学术投稿

AFLP技术及其在寄生虫学上的应用

魏冬霞;邓艳;马妮妮;朱兴全

关键词:AFLP技术, 寄生虫学, 应用
摘要:扩增片断长度多态性 (amplified fragment length polymorphism, AFLP)是 1993年由 Zabeau和 Vos[1]发明并发展起来的一种检测 DNA多态性的新方法.它克服了限制性片段长度多态性 (RFLP)和 PCR的缺点,结合了 RFLP技术的可靠性和 PCR技术的高效性.该方法问世后很快应用于动物 [2~ 10]、植物 [11~ 14]、微生物 [15~ 19]、寄生虫 [5,16, 18, 20]等生物的遗传育种、构建遗传图谱、遗传多样性分析、基因定位、分类等方面的研究.本文简要介绍了这种技术的原理、特点及在寄生虫学上的应用.
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    目的比较寄生于黄牛和水牛的枯氏肉孢子虫 (Sarcocystis cruzi)乳酸脱氢酶、磷酸葡萄糖变位酶、 6-磷酸葡萄糖脱氢酶、苹果酸酶四种同工酶的酶谱. 方法进行聚丙烯酰胺垂直平板梯度凝胶电泳的方法. 结果黄牛与水牛的枯氏肉孢子虫两种酶酶带相似,只在活性上略有差异. 结论同工酶谱分析证明黄牛和水牛都是枯氏肉孢子虫的自然中间宿主.

    作者:梁亦龙;左仰贤;谭德勇;陈新文 刊期: 2005年第02期

  • 血清CEA检测在结直肠癌患者中的临床意义

    目的探讨血清 CEA的检测对大肠癌诊断的临床应用价值. 方法对 88例大肠癌患者、 40例结直肠良性疾病患者、 30例健康成人的 CEA检测水平进行分析.结果恶性肿瘤血清 CEA检出率与健康组、良性疾病组相比有显著差异 (P< 0.01); CEA在结肠癌和直肠癌中检出率无显著性差异 (P >0.90);血清 CEA水平与病理分期 (Dukes 分期 )、淋巴结转移、远处转移呈正相关 ,均有密切关系 (P< 0.005);与年龄、性别、肿瘤大小、组织学分型、分化程度均无显著相关性( P均 >0.1),术前 CEA水平与术后比较 ,两者有显著性差异( P< 0.01).结论 CEA是结直肠癌的一个重要的诊断指标,同时有利于判断病情发展和肿瘤侵润程度.

    作者:李旺林;曹杰;唐伟镖 刊期: 2005年第02期

  • 低蛋白血症对药物性肝功能损害的影响

    目的探讨低蛋白血症对药物性肝功能损害的影响.方法对 2001年 9月至 2003年 5月在本院住院治疗的初治肺结核患者 258例.根据其年龄、性别和乙肝两对半情况,进行 1∶ 1配对的病例-对照研究.结果 258例肺结核患者中出现肝功能损害 54例( 20 9%),病例组出现药物性肝功能损害 34例( 26 4%),对照组 20例( 15 5%, P=0 032).低蛋白血症与抗结核治疗中出现肝功能损害有关联,其优势比( OR)为 2 0,但是在药物性肝功能损害的发生时间和损害程度上均无明显差异.结论在临床上,对合并低蛋白血症结核病患者治疗时,应注意监测其肝功能变化以及注意改善其低蛋白血症的状态,减少药物性肝功能损害的发生.

    作者:谭守勇;林兆原;关玉华;李嫣红;潘爱华;黎燕琼;粱敏青 刊期: 2005年第02期

  • 重组SARS冠状病毒N蛋白纯化与鉴定

    目的分析重组 SARS- CoV N蛋白的表达,并予以纯化.方法 SDS- PAGE分析 N蛋白的表达,于自动蛋白层析系统上,用 His· BindTM柱亲和层析纯化.结果重组表达的 N蛋白存在于裂解细菌上清中,分子量大小约 49 000 u, N蛋白经亲和层析获得纯化,纯化蛋白能与病人血清反应.结论表明自动层析获得了纯化良好抗原性的 N蛋白.

    作者:陈泽辉;吴少庭;秦莉;袁仕善;张仁利;高世同;黄达娜 刊期: 2005年第02期

  • 62例慢性HBV携带者肝脏组织学改变与临床的关系

    目的探讨慢性 HBV携带者的临床转归.方法对 62例慢性 HBV携带者进行单人操作肝活检,了解肝脏组织学改变,同时分析临床资料.结果 62例慢性 HBV携带者中肝组织学有明显病理改变者占 91.94% (57/62),其中 G1占 77.42% (42/62), G2占 14.52% (9/62), S0占 19.35% (12/62), S1占 51.61% (32/62), S2占 20.97% (13/62).肝组织炎症程度的高低与大、小三阳及 HBVDNA定量水平无关( P >0.05);肝组织纤维化进展程度与 HBVDNA定量水平无关( P >0.05);进展到 S2期中以小三阳患者所占比例为多( P< 0.01),且外周血肝纤维指标中 HA、 PⅢ有明显升高( P< 0.05);随着纤维化程度的进展, B超脾厚径亦有增大趋势, S2期 >S1期 >S0期( P >0.05, P< 0.01). 结论慢性 HBV携带者绝大部分有一定的肝组织学改变,应引起足够重视;肝组织学炎症、纤维化程度改变与乙肝病毒复制水平无关;纤维化程度高者( S2)以小三阳为多,似与病程长短有关; B超脾厚径的检测可早期发现纤维化的存在;定期监测血清 HA、 PⅢ水平可预测肝组织纤维化的程度.

    作者:张春兰;杨湛;范慧敏;李文莉;张健珍;易俊卿 刊期: 2005年第02期

  • 云南省曼氏裂头蚴病流行概况

    目的了解曼氏裂头蚴病在云南省的流行情况.方法通过现有病例与过去文献报告的病例进行归纳. 结果至今云南已报告的裂头蚴病共 10例,其中皮下裂头蚴病 5例,眼裂头蚴病 2例,内脏裂头蚴病 3例.其中 2例为男性,其余 8例均为女性;年龄小的 4岁,大的 46岁;地区分布在昆明、玉溪、曲靖、昭通、思茅及西双版纳等 6个地州市;感染的方式和途径可能是误食受感染的剑水蚤,或者是原尾蚴直接经皮肤和粘膜侵入.结论云南省局部地区有曼氏裂头蚴病的流行.

    作者:周本江;王文林;雷霖 刊期: 2005年第02期

  • 低温对家蝇室内种群不同日龄蛹羽化率的影响

    目的探讨低温对家蝇蛹羽化率的影响.方法室内连续饲养的家蝇第 4代 1日龄蛹和 3日龄蛹,分别置于 2℃和 6℃处理 1、 2、 3、 4、 5 d后,取出置于室内羽化,记录不同日龄以及不同时间的低温处理后的羽化率.结果家蝇 1日龄蛹经不同时间 2℃低温处理后的羽化率 (% )依次为: 75.0± 13.54、 51.25± 13.15、 30.0± 15.81、 6.25± 6.29、 6.25± 4.79; 1日龄蛹经不同时间 6℃低温处理后的羽化率依次为: 88.75± 4.79、 66.25± 10.31、 40.0± 12.91、 37.50± 18.48、 12.50± 6.45. 3日龄蛹经不同时间 2℃低温处理后的羽化率依次为: 90.0± 7.07、 78.75± 11.09、 57.50± 9.57、 61.25± 11.09、 32.50± 22.55; 3日龄蛹经不同时间 6℃低温处理后的羽化率依次为: 92.50± 5.0、 90.0± 10.80、 88.75± 2.50、 90.0± 5.77、 66.25± 10.31.结论温度越低,蛹羽化率越低,低温处理时间越长,蛹羽化率越低; 蛹日龄越大,耐受低温能力越强.

    作者:许兵红;董卫华 刊期: 2005年第02期

  • 拉萨市蔡公堂乡牛带绦虫病的流行病学调查

    目的了解西藏自治区拉萨市蔡公堂乡藏民中牛带绦虫病的流行概况.方法采用现场询问排节片史方法进行调查.对有病史者用槟榔-南瓜子法驱虫,测量虫体长度,观察头节和孕节. 结果当地人群排节片率为 34.4%( 32/93),牛囊尾蚴感染率为 33.3%( 1/3).对有排节片史的 32人进行驱虫,有 12人共驱出 18条虫体,驱虫率为 37.5% (12/32),虫体长度为 2.06~ 5.38 m,平均 3.72 m.虫体头节上无顶突和小钩,有四个吸盘,子宫分支为 16~ 28支,排列整齐,鉴定为牛带绦虫.男性驱虫率为 52.6% (10/19),女性驱虫率为 23.1% (3/13),在驱出虫体的 12人中,其临床表现为排节片史 100% (12/12),肛门瘙痒 75% (9/12),消化道症状 (腹痛、腹泻、便秘和腹部不适 )59.3% (7/12), 患者未发现有囊尾蚴寄生的情况.结论拉萨市蔡公堂乡存在牛带绦虫病的流行.

    作者:朱武军;郎书源;温二生;包怀恩;李建华 刊期: 2005年第02期

  • 汉坦病毒H8205株IL-2/G1融合基因在Vero细胞中的稳定表达

    目的探讨外源性 IL- 2/G1融合基因在非洲绿猴肾细胞( Vero)获得稳定表达的可行性,为汉坦病毒基因工程疫苗的研制提供一定的实验基础.方法将汉坦病毒 H8205株 G1的 cDNA重组人源 IL- 2基因后克隆到真核表达载体 pcDNA3.1/His,形成重组真核表达质粒 pcDNA3.1/His- IL- 2- G1,在脂质体介导下,将其导入 Vero细胞,通过 G418筛选获得阳性克隆,并继续培养 6周,然后通过间接免疫荧光、 ELSIA、 SDS- PAGE电泳等方法检测 IL- 2- G1基因在 Vero细胞中的稳定表达情况.结果成功构建重组质粒 pcDNA3.1/His - IL- 2- G1,其片段插入方向正确.经间接免疫荧光和 SDS- PAGE电泳证实,转染了真核表达质粒 pcDNA3.1/His- IL- 2- G1后在 Vero细胞培养上清和胞浆中有融合蛋白的表达,其相对分子量为 78 000 u,与预期的相符合.经人 IL- 2 ELISA检测试剂盒检测证实在培养上清和细胞裂解物所表达的融合蛋白有 IL- 2特性. 结论在脂质体介导下,外源性 IL- 2/G1融合基因能够成功导入 Vero细胞并获得稳定表达.

    作者:胡洪波;张泽华;黄汉菊;贾珉;刘广 刊期: 2005年第02期

  • 直肠癌根治术后局部复发37例临床分析

    目的探讨直肠癌根治术后局部复发原因及防治. 方法回顾性分析 1998年 6月~ 2004年 7月我院收治 37例直肠癌术后局部复发病例资料. 结果 37例中,会阴部复发 8例,吻合口处复发 12例,盆腔、腹腔种植复发 17例.本组病例均再次行手术治疗,其中根治性切除率 54%( 20/37),姑息性切除率 46%( 17/37).结论早期诊断、合理治疗 ,切除足够肠管,彻底清除淋巴结及所在的肠系膜,术中无瘤操作是减少直肠癌根治术后复发的主要措施.对复发病例应根据复发部位、病期早晚采取以手术为主的综合治疗方案.

    作者:唐志良;冯平;郑小明 刊期: 2005年第02期

  • 胆道扩张和液电碎石在复杂性肝内胆管结石治疗中的应用

    目的总结胆道镜胆道扩张技术和液电碎石对合并有肝内胆管狭窄、胆道嵌顿结石、巨大结石复杂性肝内胆管结石的治疗效果.方法回顾 41例肝内胆管嵌顿结石和巨大结石合并有肝内胆管狭窄病例,术中或术后应用胆道镜扩张技术和液电碎石进行治疗. 结果 41例中 37例狭窄完全解除,结石完全取净, 3例胆道狭窄在胆道镜下无法解除,结石无法取净, 1例狭窄解除但结石未能取净.总治愈率为 90.24%.结论应用胆道镜胆道扩张技术和液电碎石可有效治疗难治的复杂性肝内胆管石.

    作者:罗云藩;邓予;黄华容;李胜新 刊期: 2005年第02期

  • 高州市实施结核病控制项目效果分析

    目的评价高州市实施世界银行贷款结核病控制项目的成效. 方法收集并分析 1992~ 2001年项目季报表及有关资料. 结果 10年间共接诊可疑肺结核症状者 20 124人,可疑者检查率平均为 0.15%;发现活动性肺结核 5 138例,其中涂阳 4 001例,涂阳病人占活动性病人 77.9%;涂阳登记率从 8.14/10万提高到 28.22/10万;初复治涂阳比例 1∶ 0.05,初治涂阳病人治愈率为 97.9%;复治涂阳病人治愈率为 84.4%.结论高州市结控项目取得了满意效果.

    作者:余荣深 刊期: 2005年第02期

  • 超声波药物导入治疗创伤后皮肤红斑瘢痕的临床疗效

    目的观察超声波药物导入治疗创伤后皮肤红斑瘢痕的临床疗效.方法将治疗瘢痕的药膏涂于创伤部位,以超声头按摩 15~ 20 min, 1次 /2 d, 10次为一个疗程.结果本组 42例患者, 2个疗程治愈 33例,显效 6例, 有效 3例, 总有效率 92.8%.结论超声波药物导入能迅速解除创伤后红斑、痒痛症状,软化瘢痕,抑制瘢痕增生.

    作者:宋玲;陈焕英 刊期: 2005年第02期

  • 孕期妇女TORCH感染对妊娠结局的影响

    目的探讨孕期妇女 TORCH感染对妊娠结局的影响.方法应用酶联免疫吸附法( ELISA法)对 3 427例不同孕周的孕妇进行 TORCH IgM特异性抗体检测,并对阳性孕妇的妊娠结局和转归进行分析. 结果 3 427例病例检出阳性例数 273例.阳性率 RV 1 3%、 CMV 3 7%、 TOX 3 2%; TORCH IgM阳性孕妇流产、死胎、胎儿畸形、新生儿黄疸发生率分别为 28 2%、 11%、 5 3%、 12 8%. 结论孕期妇女 TORCH感染可影响妊娠结局.孕前及孕早期筛查非常重要,阳性者可给予及时临床干预.

    作者:李萍;周沫;江悦华;宾利;胡小平;韩凤珍 刊期: 2005年第02期

  • 透明带多表位疫苗载体的构建及抗生育研究

    目的研究透明带( ZP)多表位疫苗的抗生育效果. 方法根据牛核糖核酸酶 T细胞抗原( BRNT)、 ZP2和 ZP3的表位序列设计含限制性核酸内切酶识别位点的反向互补引物,经退火、延伸、酶切后,重组至 pQE- 80L载体.用表达产物对 BALB/c小鼠进行主动免疫,检测抗生育效果.结果构建了 ZP表位疫苗载体,成功地诱导出体液免疫应答, ZP3、 ZP2及 ZP2和 ZP3多表位疫苗的避孕率分别为 60.00%、 50.00%和 83.33%. 结论 ZP2和 ZP3多表位疫苗的避孕率高于 ZP2或 ZP3表位疫苗.

    作者:陈享;曾海涛 刊期: 2005年第02期

  • 家蝇抗菌肽的诱导提取及筛选

    目的筛选家蝇血淋巴中抑制各种病原体的抗菌肽.方法用多种病原体及药物来刺激家蝇幼虫,诱导其产生抗菌肽, 把其中部分加热,用诱导出的抗菌肽进行抑菌试验.结果所提取的抗菌肽均有抗菌成份,但效果不一.结论诱导源不同可产生不同的抗菌成份, 加热后的抗菌成份有所破坏.

    作者:赵瑞君;刘成芳;董建臻;张亚尼 刊期: 2005年第02期

  • 恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)EBA-175Ⅱ区F2结构域基因的克隆与表达

    目的构建 EBA- 175Ⅱ区 F2结构域基因的原核表达载体. 方法采用 PCR的方法从恶性疟原虫基因组 DNA中扩增出 EBA- 175Ⅱ区 F2结构域 856~ 1848 bp基因,定向克隆入 PMD18- T质粒,再经 BamHⅠ和 XhoⅠ酶切亚克隆入高效表达载体 pET23a(+ ).重组质粒经 PCR、酶切、测序鉴定后,在 BL21( DE3)菌株中进行 IPTG诱导表达.结果重组质粒经序列测定证实插入基因为目的基因,符合表达框架,经 IPTG诱导,在 BL21( DE3)菌株中以非融合蛋白形式表达, SDS- PAGE电泳显示在约 36.4 kDa处可见明显蛋白增粗条带,与预期结果一致.结论成功构建了重组 EBA- 175Ⅱ区 F2结构域基因表达载体,并在 BL21( DE3)中有效表达.

    作者:孙晓敏;郝文波;王萍;李明;贾钰华 刊期: 2005年第02期

  • 曲马多复合异丙酚静脉麻醉用于宫腔镜电切术

    目的探讨曲马多复合异丙酚静脉麻醉用于宫腔镜电切术的可行性和安全性. 方法 ASAⅠ~Ⅱ级宫腔镜电切术患者 40例,随机分为对照组 (P组 )和观察组 (PT组 ),每组各 20例, P组单用异丙酚 2mg· kg- 1诱导, PT组采用曲马多 2mg kg- 1+异丙酚 2mg kg- 1诱导,术中维持每次追加异丙酚 0.5~ 1.0mg· kg- 1,观察麻醉前后 MAP、 HR、 RR和 SPO2的变化,注射痛和术后宫缩痛的发生情况,记录患者睁眼时间、定向力恢复时间、手术时间、异丙酚用药量以及不良反应.结果麻醉后两组 MAP、 HR、 RR和 SPO2均有所下降,但下降幅度均在正常范围内. PT组注射痛和术后宫缩痛的发生率明显低于 P组 (P< 0.01),异丙酚用量明显少于 P组 (P< 0.01).术后患者无恶心、呕吐发生.结论曲马多复合异丙酚静脉麻醉用于宫腔镜电切术较单用大剂量异丙酚具有麻醉效果好,能有效减少异丙酚用量,明显减轻异丙酚的注射痛和术后宫缩痛等优点,值得临床推广应用.

    作者:李步龙;吴晓东;肖生红;詹鸿;陈浩文 刊期: 2005年第02期

  • TR/Patoc-Ⅰ株抗原肉眼凝集试验在钩端螺旋体病中的临床意义

    目的探讨血清学 TR/Patoc-Ⅰ株抗原的肉眼凝集试验 (即快速玻片凝集反应 )在钩端螺旋体病中的应用价值.方法对本院 1995年 7月~ 2004年 5月收治的 32例小儿病人进行临床综合分析.血清学检测采用快速玻片凝集反应,并与活抗原显微镜凝集试验相对照.结果快速玻片凝集反应全部阳性.+~++的 16例双份血清 3~ 4周后复查增高++以上的有 13例.+++~++++的 10例 3~ 4周后降为+~++.双份血清升高或降低++以上的有 27例 ,无变化的 5例临床诊断均为闭塞性脑动脉炎.入院后 1周内 SAT和 MAT二者敏感度经统计学卡方检验 ,统计学上有显著差异 (P< 0 01).入院 1周内 SAT+以上的有 32例, MAT抗体滴度 1∶ 100以上的有 24例,两者阳性率经卡方检测 ,统计学上有显著差异 (P< 0 01). 100例非钩体病儿童检验二者的特异性,经卡方检测, 统计学上有显著差异 (P< 0 01). 32例成对标本中 , 入院后 3~ 4周 32例 SAT与 MAT均阳性 ,同时阴性为 0例.入院后 3~ 4周 SAT与 MAT一致率为 100%.两者结果有一致性( P< 0.01).结论快速玻片凝集反应操作简便、快速、无传染性, 并且准确、特异和敏感 , 对钩体病早期诊断有一定的价值, 值得基层医院推广.

    作者:严智先;莫伟雄;葛德珊 刊期: 2005年第02期

  • 经纤维支气管镜治疗继发性肺曲霉肿的临床研究

    目的研究经纤维支气管镜 (纤支镜 )治疗继发性肺曲霉肿的临床应用价值.方法观察比较 43例经纤支镜治疗和 30例经手术切除治疗的继发性肺曲霉肿的治疗效果及术后并发症.结果 43例经纤支镜治疗的继发性肺曲霉肿患者中有 35例的肺曲霉肿得到彻底地治疗 ,症状、体征明显改善 ,追踪观察 2~ 50个月病情无复发. 8例因各种原因未得到彻底治疗的病例则出现咳嗽、咯血反复 ,该组病例纤支镜治疗后未出现明显的并发症. 30例经手术切除治疗的继发性肺曲霉肿患者的肺曲霉肿均得到彻底治疗 ,但手术并发症高达 66.7% ,其中 1例死亡 ,4例需再次手术治疗.结论病变广泛、粘连严重、累及支气管的肺结核空洞内的继发性曲霉肿 ,经纤支镜治疗可能是好的选择 ,对于纤支镜难以到达的较边缘的肺曲霉肿或同一肺叶内多个曲霉肿 ,应选择手术治疗.

    作者:张言斌;张强;刘伟光;周强;李一耕 刊期: 2005年第02期

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主管:广东省科学技术协会

主办:广东省寄生虫学会 中华预防医学会