采用RT-PCR技术进行SARS冠状病毒基因检测

闫梅；刘敬忠；肖白；吕月平；丁洁；谭淑珍；王臻；梁燕；李兴旺；徐作军；于常海；王辰

关键词：SARS冠状病毒, 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)

摘要：目的建立RT-PCR检测SARS冠状病毒基因的方法,用于早期诊断.方法对临床确诊的20例SARS患者的血、鼻拭子、咽拭子、尿、便等69份标本进行总RNA提取,反转录成cDNA后再以本研究室自行设计合成的一对特异引物进行PCR扩增,2%琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物,出现140bp带者为SARS病毒阳性.采用测序仪对140bp带进行特异性检测,并进行灵敏度试验.结果140bp扩增序列与公布的SARS病毒的基因序列完全一致,灵敏度可达10个拷贝.SARS患者11份尿标本中6份检出140bp阳性扩增带,8份便标本中检出3份阳性,从15份鼻拭子和15份咽拭子中分别检出6份和5份阳性标本,血清15份、白细胞5份分别检出2份阳性.20例SARS患者中送检1至4种标本检测到SARS病毒阳性者共15例(75%).结论本研究建立的RT-PCR方法灵敏、特异,可用于早期诊断.尿、便标本中的SARS病毒检出率较高且取材简便、病人无痛,是取材的极好选择.每例待测患者好同时取其尿、便、拭子、血等多种标本,可以提高SARS病毒检出率.

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先天性心脏病体外循环心内直视手术的围手术期及术后的护理

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