梁杰贤；季文进；洪迅；郭中敏；刘培庆
目的克隆荔枝果实中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin)同源基因.方法采用生物信息学方法对多个植物泛变应原基因进行序列同源性比对,根据序列保守区域设计并合成简并性引物,通过RT-PCR和3′-RACE技术克隆荔枝果实中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析.结果获得了一个全长的新基因(689bp).该基因开放阅读框为396个碱基,编码131个氨基酸残基,经分析该蛋白等电点为4.98,分子量约为14 060.此序列已被GenBank收录,登陆号为DQ309464.序列分析结果显示所克隆到的基因与许多水果和花粉的泛变应原profilin基因有很高的同源性(与桦树和橡胶花粉泛变应原profilin的同源性分别为80%和84%,与桃子profilin的同源性为85%),因此认定其为泛变应原基因.结论从荔枝果实中成功地克隆出了一个泛变应原基因,为进一步的蛋白表达奠定了基础.
作者：张红云；宋娟娟；刘志刚；康敏雄 刊期： 2006年第06期
目的制备抗PSMD10的单克隆抗体(McAb),并对其特异性进行鉴定.方法用柱层析纯化的重组PSMD10蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,用ELISA和有限稀释法筛选出分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,用Protein-G亲和层析纯化接种杂交瘤细胞的小鼠腹水,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,Western-blot分析其特异性.通过免疫组织化学染色法检测PSMD10在肝细胞肝癌组织中的表达部位.结果筛选出2株能稳定分泌抗PSMD10单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗均为IgG2,Western-blot分析显示,2株单抗都与重组的PSMD10发生特异性结合.免疫组织化学染色分析显示,PSMD10表达在肝细胞肝癌的细胞浆内.结论制备的抗PSMD10杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单克隆抗体,可望用于进一步研究肝细胞肝癌的发生发展、诊断和治疗.
作者：陶涛；李明；宁云山；吴英松；季超能；洪艳华；邓东声 刊期： 2006年第06期
目的分析广东省医疗机构消毒监测资料,掌握广东省医疗机构消毒工作的状况.方法收集2000～2004年广东省疾病预防控制机构对医疗机构进行消毒监测的数据,并用SPSS统计软件进行分析.通过对不同监测项目监测结果的分析,找出不同级别医疗机构消毒质量的差异.结果 2000～2004年,全省医疗机构消毒监测样品总数依次为104352份、151176份、140171份、138138份、132135份,总合格率依次为87.44%、86.42%、88.91%、91.23%、89.91%.市以上、县、镇以下医疗机构消毒监测样品五年总合格率分别为94.10%、93.13%及84.99%,三者差异有显著性(P＜0.01).各类监测样品中以使用中消毒液合格率高(96.84%),低为空气中细菌含量(65.32%).结论应加强空气消毒工作的落实,镇以下医疗机构是今后消毒监测工作的重点.
作者：张贤昌；林锦炎；廖如燕；邹钦 刊期： 2006年第06期
目的摸清德国小蠊的侵害及密度,为制定防制对策提供科学依据.方法采用目测法、药激法分别对特殊行业单位60个,一般单位40个,居民住户100户调查侵害情况;用粘蟑盒对受侵害的特殊行业单位6个、一般单位4个,居民住户10户测定密度.结果特殊行业、一般单位、居民住户的侵害率分别为100%、37.50%、17.00%,经统计学分析差异有高度显著性(x2=35,P＜0.005).密度(只/盒·夜)分别为15.09、1.79、1.41.侵害情况及密度以特殊行业为严重,其次为一般单位和居民住户.侵害率和密度较高的场所为厨房、点心间、食品仓库、熟食间、员工更衣室及首层餐厅等.结论德国小蠊侵害情况和密度不断上升,危害日趋严重.侵害场所由原来的宾馆、酒家、娱乐等特殊行业蔓延至一般单位和居民住户,成为严重的公共卫生问题,是今后蟑螂防制工作策略的新挑战.
作者：梁河章；胡应辉；蓝荣彪 刊期： 2006年第06期
目的分析湖北省世界银行贷款项目环境改造灭螺工程的费用-效果与费用-效益,为今后科学规划环境改造灭螺工程提供依据.方法参照卫生经济评价原理和方法,对湖北省160项世界银行贷款项目环境改造灭螺工程的费用-效果与费用-效益进行分析.结果 160项环境改造灭螺工程的单位灭螺面积费用为0.81元/m2,有螺面积下降1%的费用为116.62元,总费用效益比为1.10,总净费用效益比为0.10.结论虽然不同疫区市、不同方法的环境改造灭螺工程的费用-效果与费用-效益差异较大,但是总体上还是可产生较好的直接效益.
作者：刘建兵；黄水生；范宏萍；戴裕海 刊期： 2006年第06期
目的建立检测巨噬细胞移动抑制因子含量的ELISA检测法.方法采用方阵滴定法,比较4种封闭液、不同稀释度的捕获抗体、检测抗体和辣根过氧化酶标记链菌素对检测结果的影响,确定ELISA法的佳实验条件.结果包被用捕获抗体的适浓度为4 mg/L,检测抗体的适浓度为200 mg/L,Streptavidin-HRP的适稀释度为1:5000.该方法的检测灵敏度为0.156μg/L,变异系数为7.3%～9.6%,回收率为91.2%～113.6%,与VEGF、TNF-α、IL-6、ICAM-1、胆红素、血红蛋白及甘油三酯均无交叉反应.结论建立的ELISA检测法简便、特异且灵敏,适用于检测血清中的MIF水平.
作者：林秋雄；单志新；黄小穗；余细勇；杨敏；周志凌；刘晓颖；陈红梅；林曙光 刊期： 2006年第06期
目的通过检测足叶乙甙浓度及其药代动力学参数,对血液透析治疗的患者应用标准剂量的足叶乙甙进行药物安全性研究.方法通过高效液相色谱法,检测血浆中足叶乙甙浓度(总浓度和非蛋白结合浓度),观察患者在透析前后药物的浓度、半衰期、药物分布容积等指标.结果足叶乙甙的透析前后药物半衰期的对比符合一级动力两室模型,15例患者透析前后足叶乙甙的半衰期t1/2分别为:(4.3±0.45)h,(3.5±0.36)h.透析过程中药物分布容积为(8.5±0.4)L/m2,血液中非蛋白结合状态的足叶乙甙占总浓度的9.0%(9.02%±0.7%).结论在有肾功能损害的情况下,足叶乙甙在体内通过排泄途径的改变使药物的清除率无明显下降,血透治疗没有显著增加足叶乙甙的排泄.在药动学和临床治疗反应的动态监测下,标准剂量的足叶乙甙静脉治疗在取得积极疗效的同时,药物不良反应轻微,具有较好的安全性.
作者：张庆光；莫洁庭；钟华 刊期： 2006年第06期
目的探讨新生儿急诊开胸手术的麻醉与危症处理.方法对29例出生1周以内的新生儿急诊开胸手术的麻醉资料作回顾性分析.结果所有病例术前均有合并症,术中出现需要及时处理的并发症12例(41%),其中术中出现呼吸和心血管系统较大波动的有6例(20%),出现水电解质和酸硷失衡的有8例(27%),经对症处理术中得以纠正.术后有6例(20%)出现较严重肺部感染和不同程度心力衰竭,经抗感染、强心利尿和呼吸支持等治疗,得到控制.全部病例基本痊愈出院.结论并发症的严重程度对预后有直接影响.术中维持有效的呼吸道通气和较稳定的血流动力学,及时纠正水、电解质和酸碱失衡等并发症是麻醉成功的关键.
作者：黄漫 刊期： 2006年第06期
目的研究整合子在多重耐药革兰阴性菌中的分布和所起的作用.方法用Kirby-Bauer(K-B)药敏法分析80株多重耐药革兰阴性菌的耐药性,再用可变引物与兼并引物进行聚合酶链反应(PCR),分别扩增革兰阴性菌整合子.结果用兼并引物可检出50株革兰阴性菌携带有整合子,有21.2%的菌株同时对10种抗生素都耐药,依次为氨苄西林(72.5%)、头孢曲松(62.5%)、头孢唑啉(61.2%)、头孢他啶(56.2%)、哌拉西林(55.0%)、复方磺胺嘧啶(51.2%)、环丙沙星(50%)、庆大霉素(48.8%)、头孢吡肟(48.8%)、头孢西丁(33.8%),显著高于整合子阴性的菌株.用可变引物检出29株携带有Ⅰ类整合子,可扩增出1000 bp,1450 bp,1600 bp,1700 bp,1850 bp,1900 bp,大于2000 bp等6种不同长度的脱氧核苷酸(DNA)片段,相同菌属可携带有不同长い度的耐药基因片段,不同细菌种属间携带有相同长度的耐药基因片段.结论Ⅰ类整合子广泛分布于革兰阴性杆菌中,在多重耐药机制中起着重要的作用.
作者：廖伟娇；江洁华；易建云；徐韫健；潘思争 刊期： 2006年第06期
目的研究内皮素-1(ET-1)在局部引起热痛觉过敏的表现及机制.方法小鼠分为生理盐水对照组(NS组)、ET-1组(ET组)、ETA受体拮抗剂BQ123加ET-1组(BE组),每组6例.NS足底注射生理盐水,ET组足底注射10 pmol ET-1,BE组注射3 nmol BQ123 20 min后再注射ET-1.测量注药前后15 min、30 min、45 min及60 min热痛阈值.结果 NS组热痛阈值无明显变化,ET组热痛阈值降低,60 min时热痛阈值基本恢复,BE组热痛阈值无明显变化.结论 ET-1可在局部通过与ETA受体结合引起动物的热痛觉过敏.
作者：梁杰贤；季文进；洪迅；郭中敏；刘培庆 刊期： 2006年第06期
目的猪作为人异种胰岛细胞移植的供体被认为可能是解决人类供体短缺的办法.本研究目的是观察异种胰岛细胞移植对1型糖尿病的治疗效果.方法本研究共3名1型糖尿病自愿受试者,随访6个月.3名患者均在内分泌专科医生的指导下坚持胰岛素治疗,但是长期血糖控制欠佳,血糖波动大,多次出现严重低血糖.供体是新生猪,采用胶原酶消化法分离胰岛细胞,经过体外培养后注入受试者肝内.移植细胞数分别为80万、100万、60万.免疫抑制剂:2例选用环孢霉素(cyclosporine,CSA)+骁悉(mycophenolate mofetil,MMF),1例选用他克莫司(tacrolimus,FK506)+MMF.结果所有病人在移植后1周内均有低热和轻度的肝区疼痛,没有严重的并发症.移植术后仍需胰岛素治疗.术后20 d左右,胰岛素用量较术前逐渐减少.6个月后观察,3名受试者血糖均能较好控制,血糖大幅度波动的情况得到改善,HbA1c明显下降,C肽水平显著升高,每天胰岛素用量分别减少了46.7%、25%、20%.结论异种(猪)胰岛细胞移植治疗1型糖尿病,可以使血糖得到理想控制,改善血糖的大幅度波动,低血糖发生率降低,胰岛素用量减少,短期内无明显副反应.
作者：梁干雄；李晓群；季明芳；余元龙；王得坤；陈少颖；王维 刊期： 2006年第06期
目的采用分子生物学方法鉴定一株甲病毒M1.方法 M1病毒在C6/36细胞中增殖,用TRIZOL法提取总RNA.采用RT-PCR方法扩增目的片段,并将其克隆到T载体中,筛选重组子并测定其核苷酸序列.用NCBI/BLAST程序进行同源性收索.结果 M1病毒扩增出469 bp的特异片段,且包含SAG特有的100nt片段.同源性分析表明,该片段与SAG、GET相对应片段同源性为95%,91%.结论 M1病毒属于鹭山病毒.
作者：赵文忠；罗招凡；刘建伟；方美玉 刊期： 2006年第06期
目的了解花都区饮食、服务行业从业人员人群肠道沙门氏菌带菌状况.方法对花都区疾病预防控制中心2004年12月至2005年11月的饮食、服务行业从业人员健康体检时肛拭样品中检出的肠道沙门氏菌进行分析.结果检测样品21 787份,检出沙门氏菌108份,检出率为0.496%.全年各月份的检出率为0.104%～1.153%,8月份高,3月份低(x2=48.4528,P＜0.005).女性(0.524%)高于男性(0.427%,x2=0.8435,0.25＜P＜0.50).108株沙门氏菌分布于21个血清型,菌型以德尔俾沙门氏、斯坦利沙门氏、纽兰沙门氏、阿贡纳沙门氏、鸭沙门氏、纽波特沙门氏为主,6个血清型共检出79份,占总检出率的73.13%.结论沙门氏菌是重要的肠道病原菌,人群带菌率与气候、季节关系密切.并且周围的卫生环境条件及人群的生活方式也是影响带菌率的重要因素.我区人群沙门氏菌带菌率较高,菌型分散,给卫生检测工作带来了一定困难.各地区菌型的差异因人口流动为沙门氏菌在人群中的分布带来了很大的不确定因素.因此,沙门氏菌是花都区卫生部门要重点检测的肠道致病菌之一.
作者：徐胜玲；蔡师志；汤国球 刊期： 2006年第06期
目的了解广东及广西蝙蝠携带登革病毒和流行性乙型脑炎(乙脑)病毒的情况.方法 2004年9月至2005年11月期间11次收集广东及广西部分地区的蝙蝠.收集的蝙蝠取脑组织标本和血清标本,采用两对登革病毒和乙脑病毒通用引物,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和细胞培养分离方法检测所采集蝙蝠标本中的登革病毒(dengue virus,DV)和乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV).结果收集了4个科9个种共905只蝙蝠,其中棕果蝠154只、犬蝠395只、普通长翼蝠5只、小黄蝠52只、中菊头蝠228只、中华菊头蝠15只、小菊头蝠41只、双色蹄蝠8只、普氏蹄蝠7只.蝙蝠来源于粤中、粤西和桂东的7个县市.905只蝙蝠标本中未检测、分离到登革病毒和乙型脑炎病毒.结论未发现所调查的蝙蝠携带登革病毒和乙型脑炎病毒.
作者：胡勇；陈清；李志峰；吴毅；胡贵方；李建栋；俞守义 刊期： 2006年第06期
目的采用阳离子脂质体介导的基因转染的方法对人膀胱移行细胞癌T24细胞进行荧光标记,建立其可在活体荧光成像系统下直接观察肿瘤生长及转移的简便、可靠的原位移植模型.方法以绿色荧光蛋白作为标记基因经阳离子脂质体介导转入人类膀胱移行细胞癌T24细胞株中,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达绿色荧光蛋白的细胞克隆并扩大培养,然后接种于裸小鼠膀胱壁内,活体荧光成像系统直接观察原位肿瘤的生长与转移,并与常规石蜡切片苏木素-伊红(HE)染色比较.结果经绿色荧光蛋白标记的人膀胱肿瘤T24细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光,并可在体内、外持续稳定表达.绿色荧光蛋白转染后的人膀胱移行细胞癌T24细胞的体内外生物学行为无明显改变,裸小鼠膀胱原位接种5×105个转染后的膀胱肿瘤细胞后1周即可在荧光成像系统下观察到下腹部新生膀胱肿瘤发出绿色荧光,2周后膀胱肿瘤可被触及,4周后经解剖可在荧光成像系统下观察到腹膜后及盆腔淋巴结等远处转移.结论绿色荧光蛋白是新一代的生物源性荧光标记物质,它具有分子量小、对细胞无毒、使用方便及容易检测等优点.绿色荧光蛋白能够在T24人膀胱肿瘤细胞中长期稳定表达,用绿色荧光蛋白标记的人膀胱肿瘤T24细胞建立的可视裸鼠原位移植模型为进一步研究膀胱肿瘤提供了一种简便、可行的新方法.
作者：谭万龙；吴元东；陈彤；熊林；郑少斌 刊期： 2006年第06期
目的构建pGEX-6P-3/GAD65原核表达载体,获得大量纯化的大鼠GAD65蛋白.方法通过RT-PCR技术从大鼠脑组织中扩增GAD65 cDNA,克隆至PGEM-Teasy载体上并测序,利用引物上的BamHI与EcoRI酶切位点将GAD65基因插入PGEX-6P-3,转化大肠杆菌BL21,限制性内切酶消化鉴定.IPTG诱导重组菌株表达,用SDS-PAGE与Western-blot对表达产物进行鉴定,并用Sepharose4B亲和层析柱对表达产物进行纯化,PreScissionProteas酶对融合蛋白进行酶切.结果扩增的GAD65长度为1758bp,测序结果与已知序列吻合.重组子经酶切鉴定,获得PGEX-6P-3 GAD65原核表达菌株,获得分子量约91 000的PGEX-6P-3/GAD65融合蛋白,分离纯化出约65 000的GAD65蛋白,Western-blot表明重组蛋白能被GAD65单克隆抗体特异结合.结论成功获得GAD65蛋白,为研究GAD65生物学作用奠定了基础.
作者：郑小玲；刘启才；林勇平；孙卫文；陈盛强；吴晓蔓 刊期： 2006年第06期
目的探讨急性心肌梗死后早期心绞痛经皮冠状血管重建术对患者预后的影响.并分析死亡率及再入院率的发生与血管病变的关系及对患者预后的影响.方法对急性心肌梗死后发生早期心绞痛的87例患者,分为治疗组43例与对照组45例,随访1～7年,平均4.2年,研究经皮冠状血管重建术对患者远期预后的影响.结果随访平均4.2年,治疗组总入院率为67.4%(29/43),对照组则为93.3%(42/45,P＜0.01);治疗组因心血管疾病再入院率为25.6%(11/43),对照组则为66.7%(30/45,P＜0.001).治疗组总死亡率为16.3%(7/43),对照组为24.4%(11/45)(P＜0.05);治疗组因心血管疾病死亡率为7.0%(3/43),对照组为13.3%(6/45)(P＜0.01).结论经皮冠状血管重建术能降低急性心肌梗死后早期心绞痛患者的总入院率和因心血管疾病再入院率;同时能降低总死亡率和因心血管疾病的死亡率.
作者：杨春万；邓斌；冯新武；李挺 刊期： 2006年第06期
目的建立屋尘螨主要变应原Der p 1蛋白原核表达产物的纯化方法,获得理想的表达产物并鉴定其免疫原性.方法大量诱导表达含pET24a-Der p 1质粒的BL 21工程菌,表达产物以重组蛋白包涵体的形式存在,包涵体经洗涤与溶解后,使用结合6组氨酸的镍柱进行亲和层析纯化蛋白质,用稀释复性方法进行重组蛋白的复性,再用屋尘螨过敏性哮喘患者阳性血清经Dot-ELISA方法分析Der p 1纯化蛋白的抗原活性.结果分步洗涤可有效去除重组蛋白包涵体沉淀中混杂的多数杂蛋白成分,亲和层析分离可获得高纯度重组变应原Der p 1蛋白.Dot-ELISA法检测结果表明经复性并纯化的Der p 1蛋白呈强阳性反应,佳血清稀释度为1:64,而重组蛋白与正常人血清呈阴性反应.结论纯化后的融合蛋白Der p 1具有较高的纯度及较强的免疫活性,可望作为有效的屋尘螨变应原诊断试剂和疫苗的候选分子.
作者：刘志刚；杨慧；付颖媛；高波；朱健琦；吉坤美 刊期： 2006年第06期
目的比较HE染色和酶组织化学染色对判断微波消融灭活肝癌细胞活性的价值.方法用10W、1.5～2 min(85～95℃)和5 W、1.5～2 min(55～65℃)两种条件的微波消融,分别治疗A、B两组(每组3只)小鼠移植型肝癌,并取微波消融前后的肿瘤组织标本制成切片,进行常规HE染色及琥珀酸脱氢酶的酶组织化学染色,在显微镜下观察两种染色的情况.结果从HE染色观察到,A、B两组小鼠肝癌组织在微波消融后的即刻,其细胞核形态和排列较消融前无明显改变.酶组织化学染色显示,A组肿瘤消融区内的琥珀酸脱氢酶的活性均消失,这说明了癌细胞的灭活;B组肿瘤消融区内上述的酶活性都呈散在阳性,提示部分癌细胞仍存活,A、B两组的肿瘤灭活效果明显不同(P＜0.01).结论 HE染色不能评价微波消融对肝癌的即刻灭活效应,用酶组织化学染色测琥珀酸脱氢酶的活性能判定MA对肝癌的灭活效果.
作者：冯炼强；刘大全；朱兆玲；吕明德；谭进富；王竹；周忠信 刊期： 2006年第06期
目的克隆并分析阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)沉寂信息调节因子Sir2基因,构建原核表达重组载体,表达重组蛋白,并制备抗体进行相关功能的研究.方法从阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离获得阴道毛滴虫Sir2同源基因的cDNA克隆、测序,并采用相关在线程序及软件进行序列分析.将cDNA部分片段亚克隆到原核表达载体pET-41a,转化宿主菌E.coli BL21,IPTG(isopropylthio-β-D-galactoside)诱导表达,亲和层析法纯化表达产物并对表达产物进行SDS-PAGE鉴定之后,用纯化重组蛋白免疫豚鼠获得抗血清,对重组蛋白和滴虫总蛋白进行蛋白质印迹鉴定.结果在阴道毛滴虫cDNA文库中获得一株1 034 bp的cDNA克隆,序列分析表明,该序列开放阅读框有912 bp,推测肽链具有304个氨基酸,等电点(PI)5.5.该肽链与酵母SIR2p蛋白及其同源物一致性高达30%～47%,并具有SIR2p及其同源蛋白的三个高度保守的特征性结构域.进化树结果显示,TvSIR2p接近线虫的SIR2蛋白,与同时克隆到的基因组TvSir2比较序列一致,证明该TvSir2基因组DNA不含内含子.PCR扩增出890bp片段,植入表达载体pET-41a;经酶切鉴定后取阳性克隆用IPTG诱导表达,产生融合蛋白产物经SDS-PAGE鉴定相对分子质量为62 000,与预期分子质量相符.用该融合蛋白免疫豚鼠得到的抗体,经Western blotting检测其与相应融合蛋白发生特异性反应,同时在33 000处也能识别滴虫虫体全蛋白.结论推测该克隆是阴道毛滴虫Sir2的同源基因,该基因没有内含子,它可能参与阴道毛滴虫的组蛋白去乙酰化作用及调节衰老和寿命.阴道毛滴虫Sir2基因可以在大肠杆菌中得到表达,并获得了相应的抗血清,为进一步研究其功能奠定了基础.
作者：史咏梅；傅玉才；徐晓园；许铭炎；刘红 刊期： 2006年第06期
热带医学杂志
主管:广东省科学技术协会
主办：广东省寄生虫学会 中华预防医学会
