学术投稿

大鼠IgE依赖组胺释放因子重组蛋白纯化效果的优化

陈晓湘;胡旭初;徐劲;余新炳

关键词:大鼠, IgE依赖组胺释放因子, 原核表达载体, 蛋白质纯化
摘要:目的 提高大鼠IgE依赖组胺释放因子(rHRF)的可溶性表达水平,改善其亲和层析纯化效果,为深入研究该重组蛋白的生物学功能奠定基础.方法 选择多克隆酶切化点BamH I和Xho I,将rHRF完整编码区基因从原有的pET-30a-rHRF重组质粒亚克隆至pET-28a载体,构建重组质粒pET-28a-rHRF;转化大肠杆菌BL21(DE3)后,通过改变IPTG浓度(0.1~1.0 mmol/L),调节诱导表达温度(25~37℃)和时间(1~5 h),筛选能够提高rHRF可溶性表达水平的条件;同时改进亲和层析纯化的条件,提高纯化效果.结果 成功构建重组质粒pET-28a-rHRF,不同IPTG浓度、诱导温度和时间对重组蛋白的可溶件表达水平无明显影响.但是,与pET-30a-rHRF转化菌相比,pET-28a-rHRF转化菌所表达的重组蛋白因其N端和C端均带有6xhis标签,增强了目的 蛋白与树脂的结合力,而使亲和层析纯化效果(重组蛋白的浓度和纯度)显著提高.结论 rHRF重组蛋白的可溶性表达水平不受IPTG浓度、诱导表达温度和时间的影响.但是可溶性重组蛋白两端均携带6xhis标签可使亲和层析纯化效果显著提高,从而有利于获得足昔rHRF 用于进一步的生物学功能研究.
热带医学杂志相关文献
  • 液基细胞学在子宫颈病变筛查中的诊断价值

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    作者:刘自光;汪江萍;谢芬 刊期: 2008年第12期

  • S79株腮腺炎减毒活疫苗保护作用持久性研究

    目的 评估S79株腮腺炎减毒活疫苗对临床腮腺炎病例保护效果的持久性.方法 收集国家传染病预防控制系统2004年9月至2005年3月广州市腮腺炎报告病例,按照性别、年龄和居住地(居委或村)为每个病例设置1个对照,从广州市儿童预防接种管理信息系统获取既往S79疫苗免疫信息,计算S79疫苗的保护效果及其95%可信限.结果 有469对病例及其对照纳入研究,1剂(相对于0剂)S79减毒腮腺炎疫苗提供86.O%(95% CI:77.2%~91.5%)的保护.接种1剂疫苗4年内的保护效果(96.7%,95%CI:92.6%~98.5%)高于12年内(53.0%,95% CI:35.1%~66.0%).结论 1荆S79腮腺炎减毒活疫苗对临床腮腺炎存在有效的保护效果,保护作用在接种后第5年迅速下降.

    作者:傅传喜;梁建华;王大虎;许建雄;王鸣;聂军 刊期: 2008年第12期

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    作者:伍绍国;刘海英;李孜;黄钰君;刘云峰;赵明光;曾华松;梁明伟 刊期: 2008年第12期

  • 甲醛、甲苯和二甲苯对SD大鼠胚胎肢芽细胞的联合毒性作用

    目的 研究3种主要挥发性有机化合物(VOCs)甲醛、甲苯和二甲苯对SD大鼠胚胎肢芽细胞的联合毒性作用.方法 将肢芽细胞分别暴露于不同浓度的甲醛、甲苯和二甲苯及3种挥发性有机化合物的混合溶液中.采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTF)法分别检测对肢芽细胞的半数抑制浓度(IC50).结果 作用5 d后,甲醛、甲苯和二甲苯对肢芽细胞的IC50分别为10.41、45.58、37.12 mg/L,3种物质混合液的IC50为26.51.Q值为1.07.结论 甲醛、甲苯和二甲苯均有明显的细胞毒性,3种物质的联合毒性类型为相加作用.

    作者:张全新;朱伟;李军涛;杨光宇 刊期: 2008年第12期

  • 白假丝酵母菌DNA提取方法的研究

    目的 建立一种提取白假丝酵母菌DNA 的有效方法.方法 采用蜗牛酶消化破壁形成原生质体,饱和酚/氯仿抽提法提取基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳及PCR反应等进行鉴定.结果 提取物经琼脂糖凝胶电泳检测到DNA主带,基本无DNA碎带,提取的DNA浓度为(1.18±0.36)μg/μl,纯度好(OD260/OD280>1.7),不用 RNase酶处理,无需任何纯化即可用于PCR扩增.结论 本研究中提取DNA的方法简便易行,提取物可适用于各种分子生物学研究.

    作者:王萍;厉荣玉;董群 刊期: 2008年第12期

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    目的 探讨极低出生体重儿(very low birthweight infant,VLBWI)抗真菌治疗的临床意义与疗效.方法 以我科2003~2007年收治的VLBWI为研究对象,在患儿持续使用抗生素大于2~3周时给予预防性静脉抗真菌治疗(氟康唑氯化钠注射液4 mg/kg·d,用2 d停1 d,疗程2周),观察患儿病情转归情况,监测肝、肾功能及血象情况.结果 患儿病情进展较顺利,无1例出现肝、肾功能损害等副作用.结论 VLBWI适时给予预防性静脉抗真菌治疗具有重要的临床意义,而且安全性较好,无明显副作用.

    作者:乔萍;严越秀;梁建红;谭枝涛;覃桂锋 刊期: 2008年第12期

  • 番禺区人群B型流感嗜血杆菌(Hib)疫苗接种情况及影响因素调查

    目的 了解番禺区人群Hib疾病免疫状况及影响因素,为预防和控制Hib疾病提供基础资料和科学依据.方法 随机抽取番禺区一个城区疫苗接种门诊和两个乡镇疫苗接种门诊,对所有带儿童到接种点接种的监护人进行既往Hib疫苗免疫状况及影响因素的问卷调查.结果 儿童监护人对Hib疾病的了解程度比较低,城区和乡镇均为35%左右;城区儿童监护人对Hih疫苗的了解明显比乡镇高(P=0.000).分别为65.3%和38.4%;城区的Hib疫苗接种率明显比乡镇接种率高(P=0.000),分别为72.4%和36.2%.影响Hib疫苗接种态度的因素主要为疫苗的效果,经医生介绍后儿童监护人对接种Hib疫苗的积极性都较好,城区和乡镇分别达到94.5%和80.4%.结论 Hib疫苗的接种率比较低,主要是因为儿童监护人对Hib疾病和疫苗的认识不足.应加强宣传教育,提高儿童监护人接种Hib疫苗的意识.

    作者:许晓茵;李功理;李伟强;陈光艳 刊期: 2008年第12期

  • 1950-2000年汕头市病毒性传染病流行状况分析

    目的 调查汕头地区近50年病毒性传染病的流行情况,为病毒性传染病预防和控制措施的实施提供科学依据.方法 收集1950-2000年汕头市病毒性传染病疫情资料,采用描述流行病学方法进行分析.结果 建国以后汕头地区发生过9种病毒传染性疾病:天花(甲类)、病毒性肝炎、脊髓灰质炎、麻疹、狂犬病、流行性乙型脑炎、登革热、艾滋病、流行性感冒.统计资料同时显示,天花已经灭绝,发病率明显上升的病种主要有登革热、病毒性肝炎、艾滋病,发病明显下降的病种主要有脊髓灰质炎、流行性感冒、狂犬病、流行性乙型脑炎、麻疹.结论 汕头地区需要重点监测的传染病为登革热、艾滋病、流行性感冒、麻疹、病毒性肝炎.

    作者:张敏红;赵卫;林周孟;周焕汉;马锦霞;朱利 刊期: 2008年第12期

  • 广州大学城广州管圆线虫疫源地调查

    目的 捕捉广州大学城褐云玛瑙螺(Achatina fulica)检查广州管圆线虫(Angiostrongyluscantonensis)第Ⅲ期幼虫的感染情况.方法 采集大学城10所高校生活区和教学区褐云玛瑙螺.人工消化酶消化分离第Ⅲ期幼虫,计算感染率和感染度并与广州其他地区进行比较.结果 除广东外语外贸大学、华南理工大学2个校园内未捕捉到褐云玛瑙螺外,其他8所高校均发现有褐云玛瑙螺;广州大学城广州管圆线虫总体感染率为11.8%(76/642),平均感染度为872条/螺,阳性螺中高15725条,低17条;中山大学校园内感染率和感染度比其他校园高,分别为22.0%(56/255),1007条/螺.结论 广州大学城广州管圆线虫感染率低于广州其他地区.

    作者:黄继山;曲振宇;王维;苏文哲;岳盼;邓云花;苏广校;刘森;张骁;曾胜蓝;林彦彤;詹希美 刊期: 2008年第12期

  • 铜过量小鼠肝损伤模型的建立及各项指标的观察研究

    目的 探讨昆明小鼠在不同剂量的铜负荷时所引起的肝脏抗氧化水平和相关病理的改变.方法 32只昆明小鼠平均分为4组,第1组为对照组,每天灌胃生理盐水2次,第2、3、4组作为实验组,分别用小同浓度(12.8、25.6和38.4 mg/mL)的硫酸铜每日灌胃2次,16周后,观察肝组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)以及血清和肝组织中铜含,并做Hf脏病理以及电镜检查.结果 与正常对照组相比,实验组肝组织中MDA含量明显升高(P<0.05),而SOD和GSH-Px活性明显下降(P<0.05);血清ALT、AST活性以及血清、肝脏铜含量明显升高(P<0.05);病理组织学检查可见高剂量铜灌胃组小鼠肝细胞变性坏死以及少量铜颗粒沉积;电镜提示肝细胞核、线粒体等细胞器异常,并可见铜颗粒.结论 过量的铜可对肝脏造成损害,其机制可能与释放出的铜离子介导脂质过氧化而造成肝脏损害有关.其病变过程与Wilson's病相似,可为进一步研究铜代谢异常等疾病提供动物模型.

    作者:李万立;罗海吉;查龙应 刊期: 2008年第12期

  • 异丙酚复合芬太尼在人工流产手术中的应用

    目的 观察异丙酚复合芬太尼应用于无痛人工流产的临床效果.方法 将异丙酚联合芬太尼应用于人工流产术,并与一般人工流产手术对比,观察镇痛效果、手术时间、宫颈口松弛率、术中出血量及人工流产综合征发生率等指标.结果 异丙酚复合芬太尼应用于无痛人工流产,镇痛率为100%,宫颈口松弛率高,手术时间缩短、人工流产综合征发生率低,术中出血量无明显增加.结论 异丙酚复合芬太尼应用于无痛人工流产,具有效果好、副反应小等优点.

    作者:刘湘;程相华;罗佩琼 刊期: 2008年第12期

  • 全自动酶免分析仪与临床实验室信息系统的信息化智能互动监控及应用

    目的 通过全自动酶免分析仪与临床实验室信息系统(LIS)的信息化智能互动监控,建立全自动酶免分析仪自动加样信息采集与手工检测流程的信息化监控系统和实验过程节点监控,完善全自动酶免分析仪的自动化检测与手工流程互补,实现酶免分析仪可以进行随机组合项目自动化测定.方法 全自动酶免分析仪读取标本条码后,标本加样及检测过程的所有相关信息通过串口和网口传送到LIS,实时对每个检测标本进行节点监控.当全自动酶免分析仪的后处理FAME发生任何故障时,用手工方法继续操作检测的结果可以通过LIS读取全自动酶免分析仪的加样信息后根据条码唯一属性准确无误地传送.结果 成功建立了全自动酶免分析仪自动加样信息采集与手工检测流程的信息化监控系统和实验过程节点监控,解决了由于全自动酶免分析仪的后处理发牛故障后的结果传送难题,并实现了酶免分析仪可以进行随机组合项目自动化测定.结论 该信息化智能互动监控系统大大地提高了检测效率,尤其在当全自动酶免分析仪的后处理产生故障时,该系统能够通过标本条码的唯一性将随机组合项目的 手工继续检测结果准确无误地传送,为临床和体检工作提供了高效、快速、准确的检验结果.

    作者:张婷;陈涛;廖伟娇 刊期: 2008年第12期

  • 锰接触对大鼠生长发育的毒性影响

    目的 评价锰对机体生长发育造成的毒性影响.方法 24只SD大鼠随机分为2组,分别口服高、低剂量氯化锰(MnCl2·4H2O).另选12只SD大鼠为对照组.检测大鼠作锰接触后对食物利用率、血清、脑匀浆的单胺氧化酶(MAO)和超氧化物岐化酶(SOD)活性的影响,以及对中脑黑质TH免疫反应阳性神经元的影响.结果 锰接触60 d后高、低剂量组大鼠的食物利用率无明显改变;大鼠血清和脑匀浆的MAO比对照组明显升高,而SOD活性则明显降低;中脑黑质、酪氨酸羟化酶(TH)免疫反应阳性神经元的反应强度、神经元数密度(NV)和反应阳性产物的相对光密度(OD),高、低剂组大鼠均比对照组显著降低.结论 短期的锰接触对大鼠的一般情况影响不大;随着锰接触剂量的增加,血清和脑匀浆的MAO则明显升高,而SOD活性明显降低;且锰接触会导致中脑黑质TH阳性反应神经元的损害.

    作者:钟华敏;李孜 刊期: 2008年第12期

  • 韶关市武江区华支睾吸虫感染状况调查

    目的 了解韶关市武江区华支睾吸虫感染状况,为制定防治方案提供依据.方法 采集1岁以上的常住人群粪便为标本.用清水沉淀集卵法对感染者进行虫卵计数;常见螺蛳分类后压碎于解剖镜下找尾蚴;捕捉淡水鱼分类后取鱼肉压片找囊蚴;清水沉淀集卵法查找家畜粪便虫卵,解剖野鼠肝胆寻找成虫.结果 6个点人群粪检3397例.感染者292例,感染率为8.6%.其中轻度感染276例,占94.5%;中度感染14例,占4.79%;重度感染2例,占0.68%.解剖纹绍螺11083只,感染32只,感染率为0.29%;长角涵螺440只,感染4只,感染率为0.91%.解剖淡水鱼334尾,272尾感染,感染率为81.43%.家畜猫粪检33份,感染17份,感染率为51.52%;猪粪58份和牛粪27份.未发现虫卵.解剖猫6只,均找见成虫,猪58头及野鼠43只未发现成虫.结论 韶关市武江区存在华支睾吸虫感染.经多年大力防治取得了成绩,人群感染轻度占多数,但仍需继续开展防治工作.

    作者:邹学华;陈良贵;何丽洁;罗金萍;潘登;崔文娟 刊期: 2008年第12期

  • GP方案同步放疗治疗Ⅲ期非小细胞肺癌的临床研究

    目的 观察和评价吉两他滨联合顺铂(GP)同步放疗治疗Ⅲ期非小细胞肺癌的耐受性和近期疗效.方法 42例Ⅲ期非小细胞肺癌患者随机分为2组,放疗组21例先采取常规前后野对穿照射,剂量40Gy后改为调强适形放射治疗,包括原发灶和转移淋巴结,25~30 Gy/10~12次,总剂为65~70 Gy.同步放化疗组的放射治疗同单纯放疗组,化疗采用吉西他滨1 g/m2第1、8天静脉滴注,顺铂30 mg/m2·d,第1~3天静脉滴注.21 d为1个化疗周期,化疗共4~6个周期.结果 同步放化疗组与单纯放疗组总有效率分别为85.7%和57.1%.两组差异有统计学意义.同步放化疗组1、2、3年生存率为66.7%、33.3%、23.8%,单纯放疗组1、2、3年生存率为38.1%、14.3%、9.5%,两组差异有统计学意义(P<0.05).两组的不良反应除骨髓抑制和消化道反应外无显著性差异.结论 GP方案同步放疗治疗Ⅲ期非小细胞肺癌患者耐受性良好,疗效满意,远期疗效有待进一步观察.

    作者:叶金辉;王向明;蔡悦成;练英妮 刊期: 2008年第12期

  • 妊娠相关性疟疾及其研究进展

    恶性疟疾是对人类健康危害为严重的传染病之一.生活在疟疾流行区的人随着年龄的增长和感染次数的增加会逐渐获得保护性免疫即临床免疫.然而,孕妇尤其是初孕妇女在妊娠过程中感染恶性疟原虫后往往呈现急性感染症状,甚至危及孕妇和胎儿的生命.妊娠相关性疟疾(pregnancy-associated malaria,PAM)主要是由于受恶性疟原虫感染的红细胞和单核细胞在胎盘绒毛问大量聚集引起的.大量的研究表明,黏附在子宫粘膜上的虫体表达一种具有特殊生物活性和抗原性的蛋白质(var2CSA).Var2CSA可特异性地与子宫粘膜上的硫酸软骨素A(Chondroitin sulfate A,CSA)结合.此外,由于var2CSA的序列相对保守,机体在感染几次以后较容易产生交叉免疫保护反应.对PAM的研究是疟疾领域内的重要内容,目前在很多领域(病原学、分子致病机理、免疫学等)已经取得重要进展.本篇综述概括了近年来在PAM研究方面的进展,包括虫体表达的主要膜蛋白质的功能、相关的人体受体以及免疫学方面等内容.

    作者:李萌;尹继刚;陈启军 刊期: 2008年第12期

  • p53在肺癌中的表达及其与VEGF和血管新生关系的研究

    目的 探讨63例人肺癌中p53蛋白的表达与血管内皮细胞生长因子(VEGF)和血管新生的关系.方法 采用免疫组织化学方法,以抗CD34单抗标记血管内皮细胞以测定血管新生,抗p53多抗标记p53蛋白.抗VEGF165单克隆抗体检测VEGF的表达.结果 所有肺癌组织均有不同程度的血管新生,iMVD 4~138.7(44.5±29)/×400,p53突变率为54%(34/63),VEGF的表达率为50.8%(32/63).p53突变率与组织类型、临床分期、病人性别、年龄等临床参数无关;VEGF与组织类型、I临床分期、病人性别、年龄等临床参数无关.结论 p53蛋白表达与VEGF和血管新生未见相关;人肺痛的发生发展与p53蛋白过度表达有关.

    作者:马红;马晓春 刊期: 2008年第12期

  • 大鼠IgE依赖组胺释放因子重组蛋白纯化效果的优化

    目的 提高大鼠IgE依赖组胺释放因子(rHRF)的可溶性表达水平,改善其亲和层析纯化效果,为深入研究该重组蛋白的生物学功能奠定基础.方法 选择多克隆酶切化点BamH I和Xho I,将rHRF完整编码区基因从原有的pET-30a-rHRF重组质粒亚克隆至pET-28a载体,构建重组质粒pET-28a-rHRF;转化大肠杆菌BL21(DE3)后,通过改变IPTG浓度(0.1~1.0 mmol/L),调节诱导表达温度(25~37℃)和时间(1~5 h),筛选能够提高rHRF可溶性表达水平的条件;同时改进亲和层析纯化的条件,提高纯化效果.结果 成功构建重组质粒pET-28a-rHRF,不同IPTG浓度、诱导温度和时间对重组蛋白的可溶件表达水平无明显影响.但是,与pET-30a-rHRF转化菌相比,pET-28a-rHRF转化菌所表达的重组蛋白因其N端和C端均带有6xhis标签,增强了目的 蛋白与树脂的结合力,而使亲和层析纯化效果(重组蛋白的浓度和纯度)显著提高.结论 rHRF重组蛋白的可溶性表达水平不受IPTG浓度、诱导表达温度和时间的影响.但是可溶性重组蛋白两端均携带6xhis标签可使亲和层析纯化效果显著提高,从而有利于获得足昔rHRF 用于进一步的生物学功能研究.

    作者:陈晓湘;胡旭初;徐劲;余新炳 刊期: 2008年第12期

  • 巨噬细胞移动抑制因子、高敏C-反应蛋白与颈动脉粥样硬化和急性脑梗死的关系

    目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子、高敏C-反应蛋白与颈动脉粥样硬化和急性脑梗死的关系.方法 103例首次发病的脑梗死患者和40例健康体检者,应用酶联免疫双抗体夹心法测定血清MIF浓度,免疫散射比浊法测定血清hs-CRP浓度.应用颈动脉超声检测颈动脉内膜状况,并对急性脑梗死患者进行神经功能缺损评分.结果 急性脑梗死患者血清MIF和hs-CRP浓度显著高于正常对照组(P<0.01).不稳定斑块组(混合斑块组、软斑组)血清MIF和hs-CRP浓度显著高于稳定斑块组(硬化斑块组)和内膜粗糙组(P<0.01).血清MIF和hs-CRP浓度分别与急性脑梗死患者神经功能缺损评分呈正相关.结论 急性脑梗死患者血清MIF和hs-CRP水平可以反映颈动脉斑块的性质和稳定性,是临床了解脑梗死严重程度的重要指标.

    作者:黄帆;杨静;仲飞;徐雪;马中富 刊期: 2008年第12期

  • 丹红注射液对急性脑梗死大鼠保护作用的研究

    目的 探讨丹红注射液对大鼠急性脑梗死后自由基损伤的脑保护作用.方法 制备脑缺血模型.假手术组、手术组(注射生理盐水),手术+丹红组(注射丹红注射液),连续5d后测定脑组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(CSH-Px)活力和丙二醛(MDA)含量,同时观察海马CA1区病理组织学改变.结果 手术+丹红组大鼠脑组织的SOD和GSH-Px活力较手术组增高,MDA含量降低,其差异有统计学意义(P<0.05).手术+丹红组脑组织病理改变较手术组轻.结论 丹红注射液可增强缺血脑组织SOD和GSH-Px活力,降低MDA含量,清除氧自由基,达到保护脑细胞的作用.

    作者:胡波;吴禹 刊期: 2008年第12期

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