罗再；曾巨丹；冯琛卓
目的：探究白细胞介素（IL）－22对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLSs）功能的影响及机制。方法：组织块法培养RA－FLSs。将不同浓度（0、1、10、100μg／L）的重组人源性IL－22（rhIL－22）与RA－FLSs共培养24 h、48 h、72 h，CCK－8法检测细胞活力的改变；利用10μg／L的rhIL－22作用于RA－FLSs 24 h，流式细胞术检测细胞周期改变。 rhIL－22和／或信号转导和转录因子3（ STAT3）特异性抑制剂STA－21以不同浓度作用RA－FLSs 24 h，Western blot法检测Bcl－2和p－STAT3蛋白水平的变化。结果：不同浓度的rhIL－22作用于RA－FLSs 24 h、48 h、72 h后，RA－FLSs细胞活力明显增高，均显著高于对照组（P＜0．05）。 rhIL－22刺激RA－FLSs后，S期和G2／M期细胞明显增多，G0／G1期细胞减少。 Western blot法检测结果提示rhIL－22可上调RA－FLSs中Bcl－2、p－STAT3的蛋白水平，而STA－21单用或联用rhIL－22均可抑制RA－FLSs中Bcl－2及p－STAT3的表达（ P＜0．05）。结论：IL－22在RA－FLSs细胞活力和周期调节中起重要作用，且STAT3在IL－22促RA－FLSs细胞Bcl－2表达的过程中起关键作用，提示IL－22可能对RA－FLSs凋亡有一定的影响。
作者：刘梦；刘岩；杨梦如；莫碧瑶；潘云峰 刊期： 2016年第07期
目的：构建生长激素促泌素受体1a（ growth hormone secretagogue receptor 1a，GHSR1a）基因短发夹干扰RNA（ short hairpin RNA，shRNA）慢病毒载体，感染人结直肠癌细胞系SW480，观察沉默GHSR1a基因对SW480细胞生长的影响，并探讨其作用机制。方法：构建特异性靶向GHSR1a基因的shRNA慢病毒表达载体和阴性对照序列慢病毒载体；建立稳定表达GHSR1a shRNA的SW480细胞、阴性对照细胞（NC）及空白对照细胞（BC），RT－PCR检测GHSR1a的mRNA在细胞中的表达；通过Western blot技术检测细胞中GHSR1a、ghrelin、PTEN、p－AKT及p53蛋白的水平；CCK－8法测定GHSR1a shRNA对SW480细胞活力的影响；建立裸鼠结直肠癌皮下移植瘤模型，实验结束后处死裸鼠并测量各组裸鼠肿瘤重量；免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki－67和PTEN的阳性表达。结果：在体外实验中，GHSR1a在人结直肠癌细胞株Caco－2及SW480中的表达明显高于人正常结肠上皮细胞株NCM460的表达；成功建立了稳定表达GHSR1a shRNA的SW480细胞；GHSR1a shRNA能明显抑制SW480细胞GHSR1a mRNA及蛋白的表达；沉默GHSR1a基因后SW480细胞活力明显减弱；与NC组相比较，GHSR1a shRNA组细胞中PTEN mRNA及蛋白水平上调，AKT磷酸化被抑制，p53的表达明显增加；在体内实验中，与NC组相比较，GHSR1a shRNA组裸鼠结直肠癌皮下移植瘤重量明显减轻，同时Ki－67表达下调，PTEN表达上调。结论：慢病毒介导的GHSR1a shRNA对体内、外人结肠癌细胞的生长有明显抑制作用，该作用可能通过上调PTEN及其下游PI3K／AKT通路实现。
作者：刘岸；黄成钢；徐佳 刊期： 2016年第07期
目的：研究蛋白基因产物9．5（PGP9．5）在宫颈癌病理标本中的表达与宫颈癌临床病理特征及预后的关系，并初步探讨利用PGP9．5－siRNA靶向治疗宫颈癌的潜在价值。方法：回顾性分析2008年1月～2015年6月在天津市第五中心医院妇科及天津市中心妇产科医院接受手术治疗并经病理确诊的180例宫颈癌患者临床资料。所有患者宫颈癌病理标本制作病理切片并进行SP法免疫组化染色。以PGP9．5染色后评分为依据将患者分为PGP9．5高表达组和PGP9．5低表达组。观察2组患者年龄、HPV感染、病理分级、肿瘤直径、淋巴结转移、浸润深度、累及脉管和临床分期等临床病理学参数的关系。采用Kaplan－Meier法和log－rank检验进行生存分析。采用PGP9．5－siRNA、NC－siRNA、PGP9．5真核表达质粒和对照空质粒按照脂质体载体试剂说明书转染SiHa细胞，设立si－PGP9．5组、NC组、PGP9．5组和vector组。同时设立SiHa细胞空白对照（ control）组。分别采用Western blot 实验、平板克隆形成实验和Transwell实验分析5组细胞PGP9．5蛋白的表达水平、克隆形成能力和侵袭能力。结果：2组患者病理分级、肿瘤直径、淋巴结转移、浸润深度、累及脉管和临床分期等临床病理参数与PGP9．5表达水平有关。 PGP9．5高表达组患者3、5年总体生存率明显低于PGP9．5低表达组患者。与control组相比，si－PGP9．5组Si－Ha细胞中PGP9．5蛋白的表达量明显降低，克隆形成数量明显减少，过膜细胞数量明显减少；PGP9．5组SiHa细胞中PGP9．5蛋白的表达量明显升高，克隆形成数量明显增多，过膜细胞数量明显增加。结论： PGP9．5蛋白高表达预示宫颈癌患者预后不良，可能成为预测宫颈癌患者预后的良好指标，对其表达进行抑制可能实现对宫颈癌的有效基因治疗。
作者：靳荣；李红芳；张立东 刊期： 2016年第07期
目的：探讨SHARPIN对去势抵抗性前列腺癌细胞LNCaP－AI坏死性凋亡关键因子Rip1的调控作用，以及对细胞坏死性凋亡的影响。方法：将LNCaP－AI细胞分为TNF－α＋Z－VAD（ caspase抑制剂）处理组与TNF－α＋Z－VAD＋Nec－1（Rip1抑制剂）处理组，应用MTS检测各组细胞的活力，研究坏死性凋亡机制在诱导LNCaP－AI细胞死亡中的作用。将LNCaP－AI细胞分为阴性对照组和SHARPIN干扰（ si－SHARPIN）组，RT－qPCR验证抑制效率，通过免疫荧光等技术进一步探讨SHARPIN调控坏死性凋亡的具体分子机制。结果：与对照组相比，TNF－α＋Z－VAD处理组的LNCaP－AI细胞活力下降28％（P＜0．05），而TNF－α＋Z－VAD ＋Nec－1处理组的细胞在Rip1被抑制后，细胞活力无明显改变。在LNCaP－AI细胞中，通过siRNA抑制SHARPIN表达后，Rip1表达水平上调，同时， LNCaP－AI细胞坏死性凋亡比例升高。结论：LNCaP－AI细胞可通过坏死性凋亡机制诱导死亡，下调SHARPIN可能通过激活Rip1增强LNCaP－AI细胞坏死性凋亡。
作者：王淦平；黄海；陈贤举；赖义明；林春浩；曾乐祥；曹亿；张一鸣；余永晟；郭正辉 刊期： 2016年第07期
目的：探讨肾活检组织冰冻切片储存温度对免疫荧光结果的影响。方法：选择2015年1月～2015年6月浙江省人民医院肾脏病科肾脏活检标本100例，将同一肾穿组织同时切两套切片分别储存于－70℃低温冰箱和－12℃冷冻切片机内，其中储存于－70℃低温冰箱的切片作为实验组，储存于－12℃冷冻切片机内的切片作为对照组，次日用直接免疫荧光法检测免疫球蛋白（ IgG、IgA和IgM）、补体（ C3、C4和C1q）及纤维蛋白原，间接免疫荧光法检测Ⅳ型胶原a3和a5链，荧光显微镜下观察定性及半定量结果。结果：实验组3＋～4＋IgG 16例，对应的对照组IgG均为1＋～2＋，阳性强度明显弱于实验组，差异有统计学显著性（ P＜0．05）；实验组3＋～4＋a399例，对照组1＋～2＋a392例，阴性8例；实验组3＋～4＋a599例，对照组1＋～2＋a592例，阴性8例，对照组阳性强度减弱，差异有统计学显著性（P＜0．05）。实验组4＋IgA 15例，3＋IgA 19例，3＋IgM 15例，2＋IgM 11例，4＋C313例，3＋C312例，相对应的对照组阳性强度没有明显减弱，差异无统计学显著性。结论：肾活检冰冻切片免疫荧光结果受切片储存温度影响大，其中对IgG和Ⅳ型胶原免疫荧光阳性强度影响更大，建议肾脏活检组织冰冻切片置于－70℃低温冰箱储存。
作者：赵黎；朱萌华；金娟；龚建光；李一文；何强 刊期： 2016年第07期
目的：研究外源性硫化氢（ H2 S）能否通过调控Janus激酶／信号转导及转录激活因子（ JAK／STAT）通路对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞（ HUVECs）损伤。方法：Western blot法测定JAK2、STAT3、cleaved caspase－3的蛋白水平；CCK－8法检测细胞存活率；罗丹明123染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位（ MMP）；双氯荧光素（ DCFH－DA）染色荧光显微镜照相法测定胞内活性氧（ ROS）水平；超氧化物歧化酶（ SOD）检测试剂盒检测SOD活性。结果：应用400μmol／L硫氢化钠（ NaHS，为H2 S的供体）预处理HUVECs 30 min能明显地抑制高糖（40 mmol／L葡萄糖，HG）对p－JAK2和p－STAT3蛋白水平的上调作用。400μmol／L NaHS预处理30 min或20μmol／L JAK／STAT通路抑制剂AG490预处理30 min均能抑制高糖对HUVECs引起的损伤，使细胞存活率和SOD活性升高，cleaved caspase－3蛋白水平、ROS生成量及MMP丢失均减少。结论：外源性的H2 S通过抑制JAK／STAT通路保护HUVECs对抗高糖引起的损伤。
作者：林佳琼；陈景福；廖静秋；林凯；邓海鸥；吴冬波；吴文 刊期： 2016年第07期
目的：研究原花青素单一活性成分B2（PC－B2）对高糖环境下人内皮祖细胞（EPCs）的保护作用及其作用机制。方法：从健康人外周血中分离诱导培养人EPCs，并进行鉴定。将EPCs分为control组（ PBS处理）、高渗对照组（25 mmol／L甘露醇处理）、高浓度30 mmol／L葡萄糖作用组以及不同浓度（2、10和50 mg／L） PC－B2与30 mmol／L葡萄糖共处理组。使用CCK－8法检测各组中EPCs 活力的变化；同时检测各组EPCs 中乳酸脱氢酶（ LDH）、丙二醛（ MDA）、超氧化物歧化酶（ SOD）和还原型谷胱甘肽（ GSH）水平；ELISA方法检测各组EPCs上清中一氧化氮（NO）、内皮素－1（ET－1）、细胞间黏附分子－1（ICAM－1）和血管细胞黏附分子－1（VCAM－1）的含量变化；流式细胞术检测各组中EPCs活性氧簇（ ROS）生成和凋亡率变化；Western blot检测血管内皮生长因子（ VEGF）和血管内皮生长因子受体－2（ VEGFR－2）的表达情况。结果：与control组相比，高糖作用组中人EPCs的活力显著下降（ P＜0．05）；LDH漏出量以及MDA、ET－1、ICAM－1和VCAM－1含量均显著升高（P＜0．05）；而SOD和GSH活性以及NO含量显著降低（ P＜0．05）；细胞中ROS含量和凋亡率显著上升（ P＜0．05）；EPCs中VEGF和VEGFR－2表达量显著降低（P＜0．05）。与高糖作用组相比，不同浓度PC－B2作用组EPCs活力均明显回升（P＜0．05）；LDH漏出量以及MDA、ET－1、ICAM－1和VCAM－1含量均逐渐下降（ P＜0．05）；SOD和GSH活性以及NO含量均显著上升（ P＜0．05）；细胞中ROS生成和凋亡率逐渐下降（ P＜0．05）；而EPCs中VEGF和VEGFR－2表达量也随之逐渐上升，并具有浓度依赖性（ P＜0．05）。结论： PC－B2能够提升高糖作用下人EPCs活力，减少高糖引起的氧化损伤，恢复EPCs正常功能，降低高糖诱导的炎症因子和细胞凋亡，从而对人EPCs发挥保护作用，并可通过诱导VEGFR－2和VEGF表达发挥作用。
作者：王丽萍；李莉；姚计文；李博 刊期： 2016年第07期
目的：建立重症急性胰腺炎大鼠模型，研究生长抑素（奥曲肽）联合大柴胡汤对急性重症胰腺炎的作用及初步机制。方法：50只大鼠随机分为假手术组、模型组、奥曲肽组、大柴胡汤组与联合组，经相应处理后记录腹水量，测定血清中淀粉酶（ amylase，AMY）、丙氨酸氨基转移酶（ alanine aminotransferase，ALT）和肌酐（ creatinine， Cr）的水平，HE染色后观察胰腺组织形态，Western blot检测胰腺细胞核中NF－κB与细胞中IκBα的蛋白表达水平， qPCR检测胰腺细胞中ICAM－1与IL－1的mRNA表达水平。结果：生长抑素联合大柴胡汤能有效降低重症急性胰腺炎大鼠的腹水量以及血清中AMY、ALT和Cr的水平；重症急性胰腺炎可导致胰腺细胞核NF－κB蛋白表达升高，IκBα蛋白表达降低，ICAM－1和IL－1 mRNA表达升高。生长抑素联合大柴胡汤可逆转这些改变。结论：生长抑素联合大柴胡汤可以减轻大鼠的急性重症胰腺炎，其机制可能与抑制NF－κB信号通路以及ICAM－1和IL－1表达有关。
作者：冯辉；吴标；赵习德；郭宝瑞 刊期： 2016年第07期
目的：观察内源性一氧化氮合酶（ NOS）抑制物非对称性二甲基精氨酸（ ADMA）及其信号通路在4周运动大鼠NO水平及骨骼肌收缩功能与线粒体生物合成中的调节作用。方法：建立4周运动大鼠模型，检测离体比目鱼肌对电刺激的单次、强直和疲劳收缩的大张力；并检测骨骼肌中ATP和线粒体DNA含量以及过氧化物酶增殖体受体γ辅激活因子1α（ PGC－1α）、核呼吸因子（ NRF） mRNA的表达以反映线粒体生物合成及功能；用高效液相色谱测定血清ADMA浓度；用Western blot法检测骨骼肌中内源性ADMA生成酶PRMT1和ADMA代谢酶DDAH 2种亚型以及NOS 3种亚型蛋白的表达；用比色法测定NOS活性及一氧化氮（ NO）含量等。结果：与正常对照组相比，运动组大鼠比目鱼肌对电刺激诱导的各种收缩张力均明显增强，比目鱼肌ATP含量、线粒体DNA含量和PGC－1α、NRF mRNA增加显著（ P＜0．01）。运动组大鼠比目鱼肌中构成型NOS（ cNOS）的蛋白表达及其NOS活性明显上调（ P＜0．01），而NO含量仅小幅增加（ P＜0．05）；同时，4周运动增加大鼠血清ADMA浓度，并伴有骨骼肌DDAH2表达下调。结论：短期耐力运动增强比目鱼肌单次收缩、强直收缩和抗疲劳收缩肌功能，其机制可能与过度增加的cNOS促使ADMA水平反馈性升高，从而维持骨骼肌NO低幅度增加，促进线粒体生物合成有关。
作者：邱霓；方伟进；李聪；李晓媚；熊燕 刊期： 2016年第07期
目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂伏立诺他（即辛二酰苯胺异羟肟酸，SAHA）在惊厥性脑损伤发病中的作用及机制。方法：32只雄性SD大鼠随机分为control组、戊四唑（ pentylenetetrazole，PTZ）组、PTZ＋10 mg／kg SAHA组及PTZ＋50 mg／kg SAHA组，通过腹腔注射PTZ制作发育期大鼠惊厥模型，SAHA于PTZ诱导惊厥前2 h腹腔注射给药。本实验中PTZ造模成功率约85％，注射后约30 min到1 h后出现惊厥发作，评估惊厥发作的等级。惊厥后24 h处死大鼠，RT－qPCR及Western blot检测海马组织TLR4、MYD88、NF－κB P65和IL－1βmRNA及相应蛋白的表达；HE染色观察脑组织病理变化；TUNEL染色检测大鼠海马神经元凋亡。结果：（1） PTZ组均达到Ⅳ～V级惊厥发作，而SAHA预处理能减轻惊厥发作的等级；（2） PTZ组大鼠海马组织中TLR4、MYD88、NF－κB P65和IL－1βmRNA及相应蛋白的表达均较对照组显著增高（P＜0．05），而SAHA预处理能抑制mRNA和相应蛋白表达水平的增高；（3） HE染色可见PTZ组明显的细胞水肿及神经元凋亡，伴有较多的炎症细胞浸润，而SAHA预处理能减轻细胞水肿及神经元凋亡，同时减少炎症细胞浸润；（4）大鼠海马组织中的神经元凋亡数PTZ组较对照组显著增加（P＜0．05），而SAHA预处理能抑制海马神经元的凋亡；（5）相对于10 mg／kg SAHA治疗组，50 mg／kg SAHA治疗作用更明显（ P＜0．05）。结论：组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA能抑制惊厥后TLR4／MYD88炎症信号通路和海马神经元的凋亡，从而减少炎症反应及惊厥性脑损伤。
作者：胡擎鹏；黄湘壹 刊期： 2016年第07期
目的：探讨adipolin／CTRP12对LPS致ARDS小鼠的作用及肺泡上皮钠离子通道（ ENaC）的调节。方法：40只C57BL／6J小鼠按随机数字表分为对照组、LPS组、adipolin组和wortmannin（PI3K抑制剂）组，每组10只。苏木精－伊红（HE）染色观察肺组织病理改变；伊文氏蓝标记蛋白检测肺水清除率（AFC），BCA法测支气管肺泡灌洗液（BALF）中蛋白含量，评估肺组织通透性改变；ELISA检测BALF中白细胞介素（IL）－1β和肿瘤坏死因子（ TNF）－α含量，髓过氧化物酶（ MPO）试剂盒检测MPO活性，吉姆萨染色计数BALF总细胞数和多形核白细胞数， Western blot法检测肺组织α－ENaC蛋白表达和Akt磷酸化水平，实时荧光定量PCR检测肺组织α－ENaC的mRNA转录水平。结果：与control组相比，LPS组表现出典型的ARDS病理改变，肺损伤明显（P＜0．05），湿干重比（W／D）和BALF蛋白含量明显增高而AFC明显减弱（P＜0．05），BALF细胞计数、MPO活性、IL－1β含量和TNF－α含量明显升高（P＜0．05），而肺α－ENaC表达和Akt磷酸化水平显著下调（P＜0．05）。与LPS组相比，adipolin组肺损伤明显减轻（P＜0．05），W／D和BALF蛋白含量明显降低而AFC明显增强（P＜0．05），且BALF细胞计数、MPO活性、IL－1β含量和TNF－α含量均较LPS组显著降低（P＜0．05），伴α－ENaC表达和Akt磷酸化水平显著上调（P＜0．05）。而PI3K抑制剂wortmannin组与adipolin组相比，其肺损伤明显加重（P＜0．05），W／D和BALF蛋白含量明显增高， AFC明显减弱（P＜0．05），BALF细胞计数、MPO活性、IL－1β含量和TNF－α含量明显升高（P＜0．05），同时伴α－ENaC表达和Akt磷酸化水平显著下调（P＜0．05）。结论： Adipolin／CTRP12可通过PI3K／Akt信号通路介导的α－ENaC上调机制，增强肺水肿液清除能力，从而对LPS所致ARDS小鼠发挥保护性调控作用。
作者：唐旭毛；戚迪；王导新 刊期： 2016年第07期
目的：探讨自噬是否参与肾大部切除（ SNx）大鼠肾小管上皮细胞的过度死亡，及其与程序性坏死的关系。方法：48只雄性SD大鼠随机分为control组（6只）和SNx组（42只），分别行假手术和SNx。将24只SNx大鼠分为0、4、8和12周组；其余SNx大鼠分为SNx＋vehicle组、SNx＋necrostatin－1（ Nec－1）组和SNx＋3－甲基腺嘌呤（3－MA）组，每组6只。检测0、4、8和12周组大鼠肾组织RIP1、RIP3、LC3和beclin－1的mRNA和蛋白表达水平；用Nec－1和3－MA干预SNx大鼠，Western blot法检测LC3－Ⅰ、LC3－Ⅱ和beclin－1的蛋白水平，透射电镜和TUNEL染色判定Nec－1和3－MA对SNx大鼠肾小管上皮细胞死亡的影响，并观察Nec－1和3－MA对SNx大鼠肾组织的病理变化、活性氧簇（ROS）、血尿素氮（BUN）和血肌酐（SCr）含量的影响。结果： SNx术后8周大鼠肾组织RIP1、RIP3、LC3和beclin－1的mRNA和蛋白水平达高值（ P＜0．01）；Nec－1和3－MA干预SNx大鼠的LC3－Ⅱ／Ⅰ和beclin－1蛋白水平、发生程序性坏死的肾小管上皮细胞及TUNEL阳性细胞数量均显著降低（P＜0．01）。另外，Nec－1减低SNx大鼠肾组织的ROS含量，但3－MA无此作用。结论：自噬参与了SNx大鼠肾小管上皮细胞过度死亡；抑制自噬可减轻SNx大鼠肾小管上皮细胞程序性坏死及其肾损伤。
作者：朱永俊；夏云峰；钟良宝；梁海琴；王善智；林欣然；甘华 刊期： 2016年第07期
目的：探讨慢性间歇性低氧对幼鼠脑区腺苷酸活化蛋白激酶（ AMP－activated protein kinase， AMPK）通路的影响。方法：第一部分：将3～4周龄的SD幼鼠随机分为4组（ n＝8）：2周空气模拟对照（2AC）组、2周慢性间歇低氧（2IH）组、4周空气模拟对照（4AC）组和4周慢性间歇低氧（4IH）组。第二部分：将3～4周龄的SD幼鼠随机分为2组（n＝8）：4周慢性间歇性低氧组（4IH）和4周慢性间歇性低氧用药组（4IHI）。造模结束后行八臂迷宫测试，TUNEL法检测细胞凋亡，RT－qPCR法了解腺苷A2a受体的mRNA表达，Western blot法测定AMPK及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（ mammalian target of rapamycin，mTOR）的磷酸化水平。结果：与对照组相比，2IH组和4IH组的参考记忆错误（RME）、工作记忆错误（WME）和总错误（TE）次数明显增加，差异有统计学显著性（P＜0．01）；4IH与2IH组比较，各项错误次数亦明显增加（P＜0．01）。4IHI组比4IH组RME、WME和TE次数减少，差异有统计学显著性（P＜0．01）。与对照组相比，2IH组和4IH组海马和前额皮层区的神经元凋亡增多，以4IH组凋亡明显（P＜0．05）；4IHI组凋亡较4IH组减少（P＜0．05）。2IH组和4IH组海马和前额皮层区腺苷受体A2a的mRNA和AMPK磷酸化蛋白的水平升高，mTOR磷酸化蛋白的水平下降，4IH 组较2IH 组改变明显（P＜0．05）。4IHI组较4IH组海马和前额皮层区的AMPK磷酸化蛋白水平下降，mTOR磷酸化蛋白水平升高（ P＜0．05）。结论：慢性间歇性低氧诱导神经元凋亡，从而引起幼鼠学习记忆障碍，呈时间依赖性。慢性间歇性低氧上调腺苷A2 a受体，激活海马和前额皮层区AMPK，抑制mTOR的活性，诱导神经元凋亡，进而影响幼鼠学习记忆能力。
作者：梁冬施；陈利亚；洪芳芳；林晶；温正旺；李秀翠；蔡晓红 刊期： 2016年第07期
目的：探究固醇调节元件结合蛋白2（SREBP－2）对衣霉素诱导的软骨细胞内质网应激（ERS）的影响。方法：分离人正常软骨细胞和骨关节炎（ OA）软骨细胞培养，衣霉素和SREBP－2 siRNA分别处理正常软骨细胞。24 h后，实时荧光定量PCR检测对微小RNA－185（miR－185）表达的影响，流式细胞术检测对细胞凋亡的影响， Western blot法检测对SREBP－2、CHOP、p－eIF2α和ATF4等ERS相关蛋白，Bcl－2、Bax和caspase－3等凋亡相关蛋白水平的影响；caspase－3活性试剂盒检测对细胞caspase－3活性的影响。结果：与对照组相比， OA组和衣霉素组SREBP－2表达增加，miR－185表达降低（ P＜0．05）。 SREBP－2 siRNA转染可明显阻断衣霉素引起的miR－185降低（P＜0．05）。miR－185过表达能够下调SREBP－2蛋白水平（P＜0．05）。与对照组相比，OA组和衣霉素组CHOP、p－eIF2α和ATF4的蛋白水平明显上调，Bcl－2表达下调，Bax和caspase－3表达增加（P＜0．05）；SREBP－2沉默处理则显著逆转上述蛋白表达（P＜0．05）。细胞凋亡率与上述细胞凋亡相关蛋白的变化趋势一致（P＜0．05）。与衣霉素组相比，SREBP－2 siRNA转染明显下调 caspase－3活性， miR－185抑制则明显逆转上述作用（ P ＜0．05）。结论：SREBP－2沉默可通过上调miR－185抑制衣霉素诱导的软骨细胞ERS和细胞凋亡。
作者：谢静；史栋梁；郭会卿 刊期： 2016年第07期
目的：研究唑来膦酸（ ZOL）对人类急性髓系白血病细胞U937的增殖抑制及促凋亡作用。方法：CCK－8法检测不同时间ZOL对U937细胞的生长抑制率；流式细胞术检测ZOL对 U937细胞周期的影响；Annexin V－PI法及Hoechst 33342法检测ZOL作用前后细胞凋亡情况变化， JC－1检测ZOL对U937细胞线粒体膜电位变化的影响；克隆形成实验检测U937细胞克隆形成能力；Western blot法检测ZOL对U937细胞周期和凋亡相关蛋白的变化。结果：CCK－8结果显示ZOL可以抑制U937细胞的活力，并呈时间－剂量依赖性；Annexin V－PI 及Hoechst 33342结果显示ZOL可以促进U937细胞凋亡，且呈时间－剂量依赖性；JC－1结果显示ZOL可以明显降低U937细胞线粒体膜电位；PI法证实ZOL将U937细胞周期阻滞在S期，克隆形成实验证实0．2 mmol／L ZOL可以完全抑制U937细胞的克隆形成能力；Western blot结果显示ZOL作用于U937细胞48 h后细胞周期相关蛋白p21表达显著增强，促凋亡蛋白Bax表达增强，抑凋亡蛋白Bcl－2表达明显减弱。结论： ZOL抑制U937细胞的增殖和克隆形成主要是由于抑制了细胞周期相关蛋白表达，同时ZOL可以促进U937细胞凋亡，这种作用主要是通过调节线粒体凋亡途径相关蛋白来实现的。
作者：范蕊芳；刘玲玲；张玲；郭小燕；王晓珍；林东军 刊期： 2016年第07期
目的：探讨程序性死亡因子配体1免疫球蛋白（ PDL1 Ig）基因转染骨髓间充质干细胞（ BMSCs）抑制大鼠原位肝移植免疫排斥反应的机制。方法：培养并鉴定大鼠的BMSCs，重组腺病毒pAdEasy－1／PDL1 Ig感染BMSCs 72 h后，提取细胞总蛋白，采用Western blot法检测转染后BMSCs中PDL1 Ig的蛋白表达。混合淋巴细胞反应检测未转染和转染后的BMSCs对外周血T淋巴细胞活力的抑制作用。以雄性Wistar大鼠为供体，以雄性SD大鼠为受体，采用改良的两袖套法进行原位肝移植，建立大鼠原位肝移植急性排斥反应模型。随机分为对照组、BMSCs治疗组、空载体BMSCs治疗组（ BMSCs／GFP）和转基因治疗组（ BMSCs／PDL1 Ig），每组10对。每组随机取5只于术后第7天处死，检测外周血白细胞介素（ IL）－2、IL－4和干扰素γ（ IFN－γ）水平，检测肝功能情况，光学显微镜下观察移植肝的病理学变化，另外5只观察生存情况及时间。结果：重组pAdEasy－1／PDL1 Ig感染BMSCs 72 h后， BMSCs中有PDL1 Ig的蛋白表达。 BMSCs／PDL1 Ig抑制淋巴细胞活力的作用强于BMSCs／GFP。 BMSCs／PDL1 Ig组的IL－4水平明显高于其它3组，IL－2和IFN－γ水平也明显降低（ P＜0．05）。各实验组移植后7 d检测肝功能，发现BMSCs／PDL1 Ig组的肝功能改善明显，ALT、AST和TBil基本达到正常水平，与对照组比较差异有统计学显著性，与BMSCs治疗组和空载体BMSCs治疗组比较差异也有统计学显著性。肝组织病理检查结果显示对照组移植肝发生了重度排斥反应，BMSCs治疗组和空载体BMSCs治疗组移植肝亦发生排斥反应，但与对照组比较程度较轻， BMSCs／PDL1 Ig组移植肝几乎没有排斥反应，受体存活时间大部分超过100 d，显著长于其它3组（ P＜0．05）。结论：PDL1 Ig修饰的BMSCs可抑制大鼠肝移植排斥反应，诱导肝移植免疫耐受，其效果优于BMSCs单用。
作者：李鹏；李恒平；周东；丁正华；黄卫东；王俊；张玉毅 刊期： 2016年第07期
目的：探讨开放ATP敏感性钾通道（KATP通道）能否抑制Toll样受体4（TLR4）／核因子－κB（NF－κB）通路对抗高糖（ HG）引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症。方法：应用Western blot测定TLR4和NF－κB p65的蛋白水平；应用ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素－1β（ IL－1β）和肿瘤坏死因子－α（ TNF－α）的水平；采用细胞计数试剂盒8（CCK－8）测定心肌细胞存活率；罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位（MMP）；双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定细胞内活性氧簇（ ROS）水平；Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法检测凋亡细胞数量。结果：H9c2心肌细胞经HG（35 mmol／L葡萄糖）处理24 h，胞内TLR4和磷酸化NF－κB p65（p－NF－κB p65）的蛋白水平明显增加，100μmol／L KATP通道开放剂二氮嗪（ DZ）预处理30 min可抑制HG对TLR4和p－NF－κB p65蛋白水平的上调作用；此外，30μmol／L TAK－242（ TLR4抑制剂）和HG共处理心肌细胞24 h也可减轻HG对p－NF－κB p65的上调作用。另一方面，100μmol／L DZ预处理有明确的心肌保护作用，可抑制HG引起的细胞毒性、炎症反应、线粒体损伤、氧化应激和细胞凋亡，使细胞存活率升高，并减少IL－1β和TNF－α分泌水平、MMP丢失、ROS生成及凋亡细胞数量；而30μmol／L TAK－242或100μmol／L PDTC（ NF－κB抑制剂）共处理心肌细胞24 h也可发挥和DZ相类似的作用，能抑制HG引起的上述损伤和炎症反应。结论：开放KATP通道可通过抑制TLR4／NF－κB通路对抗HG引起的H9 c2肌细胞损伤和炎症。
作者：梁伟杰；陈美姬；何洁仪；黄惠敏；余盛龙；陈君；陈景福；宋明才；廖新学 刊期： 2016年第07期
目的：探讨胰高血糖素样肽－l（ GLP－1）对非酒精性脂肪肝大鼠SOCS－3和SREBP－1c mRNA表达的影响。方法：将雄性SD大鼠32只随机分为正常对照（ NC）组、高脂（ HF）组和HF＋利拉鲁肽（ Lira）组。 HF组和HF＋Lira组给予高脂饲料喂养16周，HF＋Lira组高脂喂养12周后，给予Lira 600μg? kg－1? d－1腹腔注射4周。在16周末处死大鼠。全自动生化仪检测血清ALT、AST、甘油三酯（ TG）和总胆固醇（ TC）；GPO－PAP 法测定肝脏TG含量；酶联免疫法测定空腹胰岛素，并计算胰岛素抵抗指数（ HOMA－IR）；光学显微镜下观察肝脏病理变化；RT－qPCR法测定肝组织SOCS－3和SREBP－1c的mRNA表达水平。结果：与NC组相比，HF组血清ALT、AST、TG、TC、肝TG、FINS及HOMA－IR均明显升高（P＜0．01）；HF＋Lira组与HF组相比，血清的ALT、AST、TG、TC、肝TG、FINS及HOMA－IR均下降，差异有统计学显著性（P＜0．05）。 HF组肝组织SOCS－3和SREBP－1c的mRNA表达水平较NC组显著增强（P＜0．01）；HF＋Lira组较HF组SOCS－3和SREBP－1c的mRNA表达显著下降（P＜0．05）。结论：Lira可能通过下调肝组织SOCS－3和SREBP－1c的mRNA表达，改善 IR，减少肝脏TG沉积，从而对非酒精性脂肪性肝病起到治疗作用。
作者：侯洪涛；裘艳梅；张建；胡义亭；苏少慧；王玉珍 刊期： 2016年第07期
目的：研究人参皂苷Re对大鼠颈动脉球囊损伤所致血管内膜增生的作用及其对NF－κB p65炎症信号通路的影响。方法：40只SD大鼠随机分组为5组：假手术组，模型组，人参皂苷Re低、中、高剂量组。除假手术组外，其余组大鼠均用2F球囊导管建立颈动脉球囊损伤模型，制模后次日灌胃给药，假手术组和模型组给予等体积蒸馏水，人参皂苷低、中、高剂量组大鼠分别给予12．5、25、50 mg／kg人参皂苷Re。连续给药14 d后取损伤段颈动脉，HE染色观察血管形态学改变，并测定血管管腔面积（ lumen area，LA）、内膜面积（ intima area，IA）、中膜面积（ media area，MA），计算内膜／中膜面积比（ IA／MA）；real－time PCR法检测肿瘤坏死因子－α（ tumor necrosis factor－α， TNF－α）和白细胞介素－1β（ interleukin－1β，IL－1β）的mRNA水平；免疫组织化学法检测血管壁增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）和核因子κB（nuclear factor－kappa B，NF－κB）p65蛋白的表达。结果：与假手术组相比，模型组大鼠血管腔明显变窄（P＜0．01），血管壁TNF－α、IL－1β的mRNA水平及PCNA、NF－κB p65蛋白的表达均明显增高（P＜0．05）；与模型组比较，人参皂苷Re中、高剂量组血管内膜增生明显减轻（P＜0．05），血管壁TNF－α和IL－1β的mRNA水平及PCNA和NF－κB p65的蛋白表达则明显下调（ P＜0．05）。结论：人参皂苷Re能减轻球囊损伤所致大鼠颈动脉内膜增生，其机制可能与抑制NF－κB p65炎症信号通路有关。
作者：高晨盈；王俊逸；罗云梅；罗超；高杨 刊期： 2016年第07期
目的：探讨Lowe综合征的临床、影像特点及基因特征。方法：分析1例10月大Lowe综合征患儿的临床资料，头颅核磁共振（ MRI）特征及其致病基因OCRL突变检测结果。结果：患儿有先天性白内障、眼球震颤、精神运动发育落后、肌张力低下、蛋白尿及血尿等临床表现。头颅MRI提示患者脑白质髓鞘发育落后，双侧额颞叶发育不良，蛛网膜下腔增宽。 OCRL 基因检测发现一新发缺失突变 NM＿000276．3： c．1280－1281delTT （ p． Cys428Hisfs*2），该突变未见文献报道。结论：Lowe综合征的诊断主要通过临床表现和OCRL基因检测，本研究发现的OCRL基因新突变丰富了该基因的致病突变谱。
作者：李冰肖；张占会；周庆华；杨晶；吴瑕；柳国胜 刊期： 2016年第07期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
