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粉尘螨第五组主要变应原(Der f5)的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定

关键词:粉尘螨, Der f5, 原核表达, 蛋白纯化, 免疫原性
摘要:目的 克隆表达粉尘螨第五组变应原(Dermatophagoides farinae,Der f5)基因,并鉴定纯化蛋白免疫原性.方法 提取活粉尘螨总RNA,扩增Der f5片段.PCR产物与克隆载体pMD18-T连接,转化入大肠埃希菌JM109,经酶切及测序鉴定获得pMD18-Der f5阳性菌株,再提取质粒进行双酶切,与表达载体pET-30a(+)连接,转化人大肠埃希菌BL21,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定其表达效果.Ni-IDA亲和层析柱纯化蛋白,利用尘螨病人血清鉴定其免疫原性.结果 构建了重组质粒pMD18-Der f5和pET30a-Der f5,SDS-PAGE结果表明Der f5基因在BL21中获得良好的可溶性表达,蛋白质分子量与理论值相符.纯化的蛋白与病人血清有良好的IgE结合活性.结论 获得广州地区Der f5的原核表达载体,高效表达纯化重组蛋白.初步鉴定了该蛋白的免疫原性.
热带医学杂志相关文献
  • 表现为孤立性血尿的IgA肾病36例临床分析

    目的 探讨表现为孤立性血尿的IgA肾病的临床特点及相关因素的影响.方法 分析36例经肾活检确诊为孤立性血尿的IgA肾病患者的临床表现特点、病理特征及相关因素.结果 孤立性血尿的IgA肾病患者以镜下血尿为主要临床表现,伴有腰痛、咽干咽痛、疲劳者较多.病理特征以系膜增生性肾小球肾炎为主,Lee病理分级分布以Ⅱ~Ⅲ级为主.结论 孤立性血尿的IgA肾病患病率较高,全身症状较轻,易被忽视,容易造成漏诊,应引起临床诊治的足够重视.

    作者: 刊期: 2009年第10期

  • 放疗性舌炎与其病损组织血管内皮细胞损伤的相关性研究

    目的 观察放射性舌炎病损局部病损组织血管内皮细胞损伤的动态变化.分析其与放射性舌炎病损程度的相关性.方法 建立放射性舌炎SD大鼠动物模型;观察其放射性口腔黏膜炎指数(oral mucositisindex,OMI);应用免疫组织化学方法(CD34)鉴定放射性舌炎病损局部病损组织血管内皮细胞:TUNEL检测RTG大鼠舌体病损组织内血管内皮细胞凋亡:统计学分析血管内皮细胞凋亡百分数与RTG口腔黏膜炎指数(OMI)间的时相变化关系.结果 放射照射后3 d可观察到明显的血管内皮细胞损伤和细胞凋亡.放射照射后的血管管腔变得明显不规则,管腔中可见有血栓形成,管腔内膜凹凸不平,血管扩张,管径变大,血管内皮细胞与基底膜分离脱落到管内,并可看到部分血管狭窄严重、闭塞.血管内皮细胞TUNEL检测到血管内皮细胞凋亡,5 d组凋亡内皮细胞百分数(%)为(78.3±0.31),8 d组为(89.3±0.83),14 d组为(83.5±0.41),21 d组为(69.3±0.57),28 d组为(47.3±0.59).5 d、8 d、14 d、21 d、28 d时RTG 13腔黏膜炎指数(OMI)与大鼠舌组织血管内皮细胞凋亡百分比的相关系数R=0.67(P=0.034).结论 RTG病损组织内血管内皮细胞损伤与RTG的病情相关,提示血管内皮细胞损伤可能在RTG病理过程中起作用并有潜在应用价值.

    作者: 刊期: 2009年第10期

  • 新型甲型H1N1流感的实验室检测特征及分析

    目的 比较新型甲型H1N1流感、季节性流感及普通上呼吸道感染的实验室检测特征.进一步认识新型甲型H1N1流感的特点并分析产生的可能机制.方法 对我院2009年5~7月收治的新型甲型H1N1流感、季节性流感及普通上呼吸道感染病例的人院实验室检测资料进行回顾性分析.结果 新型甲型H1N1流感患者入院时平均血钾为(3.43±0.33)mmol/L,低于季节性流感组和普通上呼吸道感染组,甲型H1N1流感中伴有低钾血症(血钾<3.5 mmol/L)者占60.22%,明显高于另外两组,但合并低钾血症者的血钾平均值在三组问并无明显差异;与另两组相比,新型甲型H1N1流感组外周血白细胞、中性粒细胞、CD4+T细胞计数降低;其他实验室检测指标包括血钠、血钙、血磷、LDH活性、CK活性等在三组间并无统计学差异.结论 新型甲型H1N1流感实验室检测特征包括血钾降低、白细胞、中性粒细胞、CD4+T细胞减少.其中低钾血症是新型甲型H1N1流感的一个显著实验室特征,其发生的具体机制尚待进一步研究.

    作者: 刊期: 2009年第10期

  • 广州市35间公共场所集中空调通风系统卫生质量调查

    目的 通过对广州市各类公共场所使用中的集中空调通风系统进行卫生检测,了解广州市公共场所集中空调通风系统的卫生情况.方法 抽取广州市35间公共场所进行集中空调通风系统卫生监测,检测空调送风中可吸入颗粒物(PM10)、微生物指标和风管内表面积尘量、微生物指标.结果 集中空调通风系统均未检出β-溶血性链球菌,空调送风中可吸人颗粒物、细菌总数超标率高达54.6%和37.5%,而送风中真菌总数超标率为7.3%;风管内表面积尘量全部合格,真菌总数超标率只有1.9%,只有细菌总数超标率较高,为7.7%;各类公共场所中医院和图书馆卫生状况较好,商场、宾馆酒店和餐厅较差.结论 广州市集中空调通风系统风管内表面卫生状况较好,空调送风可吸人颗粒物浓度较高,且存在微生物污染,而医院集中空调通风系统卫生状况较好可能与其使用了中效过滤器有关.

    作者: 刊期: 2009年第10期

  • 胱抑素C、IgG和D-二聚体在早期糖尿病肾病诊断中的价值

    目的 分析早期糖尿病肾病胱抑素C(Cys-c)、免疫球蛋白g(IgG)和D一二聚体(DD)的变化,探讨其在早期糖尿病肾病诊断与治疗中的价值.方法 按照Mogensen的DN分型标准对SDM组、EDN组、CDN组和对照组24 h尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rate,UAER)、Cys-C、IgG、DD进行对照,并作相关性分析.结果 EDN组和CDN组的Cys-c、IgG和DD与SDM组和对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),EDN组和CDN组的Cys-c、IgG和DD比较,差异有统计学意义(P<0.05).Cys-c、IgG和DD与UAER的相关系数分别为0.773、0.549和0.385.结论 Cys-c、IgG、DD均可作为早期糖尿病肾病的检测指标,以Cys-c的相关性优.

    作者: 刊期: 2009年第10期

  • 河南省林州地区儿童肠道寄生虫感染情况调查

    目的 为了解林州地区儿童肠道寄生虫的感染情况,尤其是机会性致病原虫和人兽共患寄生虫的流行情况.方法 2007年10月至2008年5月,对林州地区8个乡镇进行了调查.采用卢戈氏碘液染色法、饱和蔗糖溶液漂浮法、改良抗酸染色法和分子生物学方法对林州地区23个调查点的1949名15岁以下儿童进行了检测.结果 寄生虫总感染率为1.33%(26/1949).共查出6种肠道寄生虫,其中原虫和蠕虫均为3种,感染率分别为0.72%和0.62%.男女寄生虫感染率分别为1.27%(14/1103)和1.42%(12/846),差异无统计学意义(P<0.05).姚村镇、城郊乡、茶店乡、临淇镇、五龙镇、东姚镇、横水镇和采桑镇儿童感染率分别为1.76%、1.42%、0.83%、2.71%、0.00%、0.74%、1.45%、0.75%和1.33%,各个乡镇之间感染率差异无统计学意义(P>0.05).首次摸清了林州地区儿童隐孢子虫感染的流行状况.感染率为0.15%.对分离到的1例等孢球虫进行了分子鉴定,序列分析结果显示与雀类的一种球虫Atoxoplasma sp.(AY331571)为接近,同源性达99.4%,表明可能为鸟类粪便污染所致.结论 林州地区儿童肠道寄生虫感染率较低,但仍应进一步开展健康教育,普及卫生知识,提高自我保健意识和自我保健能力,预防寄生虫病的发生和流行.

    作者: 刊期: 2009年第10期

  • 新型的抗线粒体抗体M2亚型抗体的检测方法在原发性胆汁性肝硬化诊断中的可靠性分析

    目的 研究以天然M2抗原和BPO融合蛋白M2-3E(BPO)为靶抗原的ELISA法(抗-M2-3EELISA)检测抗线粒体抗体M2亚型(AMA-M2)抗体在原发性胆汁化肝硬化(PBC)诊断中的可靠性.方法 分别用间接免疫荧光法(IFL)、以丙酮酸脱氢酶复合体(PDC)为靶抗原的ELISA法(抗-PDC ELISA)、以三联体(BPO)为靶抗原的ELISA法(抗-3E ELISA)、以天然M2抗原和BPO融合蛋白M2-3E(BPO)为靶抗原的ELISA法(抗-M2-3E ELISA)检测107例PBC、167例疾病对照和30例正常对照血清中的AMA-M2抗体.结果 107例PBC患者用抗-M2-3E ELISA、抗-3E ELISA、抗-PDC ELISA和IFL 4种方法检测AMA-M2的检出率(敏感性)分别为99/107(92.5%)、94/107(87.9%)、78/107(72.9%)、87/107(81.3%),特异性分别为97.3%、98.5%、98.5%、97.3%.抗-M2-3E EUSA法AMA-M2的检出率(92.5%)显著高于抗-PDC ELISA法(72.9%)(P<0.001)、IFL法(81.3%,P<0.001),高于抗-3E ELISA(87.9%).在20例IFL检测AMA-M2为阴性的PBC患者中,用抗-M2-3E ELISA法AMA-M2的检出率为11/20(55%).抗-M2-3E ELISA和IFL的重叠度为85.0%(91/107).结论 抗-M2-3E ELISA法具有比IFL、抗-PDC ELISA法和抗-3E ELISA更高的敏感性,特异性达97.3%.因此.抗-M2-3E ELISA法可作为第一轮AMA-M2的筛查,但不可以单独用于诊断PBC的标记.

    作者: 刊期: 2009年第10期

  • 广东从化市首起甲型H1N1流感疫情的调查

    目的 探讨从化市首例甲型H1N1流感病例的发生过程,为制订防控措施提供依据.方法 按照2009年卫生部<甲型H1N1流感流行病学调查和暴发疫情处理技术指南(试行)>的要求进行现场流行病学调查.结果 病例潜伏期74 h,体温37.5℃,无明显呼吸道症状;临床症状较轻;咽拭子样本检测,甲型H1N1流感病毒核酸阳性,确诊为甲型H1N1流感病例;未见续发二代病例.结论 本事件为输入性二代病例引发本地感染甲型H1N1流感疫情,感染者在无防护的环境下,接触保留带有甲型H1N1流感病毒的被褥或尘埃后导致感染.

    作者: 刊期: 2009年第10期

  • 我国首起甲型H1N1流感本地感染疫情感染环境的调查

    目的 了解引起我国首起甲型H1N1流感本地感染病例感染的环境危险因素.方法对感染的环境进行实地现场勘察.结果感染的环境主要为通风换气不良,无新风补给.为一个相对密闭的环境.结论与传染源在同一个相对密闭、空气流通不畅的环境内密切接触是引起此起甲型H1N1流感本地感染疫情的主要原因.公共场所的通风设施不健全应纳入公共场所管理的卫生问题范围中,并应引起卫生监管部门重视.

    作者: 刊期: 2009年第10期

  • 粉尘螨第五组主要变应原(Der f5)的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定

    目的 克隆表达粉尘螨第五组变应原(Dermatophagoides farinae,Der f5)基因,并鉴定纯化蛋白免疫原性.方法 提取活粉尘螨总RNA,扩增Der f5片段.PCR产物与克隆载体pMD18-T连接,转化入大肠埃希菌JM109,经酶切及测序鉴定获得pMD18-Der f5阳性菌株,再提取质粒进行双酶切,与表达载体pET-30a(+)连接,转化人大肠埃希菌BL21,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定其表达效果.Ni-IDA亲和层析柱纯化蛋白,利用尘螨病人血清鉴定其免疫原性.结果 构建了重组质粒pMD18-Der f5和pET30a-Der f5,SDS-PAGE结果表明Der f5基因在BL21中获得良好的可溶性表达,蛋白质分子量与理论值相符.纯化的蛋白与病人血清有良好的IgE结合活性.结论 获得广州地区Der f5的原核表达载体,高效表达纯化重组蛋白.初步鉴定了该蛋白的免疫原性.

    作者: 刊期: 2009年第10期

  • 转基因苜蓿的研究进展

    苜蓿(Medicago sativa)是一种优良的豆科牧草,应用基因工程技术对苜蓿进行开发和改造已成为国内外研究的热点.本文综述了病毒、细菌、寄生虫、抗逆基因、品质改良基因、抗除草剂基因、单克隆抗体和工业原料等转基因苜蓿的研究进展.

    作者: 刊期: 2009年第10期

  • 中药防治肺孢子虫肺炎的研究进展

    肺孢子虫肺炎是由肺孢子虫引起的主要寄生于肺脏的一种致命性肺炎,常见于肿瘤放化疗者、器官移植术者或长期应用激素.尤其是艾滋病患者等免疫功能低下人群.随着肺孢子虫肺炎发病机制的逐步阐明.我国部分中药用于该病的防治取得了较好的疗效,具有广阔的应用前景.本文对近年来几种主要的抗肺孢子虫肺炎中药在防治肺孢子虫肺炎中的研究进展进行了综述.

    作者: 刊期: 2009年第10期

  • 生物信息学在生命科学研究中的应用

    生物信息学是当今生命科学的重要组成部分,它也已经成为生命科学研究的前沿领域之一.它可以方便快捷地处理在生命科学研究中产生的海量数据并利用各种数据库来分析这些数据的意义.所以生物信息学被广泛地应用于生命科学的各个领域.它可以用来对基因信息进行分析处理,破译遗传密码,对蛋白质的结构和功能进行预测,并在此基础上可以筛选、鉴定、发现和预测免疫基因以及新的药物靶点,为免疫产品和药物研发提供了一个快捷有效的方法.本文就生物信息学在基因组、蛋白质研究、免疫学、药物研发等生命科学研究领域的应用予以综述.

    作者: 刊期: 2009年第10期

  • 用Roc曲线评价血清a-L-岩藻糖苷酶在原发性肝癌中的诊断价值

    目的 运用Roc曲线通过与AFP比较评价a-L-岩藻糖苷酶(AFU)在原发性肝癌中的诊断价值,确定本实验室条件下的血清AFU用于诊断原发性肝癌的临界值.并比较AFU和AFP的筛查价值.为原发性肝癌的实验室诊断提供依据.方法 对89例原发性肝癌,120例其他肝病及202名健康体检者.联合检测AFP和AFU,利用SPSS11.5统计软件绘制ROC曲线.通过比较这两种诊断试验的ROC曲线下面积来比较其诊断价值.结果 ROC曲线下面积AFU为0.869,AFP为0.896,两者间差异有统计学意义.结论 AFP的筛查价值略高于AFU,根据ROC曲线确定本实验室AFU临界值为32 U/L.

    作者: 刊期: 2009年第10期

  • BSA-ELISA初步检测短穗鱼尾葵花粉特异性IgE

    目的 对短穗鱼尾葵花粉粗浸液的主要变应原进行分析、鉴定.方法 通过SDS-PAGE分析短穗鱼尾葵花粉蛋白质组份.采用Westem blotting鉴定主要变应原,以短穗鱼尾葵花粉粗浸液包板,摸索出其包被浓度、血清稀释度和酶结合物浓度.采用BSA-ELISA法对短穗鱼尾葵花粉过敏患者血清进行初步检测,并与皮肤挑刺试验比较.结果 短穗鱼尾葵花粉粗浸液SDS-PAGE显示有30余条蛋白条带,其中主要蛋白条带有10条.Western blotting显示5例短穗鱼尾葵花粉过敏患者的混合血清能与其中3条蛋白条带起反应,分子量分别是26000、14000和12000Mr.BSA-ELISA检测短穗鱼尾葵花粉特异性IgE,适粗浸液稀释度为1:100,血清稀释倍数为1:5,生物素化抗体为1:1000,辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(strepavidin-HRP)为1:1000.在此条件下BSA-ELISA与浸液皮试比较.检出结果与皮试阳性患者血清符合率为90%,与皮试阴性患者符合率为80%,与健康人对照检测符合率为100%.结论 本实验对短穗鱼尾葵花粉主要变应原进行了分离和鉴定,BSA-ELISA法测定结果与皮肤挑刺试验初步比较符合率较好.

    作者: 刊期: 2009年第10期

  • 组织特异性表达基因PLUNC调控元件的生物信息学分析

    目的 分析组织特异性表达基因PLUNC的调控元件.方法 采用进化足迹法,结合生物信息学工具,预测PLUNC基因的顺式作用元件和反式作用因子.结果 预测的PLUNC基因的转录起始位点位于-1~+10 bp区域间、-29 bp存在TATA盒子,启动子集中在-490 bp~+89 bp内,在人和小鼠PLUNC基因的启动子保守区内存在29个共同的转录因子结合部位及5个增强子.结论 PLUNC基因调控元件的分析可为探讨上呼吸道特异性表达基因的调控机制提供模型.生物信息学技术结合进化足迹法,在基因表达调控机制的研究中具有重要的应用价值.

    作者: 刊期: 2009年第10期

  • 广州市医科大学生实验室生物安全认知情况的调查及对策

    目的 通过对广州市各大医科大学的调查,了解医学生对实验室生物安全知识的认知情况.方法 运用分层随机抽样的方法,采用当场问卷的方式实施调查.结果 调查显示,大部分学生听说过实验室生物安全(69.4%),但是对其具体内容如病原微生物的危害评估等知识的了解程度有限(37.9%).结论 医学生对实验室生物安全知识的了解程度有待提高.学校应加强实验室生物安全教育.

    作者: 刊期: 2009年第10期

  • 广州市甲型H1N1流感病例密切接触者调查及医学观察结果分析

    目的 对广州市甲型H1N1流感病例密切接触者进行调查,并对隔离医学观察情况进行分析,为制定甲型H1N1流感防控措施提供科学依据.方法 对确诊病例进行流行病学调查.确定密切接触者名单并对其进行追踪调查,采取定点医院和定点宾馆集中隔离医学观察的方法对密切接触者进行隔离观察,出现症状者采集咽拭子用real-time RT-PCR方法检测甲型H1N1流感病毒核酸.结果 对223例密切接触者进行调查和观察.对其中23例出现症状者进行排查,及时发现3例甲型H1N1流感病例,其余220例均顺利解除隔离.在入境检疫时发现4例输入病例,其密切接触者104人,未发现甲型H1N1流感病例;在自行前往医院就诊时发现2例输入病例,其密切接触者共60人,发现了3例病例.密切接触者追踪凋查与集中隔离时发现的3例病例,其密切接触者59人未发现甲型H1N1流感病例.结论 对密切接触者进行调查和隔离医学观察是及时发现续发病例,防止疫情进一步传播和扩散的有效措施,病例不同发现方式影响密切接触者的转归.

    作者: 刊期: 2009年第10期

  • 无花果叶乙醇、水提取物抑菌作用的比较研究

    目的 研究无花果叶乙醇提取物和水提取物的抑菌作用.方法 采用纸片法抑菌实验观察比较无花果叶乙醇提取物和水提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草杆菌的作用.结果 生药含量为100 mg/mL的无花果叶乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌3种抑菌环的直径均大于8 mm,生药含量为144 mg/mL的无花果叶水提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌3种抑菌环的直径均小于8 mm.结论 无花果叶乙醇提取物具有明显的抑菌作用,无花果叶水提取物无抑菌作用.

    作者: 刊期: 2009年第10期

  • 家庭功能对慢性乙肝患者行为方式的影响

    目的 探讨家庭功能对慢性乙型肝炎患者行为方式的影响.方法 随机抽取我科住院的慢性乙型肝炎患者100例,采用Family APGAR问卷和患者行为方式调查表调查分析慢性乙型肝炎患者家庭功能与行为方式的关系.结果 45.0%为功能良好家庭,41.0%为中度障碍家庭,14.0%为严重障碍家庭.慢性乙型肝炎患者良好家庭和障碍家庭行为方式积极组及消极组各项目例数比较差异有统计学意义.结论 慢性乙型肝炎患者行为方式与家庭功能具有显著相关性.

    作者: 刊期: 2009年第10期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会