高林兵；易晓青
特异性抗体在蛋白质组学研究中是非常重要的,它们在蛋白质组学研究中的作用和地位就如同PCR技术之于基因组学研究.体外筛选方法可以高通量地筛选到特异性强、效价高的目的抗体.目前有几种不同的高通量筛选抗体的方法,如果能够获得足够数量和纯度的目的蛋白,物理筛选方法就比较合适,物理筛选方法目前包括噬菌体展示、酵母展示、核糖体展示和蛋白质微阵列等.如果只得到了基因序列或者是筛选物纯度不够,则可以使用肽段或基因筛选的方法,尽管这两者无论是在技术的成熟度还是操作的简便性方面都远远落后于物理筛选方法,但这种方法仍不失为一种有效的筛选方法.
作者：吴芬芳；李明 刊期： 2006年第07期
目的对深圳龙岗区2001年12月～2002年2月流行性感冒流行病学特征进行调查分析,为本地流感的防治对策提供科学依据.方法采用回顾性调查的方法,抽样分析龙岗各分区不同年龄、职业及区域人群发病率,并作统计学分析.结果龙岗区流感人群总发病率为10.1%,3岁以下婴幼儿组发病率显著高于其他各年龄组(P＜0.05);学生、干部与农民三个职业组人群之间发病率无显著性差异(P＞0.05),而工人的发病率则显著低于上述三组(P＜005).结论各分区流感发病高峰均在12月中旬.12月中旬特别加强疫苗普种,可减少发病几率,为经济有效的主要措施.
作者：刘海文 刊期： 2006年第07期
目的探讨治疗小儿包皮过长、包茎的较理想术式.方法从小儿中随机抽取100例包皮环套术病例作为实验组,取小儿包皮环切术的93例作为对照组进行临床观察、随访、对比.结果环套组与环切组比较,手术时间分别(8±2)min和(30±5)min(P＜0.001),术中出血分别(1±0.5)ml和(8±2.5)ml(P＜0.001),外观差分别1%和8.6%(P＜0.05);术中麻醉要求、术后护理要求和工作量环套组均明显低于环切组.结论小儿包皮环套术麻醉风险低、操作简单、手术时间短、术中无出血、术后痛苦少、术后护理简单方便,是较理想的术式.
作者：曾海锋；陈伯棠；黄擎雄；赖梅；冯平；吴志扬；郑小明 刊期： 2006年第07期
目的克隆人血管紧张素转换酶2基因(ACE2),并构建其真核表达载体.方法用Trizol试剂从人肺组织提取总RNA,然后经逆转录得到人ACE2的cDNA.半巢式PCR方法扩增人ACE2基因后,先进行T-A连接,转化感受态大肠杆菌DH5α,接种含IPTG和x-Gal平板筛选重组子,并进一步亚克隆至真核表达质粒载体pcDNA3.1(+).经PCR扩增、酶切和序列测定方法鉴定重组质粒.结果获得了人ACE2的编码基因,并成功构建了其真核表达载体.结论人血管紧张素转换酶2是SARS冠状病毒的功能受体,与SARS冠状病毒Spike蛋白上的受体结合域相结合,在SARS冠状病毒感染和传播中起重要作用,本工作为研究SARS冠状病毒感染及跨种属传播机制奠定了基础.
作者：肖洪广；高俊；刘利东；林勇平；黄泽红；李宁 刊期： 2006年第07期
目的探讨肝移植术后乙肝复发的预防方法,提高乙肝相关疾病患者肝移植的疗效.方法对120例成人乙肝患者肝移植的临床资料进行回顾性研究,比较小剂量HBIG+Lamivudine与单纯应用Lamivudine预防肝移植术后乙肝复发的区别.结果Lamivudine组75例患者,12例患者发现有肝炎复发,复发率为16.7%(12/75),其中4例检测到YMDD变异株.联合用药组45例患者有3例乙肝复发,复发率为6.7%(3/45),未检测到YMDD变异株.结论小剂量HBIG+Lamivudine比单纯使用Lamivudine能更有效预防肝移植术后乙肝复发,且术后发生YMDD变异的危险性降低.
作者：巫林伟；何晓顺；朱晓峰；马毅；王东平；钱世鹍；鞠卫强；黄洁夫 刊期： 2006年第07期
目的选择一种优质、高效和实用的抗-HIV ELISA血液筛选试剂.方法采用五种不同厂家的抗-HIV ELISA试剂(其中三种国产试剂,两种进口试剂)分别对国家参比品、卫生部质控品和无偿献血者标本进行检测,分析比较五种试剂的符合率、阳性检出率、假阳性率、低检测限、稳定性和前带效应.结果五种试剂盒用于检测抗-HIV国家参比品的总符合率都达到100%;常规标本的阳性检出率均达到100%;21 658份无偿献血标本抗-HIV阳性率为0.01%;进口试剂C假阳性率低于进口试剂D和国产A、B、E试剂(P＜0.05);C试剂的精密度和批间稳定性分别为5.985%和5.93%,明显低于A、B、D、E试剂(P＜0.05);国产试剂A、B、E试剂的低检测限降低至0.125 NCU,但其假阳性率较高;C试剂也不存在前带效应.结论五种试剂的总符合率均达到国家要求,阳性率均为0.01%;国产试剂的假阳性率高于进口试剂,低检测限低于进口试剂;C试剂的稳定性优,也不存在前带效应.选择C试剂进行抗-HIV血液筛选效果佳.
作者：余晋林；罗海玲 刊期： 2006年第07期
目的分析梅州市艾滋病流行和防治现状,探讨对策.方法对1992～2005年梅州市艾滋病监测结果和防治情况进行分析.结果自1992年发现首例HIV感染者,至2005年底累计报告HIV感染者29例,死亡17例.感染者主要以男性(79.31%)、20～49年青壮年(75.86%)为主;以性传播为主,占62.07%;血液传播占13.79%,母婴传播占3.45%.结论梅州市艾滋病预防控制进入关键时期.今后应继续加强艾滋病监测和预防控制网络建设,实施以宣传教育为主的艾滋病综合性预防措施.
作者：林立新；杨翼龙 刊期： 2006年第07期
目的比较非手术治疗乳糜尿的方法.方法随机将115例乳糜尿患者分为红霉素、四环素、泛影葡胺、硝酸银四组,各组患者应用以上四种药物进行肾盂灌注,比较各组患者的乳糜尿消失率,并发症发生情况.结果乳糜尿消失率:红霉素组93.7%,四环素组91.3%,泛影葡胺组64%,硝酸银组88.5%.硝酸银组出现1例休克,1例左肾萎缩,1例左输尿管上段狭窄并发症;泛影葡胺组出现1例过敏性休克;余二组无严重并发症.结论泛影葡胺可出现过敏性休克,疗效较低,红霉素、四环素肾盂灌注治疗乳糜尿简单、安全、有效,并发症少,毒性低,疗效与硝酸银相当,可代替危险性较大的硝酸银灌注法.
作者：章如吉；张永海；徐庆春；李湖；陈复纯 刊期： 2006年第07期
目的分析未经拉米夫定治疗的HBV病毒YMDD变异出现的情况,探讨HBV病毒YMDD变异出现可能的机理,了解以YMDD自然变异的慢性HBV感染患者的肝损害情况.方法对140例HBV DNA阳性,未经拉米夫定治疗的慢性HBV感染者进行YMDD检测,同时检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血清总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)、发病年龄、HBeAg与抗HBe等临床相关指标.结果140例未经拉米夫定治疗的慢性乙肝病毒感染者中20例自然发生YMDD变异,YMDD变异组与未变异组引起的肝损害无显著性差异(P＞0.05).YMDD变异与HBeAg与抗HBe的阳性表达无明显差异(P＞0.05).结论HBV病毒YMDD变异株作为一个准种与野毒株同时存在感染个体,YMDD变异对肝损害严重性无关,YMDD变异与HBeAg阳性率与抗HBe阳性率无明显差异.
作者：区映研；卫建均；曾文铤；朱科伦；马佩球 刊期： 2006年第07期
目的研究肇庆市端州区孕妇TORCH感染与异常妊娠的相关性.方法采用抗体捕获ELISA法对产前检查及近期自然流产诊治的妇女共778例,进行TORCH-IgM抗体检测.结果480例无异常妊娠史者阳性病例54例,IgM总阳性率为11.24%;285例有异常妊娠史者阳性病例126例,IgM总阳性率为44.21%(P＜0.05);13例近期自然流产者阳性病例9例,IgM总阳性率为69.22%(P＜0.05).结论在孕早期自觉进行TORCH感染检测,是做好优生优育工作的首要环节.
作者：陈金强 刊期： 2006年第07期
目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)潜伏和活动性感染状态下病毒基因复制特点.方法选择两种不同滴度HCMV感染传代培养的人胚肺成纤维细胞,建立持续稳定感染和活动感染细胞模型.在感染不同时段,分别采用FQ-PCR和RT-PCR法监测HCMV DNA复制及其主要衣壳蛋白(MCP)mRNA转录情况,光镜观察致细胞病变作用(CPE)、电镜检查细胞超微结构改变.结果两组细胞内均检测到HCMV DNA复制,但活动性感染的B组细胞内HCMV DNA负荷量显著高于A组(P＜0.05),其复制速度也较快,并且检测到了水平逐渐升高的MCP mRNA转录,细胞出现进行性加重的CPE和超微结构改变;而潜伏感染的A组未检到MCP mRNA,亦未发现细胞病变.结论高负荷量HCMV DNA复制和晚期蛋白MCP mRNA转录是HCMV活动性感染的重要特点.
作者：左约维；赵杨；陈敦金；闻良珍 刊期： 2006年第07期
目的比较研究体外分离培养的小鼠骨髓来源的树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BM-DC)和DC2.4中核转录因子RelB基因的表达水平.方法无菌从C57BL/6小鼠股骨和胫骨中取出骨髓细胞,利用rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导体系扩增骨髓前体细胞的方法产生未成熟的BM-DC,未成熟的BM-DC在培养结束前18 h经LPS刺激获得成熟的BM-DC;DC2.4细胞系用含10%胎牛血清的RPMI 1640完全培养液于37℃,5%CO2条件孵箱中培养.用流式细胞术分析它们的表型,用RT-PCR和免疫荧光染色法检测成熟的BM-DC、未成熟的BM-DC和DC2.4,RelB mRNA和其蛋白的表达.结果流式细胞术分析显示MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD40在未成熟的BM-DC和DC2.4中均呈低水平表达,在成熟的BM-DC中则呈高水平表达;共刺激分子CD86在成熟的BM-DC和DC2.4中均呈高水平表达,而在未成熟的BM-DC中呈低水平表达.RT-PCR和免疫荧光染色法检测结果均显示,RelB基因在未成熟的BM-DC和DC2.4中均呈低水平表达;而在成熟的BM-DC中呈高水平表达,成熟的BM-DC与未成熟BM-DC及DC2.4均存在显著差异(P＜0.01).结论RelB基因的表达与小鼠BM-DC的成熟状态密切相关.RelB基因在DC2.4中呈低水平表达,提示DC2.4是一种不成熟的DC细胞系.DC2.4具有的未成熟DC的特点可能与RelB基因的低水平表达有一定关系.抑制骨髓DC中RelB基因的表达,有可能诱导产生具有耐受原性的未成熟的DC.
作者：郑磊；包杰；王前；顾春瑜；裘宇容；李娟 刊期： 2006年第07期
目的以丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)F蛋白作为抗原,检测HCV感染者血清中的相应抗体,观察F抗体在国内HCV感染人群中的阳性率及其与HCV感染的相关性.方法基因工程重组表达的F蛋白经亲和柱纯化后,包被微量滴定板,以EL,ISA法检测35份HCV感染者、8份非HCV感染的肝病患者及10份健康者的血清标本.结合患者疾病资料,统计学分析F抗体与HCV感染的相关性.结果在35份HCV感染者血清标本中,F抗体的阳性率为43%(15/35),对照组(8份非HCV肝病患者及10份健康者)血清中无一例F抗体阳性,两组之间有显著的统计学差异(P＜0.005).但未发现F抗体阳性与患者年龄、性别、病程及血清HCV载量之间的相关性.结论本研究首次报道了F抗体在国内HCV感染人群中的检出情况,将有助于F蛋白的致病性研究,也对探讨F蛋白的功能及进一步将其作为HCV感染检测指标的研究有促进作用.
作者：武文斌；邵圣文；栾洁；刘敏；丁惠；戚中田 刊期： 2006年第07期
目的研究马拉色菌毛囊炎患者皮损区和非皮损区马拉色菌菌种的检出以及菌种的构成.方法采用菜子油培养基,根据菌落形态和生理生化特点进行菌种鉴定.结果从毛囊内共分离出326株马拉色菌,其中球形马拉色菌255株,占78.22%;合轴马拉色菌54株,占16.56%;糠秕马拉色菌17株,占5.22%.从皮损部位疹间皮肤皮屑分离马拉色菌298株,其中合轴马拉色菌221株,占74.16%;糠秕马拉色菌43株,占14.43%;球形马拉色菌30株,占10.07%;钝形马拉色菌4株,占1.34%.菌种检出率和菌种构成差异均有显著性(P＜0.05和P＜0.0001).结论球形马拉色菌是马拉色菌毛囊炎的优势致病菌,正常皮肤则以合轴马拉色菌为主.
作者：刘玉梅；黎小东；邢蕴博；刘金花；龚业清 刊期： 2006年第07期
目的探讨结核性脑膜炎(TBM)与活动性肺结核(PTB)病人T淋巴细胞亚群特点.方法利用流式细胞仪分别测定TBM组(45例)、肺结核(PTB)组(40例)及对照组(40例)人群CD3+、CD4+、CD8+百分比及CD4+/CD8+比值.结果TBM组与PTB组CD3+、CD4+计数百分比均显著低于对照组(P＜0.05).TBM组CD4+计数百分比亦显著低于PTB组(P＜0.05).对于CD8+细胞计数百分比,TBM组与PTB组之间,PTB组与对照组之间均无显著性差异(P＞0.05),而TBM组显著小于对照组(P＜0.05).对于CD4+/CD8+比值,TBM组、PTB组与对照组两两比较均有显著性差异(P值均＜0.05),以TBM组比值小,PTB组次之,对照组大.结论TBM与PTB病人其细胞免疫功能均低于正常人群.TBM比单纯PTB病人细胞免疫功能低下,提示病情严重,预后不良.
作者：陈永浩 刊期： 2006年第07期
目的通过检测不孕症患者宫颈分泌物中沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU)感染情况,探讨不孕与CT、UU感染的关系.方法采用聚合酶链反应(PCR)技术检测50例原发或继发不孕妇女(不孕组)及50例早孕妇女(对照组)宫颈分泌物中CT、UU感染情况.结果不孕组CT、UU感染率分别为28%、42%,显著高于对照组8%、12%(P＜0.05).结论CT、UU感染是导致不孕的重要因素.
作者：何群双；杨云 刊期： 2006年第07期
目的构建含人幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B(Urease B,UreB)编码基因的重组质粒,测定、分析其核苷酸序列,并在E.coli Top10中表达,研究其抗原性.方法应用PCR技术从Hp DNA染色体中扩增UreB编码基因片段,将其T-A克隆和测序,并与GenBank公布的其它Hp菌株基因序列比较,再将目的基因克隆至表达载体pGEX-4T-1中进行表达,用GST亲和层析对其进行纯化,纯化产物用于对29株小鼠抗Hp-全菌单克隆抗体(mAb)的鉴定及与Hp感染患者血清进行Western blot.结果扩增的UreB基因全长1 704 bp,并在GenBank上登录(No.DQ141576),与GenBank公布的其它Hp菌株的核酸同源性为97%～99%,表达的UreB融合蛋白的相对分子量为91 000.29株小鼠抗Hp-全菌mAb中有6株是针对UreB抗原的,纯化产物可被病人血清和抗UreB的鼠单克隆抗体识别.结论重组UreB具有较好的抗原性,为Hp检测诊断和疫苗的研究奠定了基础.
作者：李妍；宁云山；龙敏；董文其；李明 刊期： 2006年第07期
目的应用PCR-SSCP检测常规及BACTEC培养耐INH、RFP、SM的耐多药结核分枝杆菌临床分离株KatG、rpoB、rpsL基因突变,分析其敏感性和特异性,评价其在检测结核分枝杆菌耐药性方面的价值和临床实用性.方法22株常规培养和8株BACTEC培养检出的高浓度及低浓度耐INH、RFP、SM耐多药结核分枝杆菌分离株,分别用PCR-SSCP检测KatG、rpoB、rpsL基因,观察其电泳条带,并与结核菌标准株H37Rv对比.结果22株常规培养耐INH、RFP、SM的耐多药结核分枝杆菌分离株中,KatG、rpoB、rpsLPCR扩增产物,用SSCP分别检出KatG基因16株(72.7%)、rpoB基因19株(86.4%)和rpsL基因14株(63.6%).8株BACTEC培养耐INH、RFP、SM的耐多药结核分枝杆菌分离株中分别检出KatG基因5株(62.5%),rpoB基因6株(75%)、rpsL基因5株(62.5%).综合两者KatG、rpoB和rpsL基因检出率分别为70.0%(21/30)、83.3%(25/30)和63.3%(19/30).高浓度耐药与低浓度耐药分离株中的检出率有显著差异(P＜0.05),常规培养与BACTEC培养分离株中的检出率无显著差异(P＞0.05),与结核菌标准株H37Rv电泳条带对比,特异性为100%,敏感性97%.结论PCR-SSCP敏感、特异,可快速检测结核分枝杆菌的KatG、rpoB和rpsL基因,可用于耐多药结核分枝杆菌的临床检测.
作者：刘良安；李秋梅；张志军 刊期： 2006年第07期
目的探讨云浮市流感的流行特征及掌握病毒毒株变异情况,为制定流感防控策略提供有力的科学依据.方法通过云浮市流感监测网络系统,对流感作流行病学、病原学监测,并严密监控云浮市各地流感暴发情况.结果2004～2005年监测医院上报流感样病例14 655例,占监测医院内科门诊(或儿科门诊、发热门诊)病例的3.60%,病例以少年儿童为主,占86.48%,全年均有病例发生,冬春季病例较多;两年共分离到106株流感病毒毒株,有甲3(H3N2)、甲1(H1N1)亚型和B型,病毒毒株以甲3(H3N2)为优势株;暴发疫情五起,均发生在中、小学校,四起由甲3(H3N2)亚型病毒毒株引起,一起由B型毒株引起.结论云浮市2004年和2005年的流感发病相对平静,未发生较大规模的暴发流行,病毒毒株未发现有明显的变异,建议继续加强流感监测网络建设,建立流感早期预警系统.
作者：陈伟文；岑玫喜 刊期： 2006年第07期
目的研究微囊藻毒素(microcystin,MC)损伤肝细胞的毒性机制.方法以不同浓度的微囊藻毒素LR(MCLR)处理L-02肝细胞,通过光镜和电镜下的形态观察、DNA片断化分析、线粒体膜电位变化等了解MCLR对肝细胞的毒性效应.结果光镜下观察表明,50μg/ml MCLR处理可使细胞变圆、萎缩、不贴壁生长,电镜下L-02细胞呈现皱缩、膜发泡及染色质凝聚并边缘化等变化,这是典型的细胞凋亡形态特征,但电镜下没有观察到凋亡小体的形成;DNA电泳表明凋亡细胞没有出现明显的DNA ladder,与电镜观察的结果一致.流式细胞仪检测发现以50μg/ml MCLR处理60h后,细胞的线粒体膜电位显著下降.结论微囊藻毒素损伤线粒体可能是其损伤细胞的途径之一,这种微囊藻毒素诱导的无DNA片段断裂的凋亡现象属首次报道,具体机制有待进一步阐明.
作者：雷腊梅；宋立荣；韩博平 刊期： 2006年第07期
热带医学杂志
主管:广东省科学技术协会
主办：广东省寄生虫学会 中华预防医学会
