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家蚕蚕蛹变应原的鉴定、分离与纯化

张杰;刘志刚;林格;叶湘锋;刘瑞涛

关键词:家蚕蚕蛹, 过敏原, Western-blotting, 离子交换层析
摘要:目的鉴定、分离和纯化大造(Dazao)品系家蚕(Bombyx mori)的蚕蛹粗提液中的变应原蛋白质组分,为家蚕变应原的蛋白质组学和功能基因组学深入研究奠定基础.方法采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-blotting,鉴定了家蚕蚕蛹粗浸液中变应原蛋白质分子,并通过阴离子交换和凝胶过滤层析分别对家蚕蚕蛹变应原蛋白质进行初步纯化.结果在家蚕蚕蛹粗浸液中含有表观分子量分别为80 000及30 000的蚕蛹变应原;从家蚕蛹全虫粗提液中初步分离到分子量为30 000的蛹变应原蛋白组分.结论分离得到的家蚕蚕蛹变应原蛋白组分可用于系统研究家蚕过敏原蛋白分子的蛋白质组学和功能基因组学.
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  • 组蛋白与基因调控研究进展

    组蛋白是染色体的结构蛋白,它与DNA组成的核小体是染色体的基本结构单元.组蛋白能保护DNA免被核酸酶消化.除此之外组蛋白还有多种功能,它在基因调控、肿瘤细胞增殖、调亡、DNA修复以及衰老中发挥重要作用,它同时还是先天免疫的有效分子.本综述重点讨论了组蛋白的结构以及它们在基因调控中所发挥的调节作用.

    作者:魏泉德;黄艳;余新炳 刊期: 2006年第05期

  • 初诊2型糖尿病短期胰岛素治疗前后C肽水平的变化

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    作者:梁干雄;陈少颖;朱柏乐 刊期: 2006年第05期

  • 血红蛋白对磷酸肌酸激酶活力检测的影响

    目的探讨血清中游离的血红蛋白(不同程度溶血)对检测血清磷酸肌酸激酶(CK)活力的影响.方法用自制血红蛋白(Hb)液,制成不同浓度Hb含量的血清标本,用自动血细胞计数仪检测其Hb浓度,用自动生化仪配对检测原血清以及含不同浓度Hb血清的CK活力(U/L).结果含不同浓度Hb血清比原血清CK活力均有不同程度的升高,且CK活力升高的程度与血清中Hb的浓度成正相关.结论在检测血清CK活力时,不宜采用溶血的血清标本,以免造成CK活力的假性增高.

    作者:陈勇;吴建曾;黎玉坚 刊期: 2006年第05期

  • 东莞市1995~2004年不同传播途径传染病发病情况分析

    目的分析东莞市不同传播途径传染病的流行情况,探讨发病趋势和流行特点,为制定传染病预防和控制策略提供科学依据.方法对东莞市1995~2004年的传染病疫情资料进行描述性流行病学分析.结果1995~2004年共报告法定传染病99 804例,年均发病率223.62/10万;其中血源与性传播传染病发病率为79.96/10万,居首位;其次为肠道传染病和呼吸道传染病,发病率分别为67.79/10万、60.26/10万.而新生儿破伤风及其它传染病和自然与虫媒传染病,发病率分别为9.03/10万、6.45/10万.结论血源与性传播传染病的预防与控制仍是东莞市今后传染病预防和控制工作重点.

    作者:陈婉雯;张巧利 刊期: 2006年第05期

  • 小鼠肝癌微波消融对宿主Th2/Th1免疫应答的影响

    目的探讨小鼠肝癌微波消融(microwave ablation,MA)对宿主Th2/Th1免疫应答的影响.方法建立C57BL/6J小鼠Hepa1-6细胞移植肝癌模型,对肿瘤微波消融或手术切除,取正常、荷瘤、手术后及MA后四组小鼠,每组6只,用ELISA法检测各组周围血血浆Th1(IL-12、IFN-γ)和Th2(IL-4、IL-10)细胞因子水平(pg/ml).结果荷瘤组比正常组,细胞因子IL-10增加,IL-4、IL-12和IFN-γ下降(均P>0.05).MA组较荷瘤组,IL-12、IFN-γ显著上升(均P<0.01),IL-4明显降低(P<0.05),IL-10有所下降(P>0.05).手术组比荷瘤组,IL-12、IFN-γ上升,IL-4、IL-10下降(均P>0.05).MA组比手术组,IL-12明显上升(P<0.05),IFN-γ升高,IL-4和IL-10下降(均P>0.05).结论MA原位灭活小鼠肝癌可促进宿主免疫应答的Th2/Th1偏移,并且MA较手术切除具有较强的免疫刺激效应.

    作者:刘大全;冯炼强;吕明德;谭进富;王竹;周忠信 刊期: 2006年第05期

  • 猪蛔虫不同发育期幼虫的收集方法研究

    目的研究猪蛔虫不同发育期幼虫的收集方法.方法采用7.5%次氯酸钠氧化感染期蛔虫卵,37℃过夜后,用灭菌生理盐水离心数次,充分洗去次氯酸钠,将沉淀用玻璃珠在振荡器上振荡至全部卵壳破裂,幼虫孵出.用淋巴细胞分离液通过密度梯度离心法将幼虫与卵壳分离,后收集底层的脱鞘第三期(L3)幼虫.在贝尔曼原理的基础上,在漏斗中加入低浓度(0.4%)琼脂凝胶,分别将绞碎的含幼虫的猪肝、肺和小肠内容物及其肠粘膜平均分装在数个漏斗中,放入40℃温箱中孵育3 h,待大部分幼虫游离到管底,后用400目分样筛过滤分离肝中的L3,用300目分样筛过滤分离肺中的L3,用200目分样筛过滤分离肠内容物及其粘膜上的第四期幼虫(L4).结果次氯酸钠氧化加玻璃珠震荡法能够使感染期蛔虫卵几乎完全脱壳,配合淋巴细胞分离液的密度梯度离心法能收集到纯度较高且活力较强的体外脱鞘幼虫.与传统贝尔曼氏分离法相比,采用低浓度琼脂糖凝胶液能获得杂质少、高纯度的猪内脏中的不同发育期幼虫.结论次氯酸钠氧化加玻璃珠震荡法是体外脱鞘分离感染期幼虫的一种较为理想的方法,通过在漏斗内加低浓度的琼脂凝胶的方法是从猪内脏中获得高纯度的不同发育期幼虫的一种有效的方法.本方法不仅适用于猪蛔虫,而且对其它动物和人的寄生线虫幼虫的收集也有参考价值.

    作者:黄翠琴;陈宁;邹丰才;林瑞庆;朱兴全 刊期: 2006年第05期

  • 湛江地区家栖鼠类和蚤类的生态调查

    目的调查湛江地区家栖鼠形动物和蚤类的生态及种群的构成比.方法捕鼠采用笼夹法,晚放晨收,将捕获鼠类,分类鉴定,称重,解剖观察胎仔数及妊娠斑.室内地面游离蚤采用16开粘蚤纸,室内四个角和中央各放1张,每月布150张,晚放晨收,用生物显微镜低倍鉴别蚤种.结果在捕获鼠中,黄胸鼠占28.41%,褐家鼠占9.17%,小家鼠6.23%,臭鼩鼱占55.64%,地面游离蚤指数0.24.结论在城镇鼠类以褐家鼠为主,农村以黄胸鼠及臭鼩鼱为主,地面游离蚤以1~4月份高,以致痒蚤为主.

    作者:张曼碧;张曼青;刘小华;黄济英;张涛 刊期: 2006年第05期

  • 卵巢癌肿瘤标记物HE4基因的分子克隆与蛋白表达

    目的构建HE4基因及蛋白表达系统,用于卵巢癌的早期诊断.方法提取卵巢癌细胞H08910的总RNA,利用RT-PCR技术扩增HE4基因,然后将该片段进行T-A克隆并测序鉴定,纯化回收后亚克隆于原核表达载体PGEX-4T-1中,然后提取质粒,酶切鉴定,后经IPTG诱导,原核表达重组子在TOP10宿主菌进行表达,并进行SDS-PAGE、Western Blot分析与鉴定.结果应用RT-PCR技术,从卵巢癌HO8910的总RNA中扩增到一条大小约为400 bp的片段,经T-A克隆与测序鉴定,证实此片段为HE4基因,将PGEX-4T-1重组子转化入宿主菌,用IPTG诱导菌体表达HE4重组蛋白,经SDS-PAGE电泳和Western Blot鉴定证实,在相对分子量约39 000处可见明显的特异性的高表达条带.结论已成功克隆HE4基因,并经IPTG诱导在TOP10宿主菌中表达了相应的蛋白,为进一步制备卵巢癌的早期诊断试剂奠定基础.

    作者:陈洁晶;吴英松;宁云山;董文其;李明 刊期: 2006年第05期

  • 家蚕蚕蛹变应原的鉴定、分离与纯化

    目的鉴定、分离和纯化大造(Dazao)品系家蚕(Bombyx mori)的蚕蛹粗提液中的变应原蛋白质组分,为家蚕变应原的蛋白质组学和功能基因组学深入研究奠定基础.方法采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-blotting,鉴定了家蚕蚕蛹粗浸液中变应原蛋白质分子,并通过阴离子交换和凝胶过滤层析分别对家蚕蚕蛹变应原蛋白质进行初步纯化.结果在家蚕蚕蛹粗浸液中含有表观分子量分别为80 000及30 000的蚕蛹变应原;从家蚕蛹全虫粗提液中初步分离到分子量为30 000的蛹变应原蛋白组分.结论分离得到的家蚕蚕蛹变应原蛋白组分可用于系统研究家蚕过敏原蛋白分子的蛋白质组学和功能基因组学.

    作者:张杰;刘志刚;林格;叶湘锋;刘瑞涛 刊期: 2006年第05期

  • 痰涂片阴性肺结核病诊断研究进展

    在肺结核病例中,痰涂片阴性肺结核病占很大比例,其诊断比较复杂,目前仍无统一标准.本文对近年来涂阴肺结核病诊断研究进行了综述,分别对涂阴肺结核、涂阴肺结核的诊断、涂阴肺结核的鉴别诊断及改进诊断进行了阐述.

    作者:宋烨;杨本付 刊期: 2006年第05期

  • 广州市水源水中污染物主要来源分析

    目的通过调查广州市水源水中存在的污染物质的种类,分析各类污染物质的可能危害,并提出解决饮用水源水的方向.方法所需资料来自于1999~2004年广州市排入Z江的主要河涌水污染指标实验室监测数据以及各水厂水源水的实验室监测数据,按照<生活饮用水标准检验法>GB5750-1985、GB/T5009-2003、卫生部<生活饮用水检验规范>2001监测各项理化指标.结果广州地区水源水中有机污染物占所有污染物的70%以上,无机污染物中金属锰和亚硝酸盐氮是常见的超标项目;有机污染物主要来源于城市生活污水和工业废水,无机污染物主要是工业废水以及河底沉积重金属的溶解,致病性微生物主要来源于粪便和医院污水.结论有机污染物是广州市水源水污染的主要因素,污染主要来源是城市污水和生活垃圾,水源水的处理不能完全去除有害因素,需要寻找新的水源或采用新技术改善水质.

    作者:孙兰;杨轶戬;廖育煌;钟嶷;黎淑端;黄汝明 刊期: 2006年第05期

  • 不同佐剂的弓形虫复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠诱导的黏膜免疫应答

    目的比较IFN-γ、蜂胶佐剂以及两种佐剂混合鼻内免疫辅助可溶性速殖子抗原(STAg)增强机体黏膜免疫应答的水平,探讨两种佐剂联合应用的免疫效果.方法将5~6周龄雌性BALB/c小鼠60只随机分为4组(各15只):20μgSTAg,20μgSTAg+40μg蜂胶,20μg STAg+1 000U IFN-γ或20μgSTAg+40μg蜂胶+1 000U IFN-γ,均溶于总体积为20μl的PBS中,滴鼻免疫(10 μl/鼻孔),免疫2次,间隔14 d.末次免疫后第10天用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击.攻击后第43天处死全部存活小鼠,比较各组小鼠肠黏膜小肠上皮内淋巴细胞(IEL)、PP结T淋巴细胞数;检测小鼠粪便、鼻咽冲洗液、肺冲洗液、阴道冲洗液中弓形虫特异性sIgA含量.结果各佐剂组小鼠IEL、PP结T淋巴细胞数显著高于STAg组,黏膜sIgA含量显著高于STAg组;蜂胶+IFN-γ联合组小鼠黏膜免疫应答水平高于单独佐剂组,其中显著高于蜂胶组(P<0.05).结论IFN-γ作为弓形虫黏膜疫苗佐剂的效应优于蜂胶,IFN-γ+蜂胶作为复合黏膜佐剂鼻内免疫效果优于两者单独应用.

    作者:刘成芳;殷国荣;刘娟娟;管志玉;石蓉;张宇斌 刊期: 2006年第05期

  • 大肠癌伴转移性肝癌对门静脉的影响

    目的探讨大肠癌伴转移性肝癌的门静脉的特点.方法回顾250例大肠癌伴转移性肝癌患者的门静脉流速、直径及癌栓发生率,分析其门静脉的特点.结果大肠癌伴转移性肝癌患者门静脉的直径为(10.4±1.34)mm,门静脉流速为(19.7±5.2)cm/s;门静脉癌栓发生率为0;与原发性肝癌的门静脉癌栓发生率相比,存在显著性差异(P<0.01).结论在大肠癌伴转移性肝癌中,门静脉的流速及直径改变不显著;与原发性肝癌的门静脉癌栓发生率相比较,大肠癌伴转移性肝癌的门静脉癌栓发生率罕见.

    作者:王辉;曾山崎;盛立红 刊期: 2006年第05期

  • 赖型钩端螺旋体601株OmpL1蛋白的表达、纯化及功能分析

    目的对钩端螺旋体黄疸出血群赖株ompL1基因进行克隆、表达及产物的纯化.方法从我国钩端螺旋体黄疸出血群赖株基因组中扩增全长ompL1基因片段,克隆至pGEM-T载体,回收经EcoR Ⅰ+HindⅢ双酶切产物,将其与表达载体pET32a连接,通过酶切图谱和序列分析法筛选出重组质粒.将含重组质粒的宿主菌诱导表达后,提取全菌总蛋白进行SDS-PAGE电泳分析.结果获得pET9L重组质粒,经诱导表达后得到分子量为31 000的重组蛋白.测序得到的ompL1基因核苷酸序列与已发表ompL1基因序列(GenbankI61405)同源性为99.8%,所推导的氨基酸序列(Genbank LA3138)的同源性达100%.结论成功构建了ompL1基因的原核表达系统,为进一步制备以OmpL1为检测靶抗原的免疫层析试剂盒奠定基础.

    作者:林琳;赵卫;罗军;龙敏;张文炳;杨军;曹虹 刊期: 2006年第05期

  • 急危重症患儿死亡危险因素分析及临床对策

    目的探讨急性危重症患儿死亡的危险因素及临床对策.方法对2002年1月~2005年6月儿童监护病房(PICU)收治的282例患儿在入院第1、3、7天作小儿危重病例评分(PCIS)和全身炎症综合征(SIRS)、多器官功能障碍(MODS)指标的检查,并记录患儿的临床资料.结果SIRS组病死率明显高于非SIRS组(P<0.05);死亡组SIRS病例明显多于存活组,且其PCIS明显降低;PCIS 70分以下者病死率高于71~90分者(P<0.01),PCIS越低,病情越重,SIRS病例越多.PCIS与SIRS呈负相关.发生3个或3个以上器官功能障碍时病死率明显高于2个(x2=20.2,P<0.01),随着功能障碍器官数目的增加,死亡率亦增加.结论降低急危重症患儿的病死率关键是积极控制炎症反应,加强护理及临床监护,阻止SIRS向MODS的发展,保护重要器官的功能.

    作者:张坤尧;卢远达;余蓉 刊期: 2006年第05期

  • 岛津CL8000全自动生化分析仪碱性清洗液的配制及应用

    目的研制岛津CL8000全自动生化分析仪碱性清洗液代替产品,在保证检测质量的前提下,降低试剂成本.方法根据岛津CL8000系列全自动生化分析仪清洗原理,并结合次氯酸钠所具有的良好的冲洗和去污能力,加入非离子表面活性剂、消泡剂等配制成碱性清洗液.结果经比对试验、精密度实验、稳定性测试及日常病人标本应用测试证实,该自配碱性清洗液可达到原装碱性清洗液的清洁效果.结论自配碱性清洗液配制方法简单,成分稳定,可较好地满足日常工作的需要,同时又大大降低了成本.

    作者:陈光辉;陈慧;梁映亮;唐从国 刊期: 2006年第05期

  • 先天性梅毒患儿肺部、四肢骨骼的X线及颅脑超声征象的特点分析

    目的通过分析先天性梅毒患儿肺部、四肢骨骼X线征象的改变及颅脑超声的表现,总结出早期诊断的方法.方法对84例确诊的先天性梅毒患儿进行胸部和四肢骨骼的X线检查及颅脑超声检查,并进行分析、总结.结果84例患儿中胸片异常的有54例,占64.2%,以肺炎表现为主;四肢骨骼改变的有30例,占35.7%,病变以长骨干骺端为主;颅脑超声异常27例,占32.1%,以室管膜下出血及囊性改变为主.结论简便的胸及骨骼X线摄片与颅脑超声检查有助于先天性梅毒的早期诊断,可为治疗和预后提供重要参考.

    作者:郭小芳;张丽范;张霞;王坤林 刊期: 2006年第05期

  • 重庆市2002年霍乱流行特征分析

    目的分析重庆市2002年霍乱疫情流行特点及规律,为制定防制措施提供依据.方法对确诊的霍乱患者及其密切接触者进行个案调查,采肛拭和(或)大便取样,进行霍乱弧菌培养分离和鉴定.结果全市发生霍乱疫情23起,确诊病例173例,死亡5例,带菌者101人.霍乱感染率、发病率、死亡率和病死率分别为0.884/10万、0.558/10万、0.016/10万、2.89%.病例相对集中在渝西地区,6~8月为发病高峰,以农民发病为主.食物因素引起的病例数显著高于其它传播因素(U=6.62,P<0.01).优势流行菌型为埃尔托霍乱弧菌稻叶1d菌型,同时首次出现霍乱弧菌O139群.结论重庆市霍乱传播方式以食源性传播为主,流行株发生改变,应制定针对性强的综合防制措施,控制和减少疫情的发生和流行.

    作者:罗兴建;肖邦忠;张静秋;吴国辉;易娟;龙江 刊期: 2006年第05期

  • 人类mdr1基因新型Taq Man-MGB探针实时定量PCR检测方法的建立

    目的建立一种比现有方法敏感、特异性高、重复性好的实时荧光定量PCR检测的新方法检测人类mdr1基因.方法以含有目的基因mdr1cDNA的质粒pHaMDR1/A为阳性模板,用Primer express 2.0引物设计软件设计引物和Taq Man-MGB探针,建立荧光定量PCR检测方法.结果当待扩增DNA浓度在3.601×103cps/ml~3.601×109cps/ml范围时,模板浓度与循环阈值(Ct)之间的相关性良好,相关系数r2大于0.98.结论应用Taq Man-MGB探针的实时荧光定量PCR方法检测人类mdr1基因,具有灵敏度高、特异性高和精确度高等优点,可作为进一步研究人类mdr1基因的方法.

    作者:邹亚伟;胡斌;何蕴韶;陈福雄;封志纯 刊期: 2006年第05期

  • mTLR2基因在CHO细胞中的表达

    目的在CHO细胞中表达小鼠TLR2(mTLR2).方法将目的基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,并将其转染到CHO细胞,用G418筛选阳性克隆.采用PCR方法,检测外源基因的整合.采用Western blot、免疫组织化学对转染细胞的mTLR2表达进行鉴定.结果成功构建了pcDNA-mTLR2重组质粒.将其转染到CHO细胞,经G418筛选获得阳性细胞克隆.阳性细胞克隆经PCR检测表明TLR2基因得到稳定整合.Western blot分析显示在分子量约95 000处可见清晰的阳性反应条带.免疫组织化学检测显示转染细胞表达mTLR2.结论获得了表达mTLR2的细胞株,为进一步进行相关研究奠定了基础.

    作者:赵文忠;罗招凡;刘艳君;杨翠兰;朱平;江丽芳 刊期: 2006年第05期

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主管:广东省科学技术协会

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