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刚地弓形虫SAG3基因体外扩增及生物信息学分析

杨雯;朱穗京;田春林;王卫群;刘晓泉

关键词:刚地弓形虫, SAG3基因, 体外扩增, 生物信息学分析
摘要:目的 获取刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株表面抗原SAG3目的 基因片段,对其结构和功能进行生物信息学分析,预测其编码蛋白作为候选抗原基因的可行性.方法 提取弓形虫的基因组DNA,自行设计一对寡核苷酸引物,PCR体外扩增SAG3基因,用生物信息学方法对SAG3蛋白的理化性质、结构和功能进行预测.结果 扩增出的基因片段约1 174 bp,测序后鉴定其为弓形虫RH株SAG3基因片段.预测SAG3蛋白相对分子质量约为41 785.2,能形成两个功能结构域,氨基酸序列的前38(或39)位为信号肽序列.通过多种预测方法分析SAG3氨基酸序列抗原表位可能位于第10、50、80、95、160、180、220、250、300、330和360位点内或附近.结论 成功获得SAG3基因,为深入研究该基因结构奠定了基础.
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    作者:戴森华;李娟;高国华;吕卓;谢红伟 刊期: 2009年第05期

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  • 刚地弓形虫SAG3基因体外扩增及生物信息学分析

    目的 获取刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株表面抗原SAG3目的 基因片段,对其结构和功能进行生物信息学分析,预测其编码蛋白作为候选抗原基因的可行性.方法 提取弓形虫的基因组DNA,自行设计一对寡核苷酸引物,PCR体外扩增SAG3基因,用生物信息学方法对SAG3蛋白的理化性质、结构和功能进行预测.结果 扩增出的基因片段约1 174 bp,测序后鉴定其为弓形虫RH株SAG3基因片段.预测SAG3蛋白相对分子质量约为41 785.2,能形成两个功能结构域,氨基酸序列的前38(或39)位为信号肽序列.通过多种预测方法分析SAG3氨基酸序列抗原表位可能位于第10、50、80、95、160、180、220、250、300、330和360位点内或附近.结论 成功获得SAG3基因,为深入研究该基因结构奠定了基础.

    作者:杨雯;朱穗京;田春林;王卫群;刘晓泉 刊期: 2009年第05期

  • 3起老人院诺如病毒胃肠炎暴发疫情分析

    目的 分析3起发生在老人院内的诺如病毒胃肠炎局部暴发疫情的流行特征,为今后预防类似事件的发生提供参考依据.方法 收集2007年佛山市老人院诺如病毒胃肠炎暴发疫情现场流行病学调查报告,采用描述性流行病学方法对疫情调查处理情况进行分析.结果 2007年佛山市共报告3起老人院诺如病毒胃肠炎暴发疫情,共发病56例,无死亡病例;疫情集中发生在2~3月份:每起疫情均从部分患者粪便标本中检测诺如病毒Ⅱ型核酸;3起疫情主要以人-人密切接触的途径传播.结论 早发现、早报告、早处理疫情,以及日常加强院内卫生,强化护工的规范操作,是预防和控制诺如病毒胃肠炎在老人院发生的关键.

    作者:梁自勉;李艳容;黄祖星 刊期: 2009年第05期

  • 乙肝病毒前S1抗原时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

    目的 利用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立乙型肝炎病毒前S1抗原的检测试剂盒.方法 应用双抗体夹心法建立乙肝preS1抗原TRFIA检测试剂盒,对试剂盒的各项性能指标进行评估.结果 对280份血清样本进行检测并与国产酶联免疫法试剂盒对比,结果显示自制试剂盒的特异性更好;200份正常人血清样本检测结果表明,该试剂盒的cutoff值=阴性对照荧光值×4.5.用自制质控品检测分析内和分析间的精密度分别为3.4%~7.8%,6.9%~8.4%;检测HBsAg及HBeAg无交叉反应.结论 试剂盒各项指标均达到临床检测要求,TRFIA法精密度和特异性有较大提高,可替代酶免法试剂盒.

    作者:胡妮娅;董志宁;周卓龙;李明;吴英松 刊期: 2009年第05期

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    作者:徐秀章;夏文杰;叶欣;付涌水;陈扬凯;邓晶;丁浩强;罗广平;许茹 刊期: 2009年第05期

  • 尼妥珠单抗联合化疗药物对人结肠癌细胞株LoVo的实验研究

    目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)的单克隆抗体尼妥珠单(nimotuzumab,h-R3)与化疗药物联合对结肠癌细胞株LoVo的作用.初步探讨其可能的作用机制.方法 采用MTT法测定不同药物单药、两药联合分别对结肠癌细胞株LoVo的IC50值;计算不同药物联合的q值,以确定药物联合的作用;流式细胞仪检测不同药物单药或者联合对细胞周期分布及凋亡比例的影响.结果 联合h-R3能显著提高伊立替康对LoVo细胞的细胞抑制率.诱导更多肿瘤细胞发生凋亡以及产生G0/G1期、G2/M期阻滞,与5-氟尿嘧啶联合具有类似的作用,但较伊立替康不明显,而与奥沙利铂联合无明显增效作用.结论 h-R3通过协同或相加作用提高伊立替康、氟尿嘧啶的细胞杀伤作用,其机制与促进细胞凋亡和影响细胞周期分布有关,奥沙利铂联合对LoVo细胞无明显增效作用.为进一步的体内及体外实验提供了一定的指导作用.

    作者:李小燕;曹梦苒;吕成伟;郑大勇;苏宁;罗荣城 刊期: 2009年第05期

  • 肺炎支原体抗原酶联免疫检测方法的建立

    目的 采用ELISA技术,建立肺炎支原体(Mycoplmma pneumonia)抗原检测方法.方法 制备肺炎支原体的多克隆抗体,建立酶联免疫吸附法,检测标本中的肺炎支原体,对其敏感性和特异性进行检测.结果 本方法可以检测毒株的1/212的稀释样品,对甲型流感病毒(H3N2亚型、H1N1亚型)、乙型流感病毒、副流感病毒(Ⅰ型、Ⅲ型)、呼吸道腺病毒(Ⅲ型、Ⅶ型)、肺炎衣原体无特异性反应.结论 本肺炎支原体抗原检测方法可用于疑似肺炎支原体感染样品的临床诊断和鉴别诊断.

    作者:周转;李军涛 刊期: 2009年第05期

  • 微创治疗在子宫肌瘤中的应用

    子宫肌瘤是女性生殖系统常见的良性肿瘤.近年来,以腹腔镜和官腔镜为代表的微创技术在子宫肌瘤治疗的应用中逐渐普及,如腹腔镜子宫切除术、腹腔镜子宫肌瘤切除术、官腔镜子宫肌瘤切除术,以及近年来越来越受到重视的阴式子宫切除术、阴式子宫肌瘤剔除术及子宫动脉栓塞术等.上述手术具有刨伤小、患者痛苦少、恢复快、住院时间短等优点,但适应证、手术方法、并发症又各不相同.

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  • 小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组的提取和双向电泳分离

    目的 提取小鼠肝细胞核磷酸化蛋白并利用双向凝胶电泳分离小鼠肝细胞核磷酸化蛋白.方法 提取小鼠肝细胞核蛋白并利用金属磷酸盐亲和层析树脂纯化出磷酸化蛋白后,进行一维等电聚焦分离和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并挑选其中一个蛋白斑点进行质谱分析.结果 成功提取了肝细胞核磷酸化蛋白,通过双向凝胶电泳分离技术成功建立了小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组图谱.质谱鉴定结果证实被挑选蛋白斑点是小鼠核磷酸化蛋白.结论 磷酸化蛋白纯化技术结合二维凝胶电泳分离技术是研究肝细胞核磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步全面研究和鉴定小鼠肝细胞核磷酸化蛋白的功能打下了基础.

    作者:夏高晓;李红梅;陈丽;赵明哲;胡水旺;王继刚;孙明晶;邓鹏;刘靖华;姜勇 刊期: 2009年第05期

  • 子痫前期患者白细胞介素-8和胎盘生长因子的表达及其意义

    目的 通过检测子痫前期患者羊水中白细胞介素-8(IL-8)和胎盘组织中胎盘生长因子(PLGF)的水平,以探讨IL-8和PLGF在子痫前期发病中的作用.方法 采用酶联免疫吸附法和免疫组化法分别测定20例轻度子痫前期患者,22例重度子痫前期患者和30例正常妊娠妇女(对照组)的羊水中IL-8和胎盘组织中的PLGF的表达.结果 子痫前期轻度组及重度组羊水IL-8均高于对照组,重度组羊水IL-8显著高于轻度组,差异均有统计学意义(P<0.01).子痈前期轻度组及重度组胎盘组织中PLGF表达量均低于对照组(P<0.01),而重度组低于轻度组(P<0.01).子痫前期轻、重度组及对照组胎盘组织中PLGF表达量与羊水IL-8水平均呈高度负相关(P<0.01).结论 子痫前期患者羊水中IL-8增高,而胎盘组织中PLGF表达下降,可能与子痫前期的发生、发展有关.

    作者:吴雪琴;赵勇;朱小芳;李玉芳;许瑞环 刊期: 2009年第05期

  • 粉尘致肺纤维化机制研究现状

    鉴于尘肺病的高发病率、高危害性和不可逆转性,探讨其发病机制以达到早发现、早诊断、早治疗具有重要意义.本文对目前研究的较为深入的自由基学说和细胞因子网络学说进行综述.

    作者:顾春晖;刘移民 刊期: 2009年第05期

  • 新型的变异甲型H1N1流感疫情爆发的防控

    2009年4月24日开始在墨西哥、美国等地接连爆发新型甲型H1N1流感(疫情之初称人感染猪流感)病毒疫情,这一疫情迅猛发展.截至北京时间4月29日晚,甲型HlNl流感疫情目前已蔓延至23国,其中10国已有确诊病例.

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  • 血者ABO血型反定型O细胞凝集原因分析

    目的 分析献血者ABO血型反定型O细胞凝集原因,以确保受血者输血安全.方法 对江门市2000年1月至2008年6月间,采用微板法检测献血者ABO血型出现反定型O细胞凝集者进行冷凝集素效价测定、吸收放散试验、意外抗体鉴定等血型血清学检测.结果 308 410例献血者中有25例出现反定型O细胞凝集.其中血清中含有冷凝集素导致O细胞凝集16例:效价1:4~1:32者10例、效价≥1:64者6例;血清中存在意外抗体导致O细胞凝集9例:抗-M(IgM)5例、抗-Lea(IgM)2例、抗-Leb(IgM)1例、抗-P1(IgM)1例.结论 采用微板法检测献血者ABO血型出现反定型O细胞凝集时,应进行相关的血型血清学检测;非血源紧缺的情况下,反定型O细胞凝集者不宜作为献血者.

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  • 大肠埃希菌O157:H7 Tir基因的生物信息学分析

    目的 扩增和测序肠出血型大肠埃希菌O157:H7 tir基因,利用生物信息学预测分析其结构和功能特征.以探讨Tir作为疫苗候选抗原的可能性.方法 利用PCR技术扩增咖基因并测序,应用生物信息学网站在线分析工具和vector NTI suite软件分析Tir蛋白结构和生物学功能,预测B细胞抗原表位.结果 该基因全长1 674 bp,编码558个氨基酸,蛋白质总体亲水性高,有稳定的理化性质.含有3个结构和功能域,两段穿膜结构,多个磷酸化位点,预测20个B细胞线性表位.结论 Tir毒力因子是很有前景的疫苗候选抗原,为肠出血型大肠埃希菌O157:H7的疫苗研究提供了理论依据.

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    卡介苗(BCG)由于其广泛应用的安全性及其免疫佐剂作用,以其为载体的重组疫苗研究日益被科学家们重视.本文简要概述了近年来硕大利什曼原虫、疟原虫、弓行虫、肝片吸虫等寄生虫重组BCG疫苗的构建及免疫机制的研究进展.

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