王丽萍；李莉；姚计文；李博
目的：研究人参皂苷Re对大鼠颈动脉球囊损伤所致血管内膜增生的作用及其对NF－κB p65炎症信号通路的影响。方法：40只SD大鼠随机分组为5组：假手术组，模型组，人参皂苷Re低、中、高剂量组。除假手术组外，其余组大鼠均用2F球囊导管建立颈动脉球囊损伤模型，制模后次日灌胃给药，假手术组和模型组给予等体积蒸馏水，人参皂苷低、中、高剂量组大鼠分别给予12．5、25、50 mg／kg人参皂苷Re。连续给药14 d后取损伤段颈动脉，HE染色观察血管形态学改变，并测定血管管腔面积（ lumen area，LA）、内膜面积（ intima area，IA）、中膜面积（ media area，MA），计算内膜／中膜面积比（ IA／MA）；real－time PCR法检测肿瘤坏死因子－α（ tumor necrosis factor－α， TNF－α）和白细胞介素－1β（ interleukin－1β，IL－1β）的mRNA水平；免疫组织化学法检测血管壁增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）和核因子κB（nuclear factor－kappa B，NF－κB）p65蛋白的表达。结果：与假手术组相比，模型组大鼠血管腔明显变窄（P＜0．01），血管壁TNF－α、IL－1β的mRNA水平及PCNA、NF－κB p65蛋白的表达均明显增高（P＜0．05）；与模型组比较，人参皂苷Re中、高剂量组血管内膜增生明显减轻（P＜0．05），血管壁TNF－α和IL－1β的mRNA水平及PCNA和NF－κB p65的蛋白表达则明显下调（ P＜0．05）。结论：人参皂苷Re能减轻球囊损伤所致大鼠颈动脉内膜增生，其机制可能与抑制NF－κB p65炎症信号通路有关。
作者：高晨盈；王俊逸；罗云梅；罗超；高杨 刊期： 2016年第07期
目的：探讨肾活检组织冰冻切片储存温度对免疫荧光结果的影响。方法：选择2015年1月～2015年6月浙江省人民医院肾脏病科肾脏活检标本100例，将同一肾穿组织同时切两套切片分别储存于－70℃低温冰箱和－12℃冷冻切片机内，其中储存于－70℃低温冰箱的切片作为实验组，储存于－12℃冷冻切片机内的切片作为对照组，次日用直接免疫荧光法检测免疫球蛋白（ IgG、IgA和IgM）、补体（ C3、C4和C1q）及纤维蛋白原，间接免疫荧光法检测Ⅳ型胶原a3和a5链，荧光显微镜下观察定性及半定量结果。结果：实验组3＋～4＋IgG 16例，对应的对照组IgG均为1＋～2＋，阳性强度明显弱于实验组，差异有统计学显著性（ P＜0．05）；实验组3＋～4＋a399例，对照组1＋～2＋a392例，阴性8例；实验组3＋～4＋a599例，对照组1＋～2＋a592例，阴性8例，对照组阳性强度减弱，差异有统计学显著性（P＜0．05）。实验组4＋IgA 15例，3＋IgA 19例，3＋IgM 15例，2＋IgM 11例，4＋C313例，3＋C312例，相对应的对照组阳性强度没有明显减弱，差异无统计学显著性。结论：肾活检冰冻切片免疫荧光结果受切片储存温度影响大，其中对IgG和Ⅳ型胶原免疫荧光阳性强度影响更大，建议肾脏活检组织冰冻切片置于－70℃低温冰箱储存。
作者：赵黎；朱萌华；金娟；龚建光；李一文；何强 刊期： 2016年第07期
目的：研究原花青素单一活性成分B2（PC－B2）对高糖环境下人内皮祖细胞（EPCs）的保护作用及其作用机制。方法：从健康人外周血中分离诱导培养人EPCs，并进行鉴定。将EPCs分为control组（ PBS处理）、高渗对照组（25 mmol／L甘露醇处理）、高浓度30 mmol／L葡萄糖作用组以及不同浓度（2、10和50 mg／L） PC－B2与30 mmol／L葡萄糖共处理组。使用CCK－8法检测各组中EPCs 活力的变化；同时检测各组EPCs 中乳酸脱氢酶（ LDH）、丙二醛（ MDA）、超氧化物歧化酶（ SOD）和还原型谷胱甘肽（ GSH）水平；ELISA方法检测各组EPCs上清中一氧化氮（NO）、内皮素－1（ET－1）、细胞间黏附分子－1（ICAM－1）和血管细胞黏附分子－1（VCAM－1）的含量变化；流式细胞术检测各组中EPCs活性氧簇（ ROS）生成和凋亡率变化；Western blot检测血管内皮生长因子（ VEGF）和血管内皮生长因子受体－2（ VEGFR－2）的表达情况。结果：与control组相比，高糖作用组中人EPCs的活力显著下降（ P＜0．05）；LDH漏出量以及MDA、ET－1、ICAM－1和VCAM－1含量均显著升高（P＜0．05）；而SOD和GSH活性以及NO含量显著降低（ P＜0．05）；细胞中ROS含量和凋亡率显著上升（ P＜0．05）；EPCs中VEGF和VEGFR－2表达量显著降低（P＜0．05）。与高糖作用组相比，不同浓度PC－B2作用组EPCs活力均明显回升（P＜0．05）；LDH漏出量以及MDA、ET－1、ICAM－1和VCAM－1含量均逐渐下降（ P＜0．05）；SOD和GSH活性以及NO含量均显著上升（ P＜0．05）；细胞中ROS生成和凋亡率逐渐下降（ P＜0．05）；而EPCs中VEGF和VEGFR－2表达量也随之逐渐上升，并具有浓度依赖性（ P＜0．05）。结论： PC－B2能够提升高糖作用下人EPCs活力，减少高糖引起的氧化损伤，恢复EPCs正常功能，降低高糖诱导的炎症因子和细胞凋亡，从而对人EPCs发挥保护作用，并可通过诱导VEGFR－2和VEGF表达发挥作用。
作者：王丽萍；李莉；姚计文；李博 刊期： 2016年第07期
目的：探讨微小RNA－193b（miR－193b）在不同宫颈组织中的表达以及其对顺铂作用于宫颈癌细胞敏感性的影响，并初步探讨其作用机制。方法：实时荧光定量PCR（qPCR）检测不同宫颈组织中miR－193b的表达水平。采用脂质体将miR－193b－inhibitor转染至HeLa细胞，Transwell法、CCK－8法和免疫蛋白印迹法分别检测细胞迁移数、细胞对顺铂的敏感性以及细胞中PTEN、Akt、p－Akt和P－糖蛋白（ P－gp）的蛋白水平。结果： qPCR结果显示miR－193b在正常宫颈组织及宫颈糜烂组织中呈低表达，在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中的表达明显上升；转染miR－193b－inhibitor后，HeLa细胞迁移数明显减少（P＜0．05），顺铂对HeLa细胞活力的抑制作用进一步增强（P＜0．05），细胞中PTEN的蛋白表达明显上调（P＜0．05），Akt的蛋白表达无明显变化，p－Akt和P－gp的蛋白水平明显下调（ P＜0．05）。结论：miR－193b在宫颈癌组织中呈高表达，沉默miR－193b可增加HeLa细胞对顺铂的敏感性，作用机制可能与PTEN－PI3 K／Akt通路有关。
作者：杜文霞；姬霞 刊期： 2016年第07期
目的：建立重症急性胰腺炎大鼠模型，研究生长抑素（奥曲肽）联合大柴胡汤对急性重症胰腺炎的作用及初步机制。方法：50只大鼠随机分为假手术组、模型组、奥曲肽组、大柴胡汤组与联合组，经相应处理后记录腹水量，测定血清中淀粉酶（ amylase，AMY）、丙氨酸氨基转移酶（ alanine aminotransferase，ALT）和肌酐（ creatinine， Cr）的水平，HE染色后观察胰腺组织形态，Western blot检测胰腺细胞核中NF－κB与细胞中IκBα的蛋白表达水平， qPCR检测胰腺细胞中ICAM－1与IL－1的mRNA表达水平。结果：生长抑素联合大柴胡汤能有效降低重症急性胰腺炎大鼠的腹水量以及血清中AMY、ALT和Cr的水平；重症急性胰腺炎可导致胰腺细胞核NF－κB蛋白表达升高，IκBα蛋白表达降低，ICAM－1和IL－1 mRNA表达升高。生长抑素联合大柴胡汤可逆转这些改变。结论：生长抑素联合大柴胡汤可以减轻大鼠的急性重症胰腺炎，其机制可能与抑制NF－κB信号通路以及ICAM－1和IL－1表达有关。
作者：冯辉；吴标；赵习德；郭宝瑞 刊期： 2016年第07期
目的：探讨adipolin／CTRP12对LPS致ARDS小鼠的作用及肺泡上皮钠离子通道（ ENaC）的调节。方法：40只C57BL／6J小鼠按随机数字表分为对照组、LPS组、adipolin组和wortmannin（PI3K抑制剂）组，每组10只。苏木精－伊红（HE）染色观察肺组织病理改变；伊文氏蓝标记蛋白检测肺水清除率（AFC），BCA法测支气管肺泡灌洗液（BALF）中蛋白含量，评估肺组织通透性改变；ELISA检测BALF中白细胞介素（IL）－1β和肿瘤坏死因子（ TNF）－α含量，髓过氧化物酶（ MPO）试剂盒检测MPO活性，吉姆萨染色计数BALF总细胞数和多形核白细胞数， Western blot法检测肺组织α－ENaC蛋白表达和Akt磷酸化水平，实时荧光定量PCR检测肺组织α－ENaC的mRNA转录水平。结果：与control组相比，LPS组表现出典型的ARDS病理改变，肺损伤明显（P＜0．05），湿干重比（W／D）和BALF蛋白含量明显增高而AFC明显减弱（P＜0．05），BALF细胞计数、MPO活性、IL－1β含量和TNF－α含量明显升高（P＜0．05），而肺α－ENaC表达和Akt磷酸化水平显著下调（P＜0．05）。与LPS组相比，adipolin组肺损伤明显减轻（P＜0．05），W／D和BALF蛋白含量明显降低而AFC明显增强（P＜0．05），且BALF细胞计数、MPO活性、IL－1β含量和TNF－α含量均较LPS组显著降低（P＜0．05），伴α－ENaC表达和Akt磷酸化水平显著上调（P＜0．05）。而PI3K抑制剂wortmannin组与adipolin组相比，其肺损伤明显加重（P＜0．05），W／D和BALF蛋白含量明显增高， AFC明显减弱（P＜0．05），BALF细胞计数、MPO活性、IL－1β含量和TNF－α含量明显升高（P＜0．05），同时伴α－ENaC表达和Akt磷酸化水平显著下调（P＜0．05）。结论： Adipolin／CTRP12可通过PI3K／Akt信号通路介导的α－ENaC上调机制，增强肺水肿液清除能力，从而对LPS所致ARDS小鼠发挥保护性调控作用。
作者：唐旭毛；戚迪；王导新 刊期： 2016年第07期
目的：探究青蒿素对脂多糖（ lipopolysaccharide， LPS）诱导的大鼠肠上皮IEC－6细胞屏障功能损伤的影响。方法：体外培养IEC－6细胞，随机分为5组：对照组、LPS （100 mg／L ）组和LPS＋青蒿素（30、50和100μmol／L）组，MTT法检测各组细胞毒性变化，ELISA检测各组细胞分泌炎性因子TNF－α、IL－1β和IL－6水平的变化，电阻仪检测肠上皮细胞跨上皮电阻（TER），酶标仪检测单层细胞对辣根过氧化物酶（HRP）的通透性，RT－qPCR和Western blot检测各组细胞紧密连接蛋白（ ZO－1、claudin－1和occludin）以及TLR4／MyD88／NF－κB mRNA和蛋白表达的变化。结果：LPS与青蒿素在本实验浓度范围对IEC－6细胞均无毒性。与对照组相比， LPS处理下，细胞分泌TNF－α、IL－1β和IL－6水平以及TLR4／MyD88／NF－κB的mRNA和蛋白表达明显增加，ZO－1、claudin－1和occludin的mRNA和蛋白表达降低。而青蒿素干预下，细胞分泌TNF－α、IL－1β和IL－6水平以及TLR4／MyD88／NF－κB mRNA和蛋白表达明显降低，ZO－1、claudin－1和occludin的mRNA和蛋白表达升高（P＜0．05），均呈现浓度依赖性。结论：青蒿素可能通过抑制TLR4／MyD88／NF－κB通路减轻LPS诱导的肠上皮细胞屏障功能损伤。
作者：孙俊波；赵璐；史素琴；寇振媛；刘爱娟；付婷婷 刊期： 2016年第07期
目的：探讨慢性间歇性低氧对幼鼠脑区腺苷酸活化蛋白激酶（ AMP－activated protein kinase， AMPK）通路的影响。方法：第一部分：将3～4周龄的SD幼鼠随机分为4组（ n＝8）：2周空气模拟对照（2AC）组、2周慢性间歇低氧（2IH）组、4周空气模拟对照（4AC）组和4周慢性间歇低氧（4IH）组。第二部分：将3～4周龄的SD幼鼠随机分为2组（n＝8）：4周慢性间歇性低氧组（4IH）和4周慢性间歇性低氧用药组（4IHI）。造模结束后行八臂迷宫测试，TUNEL法检测细胞凋亡，RT－qPCR法了解腺苷A2a受体的mRNA表达，Western blot法测定AMPK及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（ mammalian target of rapamycin，mTOR）的磷酸化水平。结果：与对照组相比，2IH组和4IH组的参考记忆错误（RME）、工作记忆错误（WME）和总错误（TE）次数明显增加，差异有统计学显著性（P＜0．01）；4IH与2IH组比较，各项错误次数亦明显增加（P＜0．01）。4IHI组比4IH组RME、WME和TE次数减少，差异有统计学显著性（P＜0．01）。与对照组相比，2IH组和4IH组海马和前额皮层区的神经元凋亡增多，以4IH组凋亡明显（P＜0．05）；4IHI组凋亡较4IH组减少（P＜0．05）。2IH组和4IH组海马和前额皮层区腺苷受体A2a的mRNA和AMPK磷酸化蛋白的水平升高，mTOR磷酸化蛋白的水平下降，4IH 组较2IH 组改变明显（P＜0．05）。4IHI组较4IH组海马和前额皮层区的AMPK磷酸化蛋白水平下降，mTOR磷酸化蛋白水平升高（ P＜0．05）。结论：慢性间歇性低氧诱导神经元凋亡，从而引起幼鼠学习记忆障碍，呈时间依赖性。慢性间歇性低氧上调腺苷A2 a受体，激活海马和前额皮层区AMPK，抑制mTOR的活性，诱导神经元凋亡，进而影响幼鼠学习记忆能力。
作者：梁冬施；陈利亚；洪芳芳；林晶；温正旺；李秀翠；蔡晓红 刊期： 2016年第07期
目的：探讨上调星形胶质细胞中蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A，PP2A）对APP／PS1双转基因小鼠的神经保护作用。方法：构建带胶质细胞原纤维酸性蛋白启动子的eGFP－wtPP2A慢病毒，特异性上调星形胶质细胞中的PP2A。将实验小鼠随机分为野生对照＋慢病毒空载体组（ Con组）、APP／PS1双转基因小鼠＋慢病毒空载体组（ APP／PS1组）和APP／PS1双转基因小鼠＋慢病毒感染组（ PP2A组），各组小鼠经侧脑室注射慢病毒4周后，采用脑片免疫荧光检测β－淀粉样蛋白（β－amyloid protein，Aβ）的水平，通过Golgi染色观察树突棘密度和形态学变化，电镜检测突触后致密物（ postsynaptic density，PSD）的厚度，Morris水迷宫定位航行实验检测感染慢病毒后对学习和记忆的影响。结果：上调星形胶质细胞中PP2A降低APP／PS1双转基因小鼠Aβ的水平，增加树突棘密度、有突触功能的蘑菇状树突棘比例和PSD厚度，缩短寻找平台逃避潜伏期。结论：上调星形胶质细胞中PP2A改善APP／PS1双转基因小鼠AD样Aβ聚集的病理改变，具有重塑突触结构与功能和改善学习记忆能力的作用。
作者：李夏春；彭敏峰；高丽华；楼正青；柳秀平 刊期： 2016年第07期
目的：探讨钙卫蛋白（ CALP）在肾脏缺血再灌注损伤（ IRI）大鼠中的表达及其在炎症反应中的作用。方法：50只雄性SD大鼠随机分为IRI组和假手术组（ sham组），每组25只。各组分别于缺血再灌注后6 h、12 h、24 h、48 h和72 h观察肾脏病理改变，检测大鼠血清尿素氮（BUN）和肌酐（SCr）水平，ELISA法检测大鼠血清CALP、肿瘤坏死因子（ TNF）－α和白细胞介素（ IL）－6的含量，免疫组织化学法和Western blot法分别检测大鼠肾脏CALP、Toll样受体4（ TLR4）和NF－κB p65蛋白表达水平。结果：IRI组大鼠肾脏呈现不同程度的肾小管上皮细胞和间质损伤，伴炎细胞浸润。血清BUN、SCr、CALP及促炎细胞因子TNF－α、IL－6的含量在各时点均显著高于sham组（ P＜0．05）。 CALP、TLR4和NF－κB p65主要表达于肾小管上皮细胞胞质中，在IRI组呈高表达，在各时点各因子的表达与sham组相比均显著增强（ P＜0．05）。结论：肾脏IRI大鼠的血清CALP、TNF－α和IL－6水平升高， CALP、TLR4和NF－κB p65在肾组织中表达增强。 CALP在大鼠肾脏IRI的炎症反应中可能起重要作用。
作者：陈萍祯；朱晔；张慧涛；徐晓嫦；郑晶；贾宁；林宇静；李玲玲；张桦 刊期： 2016年第07期
目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂伏立诺他（即辛二酰苯胺异羟肟酸，SAHA）在惊厥性脑损伤发病中的作用及机制。方法：32只雄性SD大鼠随机分为control组、戊四唑（ pentylenetetrazole，PTZ）组、PTZ＋10 mg／kg SAHA组及PTZ＋50 mg／kg SAHA组，通过腹腔注射PTZ制作发育期大鼠惊厥模型，SAHA于PTZ诱导惊厥前2 h腹腔注射给药。本实验中PTZ造模成功率约85％，注射后约30 min到1 h后出现惊厥发作，评估惊厥发作的等级。惊厥后24 h处死大鼠，RT－qPCR及Western blot检测海马组织TLR4、MYD88、NF－κB P65和IL－1βmRNA及相应蛋白的表达；HE染色观察脑组织病理变化；TUNEL染色检测大鼠海马神经元凋亡。结果：（1） PTZ组均达到Ⅳ～V级惊厥发作，而SAHA预处理能减轻惊厥发作的等级；（2） PTZ组大鼠海马组织中TLR4、MYD88、NF－κB P65和IL－1βmRNA及相应蛋白的表达均较对照组显著增高（P＜0．05），而SAHA预处理能抑制mRNA和相应蛋白表达水平的增高；（3） HE染色可见PTZ组明显的细胞水肿及神经元凋亡，伴有较多的炎症细胞浸润，而SAHA预处理能减轻细胞水肿及神经元凋亡，同时减少炎症细胞浸润；（4）大鼠海马组织中的神经元凋亡数PTZ组较对照组显著增加（P＜0．05），而SAHA预处理能抑制海马神经元的凋亡；（5）相对于10 mg／kg SAHA治疗组，50 mg／kg SAHA治疗作用更明显（ P＜0．05）。结论：组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA能抑制惊厥后TLR4／MYD88炎症信号通路和海马神经元的凋亡，从而减少炎症反应及惊厥性脑损伤。
作者：胡擎鹏；黄湘壹 刊期： 2016年第07期
自人类微生物组计划启动以来，研究发现人体肠道内存在有1000多种共生菌，主要包括 Bacte－roidetes、Firmicutes、Proteobacteria等菌门［1］，它们寄居在肠道的不同部位，通过特有的菌群结构、菌群活动、代谢产物等来影响机体的新陈代谢，维持机体内环境稳态［2］。它们相对稳定，却又受到年龄、遗传背景及生活环境的影响，在数量、结构、菌群丰度及生理状态方面表现出明显的差异。近年来，肠道菌群的差异受到国内外研究者的广泛关注，相关研究证明［1－3］，肠道菌群与肥胖、免疫相关疾病、癌症等疾病密切相关，不同个体之间肠道菌群的差异不仅造成宿主不同的生理状态，而且还会通过影响5－HT的产生来影响宿主的精神状态。同时，这种差异也提示了在疾病治疗、康复等方面，应存在个性化的营养和药物治疗策略。本文就近年来肠道菌群差异相关的影响因素及其对机体的影响做一综述。
作者：罗再；曾巨丹；冯琛卓 刊期： 2016年第07期
目的：探讨SHARPIN对去势抵抗性前列腺癌细胞LNCaP－AI坏死性凋亡关键因子Rip1的调控作用，以及对细胞坏死性凋亡的影响。方法：将LNCaP－AI细胞分为TNF－α＋Z－VAD（ caspase抑制剂）处理组与TNF－α＋Z－VAD＋Nec－1（Rip1抑制剂）处理组，应用MTS检测各组细胞的活力，研究坏死性凋亡机制在诱导LNCaP－AI细胞死亡中的作用。将LNCaP－AI细胞分为阴性对照组和SHARPIN干扰（ si－SHARPIN）组，RT－qPCR验证抑制效率，通过免疫荧光等技术进一步探讨SHARPIN调控坏死性凋亡的具体分子机制。结果：与对照组相比，TNF－α＋Z－VAD处理组的LNCaP－AI细胞活力下降28％（P＜0．05），而TNF－α＋Z－VAD ＋Nec－1处理组的细胞在Rip1被抑制后，细胞活力无明显改变。在LNCaP－AI细胞中，通过siRNA抑制SHARPIN表达后，Rip1表达水平上调，同时， LNCaP－AI细胞坏死性凋亡比例升高。结论：LNCaP－AI细胞可通过坏死性凋亡机制诱导死亡，下调SHARPIN可能通过激活Rip1增强LNCaP－AI细胞坏死性凋亡。
作者：王淦平；黄海；陈贤举；赖义明；林春浩；曾乐祥；曹亿；张一鸣；余永晟；郭正辉 刊期： 2016年第07期
目的：观察蛋白酶体抑制剂MG132诱导SH－SY5Y细胞凋亡及调节β－淀粉样蛋白（ beta－amyloid protein，Aβ）生成的作用，并对其机制进行探讨。方法：培养SH－SY5Y细胞，MG132对细胞进行处理，浓度分别为2．5μmol／L、5μmol／L和10μmol／L，24 h后检测各项指标。 MTT法检测细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡；ELISA法检测细胞Aβ1－40和Aβ1－42水平；Western blot检测淀粉样蛋白前体蛋白（ amyloid precursor protein，APP）、β－分泌酶（BACE1）、早老蛋白1（presenilins 1，PS1）、早老蛋白2（presenilins 2，PS2）、nicastrin（NCT）和α－分泌酶（ADAM10）蛋白表达。结果：经MG132处理后，细胞活力明显下降，诱导细胞凋亡，随剂量增加凋亡率分别为36．97％、46．20％、50．50％；细胞Aβ1－42和Aβ1－40蛋白水平明显上升； APP及Aβ代谢相关蛋白PS1、PS2和BACE1表达均出现剂量依赖性的增加，而ADAM10表达呈剂量依赖性降低；NCT水平变化不明显。结论： MG132能诱导神经细胞凋亡，通过影响Aβ生成途径关键蛋白而促进Aβ的产生，说明蛋白酶体活性下降可通过调节Aβ途径参与阿尔茨海默病的发生。
作者：王浩；孙利利；于杨；杨艳茹；马健；陈伟；张继国；秦树存 刊期： 2016年第07期
目的：构建生长激素促泌素受体1a（ growth hormone secretagogue receptor 1a，GHSR1a）基因短发夹干扰RNA（ short hairpin RNA，shRNA）慢病毒载体，感染人结直肠癌细胞系SW480，观察沉默GHSR1a基因对SW480细胞生长的影响，并探讨其作用机制。方法：构建特异性靶向GHSR1a基因的shRNA慢病毒表达载体和阴性对照序列慢病毒载体；建立稳定表达GHSR1a shRNA的SW480细胞、阴性对照细胞（NC）及空白对照细胞（BC），RT－PCR检测GHSR1a的mRNA在细胞中的表达；通过Western blot技术检测细胞中GHSR1a、ghrelin、PTEN、p－AKT及p53蛋白的水平；CCK－8法测定GHSR1a shRNA对SW480细胞活力的影响；建立裸鼠结直肠癌皮下移植瘤模型，实验结束后处死裸鼠并测量各组裸鼠肿瘤重量；免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki－67和PTEN的阳性表达。结果：在体外实验中，GHSR1a在人结直肠癌细胞株Caco－2及SW480中的表达明显高于人正常结肠上皮细胞株NCM460的表达；成功建立了稳定表达GHSR1a shRNA的SW480细胞；GHSR1a shRNA能明显抑制SW480细胞GHSR1a mRNA及蛋白的表达；沉默GHSR1a基因后SW480细胞活力明显减弱；与NC组相比较，GHSR1a shRNA组细胞中PTEN mRNA及蛋白水平上调，AKT磷酸化被抑制，p53的表达明显增加；在体内实验中，与NC组相比较，GHSR1a shRNA组裸鼠结直肠癌皮下移植瘤重量明显减轻，同时Ki－67表达下调，PTEN表达上调。结论：慢病毒介导的GHSR1a shRNA对体内、外人结肠癌细胞的生长有明显抑制作用，该作用可能通过上调PTEN及其下游PI3K／AKT通路实现。
作者：刘岸；黄成钢；徐佳 刊期： 2016年第07期
目的：探讨开放ATP敏感性钾通道（KATP通道）能否抑制Toll样受体4（TLR4）／核因子－κB（NF－κB）通路对抗高糖（ HG）引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症。方法：应用Western blot测定TLR4和NF－κB p65的蛋白水平；应用ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素－1β（ IL－1β）和肿瘤坏死因子－α（ TNF－α）的水平；采用细胞计数试剂盒8（CCK－8）测定心肌细胞存活率；罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位（MMP）；双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定细胞内活性氧簇（ ROS）水平；Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法检测凋亡细胞数量。结果：H9c2心肌细胞经HG（35 mmol／L葡萄糖）处理24 h，胞内TLR4和磷酸化NF－κB p65（p－NF－κB p65）的蛋白水平明显增加，100μmol／L KATP通道开放剂二氮嗪（ DZ）预处理30 min可抑制HG对TLR4和p－NF－κB p65蛋白水平的上调作用；此外，30μmol／L TAK－242（ TLR4抑制剂）和HG共处理心肌细胞24 h也可减轻HG对p－NF－κB p65的上调作用。另一方面，100μmol／L DZ预处理有明确的心肌保护作用，可抑制HG引起的细胞毒性、炎症反应、线粒体损伤、氧化应激和细胞凋亡，使细胞存活率升高，并减少IL－1β和TNF－α分泌水平、MMP丢失、ROS生成及凋亡细胞数量；而30μmol／L TAK－242或100μmol／L PDTC（ NF－κB抑制剂）共处理心肌细胞24 h也可发挥和DZ相类似的作用，能抑制HG引起的上述损伤和炎症反应。结论：开放KATP通道可通过抑制TLR4／NF－κB通路对抗HG引起的H9 c2肌细胞损伤和炎症。
作者：梁伟杰；陈美姬；何洁仪；黄惠敏；余盛龙；陈君；陈景福；宋明才；廖新学 刊期： 2016年第07期
目的：探究固醇调节元件结合蛋白2（SREBP－2）对衣霉素诱导的软骨细胞内质网应激（ERS）的影响。方法：分离人正常软骨细胞和骨关节炎（ OA）软骨细胞培养，衣霉素和SREBP－2 siRNA分别处理正常软骨细胞。24 h后，实时荧光定量PCR检测对微小RNA－185（miR－185）表达的影响，流式细胞术检测对细胞凋亡的影响， Western blot法检测对SREBP－2、CHOP、p－eIF2α和ATF4等ERS相关蛋白，Bcl－2、Bax和caspase－3等凋亡相关蛋白水平的影响；caspase－3活性试剂盒检测对细胞caspase－3活性的影响。结果：与对照组相比， OA组和衣霉素组SREBP－2表达增加，miR－185表达降低（ P＜0．05）。 SREBP－2 siRNA转染可明显阻断衣霉素引起的miR－185降低（P＜0．05）。miR－185过表达能够下调SREBP－2蛋白水平（P＜0．05）。与对照组相比，OA组和衣霉素组CHOP、p－eIF2α和ATF4的蛋白水平明显上调，Bcl－2表达下调，Bax和caspase－3表达增加（P＜0．05）；SREBP－2沉默处理则显著逆转上述蛋白表达（P＜0．05）。细胞凋亡率与上述细胞凋亡相关蛋白的变化趋势一致（P＜0．05）。与衣霉素组相比，SREBP－2 siRNA转染明显下调 caspase－3活性， miR－185抑制则明显逆转上述作用（ P ＜0．05）。结论：SREBP－2沉默可通过上调miR－185抑制衣霉素诱导的软骨细胞ERS和细胞凋亡。
作者：谢静；史栋梁；郭会卿 刊期： 2016年第07期
目的：探讨程序性死亡因子配体1免疫球蛋白（ PDL1 Ig）基因转染骨髓间充质干细胞（ BMSCs）抑制大鼠原位肝移植免疫排斥反应的机制。方法：培养并鉴定大鼠的BMSCs，重组腺病毒pAdEasy－1／PDL1 Ig感染BMSCs 72 h后，提取细胞总蛋白，采用Western blot法检测转染后BMSCs中PDL1 Ig的蛋白表达。混合淋巴细胞反应检测未转染和转染后的BMSCs对外周血T淋巴细胞活力的抑制作用。以雄性Wistar大鼠为供体，以雄性SD大鼠为受体，采用改良的两袖套法进行原位肝移植，建立大鼠原位肝移植急性排斥反应模型。随机分为对照组、BMSCs治疗组、空载体BMSCs治疗组（ BMSCs／GFP）和转基因治疗组（ BMSCs／PDL1 Ig），每组10对。每组随机取5只于术后第7天处死，检测外周血白细胞介素（ IL）－2、IL－4和干扰素γ（ IFN－γ）水平，检测肝功能情况，光学显微镜下观察移植肝的病理学变化，另外5只观察生存情况及时间。结果：重组pAdEasy－1／PDL1 Ig感染BMSCs 72 h后， BMSCs中有PDL1 Ig的蛋白表达。 BMSCs／PDL1 Ig抑制淋巴细胞活力的作用强于BMSCs／GFP。 BMSCs／PDL1 Ig组的IL－4水平明显高于其它3组，IL－2和IFN－γ水平也明显降低（ P＜0．05）。各实验组移植后7 d检测肝功能，发现BMSCs／PDL1 Ig组的肝功能改善明显，ALT、AST和TBil基本达到正常水平，与对照组比较差异有统计学显著性，与BMSCs治疗组和空载体BMSCs治疗组比较差异也有统计学显著性。肝组织病理检查结果显示对照组移植肝发生了重度排斥反应，BMSCs治疗组和空载体BMSCs治疗组移植肝亦发生排斥反应，但与对照组比较程度较轻， BMSCs／PDL1 Ig组移植肝几乎没有排斥反应，受体存活时间大部分超过100 d，显著长于其它3组（ P＜0．05）。结论：PDL1 Ig修饰的BMSCs可抑制大鼠肝移植排斥反应，诱导肝移植免疫耐受，其效果优于BMSCs单用。
作者：李鹏；李恒平；周东；丁正华；黄卫东；王俊；张玉毅 刊期： 2016年第07期
目的：探讨胰高血糖素样肽－l（ GLP－1）对非酒精性脂肪肝大鼠SOCS－3和SREBP－1c mRNA表达的影响。方法：将雄性SD大鼠32只随机分为正常对照（ NC）组、高脂（ HF）组和HF＋利拉鲁肽（ Lira）组。 HF组和HF＋Lira组给予高脂饲料喂养16周，HF＋Lira组高脂喂养12周后，给予Lira 600μg? kg－1? d－1腹腔注射4周。在16周末处死大鼠。全自动生化仪检测血清ALT、AST、甘油三酯（ TG）和总胆固醇（ TC）；GPO－PAP 法测定肝脏TG含量；酶联免疫法测定空腹胰岛素，并计算胰岛素抵抗指数（ HOMA－IR）；光学显微镜下观察肝脏病理变化；RT－qPCR法测定肝组织SOCS－3和SREBP－1c的mRNA表达水平。结果：与NC组相比，HF组血清ALT、AST、TG、TC、肝TG、FINS及HOMA－IR均明显升高（P＜0．01）；HF＋Lira组与HF组相比，血清的ALT、AST、TG、TC、肝TG、FINS及HOMA－IR均下降，差异有统计学显著性（P＜0．05）。 HF组肝组织SOCS－3和SREBP－1c的mRNA表达水平较NC组显著增强（P＜0．01）；HF＋Lira组较HF组SOCS－3和SREBP－1c的mRNA表达显著下降（P＜0．05）。结论：Lira可能通过下调肝组织SOCS－3和SREBP－1c的mRNA表达，改善 IR，减少肝脏TG沉积，从而对非酒精性脂肪性肝病起到治疗作用。
作者：侯洪涛；裘艳梅；张建；胡义亭；苏少慧；王玉珍 刊期： 2016年第07期
目的：研究蛋白基因产物9．5（PGP9．5）在宫颈癌病理标本中的表达与宫颈癌临床病理特征及预后的关系，并初步探讨利用PGP9．5－siRNA靶向治疗宫颈癌的潜在价值。方法：回顾性分析2008年1月～2015年6月在天津市第五中心医院妇科及天津市中心妇产科医院接受手术治疗并经病理确诊的180例宫颈癌患者临床资料。所有患者宫颈癌病理标本制作病理切片并进行SP法免疫组化染色。以PGP9．5染色后评分为依据将患者分为PGP9．5高表达组和PGP9．5低表达组。观察2组患者年龄、HPV感染、病理分级、肿瘤直径、淋巴结转移、浸润深度、累及脉管和临床分期等临床病理学参数的关系。采用Kaplan－Meier法和log－rank检验进行生存分析。采用PGP9．5－siRNA、NC－siRNA、PGP9．5真核表达质粒和对照空质粒按照脂质体载体试剂说明书转染SiHa细胞，设立si－PGP9．5组、NC组、PGP9．5组和vector组。同时设立SiHa细胞空白对照（ control）组。分别采用Western blot 实验、平板克隆形成实验和Transwell实验分析5组细胞PGP9．5蛋白的表达水平、克隆形成能力和侵袭能力。结果：2组患者病理分级、肿瘤直径、淋巴结转移、浸润深度、累及脉管和临床分期等临床病理参数与PGP9．5表达水平有关。 PGP9．5高表达组患者3、5年总体生存率明显低于PGP9．5低表达组患者。与control组相比，si－PGP9．5组Si－Ha细胞中PGP9．5蛋白的表达量明显降低，克隆形成数量明显减少，过膜细胞数量明显减少；PGP9．5组SiHa细胞中PGP9．5蛋白的表达量明显升高，克隆形成数量明显增多，过膜细胞数量明显增加。结论： PGP9．5蛋白高表达预示宫颈癌患者预后不良，可能成为预测宫颈癌患者预后的良好指标，对其表达进行抑制可能实现对宫颈癌的有效基因治疗。
作者：靳荣；李红芳；张立东 刊期： 2016年第07期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
