学术投稿

半巢式聚合酶链反应在浆膜腔细菌感染诊断中的初步应用

周跃;王建民;沈轶瑶;汤伟;顾宇峰

关键词:细菌感染, 半巢式聚合酶链反应, 16SrRNA基因, 细菌培养, 浆膜腔
摘要:目的 观察革兰分型半巢式聚合酶链反应(PCR)在浆膜腔细菌感染诊断中的应用价值.方法 对30例浆膜腔积液标本,以细菌16SrRNA基因为靶序列,采用一对通用引物和一条革兰阴性菌特异性引物,以半巢式PCR方法进行检测,并同时作细菌培养.结果 以通用引物对30例标本作第1次PCR,11例扩增出371 bp长度的DNA片段,阳性率为36.7%;对阳性PCR产物再以革兰阴性菌特异性引物作第2次PCR,9例扩增出353 bp的DNA片段即为革兰阴性菌.对此30例标本作细菌培养,阳性率为16.7%,低于PCR扩增法.5例标本细菌分离结果与半巢式PCR革兰分型结果相同.结论 革兰分型半巢式PCR方法能够灵敏地检测细菌并作出革兰阴性、阳性分型,对于浆膜腔感染的早期诊断具有较好的应用价值.
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    目的 探讨乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阴性HBV感染的发生与HBsAg'a'决定簇区变异的关系.方法 对7例HBsAg阴性HBV感染者的HBV S基因区序列进行分析,并与GenBank/EMBL/DDBJ数据库中的不同基因型参考序列进行比较,分析'a'决定簇区氨基酸的变化情况.结果 7例感染者中5例为adr/C型,2例为adw/B型,未发现其它亚型及基因型的存在.3例感染者的毒株在主要亲水区(MHR)内未发现氨基酸变异,另外4例感染者的毒株均存在不同程度的氨基酸替代,包括单点和联合突变,变异位点包括Q101K、T116I、K122N、T126N、Q129R/N、T131A、C138Y、N146S、C147F.结论 HBsAg'a'决定簇区变异不是形成HBsAg阴性HBV感染的唯一原因,但确是形成HBsAg阴性感染的一个重要因素.

    作者:肖蕾;曾国兵;王战会 刊期: 2007年第11期

  • 某市吸毒人群基数估计方法研究

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    作者:钟斐;徐慧芳;赵宇腾 刊期: 2007年第11期

  • 南阳市1954-2006 年流行性乙型脑炎流行病学分析

    目的 了解南阳市流行性乙型脑炎的流行情况,为制定乙脑预防控制措施提供依据.方法 采用Excel软件进行描述流行病学分析.结果 南阳市乙脑发病呈现明显的季节变化,发病以小年龄组为主.1990年以前每8~10 年发生一次较大流行,1991年以来乙脑发病总体呈明显下降趋势.结论 提高乙脑疫苗接种率,加强乙脑病例的主动监测,提高血清学检测率以提高乙脑诊断的符合率,是进一步降低乙脑发病率的关键.

    作者:卢千超;陈广玉;张红普;王卫民 刊期: 2007年第11期

  • 5 225例唐氏综合征孕早期筛查数据分析

    目的 探讨孕妇孕早期血清标志物筛查与胎儿唐氏综合征检出的关系.方法 应用全自动时间分辨荧光测定仪及配套试剂对妊娠9~13周的5 225例孕妇进行血清妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)和游离β-人绒毛膜促性腺激素(free β-HCG)的测定,筛查结果应用PerkinElmer公司提供的1T软件计算唐氏综合征风险.风险率≥1:250定为筛查阳性,再做羊水或脐带血产前诊断以确认.结果 5 225例孕妇中筛查阳性者为283例,阳性率为5.42%,有159例接受了产前诊断,检出唐氏综合征胎儿4例,漏诊2例,检出率为66.67%,还检出其它染色体异常3例、畸形10例、死胎6例、18-三体2例.结论 孕早期血清PAPP-A和free β-HCG联合筛查胎儿唐氏综合征是行之有效的方法,结合MOM对防止先天缺陷有实用性价值.

    作者:周剑英;廖灿;孙茜;龚惠芳;苏洁玲 刊期: 2007年第11期

  • HBV基因型对慢性乙型肝炎临床的影响

    目的 了解HBV基因型对乙型肝炎病毒慢性感染者临床影响.方法 采用限制性片段长度多态性(RFLP)及序列测定法检测广东地区27例HBV携带者和173例慢性乙肝患者的HBV基因型.结果 B基因型105例(52.5%),C型94例(47%),D型1例,未发现其它基因型.B型中乙型肝炎表面抗原携带者(ASC)所占比例(18.1%)显著高于C型中ASC所占比例(8.5%).C型中肝硬化所占比例(23.4%)显著高于B型中肝硬化所占比例(7.6%).C型在ASC、慢性乙肝轻度、中度、重度及重型肝炎、肝硬化的比例依次增高.C型较B型年龄大,但二者间性别差异无统计学意义.结论 广州地区HBV基因型由B、C、D型构成,以B型为主.C型较B型年龄大.C型与较重肝病有关.B、C型间性别差异无统计学意义.

    作者:冼建中;关玉娟;唐小平 刊期: 2007年第11期

  • 亚洲带绦虫肌动相关蛋白2/3复合体结构与功能的生物信息学分析

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    作者:唐保东;黄江;胡旭初;黄艳;包怀恩;郎书源 刊期: 2007年第11期

  • 赤芍总苷抗血栓作用的研究

    目的 探讨赤芍总苷(TPG)静脉给药抗血栓作用以及其作用机制.方法 通过动静脉旁路血栓形成实验,观察TPG对血栓形成的抑制作用;建立电刺激致大鼠血栓模型,观察TPG抗血栓作用以及对血液流变学指标、凝血-纤溶系统的影响;TPG静脉注射给药5 d后,测定其对小鼠凝血时间的影响;以体外法观察TPG对ADP诱导家兔血小板聚集的影响.结果 TPG 25、50、100mg/kg能明显抑制大鼠动-静脉旁路血栓的形成,抑制率分别为32.59%、34.33%、24.88%;TPG 25、50、100 mg/kg能明显延长电刺激大鼠动脉血栓形成所需的时间,所需时间分别为648.2 s、651.1 s、746.4 s,与对照组(540.2 s)比较,差异有统计学意义(P<0.05);降低血粘度,延长凝血酶原时间和部分凝血活酶时间,降低血纤维蛋白原浓度;有效延长小鼠的凝血时间;显著抑制ADP诱导的血小板聚集(抑制率分别为23.4%、37.2%、44.9%).结论 TPG具有较好的抗血栓作用,其作用机制与其能降低血粘度,延长大鼠凝血酶原时间、部分凝血活酶时间以及降低血纤维蛋白原浓度,抑制血小板聚集有着密切的关系.

    作者:邱灿华;陈健文;蓝秀健;马仁强;王家伟;张天举;林明栋;周璇和 刊期: 2007年第11期

  • HCV2a(JFH1)NS5A蛋白在原核和真核细胞中的表达、鉴定及分析

    目的 在原核与真核细胞中表达丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)2a型JFH1(japanese fulminant hepatitis 1)株NS5A蛋白,分析JFH1 NS5A蛋白与其它基因型NS5A蛋白间的差异,为进一步研究NS5A蛋白在HCV病毒复制中的作用奠定基础.方法 PCR特异扩增JFH1 NS5A基因,克隆入pET-32a和pEGFP-N1载体中,构建JFH1 NS5A的原核和真核重组表达质粒pET-JFH1 NS5A和pEGFP-JFH1 NS5A.将pET-JFH1 NS5A转化大肠杆菌BL21(DE3),pEGFP-JFH1 NS5A转染HEK 293T细胞,在原核与真核系统中进行表达,并以SDS-PAGE、荧光显微术和Western blot方法检测.利用PubMed BLAST软件对JFH1与HCV1a、1b、2b和2c型NS5A蛋白间的同源性进行了分析.结果 酶切鉴定及测序结果表明成功构建了重组质粒pET-JFH1NS5A和pEGFP-JFH1 NS5A.SDS-PAGE电泳检测到融合蛋白在原核细胞中的表达,荧光显微镜观察和Western blot检测到了GFP-JFH1 NS5A融合蛋白在HEK 293T细胞中表达.BLAST分析显示,JFH1和H77、HC-J4、HCV-J8和BEBE1病毒株NS5A蛋白的同源性分别为57%、60%、68%和74%.结论 JFH1 NS5A蛋白在原核与真核细胞中表达成功,为研究HCV NS5A在JFH1株病毒高效复制中的作用提供了材料.

    作者:王永智;任浩;丁惠;赵平;薛利军;潘卫;戚中田 刊期: 2007年第11期

  • 乙肝病毒全长基因组真核表达载体构建

    目的 构建乙肝病毒全长基因组真核表达载体.方法 PCR一步法扩增乙肝病毒全长基因组;乙肝病毒基因组和真核表达载体pcDNA3.1(+)经Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ双酶切,连接并转化大肠杆菌DH5α.结果 PCR、酶切和测序表明乙肝病毒全长基因组成功插入真核表达载体pcDNA3.1(+).结论 成功构建乙肝病毒全长基因组真核表达载体.

    作者:周豪杰;聂咏梅;付涌水;汪传喜;郑优荣 刊期: 2007年第11期

  • 盆腔脓肿20例误诊分析

    目的 回顾性分析盆腔脓肿的临床表现,提高妇科的诊疗水平.方法 对1998年1月至2005年12月,收住我院的盆腔脓肿共89例,其中误诊为其他疾病20例进行分析.结果 误诊为外科急腹症阑尾炎7例,卵巢瘤扭转及卵巢囊破裂各5例,异位妊娠2例,卵巢癌1例.结论 要提高对盆腔脓肿的认识,尤其是临床症状不典型的患者,详细询问病史,认真进行体格检查,明确诊断,但决不能一味依赖辅助检查或主观臆断,草率诊断,匆忙手术.

    作者:杜莲芳 刊期: 2007年第11期

  • 半巢式聚合酶链反应在浆膜腔细菌感染诊断中的初步应用

    目的 观察革兰分型半巢式聚合酶链反应(PCR)在浆膜腔细菌感染诊断中的应用价值.方法 对30例浆膜腔积液标本,以细菌16SrRNA基因为靶序列,采用一对通用引物和一条革兰阴性菌特异性引物,以半巢式PCR方法进行检测,并同时作细菌培养.结果 以通用引物对30例标本作第1次PCR,11例扩增出371 bp长度的DNA片段,阳性率为36.7%;对阳性PCR产物再以革兰阴性菌特异性引物作第2次PCR,9例扩增出353 bp的DNA片段即为革兰阴性菌.对此30例标本作细菌培养,阳性率为16.7%,低于PCR扩增法.5例标本细菌分离结果与半巢式PCR革兰分型结果相同.结论 革兰分型半巢式PCR方法能够灵敏地检测细菌并作出革兰阴性、阳性分型,对于浆膜腔感染的早期诊断具有较好的应用价值.

    作者:周跃;王建民;沈轶瑶;汤伟;顾宇峰 刊期: 2007年第11期

  • 伯氏疏螺旋体与莱姆病研究进展

    莱姆病是一种新发虫媒传染病,也是一种重要的人兽共患病,其病原体是伯氏疏螺旋体.莱姆病流行范围广,发病率较高,对人类,特别是林区工作者、野外作业人员、旅游者的健康危害大.本文对近年伯氏疏螺旋体与莱姆病研究的某些进展进行简要介绍.

    作者:宝福凯;柳爱华 刊期: 2007年第11期

  • 四年制医学检验本科《临床免疫学检验》教学的几点体会

    在四年制医学检验本科《临床免疫学检验》教学中,进行合理的教学时数分配,优化教学内容,采用灵活多样的教学模式是提高教学质量的方法手段,并取得了明显的效果.

    作者:裘宇容;杨佳 刊期: 2007年第11期

  • 抗乳腺癌免疫毒素EGF-TCS的构建及生物学活性

    目的 制备对乳腺癌细胞具有特异性杀伤活性的抗乳腺癌重组免疫毒素.方法 利用大肠杆菌系统表达抗乳腺癌EGF-TCS重组免疫毒素.表达产物经Ni-NTA Agrose亲和层析柱纯化,进行特异性杀伤活性检测.结果 以可溶性形式表达于大肠杆菌培养上清中,并获得有效纯化.细胞毒试验表明其对乳腺癌细胞具有杀伤作用,而对正常乳腺细胞无损伤.结论 已成功地制备了具有杀伤活性的抗乳腺癌EGF-TCS重组免疫毒素,为其进一步应用奠定基础.

    作者:杨海文;李咏梅;陈金龙;罗仁 刊期: 2007年第11期

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    目的 了解慢性咽炎患者咽部细菌种类及分布特征,研究细菌感染与慢性咽炎的相互关系.方法 采集180例各类型慢性咽炎患者咽后壁分泌物,进行细菌培养和鉴定.结果 慢性咽炎患者咽拭子标本中,细菌培养检出率为100%.检出率前三位的细菌分别是α-溶血性链球菌(54.4%)、卡它莫拉菌(26.7%)、副流感嗜血杆菌(26.1%);检出率前3位的致病菌分别是α-溶血性链球菌(54.4%)、副流感嗜血杆菌(26.1%)、表皮葡萄球菌(22.8%),慢性咽炎患者咽部细菌检出率明显高于对照组(P<0.05).α-溶血性链球菌为临床各类型慢性咽炎患者中检出率高的细菌,其次为副流感嗜血杆菌(慢性单纯性咽炎患者),或肺炎克雷伯菌(慢性肥厚性咽炎患者),或金黄色葡萄球菌(干燥性咽炎患者),其检出率分别为32.9%、28.8%和23.3%.结论 慢性咽炎患者咽部携带的细菌谱与健康人群有明显的差异,且致病菌的检出率较高,不同临床分型慢性咽炎发病与咽部优势菌群有一定关系.

    作者:杜利军;张莉滟;吕志跃;吴忠道 刊期: 2007年第11期

  • 实时荧光PCR检测B型流感病毒方法的建立及病毒培养法验证

    目的 建立B型流感病毒实时荧光PCR检测(FQ-PCR)法,并与常规病毒培养法比较,判断二者结果的相关性,确定两种检测方法各自更适合的应用领域.方法 建立FQ-PCR法并对76株经Quidel胶体金试纸条鉴定型别的流感病毒分离培养株进行检测,比较其敏感性和特异性.21~223梯度稀释的B型流感病毒分别用FQ-PCR法和病毒培养法进行检测,记录FQ-PCR的Ct值及培养物的血凝效价,并对FQ-PCR阳性但血凝无效价的梯度进行盲传,再次检测HA效价,比较二法的灵敏度及相关性.对临床采集的881份咽拭子标本做FQ-PCR检测,同时进行病毒培养并盲传、血凝试验及Quidel胶体金试纸条分型,综合比较两种检测方法之间的差异.结果 在76株已知流感病毒标本中,FQ-PCR方法检出B型16份,与Quidel胶体金分型结果相符.FQ-PCR方法的灵敏度约高出常规培养法的25~26倍.FQ-PCR法对临床咽拭子的检测灵敏度高,无非特异性反应.结论 流感病毒FQ-PCR法具有与组织培养法一致的特异性,前者操作简便快捷,灵敏度更高,在流感病毒临床快速检测和鉴定中具有更广阔的应用前景.

    作者:彭春梅;李军涛;林斌;陈美翩;周曦;杨仁峰;周荣 刊期: 2007年第11期

  • 灵芝孢子粉对帕金森病黑质神经递质影响的实验研究

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    作者:谢安木;薛莉;刘敏 刊期: 2007年第11期

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    作者:刘泽玉;李国伟;陆家海 刊期: 2007年第11期

  • Lox-1基因501G>C和3'UTR*188C>T多态性与急性心肌梗死发病的相关性

    目的 检测Lox-1501G>C和3'UTR*188C>T多态性在中国汉族人群中的分布及其与急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)发病的相关性.方法 利用荧光染料SYBR Green Ⅰ标记定量PCR产物,通过PCR生长曲线和融解曲线分析结果进行多态位点的基因分型.分别检测汉族202名AMI患者及161名健康人群Lox-1 501G>C和3'UTR*188C>T多态性.随机选取30份经荧光定量PCR分型的标本进行DNA测序鉴定.结果 AMI患者和健康人群的Lox-1 501G等位基因频率分别为0.834和0.798,Lox-1 501C等位基因频率分别为0.166和0.202,Lox 1 501G>C基因型频率在AMI组和对照组间差异无统计学意义[OR 0.687,95%CI(0.226~2.093);P=0.507].AMI患者和健康人群的Lox-1 3'UTR*188C等位基因频率分别为0.681和0.674,Lox-13'UTR*188T等位基因频率分别为0.319和0.326,Lox-1 3'UTR*188C>T基因型频率在AMI组和对照组亦无统计学意义[OR 0.947,95%CI(0.623~1.439);P=0.80].结论 中国汉族Lox-1基因501G>C和3'UTR*188C>T多态性与AMI发病无关.

    作者:单志新;符永恒;周志凌;谭虹虹;林秋雄;邝素娟;余细勇 刊期: 2007年第11期

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    食品添加剂在食品工业中越来越被广泛使用,但过量摄入食品添加剂会对儿童的神经系统造成损害,也会对人体各部分器官造成不同程度的损害,我国大部分地区的食品都不同程度地存在过量使用食品添加剂的情况,更有甚者将工业添加剂用作食品添加剂.本文就我国目前使用广泛的食品添加剂的特性及其使用情况作一综述.

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