梁伟杰；陈美姬；何洁仪；黄惠敏；余盛龙；陈君；陈景福；宋明才；廖新学
目的：研究人参皂苷Re对大鼠颈动脉球囊损伤所致血管内膜增生的作用及其对NF－κB p65炎症信号通路的影响。方法：40只SD大鼠随机分组为5组：假手术组，模型组，人参皂苷Re低、中、高剂量组。除假手术组外，其余组大鼠均用2F球囊导管建立颈动脉球囊损伤模型，制模后次日灌胃给药，假手术组和模型组给予等体积蒸馏水，人参皂苷低、中、高剂量组大鼠分别给予12．5、25、50 mg／kg人参皂苷Re。连续给药14 d后取损伤段颈动脉，HE染色观察血管形态学改变，并测定血管管腔面积（ lumen area，LA）、内膜面积（ intima area，IA）、中膜面积（ media area，MA），计算内膜／中膜面积比（ IA／MA）；real－time PCR法检测肿瘤坏死因子－α（ tumor necrosis factor－α， TNF－α）和白细胞介素－1β（ interleukin－1β，IL－1β）的mRNA水平；免疫组织化学法检测血管壁增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）和核因子κB（nuclear factor－kappa B，NF－κB）p65蛋白的表达。结果：与假手术组相比，模型组大鼠血管腔明显变窄（P＜0．01），血管壁TNF－α、IL－1β的mRNA水平及PCNA、NF－κB p65蛋白的表达均明显增高（P＜0．05）；与模型组比较，人参皂苷Re中、高剂量组血管内膜增生明显减轻（P＜0．05），血管壁TNF－α和IL－1β的mRNA水平及PCNA和NF－κB p65的蛋白表达则明显下调（ P＜0．05）。结论：人参皂苷Re能减轻球囊损伤所致大鼠颈动脉内膜增生，其机制可能与抑制NF－κB p65炎症信号通路有关。
作者：高晨盈；王俊逸；罗云梅；罗超；高杨 刊期： 2016年第07期
目的：研究外源性硫化氢（ H2 S）能否通过调控Janus激酶／信号转导及转录激活因子（ JAK／STAT）通路对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞（ HUVECs）损伤。方法：Western blot法测定JAK2、STAT3、cleaved caspase－3的蛋白水平；CCK－8法检测细胞存活率；罗丹明123染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位（ MMP）；双氯荧光素（ DCFH－DA）染色荧光显微镜照相法测定胞内活性氧（ ROS）水平；超氧化物歧化酶（ SOD）检测试剂盒检测SOD活性。结果：应用400μmol／L硫氢化钠（ NaHS，为H2 S的供体）预处理HUVECs 30 min能明显地抑制高糖（40 mmol／L葡萄糖，HG）对p－JAK2和p－STAT3蛋白水平的上调作用。400μmol／L NaHS预处理30 min或20μmol／L JAK／STAT通路抑制剂AG490预处理30 min均能抑制高糖对HUVECs引起的损伤，使细胞存活率和SOD活性升高，cleaved caspase－3蛋白水平、ROS生成量及MMP丢失均减少。结论：外源性的H2 S通过抑制JAK／STAT通路保护HUVECs对抗高糖引起的损伤。
作者：林佳琼；陈景福；廖静秋；林凯；邓海鸥；吴冬波；吴文 刊期： 2016年第07期
目的：建立重症急性胰腺炎大鼠模型，研究生长抑素（奥曲肽）联合大柴胡汤对急性重症胰腺炎的作用及初步机制。方法：50只大鼠随机分为假手术组、模型组、奥曲肽组、大柴胡汤组与联合组，经相应处理后记录腹水量，测定血清中淀粉酶（ amylase，AMY）、丙氨酸氨基转移酶（ alanine aminotransferase，ALT）和肌酐（ creatinine， Cr）的水平，HE染色后观察胰腺组织形态，Western blot检测胰腺细胞核中NF－κB与细胞中IκBα的蛋白表达水平， qPCR检测胰腺细胞中ICAM－1与IL－1的mRNA表达水平。结果：生长抑素联合大柴胡汤能有效降低重症急性胰腺炎大鼠的腹水量以及血清中AMY、ALT和Cr的水平；重症急性胰腺炎可导致胰腺细胞核NF－κB蛋白表达升高，IκBα蛋白表达降低，ICAM－1和IL－1 mRNA表达升高。生长抑素联合大柴胡汤可逆转这些改变。结论：生长抑素联合大柴胡汤可以减轻大鼠的急性重症胰腺炎，其机制可能与抑制NF－κB信号通路以及ICAM－1和IL－1表达有关。
作者：冯辉；吴标；赵习德；郭宝瑞 刊期： 2016年第07期
目的：研究亚甲蓝（ methylene blue，MB）对百草枯（ paraquat，PQ）中毒大鼠胸腺T 淋巴细胞亚群免疫功能与氧化应激的影响。方法：选取Wistar雄性大鼠40只，随机分为正常组、模型组、MB低剂量（2 mg? kg－1?d－1）组和MB高剂量（4 mg? kg－1? d－1）组。72 h后HE染色法观察胸腺组织形态，比色法测定各组胸腺组织SOD活性及MDA含量，免疫组化试剂盒检测Bcl－2和Bax和CD4及CD8的表达。结果：MB组胸腺皮、髓质分界清楚，胸腺细胞MDA含量减少，SOD活性增加，抗氧化能力提高，Bcl－2和Bax表达量下调、Bcl－2／Bax的比值增加，CD4阳性表达提高。结论：MB能够改善PQ对胸腺细胞的氧化损伤，调节胸腺T 淋巴细胞亚群在皮质和髓质区的分布，从而缓解机体持续性损伤。
作者：杜斌；陈俊良；唐筛娣；陈炜；庞庆丰 刊期： 2016年第07期
目的：探究白细胞介素（IL）－22对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLSs）功能的影响及机制。方法：组织块法培养RA－FLSs。将不同浓度（0、1、10、100μg／L）的重组人源性IL－22（rhIL－22）与RA－FLSs共培养24 h、48 h、72 h，CCK－8法检测细胞活力的改变；利用10μg／L的rhIL－22作用于RA－FLSs 24 h，流式细胞术检测细胞周期改变。 rhIL－22和／或信号转导和转录因子3（ STAT3）特异性抑制剂STA－21以不同浓度作用RA－FLSs 24 h，Western blot法检测Bcl－2和p－STAT3蛋白水平的变化。结果：不同浓度的rhIL－22作用于RA－FLSs 24 h、48 h、72 h后，RA－FLSs细胞活力明显增高，均显著高于对照组（P＜0．05）。 rhIL－22刺激RA－FLSs后，S期和G2／M期细胞明显增多，G0／G1期细胞减少。 Western blot法检测结果提示rhIL－22可上调RA－FLSs中Bcl－2、p－STAT3的蛋白水平，而STA－21单用或联用rhIL－22均可抑制RA－FLSs中Bcl－2及p－STAT3的表达（ P＜0．05）。结论：IL－22在RA－FLSs细胞活力和周期调节中起重要作用，且STAT3在IL－22促RA－FLSs细胞Bcl－2表达的过程中起关键作用，提示IL－22可能对RA－FLSs凋亡有一定的影响。
作者：刘梦；刘岩；杨梦如；莫碧瑶；潘云峰 刊期： 2016年第07期
目的：探讨胰高血糖素样肽－l（ GLP－1）对非酒精性脂肪肝大鼠SOCS－3和SREBP－1c mRNA表达的影响。方法：将雄性SD大鼠32只随机分为正常对照（ NC）组、高脂（ HF）组和HF＋利拉鲁肽（ Lira）组。 HF组和HF＋Lira组给予高脂饲料喂养16周，HF＋Lira组高脂喂养12周后，给予Lira 600μg? kg－1? d－1腹腔注射4周。在16周末处死大鼠。全自动生化仪检测血清ALT、AST、甘油三酯（ TG）和总胆固醇（ TC）；GPO－PAP 法测定肝脏TG含量；酶联免疫法测定空腹胰岛素，并计算胰岛素抵抗指数（ HOMA－IR）；光学显微镜下观察肝脏病理变化；RT－qPCR法测定肝组织SOCS－3和SREBP－1c的mRNA表达水平。结果：与NC组相比，HF组血清ALT、AST、TG、TC、肝TG、FINS及HOMA－IR均明显升高（P＜0．01）；HF＋Lira组与HF组相比，血清的ALT、AST、TG、TC、肝TG、FINS及HOMA－IR均下降，差异有统计学显著性（P＜0．05）。 HF组肝组织SOCS－3和SREBP－1c的mRNA表达水平较NC组显著增强（P＜0．01）；HF＋Lira组较HF组SOCS－3和SREBP－1c的mRNA表达显著下降（P＜0．05）。结论：Lira可能通过下调肝组织SOCS－3和SREBP－1c的mRNA表达，改善 IR，减少肝脏TG沉积，从而对非酒精性脂肪性肝病起到治疗作用。
作者：侯洪涛；裘艳梅；张建；胡义亭；苏少慧；王玉珍 刊期： 2016年第07期
目的：观察蛋白酶体抑制剂MG132诱导SH－SY5Y细胞凋亡及调节β－淀粉样蛋白（ beta－amyloid protein，Aβ）生成的作用，并对其机制进行探讨。方法：培养SH－SY5Y细胞，MG132对细胞进行处理，浓度分别为2．5μmol／L、5μmol／L和10μmol／L，24 h后检测各项指标。 MTT法检测细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡；ELISA法检测细胞Aβ1－40和Aβ1－42水平；Western blot检测淀粉样蛋白前体蛋白（ amyloid precursor protein，APP）、β－分泌酶（BACE1）、早老蛋白1（presenilins 1，PS1）、早老蛋白2（presenilins 2，PS2）、nicastrin（NCT）和α－分泌酶（ADAM10）蛋白表达。结果：经MG132处理后，细胞活力明显下降，诱导细胞凋亡，随剂量增加凋亡率分别为36．97％、46．20％、50．50％；细胞Aβ1－42和Aβ1－40蛋白水平明显上升； APP及Aβ代谢相关蛋白PS1、PS2和BACE1表达均出现剂量依赖性的增加，而ADAM10表达呈剂量依赖性降低；NCT水平变化不明显。结论： MG132能诱导神经细胞凋亡，通过影响Aβ生成途径关键蛋白而促进Aβ的产生，说明蛋白酶体活性下降可通过调节Aβ途径参与阿尔茨海默病的发生。
作者：王浩；孙利利；于杨；杨艳茹；马健；陈伟；张继国；秦树存 刊期： 2016年第07期
目的：探讨钙卫蛋白（ CALP）在肾脏缺血再灌注损伤（ IRI）大鼠中的表达及其在炎症反应中的作用。方法：50只雄性SD大鼠随机分为IRI组和假手术组（ sham组），每组25只。各组分别于缺血再灌注后6 h、12 h、24 h、48 h和72 h观察肾脏病理改变，检测大鼠血清尿素氮（BUN）和肌酐（SCr）水平，ELISA法检测大鼠血清CALP、肿瘤坏死因子（ TNF）－α和白细胞介素（ IL）－6的含量，免疫组织化学法和Western blot法分别检测大鼠肾脏CALP、Toll样受体4（ TLR4）和NF－κB p65蛋白表达水平。结果：IRI组大鼠肾脏呈现不同程度的肾小管上皮细胞和间质损伤，伴炎细胞浸润。血清BUN、SCr、CALP及促炎细胞因子TNF－α、IL－6的含量在各时点均显著高于sham组（ P＜0．05）。 CALP、TLR4和NF－κB p65主要表达于肾小管上皮细胞胞质中，在IRI组呈高表达，在各时点各因子的表达与sham组相比均显著增强（ P＜0．05）。结论：肾脏IRI大鼠的血清CALP、TNF－α和IL－6水平升高， CALP、TLR4和NF－κB p65在肾组织中表达增强。 CALP在大鼠肾脏IRI的炎症反应中可能起重要作用。
作者：陈萍祯；朱晔；张慧涛；徐晓嫦；郑晶；贾宁；林宇静；李玲玲；张桦 刊期： 2016年第07期
神经元受刺激后产生动作电位，并将该刺激信号传递给其它的神经元，进而影响整个神经回路。这种接受去极化刺激后能够产生动作电位的特性，是判断细胞是否具有兴奋性的标准。然而亦有研究表明，神经元在接受超极化刺激后也能爆发动作电位，被称为“去极化反跳（ rebound depolariza－tion）”［1－2］。通常超极化使膜电位增大，产生抑制效应，使神经元兴奋性降低，而去极化反跳是由超极化引起的去极化反应，有的还能产生动作电位，使神经元兴奋性增高。本文结合国、内外近年来对神经元去极化反跳的基本特性及其机制以及在生理和病理状态下作用的研究进展加以综述。
作者：李凌超；朱梦叶；张达颖；柳涛 刊期： 2016年第07期
目的：探讨Lowe综合征的临床、影像特点及基因特征。方法：分析1例10月大Lowe综合征患儿的临床资料，头颅核磁共振（ MRI）特征及其致病基因OCRL突变检测结果。结果：患儿有先天性白内障、眼球震颤、精神运动发育落后、肌张力低下、蛋白尿及血尿等临床表现。头颅MRI提示患者脑白质髓鞘发育落后，双侧额颞叶发育不良，蛛网膜下腔增宽。 OCRL 基因检测发现一新发缺失突变 NM＿000276．3： c．1280－1281delTT （ p． Cys428Hisfs*2），该突变未见文献报道。结论：Lowe综合征的诊断主要通过临床表现和OCRL基因检测，本研究发现的OCRL基因新突变丰富了该基因的致病突变谱。
作者：李冰肖；张占会；周庆华；杨晶；吴瑕；柳国胜 刊期： 2016年第07期
目的：探讨SHARPIN对去势抵抗性前列腺癌细胞LNCaP－AI坏死性凋亡关键因子Rip1的调控作用，以及对细胞坏死性凋亡的影响。方法：将LNCaP－AI细胞分为TNF－α＋Z－VAD（ caspase抑制剂）处理组与TNF－α＋Z－VAD＋Nec－1（Rip1抑制剂）处理组，应用MTS检测各组细胞的活力，研究坏死性凋亡机制在诱导LNCaP－AI细胞死亡中的作用。将LNCaP－AI细胞分为阴性对照组和SHARPIN干扰（ si－SHARPIN）组，RT－qPCR验证抑制效率，通过免疫荧光等技术进一步探讨SHARPIN调控坏死性凋亡的具体分子机制。结果：与对照组相比，TNF－α＋Z－VAD处理组的LNCaP－AI细胞活力下降28％（P＜0．05），而TNF－α＋Z－VAD ＋Nec－1处理组的细胞在Rip1被抑制后，细胞活力无明显改变。在LNCaP－AI细胞中，通过siRNA抑制SHARPIN表达后，Rip1表达水平上调，同时， LNCaP－AI细胞坏死性凋亡比例升高。结论：LNCaP－AI细胞可通过坏死性凋亡机制诱导死亡，下调SHARPIN可能通过激活Rip1增强LNCaP－AI细胞坏死性凋亡。
作者：王淦平；黄海；陈贤举；赖义明；林春浩；曾乐祥；曹亿；张一鸣；余永晟；郭正辉 刊期： 2016年第07期
目的：研究银杏叶提取物（ Ginkgo biloba extract，GBE）对大鼠糖尿病视网膜病变（ diabetic retinopa－thy，DR）的影响及初步机制。方法：实验共分为5组，以普通Wistar大鼠作为正常对照组（ control组）、Goto－Kakiza－ki（ GK）大鼠作为糖尿病视网膜病变模型组（ DR组），给予GK大鼠不同剂量的银杏叶提取物，分为低剂量组（ GBE－L组），中剂量组（ GBE－M组）和高剂量组（ GBE－H组）；检测各组大鼠的血糖与血－视网膜屏障损伤情况；TUNEL染色法和Western blot法分别检测视网膜组织的神经节细胞凋亡情况，核子因子E2相关因子2（ nuclear factor E2－re－lated factor 2，Nrf2）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶（phosphorylation－extracellular regulated protein kinase， p－ERK）、细胞外调节蛋白激酶总蛋白（total extracellular regulated protein kinase， t－ERK）、B淋巴细胞瘤－2（B－cell lymphoma－2， Bcl－2）和P53的蛋白水平变化。结果：银杏叶提取物能够降低糖尿病视网膜病变大鼠的血糖，减轻血－视网膜屏障的损伤，并降低视网膜神经节细胞凋亡数，上调细胞内的Nrf2、p－ERK与Bcl－2的蛋白水平，下调P53的蛋白表达，而对t－ERK蛋白的表达水平无显著影响。结论：在糖尿病视网膜病变中，银杏叶提取物能有效地保护视网膜神经节细胞，可能与Nrf2／ERK通路的激活以及Bcl－2与P53蛋白表达有关。
作者：杜倩；田秋霞；付莉萍；李剑波 刊期： 2016年第07期
目的：构建生长激素促泌素受体1a（ growth hormone secretagogue receptor 1a，GHSR1a）基因短发夹干扰RNA（ short hairpin RNA，shRNA）慢病毒载体，感染人结直肠癌细胞系SW480，观察沉默GHSR1a基因对SW480细胞生长的影响，并探讨其作用机制。方法：构建特异性靶向GHSR1a基因的shRNA慢病毒表达载体和阴性对照序列慢病毒载体；建立稳定表达GHSR1a shRNA的SW480细胞、阴性对照细胞（NC）及空白对照细胞（BC），RT－PCR检测GHSR1a的mRNA在细胞中的表达；通过Western blot技术检测细胞中GHSR1a、ghrelin、PTEN、p－AKT及p53蛋白的水平；CCK－8法测定GHSR1a shRNA对SW480细胞活力的影响；建立裸鼠结直肠癌皮下移植瘤模型，实验结束后处死裸鼠并测量各组裸鼠肿瘤重量；免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki－67和PTEN的阳性表达。结果：在体外实验中，GHSR1a在人结直肠癌细胞株Caco－2及SW480中的表达明显高于人正常结肠上皮细胞株NCM460的表达；成功建立了稳定表达GHSR1a shRNA的SW480细胞；GHSR1a shRNA能明显抑制SW480细胞GHSR1a mRNA及蛋白的表达；沉默GHSR1a基因后SW480细胞活力明显减弱；与NC组相比较，GHSR1a shRNA组细胞中PTEN mRNA及蛋白水平上调，AKT磷酸化被抑制，p53的表达明显增加；在体内实验中，与NC组相比较，GHSR1a shRNA组裸鼠结直肠癌皮下移植瘤重量明显减轻，同时Ki－67表达下调，PTEN表达上调。结论：慢病毒介导的GHSR1a shRNA对体内、外人结肠癌细胞的生长有明显抑制作用，该作用可能通过上调PTEN及其下游PI3K／AKT通路实现。
作者：刘岸；黄成钢；徐佳 刊期： 2016年第07期
目的：探究固醇调节元件结合蛋白2（SREBP－2）对衣霉素诱导的软骨细胞内质网应激（ERS）的影响。方法：分离人正常软骨细胞和骨关节炎（ OA）软骨细胞培养，衣霉素和SREBP－2 siRNA分别处理正常软骨细胞。24 h后，实时荧光定量PCR检测对微小RNA－185（miR－185）表达的影响，流式细胞术检测对细胞凋亡的影响， Western blot法检测对SREBP－2、CHOP、p－eIF2α和ATF4等ERS相关蛋白，Bcl－2、Bax和caspase－3等凋亡相关蛋白水平的影响；caspase－3活性试剂盒检测对细胞caspase－3活性的影响。结果：与对照组相比， OA组和衣霉素组SREBP－2表达增加，miR－185表达降低（ P＜0．05）。 SREBP－2 siRNA转染可明显阻断衣霉素引起的miR－185降低（P＜0．05）。miR－185过表达能够下调SREBP－2蛋白水平（P＜0．05）。与对照组相比，OA组和衣霉素组CHOP、p－eIF2α和ATF4的蛋白水平明显上调，Bcl－2表达下调，Bax和caspase－3表达增加（P＜0．05）；SREBP－2沉默处理则显著逆转上述蛋白表达（P＜0．05）。细胞凋亡率与上述细胞凋亡相关蛋白的变化趋势一致（P＜0．05）。与衣霉素组相比，SREBP－2 siRNA转染明显下调 caspase－3活性， miR－185抑制则明显逆转上述作用（ P ＜0．05）。结论：SREBP－2沉默可通过上调miR－185抑制衣霉素诱导的软骨细胞ERS和细胞凋亡。
作者：谢静；史栋梁；郭会卿 刊期： 2016年第07期
目的：探讨微小RNA－193b（miR－193b）在不同宫颈组织中的表达以及其对顺铂作用于宫颈癌细胞敏感性的影响，并初步探讨其作用机制。方法：实时荧光定量PCR（qPCR）检测不同宫颈组织中miR－193b的表达水平。采用脂质体将miR－193b－inhibitor转染至HeLa细胞，Transwell法、CCK－8法和免疫蛋白印迹法分别检测细胞迁移数、细胞对顺铂的敏感性以及细胞中PTEN、Akt、p－Akt和P－糖蛋白（ P－gp）的蛋白水平。结果： qPCR结果显示miR－193b在正常宫颈组织及宫颈糜烂组织中呈低表达，在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中的表达明显上升；转染miR－193b－inhibitor后，HeLa细胞迁移数明显减少（P＜0．05），顺铂对HeLa细胞活力的抑制作用进一步增强（P＜0．05），细胞中PTEN的蛋白表达明显上调（P＜0．05），Akt的蛋白表达无明显变化，p－Akt和P－gp的蛋白水平明显下调（ P＜0．05）。结论：miR－193b在宫颈癌组织中呈高表达，沉默miR－193b可增加HeLa细胞对顺铂的敏感性，作用机制可能与PTEN－PI3 K／Akt通路有关。
作者：杜文霞；姬霞 刊期： 2016年第07期
目的：研究原花青素单一活性成分B2（PC－B2）对高糖环境下人内皮祖细胞（EPCs）的保护作用及其作用机制。方法：从健康人外周血中分离诱导培养人EPCs，并进行鉴定。将EPCs分为control组（ PBS处理）、高渗对照组（25 mmol／L甘露醇处理）、高浓度30 mmol／L葡萄糖作用组以及不同浓度（2、10和50 mg／L） PC－B2与30 mmol／L葡萄糖共处理组。使用CCK－8法检测各组中EPCs 活力的变化；同时检测各组EPCs 中乳酸脱氢酶（ LDH）、丙二醛（ MDA）、超氧化物歧化酶（ SOD）和还原型谷胱甘肽（ GSH）水平；ELISA方法检测各组EPCs上清中一氧化氮（NO）、内皮素－1（ET－1）、细胞间黏附分子－1（ICAM－1）和血管细胞黏附分子－1（VCAM－1）的含量变化；流式细胞术检测各组中EPCs活性氧簇（ ROS）生成和凋亡率变化；Western blot检测血管内皮生长因子（ VEGF）和血管内皮生长因子受体－2（ VEGFR－2）的表达情况。结果：与control组相比，高糖作用组中人EPCs的活力显著下降（ P＜0．05）；LDH漏出量以及MDA、ET－1、ICAM－1和VCAM－1含量均显著升高（P＜0．05）；而SOD和GSH活性以及NO含量显著降低（ P＜0．05）；细胞中ROS含量和凋亡率显著上升（ P＜0．05）；EPCs中VEGF和VEGFR－2表达量显著降低（P＜0．05）。与高糖作用组相比，不同浓度PC－B2作用组EPCs活力均明显回升（P＜0．05）；LDH漏出量以及MDA、ET－1、ICAM－1和VCAM－1含量均逐渐下降（ P＜0．05）；SOD和GSH活性以及NO含量均显著上升（ P＜0．05）；细胞中ROS生成和凋亡率逐渐下降（ P＜0．05）；而EPCs中VEGF和VEGFR－2表达量也随之逐渐上升，并具有浓度依赖性（ P＜0．05）。结论： PC－B2能够提升高糖作用下人EPCs活力，减少高糖引起的氧化损伤，恢复EPCs正常功能，降低高糖诱导的炎症因子和细胞凋亡，从而对人EPCs发挥保护作用，并可通过诱导VEGFR－2和VEGF表达发挥作用。
作者：王丽萍；李莉；姚计文；李博 刊期： 2016年第07期
目的：探讨开放ATP敏感性钾通道（KATP通道）能否抑制Toll样受体4（TLR4）／核因子－κB（NF－κB）通路对抗高糖（ HG）引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症。方法：应用Western blot测定TLR4和NF－κB p65的蛋白水平；应用ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素－1β（ IL－1β）和肿瘤坏死因子－α（ TNF－α）的水平；采用细胞计数试剂盒8（CCK－8）测定心肌细胞存活率；罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位（MMP）；双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定细胞内活性氧簇（ ROS）水平；Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法检测凋亡细胞数量。结果：H9c2心肌细胞经HG（35 mmol／L葡萄糖）处理24 h，胞内TLR4和磷酸化NF－κB p65（p－NF－κB p65）的蛋白水平明显增加，100μmol／L KATP通道开放剂二氮嗪（ DZ）预处理30 min可抑制HG对TLR4和p－NF－κB p65蛋白水平的上调作用；此外，30μmol／L TAK－242（ TLR4抑制剂）和HG共处理心肌细胞24 h也可减轻HG对p－NF－κB p65的上调作用。另一方面，100μmol／L DZ预处理有明确的心肌保护作用，可抑制HG引起的细胞毒性、炎症反应、线粒体损伤、氧化应激和细胞凋亡，使细胞存活率升高，并减少IL－1β和TNF－α分泌水平、MMP丢失、ROS生成及凋亡细胞数量；而30μmol／L TAK－242或100μmol／L PDTC（ NF－κB抑制剂）共处理心肌细胞24 h也可发挥和DZ相类似的作用，能抑制HG引起的上述损伤和炎症反应。结论：开放KATP通道可通过抑制TLR4／NF－κB通路对抗HG引起的H9 c2肌细胞损伤和炎症。
作者：梁伟杰；陈美姬；何洁仪；黄惠敏；余盛龙；陈君；陈景福；宋明才；廖新学 刊期： 2016年第07期
目的：探讨adipolin／CTRP12对LPS致ARDS小鼠的作用及肺泡上皮钠离子通道（ ENaC）的调节。方法：40只C57BL／6J小鼠按随机数字表分为对照组、LPS组、adipolin组和wortmannin（PI3K抑制剂）组，每组10只。苏木精－伊红（HE）染色观察肺组织病理改变；伊文氏蓝标记蛋白检测肺水清除率（AFC），BCA法测支气管肺泡灌洗液（BALF）中蛋白含量，评估肺组织通透性改变；ELISA检测BALF中白细胞介素（IL）－1β和肿瘤坏死因子（ TNF）－α含量，髓过氧化物酶（ MPO）试剂盒检测MPO活性，吉姆萨染色计数BALF总细胞数和多形核白细胞数， Western blot法检测肺组织α－ENaC蛋白表达和Akt磷酸化水平，实时荧光定量PCR检测肺组织α－ENaC的mRNA转录水平。结果：与control组相比，LPS组表现出典型的ARDS病理改变，肺损伤明显（P＜0．05），湿干重比（W／D）和BALF蛋白含量明显增高而AFC明显减弱（P＜0．05），BALF细胞计数、MPO活性、IL－1β含量和TNF－α含量明显升高（P＜0．05），而肺α－ENaC表达和Akt磷酸化水平显著下调（P＜0．05）。与LPS组相比，adipolin组肺损伤明显减轻（P＜0．05），W／D和BALF蛋白含量明显降低而AFC明显增强（P＜0．05），且BALF细胞计数、MPO活性、IL－1β含量和TNF－α含量均较LPS组显著降低（P＜0．05），伴α－ENaC表达和Akt磷酸化水平显著上调（P＜0．05）。而PI3K抑制剂wortmannin组与adipolin组相比，其肺损伤明显加重（P＜0．05），W／D和BALF蛋白含量明显增高， AFC明显减弱（P＜0．05），BALF细胞计数、MPO活性、IL－1β含量和TNF－α含量明显升高（P＜0．05），同时伴α－ENaC表达和Akt磷酸化水平显著下调（P＜0．05）。结论： Adipolin／CTRP12可通过PI3K／Akt信号通路介导的α－ENaC上调机制，增强肺水肿液清除能力，从而对LPS所致ARDS小鼠发挥保护性调控作用。
作者：唐旭毛；戚迪；王导新 刊期： 2016年第07期
目的：探讨芥子酸对高糖诱导下大鼠血管平滑肌细胞（ vascular smooth muscle cells，VSMCs）增殖和凋亡的影响及机制。方法：将培养的A7r5细胞随机分组处理，MTT法检测细胞活力，BrdU法检测细胞DNA合成，流式细胞术检测细胞周期进程和细胞凋亡，ELISA检测细胞活性氧簇（ reactive oxygen species，ROS）生成，West－ern blot检测cyclin D1、P21和P27等蛋白的表达，以及蛋白激酶C（ PKC）和P38的磷酸化水平。结果：与正常组比较，高糖组细胞活力显著升高，DNA合成加快，细胞周期加快，P21和P27表达降低，cyclin D1表达增加，ROS水平增加，细胞凋亡率降低，p－PKC和p－P38蛋白水平增加（ P＜0．05）。而芥子酸（0．1、1和10μmol／L）处理引起细胞增殖活性降低，DNA合成减弱，细胞周期受阻，P21和P27表达增加，cyclin D1表达降低，ROS水平降低，细胞凋亡率升高，p－PKC和p－P38蛋白水平降低，且呈一定浓度依赖性（ P＜0．05）。 P38抑制剂SB203580和PKC抑制剂chelerythrine均显著抑制高糖诱导的PKC／P38活化和细胞活力（ P＜0．05）。结论：芥子酸可通过抑制PKC／P38激活降低高糖诱导的VSMCs增殖，并促进细胞凋亡。
作者：裴星；韩勇；张占华；李娜；施遥；张园园；樊一钢；田红燕 刊期： 2016年第07期
目的：探讨程序性死亡因子配体1免疫球蛋白（ PDL1 Ig）基因转染骨髓间充质干细胞（ BMSCs）抑制大鼠原位肝移植免疫排斥反应的机制。方法：培养并鉴定大鼠的BMSCs，重组腺病毒pAdEasy－1／PDL1 Ig感染BMSCs 72 h后，提取细胞总蛋白，采用Western blot法检测转染后BMSCs中PDL1 Ig的蛋白表达。混合淋巴细胞反应检测未转染和转染后的BMSCs对外周血T淋巴细胞活力的抑制作用。以雄性Wistar大鼠为供体，以雄性SD大鼠为受体，采用改良的两袖套法进行原位肝移植，建立大鼠原位肝移植急性排斥反应模型。随机分为对照组、BMSCs治疗组、空载体BMSCs治疗组（ BMSCs／GFP）和转基因治疗组（ BMSCs／PDL1 Ig），每组10对。每组随机取5只于术后第7天处死，检测外周血白细胞介素（ IL）－2、IL－4和干扰素γ（ IFN－γ）水平，检测肝功能情况，光学显微镜下观察移植肝的病理学变化，另外5只观察生存情况及时间。结果：重组pAdEasy－1／PDL1 Ig感染BMSCs 72 h后， BMSCs中有PDL1 Ig的蛋白表达。 BMSCs／PDL1 Ig抑制淋巴细胞活力的作用强于BMSCs／GFP。 BMSCs／PDL1 Ig组的IL－4水平明显高于其它3组，IL－2和IFN－γ水平也明显降低（ P＜0．05）。各实验组移植后7 d检测肝功能，发现BMSCs／PDL1 Ig组的肝功能改善明显，ALT、AST和TBil基本达到正常水平，与对照组比较差异有统计学显著性，与BMSCs治疗组和空载体BMSCs治疗组比较差异也有统计学显著性。肝组织病理检查结果显示对照组移植肝发生了重度排斥反应，BMSCs治疗组和空载体BMSCs治疗组移植肝亦发生排斥反应，但与对照组比较程度较轻， BMSCs／PDL1 Ig组移植肝几乎没有排斥反应，受体存活时间大部分超过100 d，显著长于其它3组（ P＜0．05）。结论：PDL1 Ig修饰的BMSCs可抑制大鼠肝移植排斥反应，诱导肝移植免疫耐受，其效果优于BMSCs单用。
作者：李鹏；李恒平；周东；丁正华；黄卫东；王俊；张玉毅 刊期： 2016年第07期
中国病理生理杂志
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