周颖超；查灵凤；曹祝兵；吴健飞；谢强；凃欣
目的：建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型和氧化应激损伤细胞模型，研究抗肌萎缩蛋白Dp71在损伤心肌及细胞中的表达，探讨其拮抗心肌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法：阻断SD大鼠冠状动脉左前降支血流30 min后恢复血流复制心肌缺血再灌注损伤模型，观察心肌形态学、LDH变化及心肌细胞凋亡；检测再灌注不同时间心脏Dp71蛋白和mRNA表达。建立H9c2细胞氧化应激损伤模型，检测H2 O2刺激后细胞中Dp71蛋白和mRNA的表达。 H9c2细胞转染Dp71过表达质粒，流式细胞术检测Dp71高表达对H2 O2诱导H9c2细胞凋亡率的影响。 Western blot检测过表达Dp71对细胞中lamin B1和Bcl－2蛋白表达的影响；对H2 O2刺激下lamin B1和Bcl2蛋白表达改变的影响。结果：与假手术组相比，再灌注损伤组HE染色心肌出现明显形态改变，LDH明显增加， IR组心肌细胞凋亡数显著增加。 IR后各时点Dp71 mRNA和蛋白表达水平均增加（ P＜0．05）。0．2 mmol／L H2 O2刺激细胞16 h Dp71蛋白及mRNA表达明显升高（ P＜0．05）。 H9c2细胞中转染Dp71过表达质粒可抑制H2 O2所诱导的细胞凋亡；H9c2细胞中过表达Dp71引起lamin B1和Bcl2表达增高，高表达的Dp71可以抑制过氧化氢刺激引起的lamin B1和Bcl2表达下降。结论：Dp71 mRNA和蛋白表达在大鼠心肌缺血再灌注损伤模型和H2 O2诱导H9c2氧化应激损伤模型中明显升高。 H9c2细胞过表达Dp71通过提高Bcl2和lamin B1表达而抑制H2 O2诱导的细胞凋亡。
作者：赵帅；邹江；刘梅冬；陈广文；王浩；余凤秀；肖献忠；谭斯品 刊期： 2016年第08期
AIM:To investigate the effect of miR-214 on cardiomyocyte hypertrophy and the expression of the potential target genes . METHODS:A cell model of hypertrophy was established based on angiotensin-Ⅱ( Ang-Ⅱ)-induced neonatal mouse ventricular car-diomyocytes (NMVCs).Dual luciferase reporter assay was performed to verify the interaction between miR-214 and the 3’ UTR of MEF2C.The expression of MEF2C and hypertrophy-related genes at mRNA and protein levels was determined by RT-qPCR and Wes-tern blotting, respectively.RESULTS:The expression of ANP, ACTA1,β-MHC and miR-214 was markedly increased in Ang-Ⅱ-in-duced hypertrophic cardiomyocytes .Dual luciferase reporter assay revealed that miR-214 interacted with the 3’ UTR of MEF2C, and miR-214 was verified to inhibit MEF2C expression at the transcriptional level .The protein expression of MEF2C was markedly in-creased in the hypertrophic cardiomyocytes .Moreover, miR-214 mimic, in parallel to MEF2C siRNA, inhibited the expression of hy-pertrophy-related genes in Ang-Ⅱ-induced NMVCs.CONCLUSION:MEF2C is a target gene of miR-214, which mediates the effect of miR-214 on attenuating cardiomyocyte hypertrophy .
作者： 刊期： 2016年第08期
目的：探讨重组融合蛋白TAP－SSL5对ApoE基因敲除（ ApoE－／－）小鼠动脉血管粥样硬化斑块形成的影响。方法：21只12周龄ApoE－／－小鼠随机分为3组，每日分别给予TAP－SSL5（3 mg／kg）、SSL5（2 mg／kg）及同等剂量的PBS，高脂饮食饲养12周后，石蜡切片观察主动脉根部粥样硬化斑块形成情况，并应用油红O染色法观察大体动脉标本斑块情况；后应用小鼠细胞炎症因子芯片检测TAP－SSL5对40种炎症因子在动脉组织内的表达情况。结果：高脂饲养12周后，TAP－SSL5组小鼠体重增长明显低于单纯喂食高脂饮食而不进行药物干预组，血清胆固醇（ Tch）水平明显低于对照组，而甘油三酯（ TG）、低密度脂蛋白胆固醇（ LDL）及高密度脂蛋白胆固醇（ HDL）水平无明显变化。TAP－SSL5可以减轻ApoE－／－小鼠动脉血管粥样硬化斑块形成（P＜0．05）。炎症因子芯片表达分析显示，与对照组相比较，TAP－SSL5组GM－CSF、IL－3、IL－10、IL－1β、IL－12p40p70、IL－9、IL－12p70、KC、Lymphotactin、Leptin、MCP－1、MIG、MCSF、MIP－1α、 sTNF RI、RANTES和sTNF RII共17种细胞因子下调明显。结论：重组融合蛋白TAP－SSL5能够在一定程度上抑制ApoE－／－小鼠动脉粥样硬化斑块的形成，其机制与其抗炎、抗凝及抗血小板特性有关，其对细胞因子表达调控的影响有待深入研究。
作者：曲小龙；胡厚源 刊期： 2016年第08期
目的：利用Sprague－Dawley（ SD）大鼠AMI模型评价Rho激酶抑制剂法舒地尔对心梗后心室重构的改善作用及其相关机制。方法：通过结扎左前降支冠脉法制备大鼠急性心梗（ AMI）模型40只，随机分为AMI组，法舒地尔低、中、高剂量治疗组和卡维地洛治疗组，另设假手术组。连续给药4周后，进行超声心动图检测心功能指标，同时留取大鼠心肌组织标本检测Rho激酶、TGF－β1、Bax、Bcl－2、MMP－9表达和Smad2／Smad3信号通路的激活状态。结果：（1）超声心动图检测显示：与AMI组比较，法舒地尔3个治疗组对AMI后心室重构均有明显抑制作用，以中剂量组佳。（2）与AMI组比较，治疗组Rho激酶和TGF－β1的mRNA水平、Bax和MMP－9蛋白表达水平明显降低，Bcl－2水平升高，Smad2／Smad3信号通路激活程度明显降低（P＜0．05）。结论：法舒地尔可抑制大鼠心梗后的心室重构。
作者：符永恒；李桃；杨敏；林秋雄；王映辉；张梦珍；朱杰宁；李怡；刘晓颖；单志新 刊期： 2016年第08期
目的：葡萄糖转运体4（GLUT4）在球囊损伤血管新生内膜中高表达，而其转位过程依赖于肌动蛋白（actin）细胞骨架的调节。平滑肌蛋白22α（ smooth muscle protein 22α，SM22α）是一种actin细胞骨架相关蛋白，其在增殖性血管疾病中表达下调。本研究观察了SM22α是否参与血管损伤或者PDGF刺激诱导的GLUT4表达和转位活性升高。方法：用PDGF－BB刺激血管平滑肌细胞（ vascular smooth muscle cell ， VSMC），观察GLUT4膜转位和细胞骨架的变化；用荧光葡萄糖2－NBDG检测葡萄糖摄取；用特异性siRNA敲低内源性SM22α表达；BrdU实验检测细胞增殖；高效液相色谱法检测组织葡萄糖含量。结果：PDGF－BB诱导VSMCs GLUT4转位和葡萄糖摄取依赖于皮层F－actin聚合，而敲低SM22α促进这一过程。损伤新生内膜处GLUT4表达显著增加，PDGF－BB刺激促进细胞GLUT4表达和葡萄糖消耗，抑制GLUT4活性则显著降低细胞增殖活性。相对于WT组， SM22α－／－小鼠颈总动脉2－NBDG摄取显著增加，结扎后28 d新生内膜明显增厚，损伤动脉组织GLTU4转位和葡萄糖含量均明显升高。结论：PDGF－BB诱导的GLUT4转位和糖摄取参与VSMCs 增殖。缺失SM22α可诱导皮层细胞骨架聚合，增强PDGF－BB诱导的GLUT4膜转位和糖摄取及代谢活性。 SM22α是一种新的增殖相关糖代谢调节因子。
作者：赵丽丽；陈鹏；谢肖立；窦永青；聂磊；林燕玲；李晓坤；苗穗兵；董丽华；尹亚娟；张丹丹；宋昱；韩梅 刊期： 2016年第08期
AIM:To investigate the relationship between polyamine metabolism and hypoxia /ischemia ( H/I)-induced cell apoptosis and to determine the mechanisms by which exogenous spermine protects cell apoptosis against AMI in rats .METHOD:The left anterior de-scending coronary artery ( LAD) of the Wistar rats were ligated , and neonatal rat cardiomyocytes were placed under hypoxic conditions for 24 h to establish the model of AMI (or H/I).Exogenous spermine was administered by intraperitoneal injection (2.5 mg/kg daily for 7 days) in vitro and subjected to the cell medium at 5μmol/L as a pre-treatment therapy.RESULTS:AMI (or H/I) induced an increase in polyamine catabolized enzyme SSAT and a decrease in polyamine biosynthesis enzyme ODC , which result in endogenous spermine and spermidine decrease and putrescine increase .At the same time, AMI ( or H/I) lowered cardiac function , increased cTnI and CK-MB concentrations , aggravated myocardial infarct size , cardiomyocyte damage and apoptosis , raised ROS generation , increased the expression of cleaved caspase-3, cleaved caspase-9 and endoplasmic reticulum stress (ERS)-related proteins, promoted the release of cytochrome C and mPTP opening , down-regulated Bcl-2 expression and the phosphorylation of ERK 1/2, PI3K, Akt and GSK-3β, and activated PERK and eIF 2αphosphorylation .Spermine pre-treatment reversed the above-motioned changes .CONCLUSION:AMI ( or H/I ) could induce cardiomyocyte apoptosis and polyamine metabolism disorder .Exogenous spermine attenuates cardiac injury through scavenging the ROS and inhibiting mPTP opening and ERS injury .These findings provide a novel target for the prevention of apoptosis in the setting of AMI .
作者： 刊期： 2016年第08期
目的：观察胰腺β细胞中电导钙激活钾离子通道（intermediate－conductance Ca2＋－activated K ＋channel， KCa3．1）在2型糖尿病发病中的作用及调节机制。方法：应用2型糖尿病小鼠（db／db）模型，测评阻断KCa3．1对2型糖尿病表型指标的影响。分离小鼠胰腺β细胞，观察分别阻断KCa3．1和NF－κB信号通路对高糖或软脂酸诱导的NF－κB下游炎性细胞因子释放的影响。结果：KCa3．1阻断剂TRAM－34可降低db／db小鼠随时血糖水平。连续用药8周后，TRAM－34可降低db／db小鼠空腹血糖，改善葡萄糖耐量，增加餐后胰岛素水平，减轻db／db小鼠胰腺炎症并延缓β细胞的消亡。但TRAM－34不影响正常饮食C57BL／6小鼠空腹血糖和餐后血糖水平，无低血糖副作用。在分离的小鼠胰腺β细胞，分别阻断KCa3．1和NF－κB可降低高糖或软脂酸所引起的炎性趋化因子（CCL2和CCL20）的释放。结论：NF－κB活化介导胰腺β细胞KCa3．1上调，协同调节炎性细胞因子和胰岛素分泌，促发胰岛炎症和β细胞功能障碍，导致2型糖尿病。
作者：庞正达；王晓静；佘刚；邓秀玲 刊期： 2016年第08期
目的：探讨趋化因子受体7（CCR7）及血管内皮生长因子C（VEGF－C）蛋白在乳腺癌组织中的表达水平，并分析二者与乳腺癌预后的关系。方法：采用免疫组织化学技术，联合检测CCR7和VEGF－C蛋白分别在乳腺癌组织及正常乳腺组织中的表达差异情况，并分析二者与乳腺癌各相关临床病理特征之间的关系。采用Kap－lan－Meier法来评估CCR7及VEGF－C蛋白的异常表达与乳腺癌患者生存期之间的关系。结果： CCR7蛋白在乳腺癌组织（68％）中的阳性表达率高于正常乳腺组织（30％），差异有统计学显著性（P＜0．01）；而VEGF－C蛋白在乳腺癌组织（71％）中的阳性表达率也明显高于正常乳腺组织（24％），差异也有统计学显著性（P＜0．01）。且在乳腺癌组织中，CCR7与VEGF－C蛋白的表达呈正相关关系（r＝0．613，P＜0．01）。 CCR7和VEGF－C蛋白的高表达均与淋巴结转移和TNM分期有关（P＜0．05），而与年龄、肿瘤大小、雌激素受体和孕激素受体均无关。 CCR7及VEGF－C蛋白阳性表达者的生存期低于阴性表达者，两组比较差异有统计学显著性（ P＜0．05）。结论： CCR7与VEGF－C的异常高表达可能与乳腺癌预后关系密切，二者可作为判断乳腺癌预后不良的重要指标之一。
作者：刘清华；于国华；刘雨清 刊期： 2016年第08期
目的：房室传导阻滞是心脏电激动传导过程中，发生在心房和心室之间的电激动传导异常，可导致心律失常。前期，我们发现一个遗传性房室传导阻滞伴肥厚型心肌病家系，本次工作主要对其致病基因及机制进行研究。方法：采用候选基因测序的方法对已经确诊为房室传导阻滞的心脏病患者进行致病基因分析，对报道与心脏病相关的 TRP4、 SCN5A、 SCN1B、NKFX2．5、CLCA2和LMNA共6个基因测序并确定致病基因；构建致病基因的野生型和突变型质粒；克隆野生型和突变型，激光共聚焦显微镜检测野生和突变型蛋白在细胞定位，利用Western blot检测目的蛋白的表达情况对该突变功能进行分析。结果：遗传学分析显示在家系中患者LMNA基因第10号外显子缺失，并与疾病共分离。 Western blot结果显示突变型lamin蛋白表达水平正常，定位结果显示，野生型蛋白位于细胞核核膜，而突变型蛋白在核膜上和核内均有表达。 LMNA异常可引起房室结细胞死亡与纤维化，导致房室传导速率降低，并发生房室传导阻滞。自噬和凋亡是细胞死亡的重要形式，LC3－II是检测自噬的标志蛋白。应用Western blot检测LC3－II，结果显示LMNA突变不影响该蛋白表达。结论：本次研究中，我们发现了一个新的导致遗传性房室传导阻滞伴肥厚型心肌病的LMNA基因突变，该突变可使其编码的蛋白不能正确定位于细胞核膜，导致细胞核核纤层结构异常。核纤层在细胞分裂中呈现周期性的变化，因此核纤层的异常会对细胞正常周期产生重要影响从而导致细胞的异常死亡。这可能是导致该家族成员发生房室传导阻滞的原因。
作者：曹祝兵；李思思；臧小彪；凃欣 刊期： 2016年第08期
目的：探讨omega－3多不饱和脂肪酸（ polyunsaturated fatty acid ， PUFA）对动脉粥样硬化斑块稳定性的作用及可能机制。方法：采用低密度脂蛋白受体敲除（Ldlr－／－）小鼠喂养西方饮食（western diet， WD）6周诱导动脉粥样硬化，并在饮食中添加或不添加3％omega－3 PUFA进行干预。使用液相质谱联用检测血浆中PUFA及其代谢产物浓度。油红O染色分析测定动脉树斑块面积及主动脉根部斑块脂质含量，HE染色分析主动脉根部斑块大小，天狼星红染色分析胶原纤维含量，免疫荧光检测巨噬细胞和平滑肌细胞含量。结果：（1）与WD组相比，omega－3组小鼠动脉树斑块面积比例显著降低。（2） Omega－3处理组与对照组相比，主动脉根部斑块面积、脂质含量和巨噬细胞含量显著降低；同时胶原纤维和平滑肌细胞含量显著上升，斑块不稳定指数下降（P＜0．05）。（3）Omega－3处理组血清中omega－3 PUFA显著增加，分析代谢产物发现EEQ和18－HEPE水平显著增加。结论：Omega－3处理减少动脉粥样硬化斑块面积、增加斑块稳定性，其机制可能与其代谢产物水平变化相关。
作者：刘亚晋；李丹；张栩；艾玎；朱毅 刊期： 2016年第08期
目的：淋巴细胞表达胱硫醚γ裂解酶（ cystathionine γ－lyase， CSE）／硫化氢（ hydrogen sulfide ， H2 S），但其是否参与高血压发病尚不清楚。本课题旨在探讨淋巴细胞CSE／H2 S拮抗高血压的免疫调节机制。方法：收取高血压患者及匹配的健康对照纳入研究。亚甲基蓝法检测外周淋巴细胞H2 S产率，Western blot 检测蛋白表达及磷酸化，RT－qPCR检测mRNA表达，biotin－switch法检测蛋白质硫氢化修饰。结果：高血压组外周血淋巴细胞CSE蛋白表达、H2 S产率及IL－10水平明显低于正常血压组，药物治疗血压恢复后CSE蛋白表达、H2 S产率及IL－10水平也恢复至正常水平。 SHR大鼠给予NaHS治疗4周后，动脉血压显著下调，同时Th17细胞亚群下调，而Treg亚群上调。分离小鼠脾脏CD4＋T细胞，siRNA下调CSE或PAG均可抑制Treg的分化，减少IL－10的分泌。反之CSE过表达或H2 S供体可促进Treg分化和IL－10分泌。提示CD4＋T细胞内源性CSE／H2 S可促进其向Treg亚群分化。 Treg细胞的分化受到能量代谢的调节。 CSE下调或PAG可抑制AMPK Thr172位点磷酸化，促进mTOR Ser2448位点磷酸化。反之CSE过表达或H2 S供体促进AMPK磷酸化，抑制mTOR磷酸化。 AMPK Thr172位点磷酸化受LKB1激酶调控，H2 S可促使LKB1 Cys430位点发生硫氢化修饰进而增加LKB1的磷酸化水平。结论：淋巴细胞内源性H2 S可使LKB1 Cys430位点硫氢化修饰并激活LKB1／AMPK通路，促使Treg细胞的分化，并使Treg募集到肾脏、血管周淋巴节，局部分泌IL－10增加，发挥其抗高血压作用。
作者：杜从阔；范静慧；徐文静；林宪娟；郑凤娇；耿彬 刊期： 2016年第08期
目的：本研究旨在探讨人核心聚糖蛋白decorin是否可以缓解糖尿病心肌病并对其中机制进行探索。方法：在本研究中，采用Wistar大鼠作为研究对象，通过腹腔注射链唑霉素并采用高脂饮食喂养6个月诱导糖尿病心肌病模型。通过重组腺相关病毒介导大鼠心脏高表达decorin。在体外研究中，通过高浓度葡萄糖模拟在体高血糖刺激，并在人脐静脉内皮细胞中高表达decorin，通过研究细胞凋亡水平、成管能力、迁移能力和增殖能力，观察其对内皮细胞的保护效应。结果：结果显示，糖尿病心肌病大鼠表现为毛细血管密度减低、心肌纤维化以及心脏功能受损，而过表达decorin可以促进血管内皮生长因子（ VEGF）的表达，增加血管密度，减轻心肌纤维化并缓解糖尿病心肌病大鼠的心脏功能。同时，体外研究结果也表明，高糖可以抑制IGF1R／AKT通路，抑制VEGF的表达，诱导内皮细胞的凋亡增加，抑制细胞的成管能力、迁移能力和增殖能力，而过表达deco－rin则缓解了上述效应。另外，抗IGF1R抗体预处理或者AKT抑制剂处理可以阻断decorin的保护作用。结论：Decorin可以通过激活IGF1R／AKT通路，上调VEGF的表达并促进血管生成，从而缓解糖尿病心肌病。
作者：唐家荣；赖金胜；陈复琼 刊期： 2016年第08期
目的：观察硫化氢对大鼠急性心肌缺血组织细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：健康雄性SD大鼠，随机分成7组：假手术组；心肌缺血组；心肌缺血＋NaHS 低剂量组；心肌缺血＋NaHS 中剂量组；心肌缺血＋NaHS 高剂量组；心肌缺血＋SB216763组；心肌缺血＋1％DMSO组。结扎大鼠冠状动脉左前降支复制急性心肌缺血模型。记录各组大鼠MAP、LVDP、LV－EDP、dp／dtmax和dp／dtmin ，测定LDH活性、心肌细胞凋亡率、p－GSK－3β、t－GSK－3β、β－catenin、Bax和Bcl－2蛋白表达以及心肌组织形态学变化。结果：大鼠心肌缺血后MAP、LVDP、dp／dtmax和dp／dtmin降低，LVEDP升高，血清LDH活性增强，心肌细胞凋亡率和Bax表达增强，Bcl－2表达降低，p－GSK－3β、p－GSK－3β／t－GSK－3β和β－catenin表达降低。心肌纤维横纹不齐或消失，核偏移甚至裂解消失。给予NaHS后，大鼠MAP、LVDP、dp／dtmax和dp／dtmin均升高，LVEDP降低，血清LDH活性降低，心肌细胞凋亡率和Bax表达降低，Bcl－2表达增强，心肌p－GSK－3β、p－GSK－3β／t－GSK－3β和β－catenin表达均增强，心肌细胞变性程度明显减轻。结论：硫化氢可通过GSK－3β／β－catenin信号途径介导心肌损伤后抗细胞凋亡作用。
作者：张建新；葛宁；刘超；解丽君；张勤增 刊期： 2016年第08期
目的：探讨钙敏感受体（calcium－sensing receptor，CaSR）在氧化型低密度脂蛋白（oxidized low－density lipoprotein，oxLDL）诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞（A7r5细胞）增殖及迁移中的作用及信号机制。方法：BrdU掺入法检测细胞增殖；伤口愈合实验及Transwell迁移分析检测细胞迁移情况；Western blot方法检测CaSR、PCNA、ERK MAPK通路及PI3K／AKT通路的蛋白表达。结果：（1）小剂量（10 mg／L）oxLDL 作用A7r5细胞24 h促进细胞的增殖和迁移；（2）oxLDL增加A7r5细胞的CaSR表达；（3）CaSR 拮抗剂NPS2390抑制了oxLDL 的作用，而激动剂GdCl3进一步增强了oxLDL 的作用；（4）oxLDL 可促进p－AKT、p－ERK蛋白表达；（5）PI3K／AKT通路抑制剂LY294002、ERK MAPK通路抑制剂PD98059能够抑制oxLDL 诱导的细胞增殖和迁移效应；（6）NPS2390抑制了oxLDL诱导的p－AKT和p－ERK蛋白表达，而GdCl3作用相反。结论：（1）oxLDL诱导A7r5细胞增殖及迁移效应；（2）CaSR参与oxLDL诱导的A7r5细胞增殖及迁移作用；（3）CaSR 通过活化PI3K／AKT通路及ERK MAPK 信号通路参与oxLDL诱导的A7r5细胞增殖及迁移作用。
作者：李忠；徐长庆；田野；郝丽荣；李宏霞 刊期： 2016年第08期
目的：探讨携带降钙素基因相关肽（ CGRP）的慢病毒体外转染对大鼠c－kitpos心脏干细胞（ c－kit ＋CSCs）活力的影响。方法：无菌条件下取出SD大鼠的心耳，采用酶消化法结合免疫磁珠法获取c－kit＋CSCs，并通过流式细胞术鉴定；将携带目的基因的重组慢病毒载体（ Lv－EGFP－CGRP ）及空病毒载体（ Lv－EGFP ）分别转染至c－kit＋CSCs，实验分为3组：Lv－EGFP－CGRP－CSCs组、Lv－EGFP－CSCs组和CSCs组；在荧光显微镜下观察转染情况，采用流式细胞技术测定其转染率，采用ELISA测定各组培养上清液中CGRP的浓度，采用CCK－8法检测慢病毒转染对c－kit＋CSCs 活力的影响。结果：成功分离培养获取 c－kit＋CSCs，流式细胞术鉴定显示其高表达 c－kit （为91．0％），低表达CD45及CD34；成功转染慢病毒的大鼠c－kit＋CSCs可表达绿色荧光，48 h后可稳定表达，感染复数（MOI）值为20时，荧光显微镜观察及流式细胞术结果均显示转染率达80％以上；ELISA结果示，Lv－EGFP－CGRP－CSCs组细胞上清液CGRP分泌量较Lv－EGFP－CSCs组和CSCs组增加（ P＜0．01）； CCK－8检测细胞活力的结果显示，慢病毒转染不影响c－kit＋CSCs的活力。结论：携带CGRP的慢病毒载体可成功转染至c－kit ＋CSCs，转染Lv－EG－FP－CGRP后的c－kit＋CSCs可合成和分泌CGRP蛋白至上清液中，且转染后c－kit＋CSCs的活力未受影响。这为基因工程细胞疗法治疗心肌梗死提供了新的理论及实验依据。
作者：荣季冬；李玲；龙仙萍；邓文文；石蓓 刊期： 2016年第08期
目的：观察短暂反复缺血预处理（IPC）对肾缺血再灌注损伤（RI／RI）的影响。方法：成年健康雄性SD大鼠，体重150～180 g，随机分为：假手术（sham）组；缺血再灌（I／R）组；缺血预处理1次＋缺血再灌（1＋I／R）组；缺血预处理2次＋缺血再灌（2＋I／R）组；缺血预处理3次＋缺血再灌（3＋I／R）组。各组动物经1％戊巴比妥钠腹腔麻醉，开腹，暴露双侧肾动静脉。假手术组只开腹不夹闭双侧肾动静脉；I／R组夹闭双侧肾动静脉45 min后松夹再灌；1＋I／R、2＋I／R和3＋I／R各组则分别夹闭双侧肾动、静脉5 min后再灌5 min 1次、2次和3次后再行夹闭双侧肾动静脉45 min后松夹再灌；再灌后逐层缝合腹膜，腹壁肌肉和皮肤。24 h后取血及双侧肾脏测定血清肌酐（ SCr）、血尿素氮（ BUN）以及肾组织丙二醛（ MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的水平。结果：与I／R组相比，1＋I／R、2＋I／R和3＋I／R组BUN和SCr均明显降低（P＜0．05），其中以3＋I／R组BUN和SCr降低程度为著；I／R组MDA含量较sham组显著升高；SOD活力则较sham组明显降低（P＜0．01）；与I／R组相比，1＋I／R、2＋I／R和3＋I／R组SOD活力均明显增加，而MDA含量则明显降低（P＜0．05），其中以3＋I／R组MDA含量降低得为显著。结论：短暂反复IPC可改善RI／RI大鼠肾功能，减轻肾组织损伤。
作者：仝飞；牛丽静；王慧娟；苗智慧；夏晓红 刊期： 2016年第08期
目的：建立体外培养人肺内微小动脉的方法，并观察其收缩的基本特性，为研究药物及各种活性因子对人肺血管的长期作用提供有效的实验模型。方法：取癌旁5 cm以上的肺组织，于冰浴和无菌条件下，利用显微操作分离出肺内微小动脉，制备成1．8～2．0 mm长的血管条，分2组，一组急性分离组（新鲜组）马上进行血管张力测定；另一组（培养组）置于含DMEM－F12培养基（内含10％胎牛血清、1％青链霉素）的培养皿内，通以95％O2、5％CO2混合气，在37℃的条件下培养48 h。进行血管张力测定时，用2根直径40μm的不锈钢丝平行穿过血管腔，钢丝的4个端分别固定于微血管张力测定仪浴槽内钳夹的4个螺丝上，采用累积给药法，分别给予血管受体依赖性收缩剂血栓素A2类似物U46619和内皮素－1（ET－1），血管非受体依赖性收缩剂60 mmol／L KCl，然后测定血管的张力变化。结果：培养组对血管收缩剂U46619和ET－1能产生浓度依赖性收缩，U46619的pD2为7．60±0．10，Emax为（136．40±6．17）％；ET－1的pD2为（7．17±0．22），Emax为（137．14±5．52）％，结果类似于新鲜组， U46619的pD2为7．78±0．11，Emax为（131．29±3．79）％；ET－1的pD2为7．53±0．15，Emax为（139．11±6．66）％，两组比较均无显著差异。培养组对血管非受体依赖性收缩剂60 mmol／L KCl产生的收缩力Emax为（7．67±0．85） mN；新鲜组的Emax为（7．73±0．97） mN，两组比较无显著差异。结论：采用血管器官培养的方法培养人肺内微小动脉48 h，能维持血管平滑肌的基本收缩特性，可作为研究各种物质对血管长效作用的有效模型。
作者：邝素娟；杨慧；李晓红；刘晓颖；饶芳；单志新；林秋雄；杨敏；余细勇；吴书林；邓春玉 刊期： 2016年第08期
目的：本研究拟探讨平滑肌蛋白22α（ SM22α）对血管平滑肌细胞（ VSMC）表面血小板源性生长因子受体β（ PDGFR－β）胞吞的影响，进而揭示SM22α对PDGFR－β活性调控的关键步骤———胞吞和泛素化动态平衡的影响及其对血管重构过程的调控作用。方法：PDGF刺激体外培养大鼠VSMC，考察siRNA敲低SM22α蛋白后不同时点的细胞中，激光共聚焦显微镜观察PDGFR－β在细胞膜分布的异同；利用活细胞工作站实时观察SM22α的表达对PDGFR－β在细胞内内吞体和溶酶体分布的异同；SM22α对c－Cbl或TRAF6等E3泛素连接酶活性的影响；siRNA敲低早期内吞体标志蛋白Rab5、再循环内吞体标志蛋白Rab4和Rab11、多泡体（ MVB）标志蛋白Rab7，观察SM22α对PDGFR－β亚细胞定位的变化及其与血管重构的关系。结果：研究发现，SM22α表达下调促进细胞表面的PDGFR－β的再循环过程，使PDGFR－β在细胞表面的分子数显著减少，激活信号分子Akt和p42／44磷酸化，促进PDGF诱导的VSMC生长、增殖和迁移过程，SM22α对PDGFR－β再循环的调控与血管重构过程密切相关。结论：PDGFR－β调控异常诱发的生物学行为改变是心血管疾病的主要细胞和分子生物学基础，我们的结果表明， SM22α可能通过影响PDGFR－β胞吞和泛素化动态平衡而影响其活性的调控，进而参与血管重构的病理生理过程，阐明其分子机制可为发掘基于影响PDGFR－β功能的心血管疾病药物设计提供新靶点。
作者：麻晓婷；窦永青；李晓坤；孟泽祺；韩梅；聂磊 刊期： 2016年第08期
AIM:Atherosclerosis primarily involved systemic arteries .Luminal surface , a monolayer of endothelial cells , of artery directly exposes to blood and is susceptible to active substances in the blood .Exosomes contain significantly amount of proteins and RNAs .Ex-osomes can be good and bad for cells , depending on their component .Thus, exosomes may contribute to atherosclerosis by affecting endothelial cells .This study analyzed the relationship of exosome proteins and atherosclerosis .METHODS: Fifty-six patients and healthy subjects were recruited and divided into two comparisons:healthy subjects vs atherosclerosis ( HS vs AS) , and hypertension vs hypertension plus atherosclerosis ( HT vs HT+AS) .Serum exosomes were decoded by protein mass spectrometry .The protein profile and function were analyzed by gene ontology ( GO) .RESULTS:It was found that five child terms repeatedly appeared in “response to stimulus” and “immune system process” of BP of the two categories ( HS vs AS and AS vs HT+AS):“positive regulation of innate immune response”,“immune response-activating signal transduction”,”activation of innate immune response”,“innate immune re-sponse-activating signal transduction” and “innate immune response activating cell surface receptor signaling pathway ”.Two child terms repeatedly showed in “binding” of MF of the two categories:“antigen binding” and “enzyme binding”.Two proteins, PSMA6 and PSMA7, were repeatedly shown in the two categories .CONCLUSION:GO analysis was utilized for structure hierarchy “tree” to illustrate these proteins involved in various terms in BP , CC and MF.The PPI analysis supplied proteins which may play potentially im-portant roles in AS process .Innate immune system and blood coagulation pathway contribute to AS formation .The proteins, PSMA6, PSMA7 and Annexin A2, may can be the new target proteins for prevention and treatment of AS .
作者： 刊期： 2016年第08期
目的：平滑肌蛋白22α（ smooth muscle protein 22α，SM22α）被视为是细胞衰老的标志物，但是其在血管平滑肌细胞（ vascu－lar smooth muscle cell ，VSMC）衰老过程中的作用尚不清楚。本研究旨在探讨SM22α在VSMC衰老和血管老化进程中的作用。方法：利用angiotensin II（Ang II，10－7 mol／L）慢性刺激诱导VSMC衰老；用野生型和SM22α基因敲除小鼠皮下植泵，持续灌注Ang II（1μg? kg－1? min－1）4周，复制高血压模型。通过敲低和过表达SM22α观察其对VSMC衰老及调控通路蛋白表达和活性的影响。结果：Ang II持续刺激可诱导VSMC衰老，伴随着SM22α的表达增高。敲低SM22α可减弱Ang II诱导的VSMC衰老，过表达则反之。在Ang II诱导VSMC衰老条件下，SM22α表达上调抑制Mdm2与p53的结合，上调p53含量。 SM22α表达增加抑制Akt与Mdm2的磷酸化活化，导致Mdm2与p53的结合减弱。 SM22α基因敲除改善Ang II诱导的主动脉VSMC衰老和血压升高。结论：SM22α表达上调抑制Akt／Mdm2通路激活，进而减弱Mdm2与p53的结合，上调p53的表达量，促进衰老。
作者：苗穗兵；谢肖立；尹亚娟；赵丽丽；舒亚南；陈荣；陈鹏；董丽华；林燕玲；吕品；张丹丹；聂茜；薛震颖；韩梅 刊期： 2016年第08期
中国病理生理杂志
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