学术投稿

大鼠IgE依赖组胺释放因子重组蛋白纯化效果的优化

陈晓湘;胡旭初;徐劲;余新炳

关键词:大鼠, IgE依赖组胺释放因子, 原核表达载体, 蛋白质纯化
摘要:目的 提高大鼠IgE依赖组胺释放因子(rHRF)的可溶性表达水平,改善其亲和层析纯化效果,为深入研究该重组蛋白的生物学功能奠定基础.方法 选择多克隆酶切化点BamH I和Xho I,将rHRF完整编码区基因从原有的pET-30a-rHRF重组质粒亚克隆至pET-28a载体,构建重组质粒pET-28a-rHRF;转化大肠杆菌BL21(DE3)后,通过改变IPTG浓度(0.1~1.0 mmol/L),调节诱导表达温度(25~37℃)和时间(1~5 h),筛选能够提高rHRF可溶性表达水平的条件;同时改进亲和层析纯化的条件,提高纯化效果.结果 成功构建重组质粒pET-28a-rHRF,不同IPTG浓度、诱导温度和时间对重组蛋白的可溶件表达水平无明显影响.但是,与pET-30a-rHRF转化菌相比,pET-28a-rHRF转化菌所表达的重组蛋白因其N端和C端均带有6xhis标签,增强了目的 蛋白与树脂的结合力,而使亲和层析纯化效果(重组蛋白的浓度和纯度)显著提高.结论 rHRF重组蛋白的可溶性表达水平不受IPTG浓度、诱导表达温度和时间的影响.但是可溶性重组蛋白两端均携带6xhis标签可使亲和层析纯化效果显著提高,从而有利于获得足昔rHRF 用于进一步的生物学功能研究.
热带医学杂志相关文献
  • GP方案同步放疗治疗Ⅲ期非小细胞肺癌的临床研究

    目的 观察和评价吉两他滨联合顺铂(GP)同步放疗治疗Ⅲ期非小细胞肺癌的耐受性和近期疗效.方法 42例Ⅲ期非小细胞肺癌患者随机分为2组,放疗组21例先采取常规前后野对穿照射,剂量40Gy后改为调强适形放射治疗,包括原发灶和转移淋巴结,25~30 Gy/10~12次,总剂为65~70 Gy.同步放化疗组的放射治疗同单纯放疗组,化疗采用吉西他滨1 g/m2第1、8天静脉滴注,顺铂30 mg/m2·d,第1~3天静脉滴注.21 d为1个化疗周期,化疗共4~6个周期.结果 同步放化疗组与单纯放疗组总有效率分别为85.7%和57.1%.两组差异有统计学意义.同步放化疗组1、2、3年生存率为66.7%、33.3%、23.8%,单纯放疗组1、2、3年生存率为38.1%、14.3%、9.5%,两组差异有统计学意义(P<0.05).两组的不良反应除骨髓抑制和消化道反应外无显著性差异.结论 GP方案同步放疗治疗Ⅲ期非小细胞肺癌患者耐受性良好,疗效满意,远期疗效有待进一步观察.

    作者:叶金辉;王向明;蔡悦成;练英妮 刊期: 2008年第12期

  • MCS+血细胞分离机在治疗性红细胞采集术中的应用

    目的 探讨MCS+血细胞分离机应用于治疗性红细胞采集(TE)时的操作要点和临床观察指标.方法 采用治疗性自体红细胞采集(TAE)程序,选择随机等量补充补偿液,不加添加剂模式.比较采集前后的红细胞(RBC)、红细胞比积(HCT)、血红蛋白(HGB)、B超等结果,观察治疗效果;分析比较机器显示的预计采后HCT值与实际采后的外周血HCT的差别.结果 6例病人采集后外周血血常规(血Rt)示RBC、HCT、HGB均明显下降.与采集前比较差异有统计学意义(P<0.01),原有脾肿大的患者B超均明显缩小;机器显示的预计采后HCT均比实际采后外周血HCT低,差异有统计学意义(P<0.01).结论 应用MCS+血细胞分离机进行TE是安全有效的.

    作者:吴艳丽;卢岑;冯雅芳 刊期: 2008年第12期

  • 异丙酚复合芬太尼在人工流产手术中的应用

    目的 观察异丙酚复合芬太尼应用于无痛人工流产的临床效果.方法 将异丙酚联合芬太尼应用于人工流产术,并与一般人工流产手术对比,观察镇痛效果、手术时间、宫颈口松弛率、术中出血量及人工流产综合征发生率等指标.结果 异丙酚复合芬太尼应用于无痛人工流产,镇痛率为100%,宫颈口松弛率高,手术时间缩短、人工流产综合征发生率低,术中出血量无明显增加.结论 异丙酚复合芬太尼应用于无痛人工流产,具有效果好、副反应小等优点.

    作者:刘湘;程相华;罗佩琼 刊期: 2008年第12期

  • p53在肺癌中的表达及其与VEGF和血管新生关系的研究

    目的 探讨63例人肺癌中p53蛋白的表达与血管内皮细胞生长因子(VEGF)和血管新生的关系.方法 采用免疫组织化学方法,以抗CD34单抗标记血管内皮细胞以测定血管新生,抗p53多抗标记p53蛋白.抗VEGF165单克隆抗体检测VEGF的表达.结果 所有肺癌组织均有不同程度的血管新生,iMVD 4~138.7(44.5±29)/×400,p53突变率为54%(34/63),VEGF的表达率为50.8%(32/63).p53突变率与组织类型、临床分期、病人性别、年龄等临床参数无关;VEGF与组织类型、I临床分期、病人性别、年龄等临床参数无关.结论 p53蛋白表达与VEGF和血管新生未见相关;人肺痛的发生发展与p53蛋白过度表达有关.

    作者:马红;马晓春 刊期: 2008年第12期

  • 2005-2007年6409例孕妇梅毒感染状况

    目的 了解粤东地区2005-2007年妊娠期妇女梅毒感染的流行病学情况,探讨孕妇合并梅毒感染的危险性,为采取有针对性的防治措施提供实验依据.方法 应用梅毒非特异性抗体快速血浆反应索试验(TRUST)对6409例产妇进行梅毒初筛检测,阳性标本再进行梅毒螺旋体乳胶凝集试验(TPPA)确证.结果 6409例孕妇检出合并梅毒感染23例,感染率为0.35%,且有逐年增长的趋势.10名孕晚期梅毒孕妇所娩下的新生儿中有7例梅毒阳性,梅毒胎传率高达70%以上.结论 粤东地区妊娠期妇女梅毒感染率逐年增长,宫内感染危害性很大,应加强产前梅毒筛检,及早发现及时治疗.

    作者:洪楷;丁映淑;陈林兴 刊期: 2008年第12期

  • 广州管圆线虫一期幼虫的分离纯化及其抗原分析

    目的 建立广州管圆线虫一期幼虫的分离纯化方法,分析其抗原特性及血清学诊断价值.方法 分别用贝尔曼漏斗法、蔗糖离心浮选法及改良贝尔曼法联合胰酶消化法从大鼠粪便中分离纯化一期幼虫;用SDS-PAGE和Western blotting进行蛋白潜与抗原谱分析;分别用一期幼虫和成虫抗原包被ELISA反应板,间接法检测不同样本中相应抗体.结果 3种方法分离效率分别为50.1%、33.6%和19.7%;联合法获得的纯度高,凡90%以上的幼虫有活力;贝尔曼漏斗法分离的幼虫99%以上具有活力但纯度低;蔗精离心浮选法分离的绝大多数虫体失去活力.一期幼虫104 000 Mr与广州管圆线虫感染2 周的大鼠血清出现强反应,32 000 Mr和31 000 Mr与感染6周的大鼠血清、32 000 Mr与广州管圆线虫病患者血清均出现较强反应,与对照血清均未出现明显的反应;在ELISA检测中,一期幼虫抗原对广州管圆线虫病患者血清和感染大鼠血清的检出率与成虫抗原无统计学筹异.结论 改良贝尔曼法联合胰酶消化法可从大鼠的粪便中分离高纯度且具有活力的一期幼虫,一期幼虫104 000 Mr、32 000 Mr和31 000 Mr具有潜在的诊断价值,可望从大鼠粪便中分离一期幼虫开发诊断性抗原.

    作者:刘敏;顾金保;李华;陈晓光;詹希美 刊期: 2008年第12期

  • 锰接触对大鼠生长发育的毒性影响

    目的 评价锰对机体生长发育造成的毒性影响.方法 24只SD大鼠随机分为2组,分别口服高、低剂量氯化锰(MnCl2·4H2O).另选12只SD大鼠为对照组.检测大鼠作锰接触后对食物利用率、血清、脑匀浆的单胺氧化酶(MAO)和超氧化物岐化酶(SOD)活性的影响,以及对中脑黑质TH免疫反应阳性神经元的影响.结果 锰接触60 d后高、低剂量组大鼠的食物利用率无明显改变;大鼠血清和脑匀浆的MAO比对照组明显升高,而SOD活性则明显降低;中脑黑质、酪氨酸羟化酶(TH)免疫反应阳性神经元的反应强度、神经元数密度(NV)和反应阳性产物的相对光密度(OD),高、低剂组大鼠均比对照组显著降低.结论 短期的锰接触对大鼠的一般情况影响不大;随着锰接触剂量的增加,血清和脑匀浆的MAO则明显升高,而SOD活性明显降低;且锰接触会导致中脑黑质TH阳性反应神经元的损害.

    作者:钟华敏;李孜 刊期: 2008年第12期

  • 丹红注射液对急性脑梗死大鼠保护作用的研究

    目的 探讨丹红注射液对大鼠急性脑梗死后自由基损伤的脑保护作用.方法 制备脑缺血模型.假手术组、手术组(注射生理盐水),手术+丹红组(注射丹红注射液),连续5d后测定脑组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(CSH-Px)活力和丙二醛(MDA)含量,同时观察海马CA1区病理组织学改变.结果 手术+丹红组大鼠脑组织的SOD和GSH-Px活力较手术组增高,MDA含量降低,其差异有统计学意义(P<0.05).手术+丹红组脑组织病理改变较手术组轻.结论 丹红注射液可增强缺血脑组织SOD和GSH-Px活力,降低MDA含量,清除氧自由基,达到保护脑细胞的作用.

    作者:胡波;吴禹 刊期: 2008年第12期

  • 铜过量小鼠肝损伤模型的建立及各项指标的观察研究

    目的 探讨昆明小鼠在不同剂量的铜负荷时所引起的肝脏抗氧化水平和相关病理的改变.方法 32只昆明小鼠平均分为4组,第1组为对照组,每天灌胃生理盐水2次,第2、3、4组作为实验组,分别用小同浓度(12.8、25.6和38.4 mg/mL)的硫酸铜每日灌胃2次,16周后,观察肝组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)以及血清和肝组织中铜含,并做Hf脏病理以及电镜检查.结果 与正常对照组相比,实验组肝组织中MDA含量明显升高(P<0.05),而SOD和GSH-Px活性明显下降(P<0.05);血清ALT、AST活性以及血清、肝脏铜含量明显升高(P<0.05);病理组织学检查可见高剂量铜灌胃组小鼠肝细胞变性坏死以及少量铜颗粒沉积;电镜提示肝细胞核、线粒体等细胞器异常,并可见铜颗粒.结论 过量的铜可对肝脏造成损害,其机制可能与释放出的铜离子介导脂质过氧化而造成肝脏损害有关.其病变过程与Wilson's病相似,可为进一步研究铜代谢异常等疾病提供动物模型.

    作者:李万立;罗海吉;查龙应 刊期: 2008年第12期

  • 正己烷接触工人的早期生物标志物含量变化

    目的 探讨正己烷接触工人的早期生物标志物.方法 分别检测正己烷接触工人63名及对照组50g工人的尿2,5-己二酮、血清神经元特异烯醇化酶(NSE)及髓鞘碱性蛋白(MBP)水平.结果 接触组工人尿2,5-己二酮含量为0.31~10.38 mg/gCr,对照组未检出;接触组血清NSE和MBP含量分别为(9.02±3.87)μg/L和(1.47±0.41)μg/L,均显著高于对照组(P<0.05).结论 正己烷接触可导致血清NSE及MBP水平的升高,尿2,5-己二酮、血清NSE和MBP水平可作为正己烷接触的早期生物标志物.

    作者:甘德秀;徐雷;艾宝民;魏青;江高峰 刊期: 2008年第12期

  • 深圳市宝安区2007年338家五金类企业职业病危害情况分析

    目的 了解深圳市宝安区五金类企业主要职业病的危害因素,为制订相应行业职业病预防提供依据.方法 收集2007年深圳市宝安区基本职业卫生服务现场职业病危害因素监测数据并进行统计分析.结果 五金类企业主要职业病危害因素是噪声、三氯乙烯、正己烷,合格率分别为37.0%、68.9%、69.8%.结论 噪声、三氯乙烯、正己烷等是深圳市宝安区五金类企业的重要职业病危害因素.应加强卫生监督监测,做好相应的防护丁作.

    作者:袁建辉;杨建平;朱志良 刊期: 2008年第12期

  • 人体寄生虫学网络课程的应用与评价

    目的 对郧阳医学院人体寄生虫学网络课程的教学效果进行评价.方法 选取2005级临床医学一系和二系分别作为实验组和对照组,对照组的人体寄生虫学采用传统教学方法教学,实验组采用传统教学和本课题组构建的人体寄生虫学网络课程平台进行辅助教学.结果 实验组学牛的人体寄牛虫学理论课程考试成绩和实验课程考试成绩明显优于对照组学生(P<0.05).结论 人体寄生虫学网络课程能够显著提高教学效果,对突破传统面授教学的局限性和帮助学生网上学习具有重要意义.

    作者:郭鄂平;余志玲;张光玉;王绍基;杨树国 刊期: 2008年第12期

  • 江门市2003-2007年性病门诊患者HIV感染调查

    目的 了解近年江门市经性途径感染HIV的情况,为制定预防控制对策和措施提供科学依据.方法 2003-2007年每年HIV监测期间对江门市性病门诊就诊的性病患者进行HIV抗体和其他性病病原体检测.并对HIV抗体确认阳性者进行个案调查.结果 2003-2007年HIV监测期间共检测性病患者1394例,初筛HIV 阳性11例,WB法确认HIV阳性10例,阳性率为0.72%.10例确诊病例为2005-2007年发现的患者,其中经性接触感染8例,2例吸毒感染的病例同时存在性乱史.合并梅毒感染6例,占60.00%.所有病例在发生性行为时,很少甚至不用安全套.结论 随着艾滋病传播快速增长期的到来,经性传播正逐步成为江门市HIV感染的不可忽视的传播途径.性病专科临床医生应该发挥优势,在规范治疗性病的同时,应加强HIV抗体检测,并有针对性地进行性病艾滋病健康教育,以有效改变其危险性行为.

    作者:谭雪玲;黄澍杰;卢和琨;朱正君;黄丽卿;许玉兰;苏坚;吴志周 刊期: 2008年第12期

  • 病原生物学精品课程建设的探索与实践

    目的 做好病原生物学精品课程的建设工作.方法 从师资队伍、教学管理、教学内容、教学方法、课程文化等方面进行了探讨和实践.结果 精品课程的建没工作取得了显著的成效.结论 课程建设是衡量学校办学水平和教学质量的重要标志,是实现人才培养同标的基本保证.

    作者:严华;李国才;陈红菊;焦红梅;龚卫娟;潘兴元;季明春 刊期: 2008年第12期

  • 妊娠相关性疟疾及其研究进展

    恶性疟疾是对人类健康危害为严重的传染病之一.生活在疟疾流行区的人随着年龄的增长和感染次数的增加会逐渐获得保护性免疫即临床免疫.然而,孕妇尤其是初孕妇女在妊娠过程中感染恶性疟原虫后往往呈现急性感染症状,甚至危及孕妇和胎儿的生命.妊娠相关性疟疾(pregnancy-associated malaria,PAM)主要是由于受恶性疟原虫感染的红细胞和单核细胞在胎盘绒毛问大量聚集引起的.大量的研究表明,黏附在子宫粘膜上的虫体表达一种具有特殊生物活性和抗原性的蛋白质(var2CSA).Var2CSA可特异性地与子宫粘膜上的硫酸软骨素A(Chondroitin sulfate A,CSA)结合.此外,由于var2CSA的序列相对保守,机体在感染几次以后较容易产生交叉免疫保护反应.对PAM的研究是疟疾领域内的重要内容,目前在很多领域(病原学、分子致病机理、免疫学等)已经取得重要进展.本篇综述概括了近年来在PAM研究方面的进展,包括虫体表达的主要膜蛋白质的功能、相关的人体受体以及免疫学方面等内容.

    作者:李萌;尹继刚;陈启军 刊期: 2008年第12期

  • 胎膜早破患者阴道微生态及IL-2、IL-6、TNF-a变化的研究

    目的 探讨胎膜早破患者阴道微生态及黏膜免疫状况的改变.方法 收集2006年10月至2007年4月在广州市番禺区人民医院就诊的正常妇女46例,正常孕妇23例,胎膜早破31例,对其阴道分泌物细菌进行检测,并进行细胞因子IL-2浓度、IL-6浓度、TNF-α浓度的测定.结果 胎膜早破组细菌分离率由高到低依次是乳酸杆菌(15例,占48.39%)、大肠埃希氏菌(13例,占41.94%)、表皮葡萄球菌(8例,占25.81%)、溶血葡萄球菌(7例,占22.58%)、炎链球菌(4例,占12.90%)、阴沟肠杆菌(4例,占12.90%)和白色假丝酵母菌(4例,占12.90%).胎膜早破组乳酸杆菌的检出率较正常妇女和正常妊娠妇女明显降低.大肠埃希菌检出率明显增高;阴道分泌物中IL-6、TNF-α水平胎膜早破妇女较正常妊娠妇女组高,差异有统计学意义.结论 胎膜早破组菌群分布与正常妇女、正常妊娠妇女组均不同,阴道的微环境发生改变,推测菌群失调和免疫微环境改变可能为胎膜早破发生的机制.

    作者:廖乐君;陈敦金;徐燕;郭仲辉;林晓晖;李敏;梁伟华;马海燕 刊期: 2008年第12期

  • 白假丝酵母菌DNA提取方法的研究

    目的 建立一种提取白假丝酵母菌DNA 的有效方法.方法 采用蜗牛酶消化破壁形成原生质体,饱和酚/氯仿抽提法提取基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳及PCR反应等进行鉴定.结果 提取物经琼脂糖凝胶电泳检测到DNA主带,基本无DNA碎带,提取的DNA浓度为(1.18±0.36)μg/μl,纯度好(OD260/OD280>1.7),不用 RNase酶处理,无需任何纯化即可用于PCR扩增.结论 本研究中提取DNA的方法简便易行,提取物可适用于各种分子生物学研究.

    作者:王萍;厉荣玉;董群 刊期: 2008年第12期

  • 韶关市武江区华支睾吸虫感染状况调查

    目的 了解韶关市武江区华支睾吸虫感染状况,为制定防治方案提供依据.方法 采集1岁以上的常住人群粪便为标本.用清水沉淀集卵法对感染者进行虫卵计数;常见螺蛳分类后压碎于解剖镜下找尾蚴;捕捉淡水鱼分类后取鱼肉压片找囊蚴;清水沉淀集卵法查找家畜粪便虫卵,解剖野鼠肝胆寻找成虫.结果 6个点人群粪检3397例.感染者292例,感染率为8.6%.其中轻度感染276例,占94.5%;中度感染14例,占4.79%;重度感染2例,占0.68%.解剖纹绍螺11083只,感染32只,感染率为0.29%;长角涵螺440只,感染4只,感染率为0.91%.解剖淡水鱼334尾,272尾感染,感染率为81.43%.家畜猫粪检33份,感染17份,感染率为51.52%;猪粪58份和牛粪27份.未发现虫卵.解剖猫6只,均找见成虫,猪58头及野鼠43只未发现成虫.结论 韶关市武江区存在华支睾吸虫感染.经多年大力防治取得了成绩,人群感染轻度占多数,但仍需继续开展防治工作.

    作者:邹学华;陈良贵;何丽洁;罗金萍;潘登;崔文娟 刊期: 2008年第12期

  • 1950-2000年汕头市病毒性传染病流行状况分析

    目的 调查汕头地区近50年病毒性传染病的流行情况,为病毒性传染病预防和控制措施的实施提供科学依据.方法 收集1950-2000年汕头市病毒性传染病疫情资料,采用描述流行病学方法进行分析.结果 建国以后汕头地区发生过9种病毒传染性疾病:天花(甲类)、病毒性肝炎、脊髓灰质炎、麻疹、狂犬病、流行性乙型脑炎、登革热、艾滋病、流行性感冒.统计资料同时显示,天花已经灭绝,发病率明显上升的病种主要有登革热、病毒性肝炎、艾滋病,发病明显下降的病种主要有脊髓灰质炎、流行性感冒、狂犬病、流行性乙型脑炎、麻疹.结论 汕头地区需要重点监测的传染病为登革热、艾滋病、流行性感冒、麻疹、病毒性肝炎.

    作者:张敏红;赵卫;林周孟;周焕汉;马锦霞;朱利 刊期: 2008年第12期

  • 广州市1997-2007年狂犬病流行状况与防制对策

    目的 分析广州市狂犬病的流行趋势及特征.探讨疫情回升的原凶,提出预防控制措施.方法 收集广州市1997-2007年的疫情报告资料及病例个案调查表进行分析.结果 1997-2007年广州市共报告44例狂犬病,其中男32例,女12例,发病年龄小7岁,大80岁,发病人群以农村居民和学生为主,夏秋季节多发.1997-2004年仅发生9例,而近3年上升至35例.2007年达到高峰,共14例.病例主要分布在增城市,但近年向邻近的萝岗、黄埔等地区扩散.结论 农村地区养犬数多,犬只免疫有效率低,人用狂犬病疫苗及免疫球蛋白价格过高,群众防病意识淡薄等是疫情回升的主要原因.落实狂犬病综合防制措施,控制传染源,提高农村地区犬只免疫保护率是降低狂犬病发病率根本的措施.

    作者:刘小宁;郭荣同;任文锋;张豪 刊期: 2008年第12期

热带医学杂志

热带医学杂志

主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会