepG2.2.15发生凋仁.
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    目的 克隆人血红蛋白δ(delta)链蛋白基因,并在大肠杆菌中进行表达,经纯化与鉴定,获得δ链蛋白,为建立β-地中海贫血的免疫学筛查方法提供特异性抗原.方法 从K562细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术获得目的 片段并将其克隆到pET-32a及pET43.1a载体中,经PCR、酶切及测序验证,以IPTG诱导其在大肠杆菌中表达.包涵体经变性、复性后以Ni2+亲和层析柱纯化,可溶性蛋白直接以Ni2+亲和层析柱纯化.采用Western Blot和ELISA分析鉴定表达产物.结果 成功构建两种融合表达载体pET32-Hbδ及pET43.1.Hbδ,分别为包涵体表达和可溶性表达,纯化产物经Western blotting和ELISA鉴定均为δ链蛋白.结论 克隆表达并获得了纯化的人血红蛋白δ链,为后续的抗体制备及地中海贫血的免疫筛选方法的建立提供了抗原.

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    作者:王慧勇;宋福春;沈静 刊期: 2009年第01期

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    作者:周志珊;李初升 刊期: 2009年第01期

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    目的 探索慢性阻塞性肺病急性加重(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)继发侵袭性肺真菌感染的早期诊断方法,以及影响预后的因素.方法 查阅2000-2008年因AECOPD入院继发肺真菌感染病例,符合侵袭性肺部真菌感染的诊断标准与治疗原则(草案)者,调阅CT及X档案,记录住院期间抗生素和皮质激素使用史、真菌培养和药敏试验、基础病等进行分析.结果 AECOPD合并肺侵袭性真菌感染25例,死亡4例.其病原学分析显示:白假丝酵母菌16例(64%),光滑假丝酵母菌4例(16%),热带假丝酵母菌2例(8%),克柔假丝酵母菌1例(4%),曲霉菌2例(8%).胸部CT改变以结节影、结节晕轮征、团块影以及空洞为主,分别为:20、17、14和8例次,其中结节晕轮征具有特征性;X线胸片以支气管肺炎样改变、团块影、空洞和支气管炎改变为主,分别为16、14、5、5例次.预后分析提示:机械通气、抗生素使用时间超过7 d、同时使用抗生素种类超过3种、大剂量激素和合并呼吸衰竭等基础病是AECOPD继发肺侵袭性真菌感染预后不良的因素.结论 AECOPD继发肺真菌感染预后差,病死率高(16%),早期胸部CT以及痰检对及早发现肺侵袭性真菌感染有价值.合理使用抗生素,严格掌握AECOPD使用皮质激素以及机械通气的适应证,对改善预后有积极作用.

    作者:蒋文中;马洪明 刊期: 2009年第01期

  • 犬隐孢子虫和隐孢子虫病的研究进展

    隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)是由隐孢子虫(Cryptosporidium)引起的一种重要的人畜共患病.近年来,隐孢子虫病的检出率逐年增高,已被列为世界常见的6种腹泻病之一.犬隐孢子虫病世界各地均有报道.严重威胁着人类和动物的健康.本文对犬隐孢子虫病的病原分类、虫体形态和寄生部位、流行病学特点、诊断、防治等方面研究状况进行了综述,为犬隐孢子虫病的有效防制提供参考.

    作者:董和平;菅复春;张龙现;宁长申 刊期: 2009年第01期

  • 广州市2007年与2008年麻疹流行特征比较

    目的 分析2008年与2007年麻疹的流行特征,比较两年间流行特征的异同,为2008年后半年麻疹的控制重点提供依据.方法 利用<麻疹疫情监测系统数据>中麻疹的个案资料,抽取广州市2007年3-9月的2 809例麻疹病例,及2008年1~5月的1 003例病例,对其免疫史情况、发病年龄构成、户籍性质分布等进行比较分析.结果 两年间麻疹病例的平均年龄差异无统计学意义(P>0.05);2008年上半年,相比2007年8月龄~14岁麻疹免疫目标人群发病所占比例下降(P<0.05).未到初免年龄(8月龄)病例中6~8月龄占了绝大部分比例;两年中免疫空白病例仍然是发病的重点人群;流动人口仍然是发病的主要人群.结论 麻疹免疫目标人群的麻疹控制较2007年取得了一定的成绩,非目标人群(8月龄~14岁以外人群)、免疫空白人群及流动人口是麻疹控制的重点.

    作者:云雪霞;许建雄;梁建华;谭慧峰 刊期: 2009年第01期

  • PPARγ激动剂对白血病NB4细胞的诱导凋亡作用及其作用机制

    目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮(rosiglitazone,RGZ)对白血病NB4细胞的诱导凋亡作用及其作用机制.方法 以不同浓度的RGZ作用于体外培养的NB4细胞0、24、48及72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,并对细胞凋亡前后P53蛋白的表达水平进行检测.结果 RGZ可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系,在细胞凋亡的同时,P53蛋白的表达水平明显升高.结论 PPARγ激动剂RGZ能显著抑制NB4细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,升高促凋亡蛋白P53的表达水平可能是RGZ诱导NB4细胞发生凋亡的重要作用机制之一.

    作者:刘晓丽;林东军;肖若芝;刘加军 刊期: 2009年第01期

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    哺乳动物的Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)是一种重要的模式识别受体,TLR3是Toll样受体家族中的一员,与病毒感染密切相关.本文就TLR3相关信号转导途径与病毒感染及凋亡作一综述.

    作者:徐娟;黄俊琪 刊期: 2009年第01期

  • 三氧化二砷联合人参皂甙Rg3对移植瘤肝癌细胞凋亡的影响

    目的 探讨三氧化二砷(As2O3)联合人参皂甙Rg3对移植瘤肝癌细胞凋亡的影响.方法 体外培养人肝癌Bel-7402细胞株,种植于雄性裸鼠皮下,32只鼠随机均分成4组:Rg3组(5、10、20 mg/kg)、三氧化二砷组、人参皂甙Rg3+三氧化二砷组(联合用药组)及对照组.实验自肿瘤接种第3天开始,人参皂甙Rg3,隔日灌胃,共20次,三氧化二砷,每次给药为40μg/(kg·d),每日腹腔内注射,连续28 d.对照剂为生理盐水.停药一周后,脱颈处死.完整取出瘤块,检测肿瘤的重量,计算抑瘤率.采用免疫组织化学法检测联合用药组、RS3组、三氧化二砷组及对照组中在裸鼠肝癌移植瘤组织中Bax、Bcl-2蛋白的表达情况.结果 三氧化二砷组上调Bax,下调Bcl-2蛋白的表达,作用高于Rg3组,联合组Bcl-2值低,Bax值高,随着Rg3药物浓度的升高,联合组的效果更为明显(P<0.05).结论 在裸鼠体内实验中,人参皂甙Rg3与三氧化二砷联合应用,可以显著的抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长.其具体机理可能与下调抑凋亡基因Bcl-2的表达,增强促凋亡基因Bax的表达有关.

    作者:何芳;何黎 刊期: 2009年第01期

  • TRAIL诱导乙型肝炎病毒转染细胞株凋亡的实验研究

    目的 探讨人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对HBV稳定转染的肝癌细胞株HepG2.2.15的凋亡诱导效果.方法 应用MTT法了解TRAIL对HepG2.2.15细胞的诱导效果.琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术和Caspase-3酶活性分析TRAIL诱导HepG2.2.15细胞凋亡过程.结果 TRAIL(0.1μg/mL)作用于HepG2.2.15细胞株12、24、36 h后,细胞抑制率分别为17.91%、41.26%、59.85%;PI单染亚二倍体含量12 h后为21.8%,高于对照组的8.7%;24 h后DNA电泳200 bp处出现特异性条带;6 h后Caspase-3酶活性为对照组的4.76倍.结论 TRAIL诱导后,HBV稳定转染的肝癌细胞株HepG2.2.15发生凋仁.

    作者:唐永玮;吴晓蔓 刊期: 2009年第01期

  • 细粒棘球蚴AgB亚单位基因的联合表达和血清学评价

    目的 为进一步提高AgB抗原在诊断中的敏感性和特异性,将细粒棘球蚴AgB1和AgB2两个亚单位基因在同一载体中进行联合表达,并对联合表达的重组抗原和单基因表达的AgB1、AgB2在血清抗体检测中的差异进行比较研究.方法 在表达载体PET32a中构建AgB1+AgB2(AgBs)联合基因的重组质粒,用ELISA检测重组抗原与病人血清的反应性.结果 构建了AgBs重组质粒,经测序证实插入的联合基因片段序列正确.AgBs重组质粒表达的融合蛋白分子量为38 kDa,为不溶性蛋白.联合表达抗原AgBs对细粒棘球蚴病(CE)血清的敏感性为84.4%,特异性为80.5%;单基因表达的AgB1和AgB2的敏感性分别为75.6%和57.8%,特异性分别为72.6%和91.2%.结论 成功构建了AgB亚单位联合表达基因,联合表达的AgBs抗原对CE血清的诊断价值优于单基冈表达的AgB1或AgB2抗原.

    作者:江莉;冯正;许学年 刊期: 2009年第01期

  • 脂质体介导E1A—TK基因转染人肺腺癌细胞A549体外研究

    目的 用脂质体转染真核表达质粒PcDNA3E1A-TK入人肺腺癌细胞A549,观察丙氧鸟苷(GCV)、X射线及二者联合对转染细胞的体外杀伤作用.方法 用阳离子脂质体介导真核表达质粒PcDNA3E1A-TK转染人肺腺癌细胞A549,PCR、RT-PCR方法分别检测转染细胞中E1A-TK基因DNA整合、mRNA表达.MTT法测不同浓度GCV、不同剂量X射线及一定剂量X线照射后再给一定量GCV对转染细胞的生长抑制率.结果 PCR、RT-PCR结果表明转染细胞有EIA-TK基因整合、mRNA表达.根据IC50,转染细胞对GCV、X射线的敏感性分别比亲代细胞提高111.3倍和2.9倍,在作用相同时间后,GCV+X线照射治疗对转染细胞的生长抑制作用比单纯GCV或X线治疗明显增强(P<0.01).结论 脂质体介导外源基因E1A-TK成功转入人肺腺癌A549细胞并获得表达;转染细胞获得了对GCV和X线的敏感性,GCV和X线对转染细胞有协同杀伤作用.

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  • 胰岛移植研究进展

    胰腺组织的移植,包括胰腺器官(胰腺)和胰岛细胞(胰岛)移植,已经被公认为是治疗1型糖尿病的一个临床选择.成功的胰腺或胰岛移植相对于传统的外源性胰岛素注射疗法来说,可以达到一个正常或接近正常的血糖控制水平和糖化血红蛋白水平,而且还不会出现胰岛素疗法经常出现的严重的低血糖反应.两种类型胰腺组织的移植,都可以有效的降低严重低血糖的事件发生.而且胰腺移植已经被证实可以长时间使血糖保持一种持续正常稳定的状态.对于接受胰腺移植的糖尿病患者,其优点是血糖可以很好的得到控制;但同时也面临着出现手术以及移植后并发症的风险.与胰腺移植相比,成人胰岛细胞移植更加安全,手术简捷,并发症极少.并可多次重复进行;其更加吸引人的地方是它创伤性更小.而且,通过移植前的特殊培养,未来有望实现脱离免疫抑制剂的胰岛移植.不足之一是胰岛移植往往不能使血糖控制在一个稳定的水平,这一点对降低糖尿病并发症的发生往往又是必须的.另外,胰岛移植又使接受移植的患者不得不承受免疫抑制治疗带来的一系列不良反应.尽管新近的发展已使胰岛移植后脱离胰岛素治疗的比率有了很大提高,但是如何使移植物保持更长时间的活力和功能以更好的控制血糖,今后还有很多的事情要我们去做.本文将就近些年胰岛移植的一些相关内容做一简要综述,以期能给临床及科研工作者带来一定的启示.

    作者:马广念;贺德 刊期: 2009年第01期

  • 生化标志物的检测对判定急性心肌梗死溶栓后冠脉再通的临床价值

    目的 研究检测生化标志物血清肌红蛋白(MYO)、肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和C-反应蛋白(CRP)对急性心肌梗死溶栓冠脉再通的早期诊断价值.方法 MYO、cTnI、CK-MB使用酶联免疫分析法、CRP使用激光散射比浊法测定127例急性心肌梗死患者溶栓治疗前后MYO、cTuI、CK-MB和CRP浓度和时间的变化,分析急性心肌梗死患者溶栓再通组(83例)和溶栓未通组(44例)上述指标的连续、动态演变.结果 急性心肌梗死溶栓再通组MYO、cTnI、CK-MB和CRP达到峰值浓度的时间较未通组明显提前(P<0.01).其中MYO较cTnI、CK-MB和CRP峰值时间出现更早,分别为(6.1±2.4)h、(13-8±3.5)h、(14.4±3.8)h和(25.2±5.7)h(P<0.01);再通组MYO和CRP峰值浓度明显高于未通组(P<0.01);MYO、cTnI、CK-MB和CRP对判断冠脉再通的敏感性、特异性、预测值差异无统计学意义(P>0.05).结论 血清MYO、cTnI、CK-MB和CRP可以较好地预测急性心肌梗死患者溶栓再通,其中MYO较cTnI、CK-MB和CRP能更早期判断冠状动脉是否再灌注;CRP对溶栓后冠脉再通的判断也有积极的参考意义.

    作者:李挺;伍华;黄杰雄;何慧娟 刊期: 2009年第01期

  • 慢性阻塞性肺疾病大鼠中磷酸化蛋白激酶B与γ—谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达研究

    目的 通过观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型中γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)与磷酸化蛋白激酶B(p-PKB)的表达,研究p-PKB和γ-GCS在COPD中可能的参与机制.方法 28只健康雄性Wistar大鼠随机分为COPD组和对照组.采用每日熏香烟和两次气管内注入脂多糖(LPS)法制作COPD大鼠模型.检测肺组织中γ-GCS活性,原位杂交检测肺组织中γ-GCS mRNA的表达,免疫组化和Western印迹分析肺组织中γ-GCS与p-PKB蛋白水平.结果 γ-GCS活性在COPD组大鼠中明显高于对照组.组间差异有统计学意义(P<0.05).原位杂交显示COPD组大鼠支气管、肺泡上皮细胞与小动脉平滑肌细胞γ-GCS mRNA广泛表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).COPD组大鼠γ-GCS与p-PKB免疫组化可见肺泡、支气管壁细胞及小血管平滑肌细胞胞浆有较强蛋白阳性信号;图像定量分析显示COPD组γ-GCS与p-PKB蛋白表达高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).Western blot显示γ-GCS与p-PKB在COPD组蛋白表达高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05).SPSS10.0直线相关分析得出p-PKB蛋白表达与γ-GCS活性、mRNA及蛋白表达呈正相关.结论 COPD大鼠肺组织γ-GCS蛋白和mRNA表达增高,p-PKB蛋白也有相应高表达,提示p-PKB和γ-GCS可能在COPD的发病机制中起作用,且PKB可能参与了γ-GCS的信号转导.

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  • 检验医学实验教学中的辩证法

    将内因与外因、局部与整体、一般与特殊、量变与质变、认识论与方法论等唯物辩证法哲学范畴和观点应用于医学检验形态学实验教学中,融知识传授与哲学观渗透于一体,不断提高学生的学习兴趣和分析问题、解决问题的能力,同时培养学生的科学辩证思维,用科学的态度和方法指导工作、学习,逐步成为具有创新精神和实践能力的高素质应用型检验医学人才.

    作者:张继瑜;裘宇容;李海侠;包杰 刊期: 2009年第01期

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