学术投稿

淋球菌孔蛋白PIB和PIA融合蛋白真核表达载体构建及体内表达

廖芳;贺超;戴翔;宋启发;熊萍

关键词:淋球菌, 孔蛋白, PIB-PIA, 真核表达载体, 融合蛋白
摘要:目的 克隆淋球菌孔蛋白PIB和PIA基因并构建融合蛋白真核表达质粒pCI-PIB-PIA,了解pCI-PIB-PIA能否被小鼠骨骼肌细胞摄取并表达.方法 采用PCR方法从质粒pET-PIB和pET-PIA中获得孔蛋白PIB和PIA全长DNA片段,构建表达融合蛋白PIB和PIA的真核表达载体pCI-PIB-PIA.pCI-PIB-PIA肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ABC法检测pCI-PIB-PIA免疫小鼠肌细胞中PIB-PIA融合蛋白的表达.结果 PCR可扩增出预期大小的全长PIB和PIA基因片段.与GenBank报道的PIB和PIA序列比较,重组质粒pCI-PIB-PIA中目的插入片段的核苷酸序列同源性达到99%以上.免疫小鼠的肌细胞能摄取pCI-PIB-PIA并表达PIB-PIA融合蛋白.结论 本研究成功地构建了淋球菌孔蛋白PIB和PIA基因重组真核表达载体pCI-PIB-PIA;pCI-PIB-PIA接种小鼠后可见免疫小鼠肌细胞中PIB-PIA融合蛋白的表达,该结果可作为淋球菌多价DNA疫苗的研究基础.
热带医学杂志相关文献
  • 一种新的乙型肝炎病毒全基因组克隆技术的建立

    目的 建立一种乙型肝炎病毒(HBV)全基因组扩增及克隆的新方法.方法 设计含Sal Ⅰ、Not Ⅰ酶切位点的引物,用一片段PCR法扩增HBV全基因组,经双酶切后将PCR产物克隆入pBlue Script-(SK-)载体,进行HBV全基因组序列测定.结果 用此方法成功获得35例HBV全基因组DNA序列.同时以重组质粒为模板进行敏感性和保真性测定,其敏感性为102个初始模板,核苷酸的人为突变率为1.6 bp/kb.结论 此方法可用于大规模HBV全基因组扩增和序列分析,为HBV的基础和临床研究提供了一种新方法.

    作者:李莉;卢建溪;谢冬英;徐启桓;朱明芬;陈伟;李刚 刊期: 2006年第08期

  • 髓鞘碱性蛋白和白细胞介素16在多发性硬化发病机制和临床中的探讨

    目的 探讨髓鞘碱性蛋白(MBP)和白细胞介素16(IL-16)在多发性硬化(MS)发病过程中的水平变化和临床意义.方法 用ELISA法检测MS组(CSF31例、Serum 32例)、Guillain-Barre综合征(GBS)组(CSF和Serum均为24例)和对照组(CSF24例、Serum 28例)中MBP和IL-16的水平.结果 MS组中CSF和Serum中MBP水平均显著高于GBS及对照组(P<0.01),CSF IL-16的水平显著高于对照组(P<0.01),但Serum IL-16水平和对照组相比无明显差异性.MS组CSF中MBP的水平和IL-16的水平显著相关(r=0.463,P<0.05),但Serum中两者间无相关性.结论 MBP对MS的发病有很高的敏感性,IL-16主要在中枢神经系统局部产生并参与MS的炎症过程.

    作者:田作军;赵薛旭;李作汉;张帆;曹福田;李少明;邵明 刊期: 2006年第08期

  • 广东疟疾联防区2005年监测情况分析

    目的 探讨疟疾防治中联合管理的作用.方法 采用主动侦查与被动侦查相结合的方式,对临床诊断和实验室诊断病例进行个案调查.结果 参与疟疾联防的五个地级市2005年共发现疟疾病例119例(占全省病例的63.30%),年发病率0.03/万.五市当地居民血检阳性率为0.05%,流动人口血检阳性率为0.14%,两者血检阳性率有显著性差异(χ2=20.848,P<0.05);流动人口中的返乡人员血检阳性率为0.20%,外来人员血检阳性率为0.15%,经统计学检验,两者血检阳性率无显著性差异(χ2=0.899,P>0.05).在返乡人员中,从国外返乡的人员血检阳性率高,与从其它省返乡的人员血检阳性率比较有显著性差异;参与疟疾联防的五个地级市全年各月都有疟疾病例发生,其中6、7月达到高峰,病例的季节分布与我省传疟媒介的季节消长相吻合.结论 通过联防,2005年我省联防区内疟疾发病率继续维持在低水平,输入病例和输入继发病例减少,流动人口疟疾发病得到了有效控制.

    作者:张贤昌;林荣幸;张启明;阮彩文 刊期: 2006年第08期

  • 合成环肽抑制HIV-1病毒介导的细胞融合的初步研究

    目的 鉴定合成环肽FJ-08是否抑制HIV-1病毒介导的细胞融合.方法 固相合成环肽FJ-08(SACYWWHRLHCGGGS),将合成肽与BSA载体交联,ELISA检测交联物与源于HIV-1 gp41 N螺旋的合成肽N36结合,细胞融合抑制实验检测FJ-08抑制H9/HIV ⅢB细胞与MT-2细胞的融合.结果 ELISA鉴定表明FJ-08-BSA与N36肽结合.与无关肽比较,细胞融合抑制实验显示在2 h内,80 μg/ml的FJ-08肽具有抑制融合作用,呈现浓度依赖效应.结论 FJ-08合成肽可抑制HIV-1介导的细胞融合.

    作者:刘北一;朱平;姜世勃;富宁 刊期: 2006年第08期

  • 间日疟原虫部分乳酸脱氢酶基因的克隆及序列分析

    目的 克隆并测定我国间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)的部分基因序列并进行生物信息学分析.方法 根据PvLDH基因已知序列设计合成一对引物,应用PCR技术从间日疟原虫基因组DNA中扩增LDH基因,定向克隆入pMDl8质粒.阳性质粒经酶切及PCR鉴定后,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定.应用生物信息学网站www.ncbi.nlm.nih.gov、www.expasy.ch对获得的基因及其推导的氨基酸序列进行生物信息学分析.结果 PCR扩增得到特异的间日疟原虫LDH基因序列.酶切及PCR鉴定获得了正确的重组质粒.测序结果表明,获得的间日疟原虫LDH基因全长897 bp,编码299个氨基酸.DNAMAN预测PvLDH存在10个潜在抗原表位,均与PfLDH的相应预测表位间有同源序列.同源性分析显示,我国间日疟原虫与Salvador Ⅰ株和Belem株间日疟原虫的氨基酸序列同源性为99%,与其它疟原虫LDH的同源性为88%~90%.结论 成功克隆了我国间日疟原虫LDH基因,其基因序列与其它疟原虫LDH基因序列有高度同源性.

    作者:郝文波;王萍;陈白虹;高洋;李明 刊期: 2006年第08期

  • 社区儿童哮喘发病相关因素调查及综合干预评价

    目的 探讨社区儿童哮喘发病的相关因素,评价社区综合干预在儿童哮喘防治中的作用.方法 对社区中2 837名0~14岁儿童进行哮喘筛查,共筛查出65例哮喘患儿,采用自编问卷调查表进行回顾性调查,并将65例哮喘儿童随机分为干预组35例,对照组30例,对照组给予常规治疗,干预组在常规治疗的基础上给予社区综合干预措施,即健康教育、规范化管理及跟踪随访,随访期限为1年,比较两组哮喘发作频率及程度.结果 该社区中儿童哮喘的发病率为2.3%,以春季多见,占47.7%(31例);哮喘患儿首次出现喘息的年龄<3岁者占72.3%(47例);诱发因素以呼吸道感染多见,占65.2%(38例);家族中有哮喘及其他过敏史者分别为23.0%(15例)和16.9%(11例),患儿有湿疹和/或过敏性鼻炎等过敏史者占29.2%(19例).经社区综合干预后,哮喘的发作次数、发作程度均明显改善.结论 哮喘发病与发病年龄、季节、家族史及个人过敏史等多种因素密切相关;应改善儿童的居住环境,积极防治儿童早期呼吸道感染,早期诊断和社区综合干预是儿童哮喘防治的有效措施.

    作者:彭淑梅;曾静;邓雪梅 刊期: 2006年第08期

  • 三分群血细胞分析仪显微镜复检标准探讨

    目的 比较三分群血细胞分析仪和显微镜下白细胞分类结果,探讨三分群血细胞分析仪中间细胞群(mononnuclear,Mo)的显微镜复检标准,以保证血液常规的检验质量.方法 应用KX-21三分群血细胞分析仪和普通光学显微镜分别对302例临床血液常规标本进行白细胞分类,并进行对比分析.结果 Mo<8%时,仪器分类结果与显微镜分类结果无显著性差异,且有良好的相关性.Mo>8%时,仪器分类结果与显微镜分类结果有显著性差异,其中有8.6%的标本显微镜分类出现异常情况.结论 三分群血细胞分析仪仅作为白细胞分类的初筛,尚不能完全替代人工显微镜分类方法.临床应用中引入显微镜复检标准,可为临床提供有价值的诊断信息.

    作者:龙欢喜;魏小平 刊期: 2006年第08期

  • 肝硬化患者断流术后血压与生存关系的探讨

    目的 探讨肝硬化患者断流术后外周血压变化情况及其与预后的关系.方法 按照Child-Pugh分级,将168例肝硬化患者分成Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组,其中A级(Ⅰ组)55例、B级(Ⅱ组)49例、C级(Ⅲ组)64例.比较各组的血压差异,并进行随访.结果 Ⅰ组平均血压为(129.2±8.6)/(76.3±6.6)mmHg;Ⅱ组为(118.1±8.6)/(71.8±5.3)mmHg;Ⅲ组为(101.3±9.1)/(64.2±5.5)mmHg.提示患者血压随Child-Pugh分级增加而下降(P<O.05).随访发现,外周血压低的患者生存时间更短.结论 患者的外周血压直接与肝功能有关,外周血压降低提示患者的预后不佳.

    作者:张卓军;吴雄辉;谢鸿桥 刊期: 2006年第08期

  • 血浆D-二聚体和纤维蛋白原水平检测在急性冠脉综合征诊断与预后中的作用

    目的 探讨血浆D-二聚体(D-Dimer)和纤维蛋白原水平(Fg)测定与急性冠脉综合征(ACS)间的关系.方法 用全自动血凝分析仪检测36例急性心肌梗死(AMI),30例不稳定性心绞痛(UAP),25例稳定型心绞痛(SAP)患者及60例健康对照者血浆D-Dimer和Fg水平.结果 ACS患者血浆D-Dimer、Fg水平明显高于对照组(P<0.01),AMI组和UAP组患者的D-Dimer、Fg均明显高于SAP组患者(P<O.01).结论 ACS患者血浆D-Dimer和Fg水平明显升高,反映患者体内存在高凝状态,有血栓的形成,D-Dimer和Fg的检测对ACS病情及预后判断有重要意义.

    作者:刘荣静;习浩 刊期: 2006年第08期

  • 广州市企事业单位成人脂肪肝患病率及其危险因素的探讨

    目的 探讨广州市企事业单位成人脂肪肝患病率及其危险因素及预防发病的干预措施.方法 采用随机分层抽样的方法对6 272例2005年6~12月在我院健康体检的广州市企事业单位成人体检资料进行统计分析,内容包括体格检查、空腹血糖测定及肝胆B超.结果 6 272名成人研究对象中,男性3 662名,女性2 610人,平均年龄(46.43±13.7)岁.B超共检出脂肪肝1 369人,患病率为21.83%,男性为24.47%,女性为18.12%.男性患病率显著高于女性(χ2=-35.96,P<0.01).男女脂肪肝患病率均随年龄增长而增加,58岁前男性患病率显著高于女性(x2=18.7,P<0.01),58~70岁之间男女性患病率无显著性差异(x2=0.67,P=0.43),70岁后女性脂肪肝患病率显著高于男性(x2=5.3,P<0.05).脂肪肝组肥胖、血脂异常、空腹血糖增高和胆石症均显著高于非脂肪肝组.结论 广州市企事业单位成人脂肪肝患病率高,肥胖、血脂异常、空腹血糖增高和胆石症可能是其危险因素.

    作者:葛辉;梁银杏;曾亚辉;汤洁如 刊期: 2006年第08期

  • 共刺激分子-B7家族及其在胞内寄生虫感染中的作用

    近年来,共刺激信号B7家族成员在调节T细胞活化及细胞因子分泌方面的研究取得了重大进展.B7分子与受体结合后,在免疫应答不同阶段发挥重要调节作用,涉及细胞免疫、体液免疫调节诸多方面,也与寄生虫感染诱导的免疫反应密切相关.本文以B7家族成员在宿主感染胞内寄生原虫后,诱导产生免疫反应以及相互关系的研究作一综述.

    作者:宋蓓;吕杨;张锡林 刊期: 2006年第08期

  • 2005年东莞地区细菌耐药性资料分析

    目的 了解2005年东莞地区部分医院临床分离菌株对各种抗菌药物的耐药性.方法 采用琼脂扩散法对2 072株(革兰阳性球菌占37.3%,革兰阴性杆菌占62.7%)临床分离菌株进行药敏试验,以NCCLS2004年版标准判读结果.结果 在两类葡萄球菌株中,MRSA和MRCNS株检出率分别为73.7%(214/290)和75.8%(235/310),未发现耐万古霉素葡萄球菌.革兰阴性杆菌中,ESBLs检出率:大肠埃希菌为50.9%(135/265),肺炎克雷伯菌为42.8%(125/292).绿脓假单胞菌、嗜麦芽寡养单胞菌和鲍曼不动杆菌的耐药率均在5O%以上,但亚胺培南对革兰阴性杆菌有较强的抗菌活性.结论 MRSA、MRCNS,以及大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的产ESBLa检出率较高,耐药严重.加强细菌耐药监测非常重要,对指导临床正确使用抗生素有参考价值.

    作者:郭志勤;梁沛杨;高文静 刊期: 2006年第08期

  • 慢性心力衰竭患者甲状腺激素水平变化的临床观察

    目的 探讨慢性充血性心力衰竭患者(CHF)甲状腺激素水平的变化及临床意义.方法 采用放射免疫法测定30例体检正常者和50例慢性心力衰竭患者心衰治疗前后的血浆三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)及促甲状腺素(TSH)水平.比较两组间的差异,并对CHF患者进行亚组分析.结果 CHF组T3、FT3较对照组下降,且慢性心衰组随着心力衰竭的加重,T3、FT3水平逐渐减低;T4、FT4、TSH两组间比较无显著差异,抗心衰治疗后T3、FT3水平明显上升(P<0.05).慢性心衰组患者血清中T3、Fr3的水平与心衰程度呈负相关关系.结论 CHF患者甲状腺激素水平的变化,对判断其心功能损害程度和预后具有一定的临床意义.

    作者:张卫;丁彩屏;文薇;徐丽梅 刊期: 2006年第08期

  • 间日疟原虫多表位疫苗基因的设计、合成与酵母表达

    目的 针对疟原虫生活史复杂,蛋白种类多且具有期特异性,逃避宿主免疫机制健全,流行广泛等特点,构建间日疟多期多阶段多表位疫苗候选株.方法 根据文献报道筛选间日疟有效保护性抗原表位,利用计算机模建技术进行组合、排列,演绎多表位肽基因,人工合成基因,构建酵母表达系统,甲醇诱导表达多表位肽.结果 以间日疟原虫3个PvCSP T表位、1个PvCSP B细胞表位、2个PvMSP-19 B细胞表位、2个PvDBPⅡ保守序列、1个PvAMA B细胞表位和1个PvAMA T细胞表位,加入白喉毒素T细胞表位和Pan-DR Th细胞表位肽,设计合成了一条由786 bp组成的间日疟原虫多表位肽疫苗基因(PvDBW);利用G418压力筛选得到多个高拷贝pPIC9K/PvDBW/P.pastoris菌株;用甲醇诱导后表位肽呈分泌性表达,表达量为80 mg/L.结论 成功地构建了间日疟原虫多期多阶段多表位疫苗pPIC9K/PvDBW/P.pastoris菌株,得到了分泌性表达的多表位肽,为探索间日疟原虫多期、多表位疫苗的可行性奠定了物质基础.

    作者:王萍;吴娴波;董文其;李明 刊期: 2006年第08期

  • 梅县学校食堂厨工诺瓦克病毒感染情况调查

    目的 了解梅县学校食堂厨工诺瓦克病毒感染情况,为诺瓦克病毒胃肠炎预防控制工作提供科学依据.方法 应用酶联免疫法(ELISA)进行诺瓦克病毒抗原检测.结果 234份粪便标本中检出诺瓦克病毒阳性8份,阳性率为3.42%.结论 梅县学校食堂厨工存在诺瓦克病毒健康携带者,学校有爆发诺瓦克病毒胃肠炎的潜在危险.

    作者:黄念先;陈复才;熊杏茹;周志汀;陈志青;李信泰 刊期: 2006年第08期

  • 日本血吸虫性别特异性基因的研究进展

    血吸虫病是一种重要的人畜共患病,在世界范围内广泛分布,严重危害人体健康.本文以近年来国外在血吸虫基因的性别特异性方面的研究为依据,对血吸虫性别特异性基因的调控及克隆进行了综述.

    作者:王衍海;彭鸿娟 刊期: 2006年第08期

  • 口腔正畸治疗医院感染因素分析

    目的 调查口腔正畸科存在的医院感染危险因素,以采取有效措施控制感染.方法 对口腔正畸科的各种器械、物体表面、医务人员的手和口包进行目标监测.结果 正畸材料、医务人员的手和口包细菌污染情况严重,严格执行消毒隔离制度能有效控制口腔正畸科医院感染的发生.结论 口腔正畸器、材料、医务人员手等易受污染引起医院感染,严格制定和落实消毒隔离及防护措施对预防口腔正畸治疗的医院感染非常必要.

    作者:黄妙琼;罗真珍;冯航 刊期: 2006年第08期

  • 医院感染病例及耐药情况的流行病学分析

    目的 了解医院感染病例病原菌耐药性流行特征和抗生素使用情况,为医院感染控制提供参考.方法 对自2004年1~10月间某院154例医院感染患者送检标本所分离培养的154株病原菌进行分析.结果 在154株菌株中,未发现对万古霉素耐药,但对其敏感的菌株只有9.1%,而对亚胺硫霉素敏感的菌株有27株(17.5%).感染病例中,男性占68.2%;0~,25~这两个年龄组为主,共计占72.7%.感染部位的分布:男性以切口感染为主,女性则以上呼吸道感染为主.结论 感染控制应有所侧重,要针对不同人群、病种有重点的开展防控工作.

    作者:郑少敏;任婕;张春环;彭兰芬 刊期: 2006年第08期

  • 蛋白芯片法诊断结核病的临床应用评价

    目的 评价结核分枝杆菌蛋白芯片诊断结核病的临床应用价值.方法 应用结核分枝杆菌蛋白芯片检测63例结核病患者的血清标本,25份肺部其它疾病患者和健康体检者的血清标本,并与抗酸菌涂片镜检法相比较.结果 结核分枝杆菌蛋白芯片诊断肺结核的敏感性和特异性分别为68.25%(43/63)和88%(22/25),阳性预测值为93.48%(43/46),阴性预测值为52.38%(22/42),阳性检出率为52.27%(46/88),显著高于抗酸菌涂片镜检法阳性率(23.86%,21/88).结论 结核分枝杆菌蛋白芯片诊断结核病,具有简便、快速,敏感性较高和特异性强等优点,是临床辅助诊断结核病的有效方法.

    作者:罗招凡;丁鹤林;刘香梅;林向华 刊期: 2006年第08期

  • 鼠伯氏疟原虫CSP基因真核表达载体的构建及在Hela细胞中的表达

    目的 分别构建携带绿色荧光蛋白报告基因的伯氏疟原虫(Plasmodium berghei)环子孢子(CSP)全长基因和去除中央重复序列的CSP的融合蛋白真核表达质粒,并检测其在Hela细胞中的表达.方法 采用PCR技术,从伯氏疟原虫基因组中扩增全长CSP基因,将其定向克隆人Pegfp-N1,构建Pegfp/PbCSP全长基因重组质粒,酶切、PCR及序列分析鉴定;同样,采用PCR技术扩增PbCSP的N端和C端两个片段,先将C端片段定向克隆人Pegfp-N1,构建Pegfp/PbCSP-C重组质粒,再将PbCSP N端片段定向克隆入Pegfp/PbCSP-C,构建Pegfp/PbCSP重组质粒,酶切、PCR及序列分析鉴定.将Pegfp/PbCSP和Pegfp/PbCSP'分别用脂质体介导转染体外培养的Hela细胞,荧光显微镜及RT-PCR检测融合蛋白的表达.结果 PCR、酶切及测序证实目的基因PbCSP全长和片段分别正确连接至Pegfp-N1的多克隆位点,两种重组质粒转染Hela后,荧光显微镜及RT-PCR均检测到目的蛋白在Hela中表达.结论 成功构建了携带绿色荧光蛋白报告基因的伯氏疟原虫CSP全长基因和该基因片段的融合蛋白真核表达质粒,并在Hela细胞中获得表达.

    作者:马长玲;胡旭初;赵玉利;李艳文;胡凤玉;陈晓湘;周珍文;张咏莉;余新炳 刊期: 2006年第08期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会