学术投稿

乙肝病毒全长基因组真核表达载体构建

周豪杰;聂咏梅;付涌水;汪传喜;郑优荣

关键词:乙肝病毒, 基因组, 基因克隆
摘要:目的 构建乙肝病毒全长基因组真核表达载体.方法 PCR一步法扩增乙肝病毒全长基因组;乙肝病毒基因组和真核表达载体pcDNA3.1(+)经Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ双酶切,连接并转化大肠杆菌DH5α.结果 PCR、酶切和测序表明乙肝病毒全长基因组成功插入真核表达载体pcDNA3.1(+).结论 成功构建乙肝病毒全长基因组真核表达载体.
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    作者:宝福凯;柳爱华 刊期: 2007年第11期

  • 南阳市1954-2006 年流行性乙型脑炎流行病学分析

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    作者:卢千超;陈广玉;张红普;王卫民 刊期: 2007年第11期

  • 实时荧光PCR检测B型流感病毒方法的建立及病毒培养法验证

    目的 建立B型流感病毒实时荧光PCR检测(FQ-PCR)法,并与常规病毒培养法比较,判断二者结果的相关性,确定两种检测方法各自更适合的应用领域.方法 建立FQ-PCR法并对76株经Quidel胶体金试纸条鉴定型别的流感病毒分离培养株进行检测,比较其敏感性和特异性.21~223梯度稀释的B型流感病毒分别用FQ-PCR法和病毒培养法进行检测,记录FQ-PCR的Ct值及培养物的血凝效价,并对FQ-PCR阳性但血凝无效价的梯度进行盲传,再次检测HA效价,比较二法的灵敏度及相关性.对临床采集的881份咽拭子标本做FQ-PCR检测,同时进行病毒培养并盲传、血凝试验及Quidel胶体金试纸条分型,综合比较两种检测方法之间的差异.结果 在76株已知流感病毒标本中,FQ-PCR方法检出B型16份,与Quidel胶体金分型结果相符.FQ-PCR方法的灵敏度约高出常规培养法的25~26倍.FQ-PCR法对临床咽拭子的检测灵敏度高,无非特异性反应.结论 流感病毒FQ-PCR法具有与组织培养法一致的特异性,前者操作简便快捷,灵敏度更高,在流感病毒临床快速检测和鉴定中具有更广阔的应用前景.

    作者:彭春梅;李军涛;林斌;陈美翩;周曦;杨仁峰;周荣 刊期: 2007年第11期

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    目的 分析和预测亚洲带绦虫肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4(Actin related protein 2/3 complex subunit 4,Atp2/3)基因及其编码蛋白的结构和特性.方法 利用美国国家生物技术信息中心(NCBI,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASY,http://ca.expasy.org/)中有关基因和蛋白的序列和结构信息分析的各种工具,结合其它生物信息学分析软件包,如Pcgene和Vector NTI suite,从亚洲带绦虫全长cDNA质粒文库中识别Arp2/3基因及其编码区,分析、预测该基因编码蛋白质的理化特性、翻译后的修饰位点、功能域、亚细胞定位、拓扑结构、二级结构、三维空间构象等.结果 该基因全长718 bp,编码区为30-530,编码167个氨基酸,为全长基因.GenBank中与日本血吸虫Arp2/3氨基酸序列一致性达78%,相似性达90%.理论分子量为19533.9.没有跨膜区和各种亚细胞序列.预测3个主要的抗原表位为53~58,74~82,138~143均在Arp2/3空间结构的分子表面.结论 应用生物信息方法从亚洲带绦虫成虫cDNA文库中筛选出Arp2/3基因.

    作者:唐保东;黄江;胡旭初;黄艳;包怀恩;郎书源 刊期: 2007年第11期

  • 生长激素对梗阻性黄疸时肠粘膜屏障保护作用的实验研究

    目的 探讨人重组生长激素(rhGH)减轻梗阻性黄疸时肠源性细菌及内毒素移位的作用及机制.方法 Wister大鼠42只分为3组:假手术组(SO组)、胆总管结扎组(BDL组)及rhGH治疗组(rhGH组).实验1周后检测各组肝功指标的变化及血浆内毒素水平,取肝、肾、肠系膜淋巴结等肠道外器官组织做细菌培养,电镜观察末端回肠粘膜变化.结果 rhGH组多项肝功指标较BDL组明显改善,rhGH组血浆内毒素水平为(0.38±0.03)EU/ml,较BDL组的(0.65+0.04)EU/ml明显降低(P<0.01),与SO组的(0.30+0.02)EU/ml比较差异无统计学意义(P>0.05).BDL组肝、肾、肠系膜淋巴结中细菌移位率高于另两组,其中肠系膜淋巴结细菌移位率为64.29%,明显高于SO组及rhGH组(P<0.05),后两组之间各部位细菌检出率差别无统计学意义(P>0.05).电镜显示BDL组肠粘膜上皮细胞坏死,细胞核固缩,线粒体肿胀变性,内质网明显扩张.rhGH组肠粘膜上皮改变较BDL组明显减轻,接近SO组所见.结论 应用rhGH可保护梗阻性黄疸时小肠粘膜屏障功能,减少肠源性细菌/内毒素移位的发生.

    作者:孙丽芳;李晶;施中凯 刊期: 2007年第11期

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    目的 了解HBV基因型对乙型肝炎病毒慢性感染者临床影响.方法 采用限制性片段长度多态性(RFLP)及序列测定法检测广东地区27例HBV携带者和173例慢性乙肝患者的HBV基因型.结果 B基因型105例(52.5%),C型94例(47%),D型1例,未发现其它基因型.B型中乙型肝炎表面抗原携带者(ASC)所占比例(18.1%)显著高于C型中ASC所占比例(8.5%).C型中肝硬化所占比例(23.4%)显著高于B型中肝硬化所占比例(7.6%).C型在ASC、慢性乙肝轻度、中度、重度及重型肝炎、肝硬化的比例依次增高.C型较B型年龄大,但二者间性别差异无统计学意义.结论 广州地区HBV基因型由B、C、D型构成,以B型为主.C型较B型年龄大.C型与较重肝病有关.B、C型间性别差异无统计学意义.

    作者:冼建中;关玉娟;唐小平 刊期: 2007年第11期

  • 抗蓝载体单克隆抗体的制备及特性鉴定

    目的 制备抗蓝载体(blue carrier,BC)单克隆抗体(mAb),为相关研究提供支持与工具.方法 用人工合成肽与蓝载体交联后免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与NS-1融合制备杂交瘤,经筛选和3次克隆化,从制备的腹水中纯化单克隆抗体.用ELISA以及Dot-ELISA方法鉴定单克隆抗体的特性(效价、Ig亚类、特异性以及亲和力).结果 筛选到1株可稳定分泌抗蓝载体单克隆抗体的杂交瘤细胞5B5,腹水效价2×10-6,单抗亚类为IgG1,抗体亲和力为7.8×108.Dot-ELISA结果显示,在相同条件下5B5 mAb只与蓝载体特异性结合,与钥孔戚血蓝素(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵清白蛋白(OVA)等载体蛋白不发生交叉反应.结论 获得1株能特异性识别蓝载体蛋白的mAb,为评价短肽及半抗原交联免疫效果、某些疾病诊断及治疗方法疗效提供了工具.

    作者:叶青;刘艳君;朱平;富宁 刊期: 2007年第11期

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    登革病毒(dengue virus,DV)主要引起登革热、登革出血热和登革休克综合症,广泛流行于全球热带与亚热带,迄今仍未能清晰地阐明其致病机制.细胞信号转导与人类疾病的关联是目前生命科学的研究热点之一,对揭示疾病发生的本质具有极其重要的作用.本文从DV的各组成成分与信号转导的关联、DV感染引起细胞凋亡与信号转导的研究、DV相关受体与信号转导等方面加以综述,从一新的角度深入探讨其发病机制.

    作者:廖红舞;黄俊琪;吴长有 刊期: 2007年第11期

  • Lox-1基因501G>C和3'UTR*188C>T多态性与急性心肌梗死发病的相关性

    目的 检测Lox-1501G>C和3'UTR*188C>T多态性在中国汉族人群中的分布及其与急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)发病的相关性.方法 利用荧光染料SYBR Green Ⅰ标记定量PCR产物,通过PCR生长曲线和融解曲线分析结果进行多态位点的基因分型.分别检测汉族202名AMI患者及161名健康人群Lox-1 501G>C和3'UTR*188C>T多态性.随机选取30份经荧光定量PCR分型的标本进行DNA测序鉴定.结果 AMI患者和健康人群的Lox-1 501G等位基因频率分别为0.834和0.798,Lox-1 501C等位基因频率分别为0.166和0.202,Lox 1 501G>C基因型频率在AMI组和对照组间差异无统计学意义[OR 0.687,95%CI(0.226~2.093);P=0.507].AMI患者和健康人群的Lox-1 3'UTR*188C等位基因频率分别为0.681和0.674,Lox-13'UTR*188T等位基因频率分别为0.319和0.326,Lox-1 3'UTR*188C>T基因型频率在AMI组和对照组亦无统计学意义[OR 0.947,95%CI(0.623~1.439);P=0.80].结论 中国汉族Lox-1基因501G>C和3'UTR*188C>T多态性与AMI发病无关.

    作者:单志新;符永恒;周志凌;谭虹虹;林秋雄;邝素娟;余细勇 刊期: 2007年第11期

  • 湖北省恩施市输入性间日疟病例控制与监测

    目的 控制输入性间日疟继发病例.方法 对输入性间日疟现症病人采用氯喹、伯喹8日根治疗法,回归人员进行假定抗疟治疗,所有治疗人员由乡村医生实施督导服药.流行季节输入性疟疾发病的村点开展重点人群预防服药.对流动人口及本地居民定期监测疟疾发病情况.结果 2003-2005 年,流动人员96人,输入疟疾47例,发病率48.96%,现症病人治疗47例,预防性治疗49人.经监测连续3年未发生当地继发病例.结论 及时控制传染源,有效遏制二代病例的发生.

    作者:黄光全;袁方玉;吕伦权;胡乐群;刘井元 刊期: 2007年第11期

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    目的 探讨乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阴性HBV感染的发生与HBsAg'a'决定簇区变异的关系.方法 对7例HBsAg阴性HBV感染者的HBV S基因区序列进行分析,并与GenBank/EMBL/DDBJ数据库中的不同基因型参考序列进行比较,分析'a'决定簇区氨基酸的变化情况.结果 7例感染者中5例为adr/C型,2例为adw/B型,未发现其它亚型及基因型的存在.3例感染者的毒株在主要亲水区(MHR)内未发现氨基酸变异,另外4例感染者的毒株均存在不同程度的氨基酸替代,包括单点和联合突变,变异位点包括Q101K、T116I、K122N、T126N、Q129R/N、T131A、C138Y、N146S、C147F.结论 HBsAg'a'决定簇区变异不是形成HBsAg阴性HBV感染的唯一原因,但确是形成HBsAg阴性感染的一个重要因素.

    作者:肖蕾;曾国兵;王战会 刊期: 2007年第11期

  • 5 225例唐氏综合征孕早期筛查数据分析

    目的 探讨孕妇孕早期血清标志物筛查与胎儿唐氏综合征检出的关系.方法 应用全自动时间分辨荧光测定仪及配套试剂对妊娠9~13周的5 225例孕妇进行血清妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)和游离β-人绒毛膜促性腺激素(free β-HCG)的测定,筛查结果应用PerkinElmer公司提供的1T软件计算唐氏综合征风险.风险率≥1:250定为筛查阳性,再做羊水或脐带血产前诊断以确认.结果 5 225例孕妇中筛查阳性者为283例,阳性率为5.42%,有159例接受了产前诊断,检出唐氏综合征胎儿4例,漏诊2例,检出率为66.67%,还检出其它染色体异常3例、畸形10例、死胎6例、18-三体2例.结论 孕早期血清PAPP-A和free β-HCG联合筛查胎儿唐氏综合征是行之有效的方法,结合MOM对防止先天缺陷有实用性价值.

    作者:周剑英;廖灿;孙茜;龚惠芳;苏洁玲 刊期: 2007年第11期

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