任重；唐蕙；彭娟；肖卫晋；任晓晴；王佐；刘录山；屈顺林；姜志胜
目的：探讨别嘌呤醇对高果糖诱导的胰岛素抵抗性的影响。方法： SD雄性大鼠随机分为正常组（ control组）、高果糖组（ Fr组）和高果糖别嘌呤醇组（ all组），高果糖饲料喂养同时别嘌呤醇或双蒸水灌胃4周。测定各组空腹血糖、胰岛素和血尿酸变化，利用口服糖耐量试验和高胰岛素－正常葡萄糖钳夹试验评价别嘌呤醇对胰岛素敏感性的作用。 Western blot法检测骨骼肌葡萄糖转运体4（GluT4）、蛋白激酶B（Akt）及磷酸化蛋白激酶B（p－Akt）蛋白表达。结果：别嘌呤醇明显降低高果糖负荷引起的空腹胰岛素、血尿酸值的增高。口服糖耐量试验各组之间无明显差异。高胰岛素－正常葡萄糖钳夹试验表示，Fr组胰岛素敏感性指标（ GIR）明显低于正常组，表明出现胰岛素抵抗性；all组GIR值明显高于Fr组。3组GluT4和Akt蛋白表达无明显变化，别嘌呤醇明显增加Akt磷酸化水平。结论：别嘌呤醇提高骨骼肌胰岛素敏感性，改善高果糖诱导的胰岛素抵抗性。
作者：姜海英；李英顺；金清华 刊期： 2015年第10期
Intermedin（ IMD）是2004年发现的肾上腺髓质素家系的新成员。 IMD具有抗氧化、抗炎、调节内分泌代谢、调节免疫等生物学效应，是新的内源性心血管、肾脏保护因子。我们及国外实验室均报道，IMD可以显著抑制动脉粥样硬化以及巨噬细胞向泡沫细胞的转变；IMD还可以通过抑制内质网应激以及上调基质Gla蛋白抑制血管钙化的发生发展。近期我们在ApoE－／－小鼠用微量渗透泵给予血管紧张素II（ Ang II）诱导的腹主动脉瘤（ AAA）及血管平滑肌细胞（ VSMC）上发现IMD可以降低腹主动脉瘤的发生率和腹主动脉大直径，抑制主动脉内活性氧（ ROS）的产生，降低NADPH氧化酶的活性及其亚单位Nox1、Nox2和Nox4的蛋白表达。另外，IMD显著抑制基质金属蛋白酶的激活，减轻CD68阳性巨噬细胞的浸润和炎症因子表达，抑制VSMC凋亡。 IMD抑制Nox1和Nox4蛋白表达的作用可被IMD特异性受体抑制剂IMD17－47和cAMP／PKA通路阻断剂H89所阻断。这些结果提示IMD可能通过cAMP／PKA通路抑制Nox4介导的氧化应激抑制AAA的发生发展。
作者：齐永芬 刊期： 2015年第10期
目的：探讨雌马酚对大鼠脑基底动脉的舒张作用与机制。方法：应用微血管张力仪和全细胞膜片钳技术，分别观察无或有钾通道阻滞剂时，雌马酚对5－HT诱导的脑基底动脉收缩和血管平滑肌大电导钙激活钾通道（ BKCa ）电流的影响，并比较雌马酚对转染人BKCa α亚单位或α与β1亚单位共转染的HEK293细胞电流的作用。结果：雌马酚以非内皮依赖的方式，浓度依赖性（10－10 mol／L～10－5 mol／L）舒张大鼠脑基底动脉，其作用被BKCa阻断剂paxilline和iberiotoxin明显减弱，而不受电压依赖性钾通道阻断剂4－AP或ATP敏感性钾通道阻断剂格列苯脲的影响。10－6 mol／L雌马酚明显增加脑基底动脉平滑肌细胞BKCa电流，此作用因同时应用iberiotoxin而逆转。10－6 mol／L雌马酚对仅表达BKCa α亚单位的HEK293细胞电流无影响，但小于10－6 mol／L可激活稳定表达BKCa α与β1亚单位的细胞电流，同时应用paxilline可使增加的电流完全抑制。结论：雌马酚通过作用于β1亚单位激活BKCa ，舒张大鼠脑基底动脉。
作者：于玮；王燕；宋征；邓秀玲 刊期： 2015年第10期
目的：观察DNA甲基化修饰酶TET2对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）中CSE／H2S体系的影响。方法：用不同浓度（0、25、50、75、100 mg／L） ox－LDL处理HUVEC不同时间（0、12、24、48 h），RT－PCR和Western blot检测细胞TET2和CSE表达变化，改良亚甲基蓝分光光度法检测培养液中H2 S含量；用TET2过表达和TET2干扰质粒分别转染HUVEC，再用75 mg／L ox－LDL处理24 h，RT－PCR和Western blot检测细胞TET2和CSE表达，改良亚甲基蓝分光光度法检测培养液中H2 S含量。结果：ox－LDL呈浓度和时间依赖性下调HUVEC中TET2和CSE mRNA和蛋白表达，减少培养液中H2 S含量，以75 mg／L ox－LDL 处理24 h效果为明显；TET2过表达可逆转ox－LDL引起的HUVEC中TET2和CSE表达下调以及培养液中H2 S含量的降低，TET2干扰则作用相反。结论：DNA甲基化修饰酶TET2可上调HUVEC的CSE／H2 S体系，有望成为CSE／H2 S体系一个新的内源性调控靶点。
作者：彭娟；唐志晗；任重；刘录山；危当恒；姜志胜 刊期： 2015年第10期
目的：脓毒症时常伴有组织因子（ TF）表达增加，致凝血功能异常。血小板与白细胞相互作用可促进白细胞表达TF，增强凝血活性。以往研究表明热休克因子1（HSF1）能减轻脓毒症时组织器官的损伤并降低死亡率。本研究探讨内毒素血症时小鼠HSF1对血小板激活、血小板与白细胞相互作用和白细胞TF表达的影响。方法：采用HSF1基因敲除（ HSF1－／－）和野生型（ HSF1＋／＋）小鼠复制内毒素血症模型，应用流式细胞术检测外周血血小板与白细胞黏附和白细胞TF表达。结果：（1）与生理盐水组相比，内毒素血症小鼠血小板P－选择素表达、血小板－白细胞黏附和白细胞TF表达显著升高，出血时间明显缩短；（2）内毒素血症时，HSF1－／－小鼠血小板P－选择素表达、血小板－白细胞黏附和白细胞TF表达均显著高于HSF1＋／＋小鼠，出血时间比HSF1＋／＋小鼠显著缩短。结论：HSF1能抑制小鼠内毒素血症时血小板激活、血小板与白细胞相互作用和白细胞组织因子表达。
作者：肖子辉；冯宇鹏；肖献忠 刊期： 2015年第10期
目的：研究灵芝孢子对非酒精性脂肪性肝病（non－alcoholic fatty liver disease， NAFLD）小鼠肝脏载脂蛋白B100（apolipopro－tein B100， ApoB100）和固醇调节元件结合蛋白1c （sterol－regulatory element binding protein－1c， SREBP－1c）表达的影响，从分子水平探讨灵芝孢子对于NAFLD的预防及治疗效果。方法：应用RT－PCR方法对比正常组、NAFLD模型组、灵芝孢子预防组、灵芝孢子治疗组中肝脏ApoB100及SREBP－1c的mRNA表达。结果：ApoB100及SREBP－1c mRNA在模型组表达增高，而在灵芝孢子预防组和灵芝孢子治疗组表达均降低，差异有统计学意义（P＜0．05）。灵芝孢子预防组和灵芝孢子治疗组组间比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论：NAFLD模型组肝脏中ApoB100及SREBP－1c 的表达明显增高；灵芝孢子预防及治疗小鼠NAFLD过程中对于其肝脏ApoB100及SREBP－1c表达的影响无明显差异。
作者：梁衍锋 刊期： 2015年第10期
目的：探讨银杏叶提取物Egb 761对大鼠心梗后心肌纤维化的作用和可能机制。方法：结扎冠脉左前降支复制大鼠心梗后心肌纤维化模型，Masson染色观察心肌纤维化病理改变。免疫组化法检测心肌α－平滑肌肌动蛋白和磷酸化细胞外信号调节激酶1／2（extracellular signal－regulated kinase 1／2，ERK1／2）蛋白的表达。结果：假手术组心肌纤维排列规则，界限清楚；模型组梗死心肌为大量结构紊乱的纤维组织替代，纤维化明显；Egb 761组心肌纤维化减轻。α－平滑肌肌动蛋白和p－ERK1／2蛋白在假手术组有微弱表达；在模型组表达明显增加，而Egb 761可抑制上述表达的增加。结论：银杏叶提取物可改善大鼠心梗后心肌纤维化，其机制可能与调节α－平滑肌肌动蛋白和p－ERK1／2的表达有关。
作者：李淑琴；武宇洲；朱嘉宝；邢茹 刊期： 2015年第10期
目的：研究褪黑素（melatonin，MT）对Toll样受体9（TLR9）配体CpG诱导巨噬细胞产生促炎症因子的影响及其机制。方法：先采用不同浓度MT处理小鼠腹腔巨噬细胞或小鼠巨噬细胞系Raw264．7，然后采用CpG刺激细胞；通过定量PCR检测MT受体MT1和MT2表达，通过ELISA和定量PCR检测细胞因子表达，通过Western blot检测信号转导蛋白的活化。结果：MT可上调巨噬细胞MT1和MT2的表达，MT可呈剂量依赖性抑制CpG刺激的巨噬细胞TNF－α、IL－6和IL－12的蛋白质和mR－NA的表达，采用MT1／2受体抑制剂Luzindole研究发现MT的抑制作用不依赖于MT1／2受体，检测信号转导蛋白发现MT可显著抑制CpG刺激的巨噬细胞ERK和AKT磷酸化，提示MT通过下调巨噬细胞ERK和AKT活化从而抑制CpG诱导的促炎症因子的分泌。结论：MT能抑制TLR9触发的巨噬细胞促炎症因子的分泌，其机制主要通过下调ERK和AKT活化，本研究进一步阐明MT调控固有免疫反应的作用与机制。
作者：王国权；刘凯；王寿棋；许熊飞 刊期： 2015年第10期
目的：观察超声心动图斑点追踪能否早期发现和诊断异丙基肾上腺素（ ISO）引起的心脏功能异常。方法：将成年C57雄性小鼠分为对照、ISO给药后3 d和ISO给药后7 d组。 ISO组为一次性给予ISO 5 mg／kg皮下注射，分别于给药后3 d和7 d应用传统超声心动图及斑点追踪评价小鼠心脏功能。结果：（1）应用传统超声心动图方法测得ISO给药后3 d组FS和E／Em均无明显差异，给药后7 d FS仍无明显差异，而E／Em显著增加（P＜0．05）。超声心动图斑点追踪方法在给药后3 d即观测到心脏径向应变（ radial strain，RS）和纵向应变（ longitudinal strain，LS）均较对照组显著降低（ P＜0．05）；给药后7 d组的RS和LS亦显著低于对照组（ P＜0．05）。结论：相对于传统超声心动图方法，斑点追踪方法能够早期诊断ISO引起的心脏功能异常。
作者：安祥博；张幼怡；宋峣 刊期： 2015年第10期
目的：观察失血性休克肠淋巴液（PHSML）对大鼠胸主动脉内皮细胞（TAVECs）通透性以及细胞骨架蛋白F－actin表达的影响。方法：建立失血性休克模型（40 mmHg，1．5 h），液体复苏后，常规方法引流PHSML，分为0～3 h和3～6 h两个亚组；原代培养大鼠TAVECs并传代，检测CD31表达；分别观察4％和10％的PHSML对TAVECs形态（光镜、扫描电镜）和活性（ MTT法）的影响，并以LPS作阳性对照；应用Transwell小室，观察PHSML对TAVECs跨细胞电阻（ TEER）以及FITC－白蛋白透过率的影响；检测F－actin表达。结果：原代培养TAVECs呈CD31阳性表达；4％和10％的PHSML 0～3 h或3～6 h以及LPS均在不同程度上使TAVECs出现结构损伤与活性降低，TEER与F－actin表达降低，FITC－白蛋白荧光通透系数增加。结论：失血性休克肠淋巴液可损伤TAVECs，增加TAVECs单层细胞的通透性，其作用机制与降低F－actin表达有关。
作者：郭亚雄；孙改霞；张立民；赵自刚；牛春雨 刊期： 2015年第10期
作者： 刊期： 2015年第10期
2型糖尿病（T2DM）作为代谢性疾病，严重威胁着人体健康。血管病变是T2DM的重要并发症，是T2DM致残和致死的首要原因。高密度脂蛋白（ HDL）及其主要成分载脂蛋白A－I对血管内皮具有多重保护功能，与T2DM血管病变风险呈负相关，但在T2DM状态下这种保护功能受损。 T2DM HDL保护功能受损影响血管内皮细胞代谢，可能导致血管并发症，其分子机制不明。在本研究中，我们基于NMR的代谢组学技术，通过提取临床T2DM患者及非糖尿病患者HDL，作用于人脐静脉内皮细胞，分析细胞代谢模式；通过多变量分析技术，系统研究T2DM状态下HDL对血管内皮的代谢模式和代谢网络的影响，并筛选特征性代谢物，确定关键代谢通路，阐明T2DM HDL功能受损影响血管内皮代谢网络的分子机制。经研究发现，HDL对内皮细胞的调控主要体现在甘油脂质代谢、胆碱代谢、氨基酸循环、肌酸代谢及支链氨基酸代谢等通路上，其中以甘油脂质代谢和胆碱代谢的变化为显著；2型糖尿病HDL功能受损对这5条代谢通路均有较大的影响。该研究将为揭示T2DM血管病变的发病机理提供理论依据，也为防治血管病变提供潜在的药靶，具有重大的科学意义和潜在的应用价值。
作者：周恩臣；黄子成；潘兵；林东海；郑乐民 刊期： 2015年第10期
目的：探讨omentin－1对巨噬细胞ATP结合盒转运体A1（ABCA1）表达及其介导胆固醇流出的影响。方法：用omentin－1处理THP－1源性巨噬细胞24 h后，Western blot检测ABCA1蛋白水平，HPLC检测胞内总胆固醇（ TC）游离胆固醇（ FC）及胆固醇酯（ CE）含量，液体闪烁计数仪检测胞内胆固醇流出，油红O染色观察胞内脂滴情况。结果：Omentin－1呈浓度依赖性上调巨噬细胞ABCA1的表达，促进胞内胆固醇流出，降低胞内TC、FC和CE含量，抑制胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成。而ABCA1 siRNA与omentin－1共处理细胞后，明显抑制omentin－1促胆固醇流出的作用，胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成明显加剧。结论：Omentin－1通过促进巨噬细胞ABCA1表达和胆固醇流出，抑制胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成。
作者：谭玉林；张敏；吴剑锋；兰刚；李元；李靓；谢魏；唐朝克 刊期： 2015年第10期
目的：研究环境致癌物甲基硝基亚硝基胍（ MNNG）转录激活人核糖核苷酸还原酶小亚基M2（ RRM2）参与DNA损伤修复的分子机制。方法和结果：MNNG刺激显著激活RRM2基因的表达。γ－H2AX、细胞周期分布及凋亡的改变显示表达上调的RRM2转位入核参与DNA损伤修复。通过RRM2启动子探针介导的DNA pulldown、LC－MS／MS 及 ChIP－PCR分析发现MNNG刺激后，E2F3直接结合到RRM2启动子上，激活其表达。另外，转录因子NFY与E2F3相互作用，增强MNNG诱导的RRM2转录激活。 MNNG处理上调E2F3蛋白水平依赖于ATR－CHK1信号通路介导的其S124位磷酸化。结论：MNNG通过激活ATR／CHK1磷酸化E2F3 S124，增加其蛋白稳定性。上调的E2F3与NFY转录共调控RRM2基因的表达，参与DNA损伤修复过程。
作者：宫朝举；邵吉民 刊期： 2015年第10期
目的：探讨CD38基因缺失对小鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法：利用CD38基因敲除及野生型小鼠进行在体小鼠心脏左前降支结扎，缺血30 min后复灌24 h取心脏，1 mm切片进行TTC染色确定其梗死面积差异。利用shRNA干扰系统构建的CD38稳定干扰H9c2细胞系模拟体外缺氧复氧损伤。用CCK－8法确定佳缺氧复氧损伤时间，再利用流式细胞术对缺氧复氧后氧化应激诱导的活性氧含量进行检测，利用Hoechst 33258染色法检测损伤诱导的细胞凋亡。分离提取细胞核浆蛋白，Western blot检测缺氧复氧后FOXO3的核定位及抗氧化蛋白catalase、凋亡信号通路相关蛋白P53－Bax表达。结果：CD38基因缺失可以减少小鼠心肌缺血再灌注损伤中心肌梗死面积。细胞缺氧复氧模型中，缺4小时复氧不同时间（3 h，6 h，10 h，24 h）诱导细胞缺氧复氧损伤模型中，CD38干扰组细胞活性均明显高于对照组。损伤诱导后CD38干扰组H9c2细胞中氧自由基含量及其诱导的凋亡均明显低于对照组（P＜0．05）。 Western blot检测发现缺氧复氧诱导细胞损伤后，CD38干扰组FOXO3明显入核，其下游蛋白抗氧化蛋白catalase表达也明显增加，抗凋亡蛋白P53乙酰化及其下游促凋亡蛋白Bax明显增加。结论：CD38基因缺失可以通过FOXO3－catalase介导的抗氧化应激信号通路和P53－Bax介导的抗凋亡信号通路减轻小鼠心肌缺血再灌注损伤。
作者：管小卉；洪轩；赵宁；刘晓红；肖云飞；陈廷涛；韩小建；邓柯玉；辛洪波 刊期： 2015年第10期
目的：探讨糖基化终末产物（ AGEs）激活上皮细胞钠通道（ ENaC）的作用，及H2 S对抗AGEs引起ENaC异常激活的机制研究。方法：应用膜片钳记录爪蟾肾皮质集合管上皮细胞ENaC电流，研究H2 S对抗AGEs引起ENaC激活的机制；应用共聚焦显微镜技术观察H2 S对AGEs引起胞内活性氧水平升高的调节作用；应用分子生物学实验检测AGEs处理后过氧化氢酶的表达水平变化。结果：AGEs通过抑制过氧化氢酶的表达引起胞内活性氧水平升高进而上调ENaC活性；H2 S通过削弱AGEs引起活性氧水平增高从而逆转AGEs引起ENaC的激活；PTEN／PI3 K通路参与了AGEs上调ENaC活性。结论：AGEs通过抑制过氧化氢酶的表达上调胞内活性氧水平，并通过PTEN／PI3K途径调节ENaC活性，该作用可被H2 S逆转，并且AGEs上调ENaC活性具有代谢记忆现象。
作者：梁辰；张志仁 刊期： 2015年第10期
目的：探讨中药清血消脂片含药血清（QXXZ）对游离脂肪酸诱导的3T3－L1前脂肪细胞炎症干预作用。方法：采用3－异丁基－1－甲基黄嘌呤异丁基－3－甲基黄嘌呤、地塞米松和胰岛素诱导3 T3－L1前脂肪细胞的分化。用油酸诱导细胞代谢性炎症；采用CBA法和RT－PCR法分别观察QXXZ对细胞炎症因子和NF－κB mRNA的影响；用3－甲基腺嘌呤（3－MA）抑制细胞自噬，免疫荧光观察药物对炎症的调节作用。结果：与同浓度的正常血清比较， QXXZ组IL－6、 MCP－1及NF－κB mRNA表达显著降低（P＜0．05）；加入3－MA抑制细胞自噬后，IL－6 mRNA的表达水平比阻断自噬前明显上升（P＜0．01），而QXXZ依然能降低其IL－6 mRNA及NF－κB mRNA表达（ P＜0．05）。结论：清血消脂片可明显降低3T3－L1前脂肪细胞炎症模型炎症因子的表达；抑制自噬活性促进了细胞炎症因子表达，而QXXZ仍可通过调节NF－κB mRNA表达水平来抑制炎症。
作者：张蕾；贾丽超；解欣然；康群甫；刘卫红 刊期： 2015年第10期
目的：探讨酸中毒诱导大脑皮层GABA能神经元功能损伤的机理。方法：制备小鼠大脑冠状切片，灌流pH为7．35～7．45的人工脑脊液，选择感觉皮层GABA能神经元为正常组，全细胞电流钳模式记录其动作电位的阈电位（ Vts ）、绝对不应期（ ARP）和动作电位的锋间距（ ISI），电压钳模式记录兴奋性突触后电流（ sEPSCs）和抑制性突触后电流（ sIPSCs），将灌流人工脑脊液pH调为6．75，模拟胞外酸中毒为胞外酸中毒组；通过玻璃微电极胞内灌注酸性电极液，模拟胞内酸中毒为胞内酸中毒组，观察上述变化。结果：与正常组比较，胞内外酸中毒均能使GABA能神经元ISI和ARP延长（P＜0．01），Vts升高（P＜0．01）， sEPSCs幅度和频率增加（P＜0．01），sIPSCs幅度和频率减少（P＜0．01）。结论：酸中毒通过影响大脑皮层GABA能神经元内在特性和突触传递，进而诱导其功能损伤。
作者：黄丽 刊期： 2015年第10期
目的：高盐膳食是高血压等心血管疾病的主要危险因子。咖啡因是咖啡中的主要成分，具有急性利尿、利钠的作用，而长期使用咖啡因后对血压和尿钠排泄的影响还不清楚。本研究的目的是观察慢性咖啡因干预对血压和尿钠排泄的作用，并探讨其机制。方法：通过手术在盐敏感大鼠体内植入血压传感器，8％高盐饲料（对照组）或8％高盐饲料＋0．1％咖啡因饮用水（咖啡因组）干预大鼠15 d。检测大鼠血压变化，血管功能，心脏结构和功能，尿电解质。健康志愿者喝含咖啡因的咖啡（含300 mg咖啡因）或去咖啡因的咖啡，测量24 h尿钠排出和动态血压。结果：（1）慢性咖啡因干预减轻高盐膳食导致的盐敏感大鼠血压升高而不影响其交感神经活性。（2）慢性咖啡因干预增加大鼠尿钠排泄总量而不影响排尿量，该作用与激活皮质集合管AMPK从而抑制上皮钠通道（α－ENaC）重吸收钠离子有关。（3）摄入咖啡增加健康志愿者尿钠排泄56 mmol，相当于3．27 g NaCl，而对心率和血压没有显著影响。结论：（1）慢性咖啡因干预通过促进尿钠排泄拮抗盐敏感性高血压。（2）饮用含咖啡因的咖啡对盐敏感性人群来说可能是值得提倡的生活方式。
作者：杨涛；于浩；高鹏；魏星；张和轩；熊诗强；路宗师；黎黎；韦晓；陈静；刘道燕；祝之明 刊期： 2015年第10期
凝血酶是血液凝固过程中的核心凝血因子。细胞外基质软骨寡聚基质蛋白（ COMP）属于凝血酶敏感蛋白（ TSP）家族成员，同家族的TSP－1已知参与血小板功能和凝血过程，而COMP对血小板及血液凝固的作用还没有报道。本课题旨在研究COMP在血小板激活及血液凝固中的作用及可能的相关机制。我们首先筛查了野生型和COMP敲除小鼠的凝血功能，发现COMP缺陷能缩短出血时间、凝血时间和损伤诱导的血栓形成时间，提示COMP敲除可能增强了凝血酶功能。接着我们发现COMP纯化蛋白特异性地抑制血小板聚集、释放以及血块收缩。通过表面等离子共振我们确定了凝血酶与COMP的直接结合，并且证实COMP与凝血酶exosite I和II双位点结合；而COMP的EGF样重复序列被证实是其与凝血酶结合位点。我们还证明了血小板可以表达并分泌COMP，通过骨髓移植与血小板输注实验证实血小板源的而非血管壁源的COMP在抑制血液凝固中起了主要作用。综上所述，本研究证实COMP通过与凝血酶结合抑制其活性，能够抑制生理性止血和血栓形成。鉴于COMP对凝血酶功能的抑制作用，其具备作为抗凝药物的临床应用潜能。
作者：付毅 刊期： 2015年第10期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
