王飞雨；王新敏；王婵；王小芳；张宇晴；吴江东；吴芳；张万江；章乐
目的：探讨参麦注射液改善3 T3－L1脂肪前体细胞胰岛素抵抗模型的效果及其作用机制。方法：使用地塞米松等将3 T3－L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞，使用油红O染色法检测脂肪细胞分化情况；用胰岛素诱导3 T3－L1脂肪细胞以建立胰岛素抵抗模型，并使用葡萄糖氧化酶法检测细胞上清液中葡萄糖浓度，以评价模型建立情况。将建立胰岛素抵抗的细胞分为空白对照组、10μmol／L罗格列酮阳性对照组、25 g／L参麦组和50 g／L参麦组。 MTT检测各组药物作用8、16、24和36 h后的细胞活力。药物作用8、16和24 h后测定细胞上清液葡萄糖浓度。免疫印迹检测葡萄糖转运蛋白4（ GLUT4）、磷脂酰肌醇3－激酶（ PI3K）、AKT和磷酸化AKT（ p－AKT）在各组中的蛋白水平。结果：成功建立3 T3－L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型，葡萄糖浓度数据显示参麦注射液（25、50 g／L）可以改善胰岛素抵抗并可以明显增加3T3－L1细胞GLUT4、PI3K及p－AKT的蛋白水平。结论：参麦注射液可以改善3T3－L1胰岛素抵抗细胞的葡萄糖利用，并且与增加GLUT4、PI3K及p－AKT的蛋白水平有关。
作者：毛玉山；陈轶尘；赵亚荣；车晓航；陶金；叶小磊 刊期： 2015年第12期
目的：观察氧化应激是否可诱导骨髓间充质干细胞（ MSCs）自噬，探索在氧化应激微环境中自噬对MSCs增殖和凋亡的影响及可能机制，以期提高移植MSCs治疗糖尿病勃起功能障碍（ DMED）的效果。方法：以过氧化氢（ H2 O2）模拟氧化应激微环境。台盼兰染色细胞计数法及MTT分析检测不同浓度（0、50、100、200、400μmol／L） H2 O2对MSCs增殖的影响。联合MTT、流式细胞术、Western blot及透射电镜等方法研究H2 O2对MSCs凋亡及自噬的影响。结果：H2 O2呈浓度依耐性抑制MSCs增殖，IC50＝（384．5751±16．8895）μmol／L；Western blot 分析及透射电镜提示H2 O2在诱导MSCs凋亡的同时，诱导MSCs产生自噬；MTT分析及流式细胞术提示H2 O2组细胞增殖受抑、凋亡率上升，阻断自噬后细胞增殖进一步减弱，凋亡率进一步上升；Western blot 结果提示H2 O2诱导cleaved caspase－3增多及多聚ADP－核糖聚合酶1（ PARP1）裂解增强；阻断凋亡后，cleaved caspase－3降低及PARP1裂解减弱；阻断自噬后，cleaved caspase－3进一步增多及PARP1裂解进一步增强。结论：氧化应激对MSCs存活具有双重作用，在诱导MSCs凋亡的同时还诱导保护性自噬，阻断MSCs自噬可以增加MSCs的凋亡，因此进一步增强细胞保护性自噬将有望提高移植MSCs在糖尿病高氧化应激微环境中的存活率，从而改善移植MSCs对糖尿病勃起功能障碍的疗效。
作者：刘关羽；何卫阳；朱鑫；杨帆；黄小龙；印胡滨；苟欣 刊期： 2015年第12期
目的：研究小白菊内酯（PN）对球囊损伤（balloon injury，BI）后新生内膜的影响及机制。方法：将30只雄性新西兰兔2．0～2．3 kg在高脂适应性喂养1周后随机分为6组：假手术＋生理盐水（ sham＋NS）组；假手术＋二甲基亚砜（ sham＋DMSO）组；球囊损伤＋生理盐水（ BI＋NS）组；球囊损伤＋DMSO（ BI＋DMSO）组；球囊损伤＋PN低剂量（ BI＋PN low）组；球囊损伤＋PN高剂量（ BI＋PN high）组。 PN溶解于DMSO，术后立即按分组腹腔注射同体积药物治疗，每日1次。继续高脂喂养4周后取血清及髂总动脉，分析比较血管内－中膜厚度、半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶（caspase）－1、白细胞介素（IL）－1β和IL－8的表达量以及血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL）的含量。结果： BI＋DMSO组较sham＋DMSO组内膜厚度、caspase－1、IL－1β和IL－8的表达量增加（P＜0．05）；与BI＋DMSO组比较，上述指标在PN高、低剂量组有不同程度降低，但仅PN高剂量组与其差异有统计学意义（ P＜0．05）；各组血脂指标差异不明显。结论： PN能抑制球囊损伤后的内膜增殖，其机制可能与抗炎作用有关。
作者：毛霞；高丽华；邓昌明 刊期： 2015年第12期
肿瘤是指在各种致瘤因子的作用下，机体局部组织细胞非典型性增生所形成的隆起物，可分为良性肿瘤和恶性肿瘤。二者的主要区别就在于恶性肿瘤在机体中呈侵袭转移性生长，而良性肿瘤一般不转移，呈局部膨胀性生长。恶性肿瘤是世界上公认重大而又非常棘手的疾病，有研究显示我国肿瘤发病率逐年升高，2012年我国癌症发病率和死亡率分别是174．0／10万和122．2／10万，癌症已经成为中国人死亡的主要原因[1]。而肿瘤细胞远处转移并侵袭周围组织是恶性肿瘤致人体死亡的重要病理因素[2－4]。目前发现仅针对转移性恶性肿瘤的原发病灶治疗远远不够，约30％－40％的病人治疗后仍然会发生肝、肺转移[4]。因此，积极探究恶性肿瘤转移的机制，再针对其转移靶点的治疗是降低恶性肿瘤复发率和死亡率的重要手段。随着对恶性肿瘤研究的不断深入，一些恶性肿瘤细胞转移的机制逐渐被明确。其中，新近研究的吞噬和细胞运动蛋白（ engulf－ment and cell mobility proteins ，ELMO）被认为与多种恶性肿瘤细胞的侵袭转移关系密切。
作者：郭称明；彭会云；罗文；余琼芳；高典 刊期： 2015年第12期
线粒体钙离子平衡对维持线粒体特性，介导多种细胞生理功能和病理过程具有重要的作用。虽然大家都知道线粒体钙离子的摄取，但直到近年来才部分揭示此过程中转运体的分子结构。本文就线粒体钙离子单向转运体（ mitochondrial calcium unipor－ter，MCU）及其相互作用蛋白的研究进展进行综述。
作者：徐斌；李泱 刊期： 2015年第12期
目的：采用定量磁共振（ MR）灌注成像测定直肠癌的各灌注参数，以探究MR灌注成像在评价肿瘤局部微血管灌注量及渗透性方面的应用价值。方法：回顾性分析行直肠动态对比增强磁共振（ DCE－MRI）扫描的直肠癌患者38例。计算肿瘤和正常肠壁感兴趣区（ROI）灌注参数[对比剂容积转换常数（Ktrans）、血浆与血管外细胞外间隙（EES）间的速率常数（Kep）、单位体积组织的EES 容量（Ve）及初始强化曲线下面积（iAUC）]的平均值，并对肿瘤与正常肠壁、黏液腺癌与非黏液腺癌、不同分化程度及是否伴淋巴结转移的患者各灌注参数值进行比较分析。结果：直肠癌的各灌注参数均较正常肠壁高，差异具有统计学意义（P＜0．01）。直肠黏液腺癌较非黏液腺癌的Ktrans值低（P＜0．05）。不同分化程度、伴有或不伴有淋巴结转移直肠癌患者的Ktrans、Kep及Ve 差异无统计学意义，伴有淋巴结转移的直肠癌iAUC较不伴者低。结论：定量MR灌注成像验证了直肠癌较正常肠壁局部微血管灌注及渗透性的改变，并可用于鉴别黏液腺癌与非黏液腺癌的组织学分型，具有一定的诊断应用价值。但是仅根据肿瘤的灌注值来判断肿瘤的分化程度及淋巴结转移尚不可靠。
作者：肖晓娟；卢宝兰；杨心悦；王影；刘旭斌；翟凤仪；余深平 刊期： 2015年第12期
目的：明确18α－甘草次酸（18α－glycyrrhetinic acid，18α－GA）对晚期骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells ，BMSCs）衰老标志物和增殖能力的影响。方法：晚期BMSCs （≥14代）应用2．0 mg／L的18α－GA持续作用30 d，比较18α－GA组与DMSO组蛋白酶体活性；衰老相关β－半乳糖苷酶（ senescence－associatedβ－galactosidase，SA－β－Gal）染色和Western blot检测衰老相关蛋白p53、p21和p16的表达变化；CCK－8、BrdU掺入试验、流式细胞术和Western blot分别检测细胞增殖能力、细胞周期分布及细胞周期相关分子表达变化。结果：应用18α－GA后BMSCs蛋白酶体活性较DMSO组增高约0．2倍（P＜0．01）。18α－GA组SA－β－Gal阳性衰老细胞较DMSO组减少，且细胞着色浅淡；衰老相关蛋白p53和p21表达水平分别较对照组降低（P＜0．05）。 CCK－8实验及流式细胞术结果显示18α－GA组细胞增殖能力较DMSO组增高，S期细胞显著增多（P＜0．05），18α－GA组BrdU染色阳性细胞率较DMSO对照组增高（P＜0．05）。18α－GA组细胞周期相关蛋白cyclin D1及CDK4表达水平分别较DMSO组增高（P＜0．05）。结论：18α－GA可激活晚期BMSCs蛋白酶体活性延缓细胞衰老，并且可能通过上调细胞周期相关蛋白表达水平促进晚期BMSCs增殖。
作者：杨佳超；赵云鹤；蒋蓉；陆利 刊期： 2015年第12期
目的：研究真核翻译延长因子1A2（eEF1A2）在原发性肝细胞癌（HCC）组织的表达，以及eEF1A2过表达对HCC细胞生物学行为的影响。方法：应用real－time PCR法和免疫组化法分别检测62例HCC癌组织与配对癌旁组织、20例正常肝脏组织eEF1A2的mRNA和蛋白表达，应用real－time PCR法与Western blot法分别检测几种HCC细胞株eEF1A2的mRNA与蛋白表达。构建GV287－eEF1A2表达慢病毒感染低表达eEF1A2的HCC细胞，应用real－time PCR法和Western blot法分别检测细胞eEF1A2的mRNA和蛋白表达；应用MTT法、DNA倍体法和real－time PCR法分别检测细胞活力、细胞周期和白蛋白mRNA的表达。结果：HCC癌组织eEF1A2的mRNA表达水平和蛋白表达阳性率明显高于配对癌旁组织与正常肝脏组织（P＜0．01）；eEF1A2的mRNA和蛋白在HCC细胞株SMMC－7721和BEL－7402高表达，在SK－HEP－1低表达。构建的GV287－eEF1A2表达慢病毒可感染SK－HEP－1细胞使eEF1A2过表达；与阴性对照组相比，GV287－eEF1A2组SK－HEP－1细胞的活力升高，白蛋白的mRNA表达水平降低，G0／G1期的细胞比例显著减少，而S期和G2／M期的细胞比例显著升高。结论： eEF1A2在HCC癌组织存在异位高表达；eEF1 A2可能是HCC的一种潜在癌蛋白，其过表达可增强HCC细胞的增殖能力，降低HCC细胞的分化程度，并促使细胞周期通过G0／G1期，进入S期和G2／M期。
作者：黄毅；邱福南；陈敦雁；伍严安；李峰；黄肖利；吴文冰 刊期： 2015年第12期
目的：运用蛋白质组学研究方法探讨吡那地尔后处理对缺血再灌注损伤大鼠心肌的保护作用。方法：建立Langendorff大鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型，随机分为吡那地尔后处理组（ Pina组）和缺血再灌注损伤组（I／R组），每组9只。提取心肌线粒体蛋白质行双向凝胶电泳，应用质谱鉴定差异大于2倍的蛋白质点。结果：Pina组与I／R组比较，共发现7个差异蛋白质：Pina 组NADH 脱氢酶1α亚复合体10亚基（ NDUFA10）﹑NADH脱氢酶铁硫蛋白2（NDUFS2）和NADH脱氢酶黄素蛋白2（NDUFV2）表达低于I／R组；Pina组异柠檬酸脱氢酶α亚基（IDHA）和Δ3，5－Δ2，4－二烯酰辅酶A异构酶（ECH1）表达高于I／R组；另有2个蛋白质点均被鉴定为ATP合酶δ亚基，一个蛋白质点表达升高，而另一个表达降低。结论：吡那地尔后处理可能抑制了复合体Ⅰ的亚基（NDUFA10﹑NDUFS2和NDUFV2）代偿性增加，但促进了IDHA和ECH1表达并引发了ATP合酶δ亚基发生磷酸化，这些改变可能均与吡那地尔后处理保护心肌的作用有关。
作者：魏义勇；李科；刘云；刘兴奎；王海英；喻田 刊期： 2015年第12期
目的：本研究旨在检测金属络合物四硫代钼酸铵（ ATTM）的硫化氢（ H2 S）释放能力并进一步观察其减轻氧化应激诱导的皮肤细胞损伤的作用。方法：反应瓶法检测ATTM在细胞培养基中释放的H2 S，二氯二氢荧光素二乙酸酯或罗丹明123染色结合荧光显微镜照相术分别检测细胞内活性氧簇（ ROS）的含量和线粒体膜电位（ΔΨm），用试剂盒检测细胞存活率和乳酸脱氢酶（LDH）的释放。结果：与H2S供体GYY4137类似，ATTM在细胞培养基中可剂量依赖性地释放H2 S。在25～400μmol／L的浓度范围内，ATTM处理对人皮肤细胞（ HaCaT细胞）的存活率无明显影响（ P＞0．05）。紫外线照射或外源性给予ROS供体（过氧化氢，H2 O2）处理均可增加HaCaT细胞内ROS的含量。400μmol／L H2O2处理可明显降低HaCaT细胞的存活率（P＜0．01），而在H2O2处理前给予ATTM预处理，细胞存活率明显提高，其中在100和200μmol／L浓度时ATTM具有好的细胞保护作用（ P＜0．01）。400μmol／L H2 O2处理还可损害细胞的ΔΨm 和细胞膜并使LDH释放增加（ P＜0．01）。而在细胞遭受损伤前给予200μmol／L ATTM预处理可明显改善ΔΨm 的水平（P＜0．05）并抑制LDH从细胞内释放（P＜0．01）。结论：ATTM具有释放H2 S的能力并可保护人皮肤细胞对抗氧化应激诱导的损伤效应。
作者：孟富慧；陈利；徐适；鲜明；张辉；李建华；董颀；杨春涛 刊期： 2015年第12期
作者： 刊期： 2015年第12期
目的：观察处于性成熟期和去卵巢ICR小鼠的动情周期特点。方法：ICR雌性小鼠分为正常对照组、假手术组和去卵巢组，术后第8天开始，连续12 d，每日9：00和16：00分别做2次阴道涂片，记录并观察各组小鼠外阴和阴道涂片细胞特征，规律动情周期发生率，动情周期天数和动情周期各期持续时间。结果：正常对照组与假手术组动情周期特点表现相似，85％处于性成熟期的ICR小鼠呈规律动情周期，多数为6 d周期（83％），少数为5 d动情周期（17％）；与5 d相比，6 d的动情期持续时间明显增加（P＜0．05）。5 d和6 d动情周期阴道涂片细胞特征在数量和种类略有所不同。去卵巢组小鼠约76％呈动情周期紊乱，表现为连续动情间期。结论： ICR雌性小鼠具有自身品系的动情周期特点。
作者：杜纳纳；许丹丹；黄莉莉 刊期： 2015年第12期
目的：观察体外饥饿状态下脂肪细胞的自噬变化，研究自噬在维持体外饥饿状态下脂肪细胞存活中的作用。方法：将小鼠3T3－L1细胞诱导成为脂肪细胞后，雷帕霉素（ rapamycin，RAP）预处理脂肪细胞，在缺糖缺氧（ oxygen－glucose deprivation ，OGD）模拟的饥饿环境中孵育细胞。应用Western blotting 及透射电镜法检测细胞自噬变化，用TUNEL染色及Western blotting检测脂肪细胞凋亡。结果：OGD条件下脂肪细胞的自噬水平明显升高， RAP预处理进一步上调了OGD条件下的细胞自噬。与对照组相比，OGD组细胞cleaved caspase－3的水平及细胞凋亡率明显升高（ P＜0．01）。 RAP预处理降低了OGD 条件下cleaved caspase－3的水平，并明显降低了细胞凋亡率（P＜0．05）。结论：自噬在饥饿状态下脂肪细胞存活中发挥保护性作用，提高自噬水平有助于降低饥饿状态下脂肪细胞的凋亡水平。
作者：李翅翅；李力群；黄春霞；张丹 刊期： 2015年第12期
目的：研究CXC趋化因子受体7（CXC chemokine receptor 7，CXCR7）在动脉粥样硬化模型载脂蛋白E基因敲除（ ApoE－／－）小鼠中的表达并探究阿托伐他汀的干预作用。方法：8周龄ApoE－／－雄性小鼠，随机分为正常对照组、高脂组与高脂＋阿托伐他汀组，实验干预12周建立动脉粥样硬化模型；油红O及HE染色观察动脉粥样硬化病变，Western blot及免疫组化法检测动脉CXCR7的表达，Western blot 检测动脉eNOS和Akt的表达。结果：（1）动脉油红O及HE染色示高脂组可见有明显粥样核心及纤维帽的显著斑块，高脂＋阿托伐他汀组也可见斑块，但斑块负荷较模型组减轻，正常对照组未见明显斑块形成；（2）免疫组化示高脂组动脉细胞着色浅，CXCR7表达量少，高脂＋阿托伐他汀组与高脂组比较，细胞着色增加，CXCR7表达量增加，正常对照组颗粒呈深棕黄色，示CXCR7大量表达；（3）Western blot结果示高脂组CXCR7、eNOS和Akt的表达较正常对照组降低，给予阿托伐他汀干预后CXCR7、eNOS和Akt的表达较高脂组增加，较正常对照组相比CXCR7、eNOS和Akt的表达下降，但磷酸化eNOS的水平未见差异。结论：高脂血症可损伤血管内皮，促进动脉粥样硬化的发展，下调动脉CXCR7、eNOS和Akt的表达；阿托伐他汀可改善动脉粥样硬化，缓解ApoE－／－小鼠动脉CXCR7、eNOS和Akt蛋白表达的下调。
作者：涂小丽；陈琦；张洪洲；鄢瑞娟；吴延庆 刊期： 2015年第12期
目的：研究白花丹醌（ plumbagin ）对转化生长因子β1（ TGF－β1）刺激的体外培养人肝星状细胞（HSC－LX2）NADPH氧化酶4（Nox4）的mRNA和蛋白表达、活性氧簇（ROS）水平及α－平滑肌肌动蛋白（α－SMA）蛋白表达的影响。方法：体外培养HSC－LX2，随机设立空白组、TGF－β1刺激的模型组、TGF－β1＋plumbagin （2μmol／L、1．5μmol／L及1μmol／L）组；细胞与各药物共同孵育72 h后，采用RT－PCR检测细胞Nox4 mRNA的表达；原位装载探针法测定细胞内ROS的水平；Western blot检测细胞内Nox4和α－SMA的蛋白含量。结果：与模型组比较，白花丹醌作用72 h后，2μmol／L和1．5μmol／L plumbagin能明显降低HSC－LX2细胞Nox4 mRNA和蛋白的表达（ P＜0．01），下调ROS水平，降低α－SMA的蛋白表达（P＜0．01）。结论：Plumbagin可能是通过下调Nox4的表达进而降低ROS生成从而发挥其抑制HSC－LX2细胞活化的作用。
作者：杨成芳；李丽；李勇文；钟毓娟；熊美丽；方舒萍 刊期： 2015年第12期
目的：研究蜂胶醇取物（ ethanol extract of propolis ，EEP）对氧化低密度脂蛋白（ oxidized low－density lipoprotein，ox－LDL）诱导的巨噬细胞凋亡的抑制作用，并探讨可能的分子机制。方法：体外培养RAW264．7巨噬细胞，给予EEP（7．5、15和30 mg／L）、4－苯丁酸（4－phenylbutyric acid，PBA；5 mmol／L）或二亚苯基碘鎓（diphenyleneiodo－nium，DPI；5μmol／L）预处理1 h，再加入ox－LDL（100 mg／L）或衣霉素（tunicamycin，TM；4 mg／L）继续培养24 h。分别采用MTT法和Annexin V－FITC双染法检测细胞活力和凋亡情况；试剂盒测定细胞内超氧化物歧化酶（ superoxide dismutase，SOD）活性、活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）的水平。采用免疫印迹技术检测内质网应激（ endoplasmic reticulum stress ，ERS）凋亡途径关键蛋白caspase－12的表达变化。结果：与ERS抑制剂PBA相似，EEP呈剂量依赖性减轻ox－LDL所致的巨噬细胞损伤，表现为细胞活力增加（ P＜0．01），凋亡率降低（ P＜0．05），且可抑制ERS诱导剂TM所引起的巨噬细胞活力下降和凋亡（ P＜0．05）；与氧化应激抑制剂DPI相似，EEP可抑制ox－LDL诱导的氧化应激反应，表现为ROS和MDA生成减少（P＜0．01），SOD活性增加（P＜0．05）；EEP显著抑制ox－LDL和TM所诱导的caspase－12活化（ P＜0．05）；与ox－LDL组比较，PBA和DPI预处理组caspase－12活性也受到明显抑制（P＜0．01）。结论：EEP可减轻 ox－LDL 所诱导的RAW264．7巨噬细胞凋亡，其机制可能与抑制氧化应激和caspase－12活化有关。
作者：李严严；徐晓燕；张家君；方永奇；田华；焦鹏；桑慧；秦树存；姚树桐 刊期： 2015年第12期
目的：研究RNA干扰（ RNAi）介导的胰岛素样生长因子1受体（ IGF1R）基因沉默对肝癌细胞生长、迁移与侵袭的影响。方法：设计并筛选抑制IGF1R mRNA表达效率高的siRNA序列，构建该序列的慢病毒表达载体，转染293T细胞进行病毒包装。将包装好的慢病毒感染Huh7和Hep3B肝癌细胞，筛选沉默IGF1R基因表达的稳定细胞株。将上述稳定细胞株扩大培养，检测细胞IGF1 R mRNA表达变化，细胞生长、迁移与侵袭能力变化，以及Ki－67、p－AKT、p－ERK1、Gli1、β－catenin、cyclin D1、p21、BCL－XL的蛋白表达水平变化。结果：与空白及阴性对照组比较，感染携带IGF1R干扰序列慢病毒的Huh7和Hep3B肝癌细胞IGF1R mRNA表达水平显著下调，细胞增殖活性明显降低，细胞凋亡显著增加，细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制，细胞中IGF1R、Ki－67、p－AKT、p－ERK1、Gli1、β－catenin、cyclin D1、p21及BCL－XL蛋白表达水平均显著降低。结论：RNAi介导的IGF1R基因沉默可明显抑制Huh7和Hep3B肝癌细胞生长及恶性生物学特征，这可能与IGF1R表达水平显著下调而引起上述调控细胞增殖、抗凋亡基因以及相关信号通路基因的蛋白表达水平显著降低有关。
作者：别彩群；黄秋燕；颜英；石珩；汤绍辉 刊期： 2015年第12期
目的：探讨p21活化激酶4（PAK4）对非小细胞肺癌（NSCLC）侵袭和迁移能力的影响及相关机制。方法：PAK4－siRNA或阴性对照转染A549和NCI－H520细胞株，实时荧光定量PCR和Western blot 分别检测细胞PAK4 mRNA和蛋白表达水平，Transwell小室法检测其对细胞侵袭和迁移能力的影响；Western blot检测其LIMK1、cofilin及其磷酸化水平；免疫共沉淀检测PAK4和LIMK1蛋白是否直接绑定；体外激酶分析实验检测LIMK1是否是PAK4的激酶底物；Western blot检测10例非小细胞肺癌组织中PAK4和磷酸化LIMK1的相关性；PAK4－siRNA和LIMK1质粒共转染A549和NCI－H520细胞后观察细胞迁移和侵袭能力变化。结果：沉默PAK4后A549和NCI－H520细胞迁移和侵袭能力明显减弱（P＜0．05）；LIMK1和cofilin蛋白水平无显著变化，而磷酸化LIMK1和磷酸化cofilin水平显著下调；免疫共沉淀结果示PAK4与LIMK1相互绑定；激酶分析实验结果显示，激酶缺陷型PAK4（K350M）使LIMK1磷酸化的作用显著低于野生型PAK4或活化型PAK4（S445N）（P＜0．05）。 Western blot检测结果示非小细胞肺癌组织中PAK4表达上调的程度与磷酸化LIMK1含量呈正相关（P＜0．05）；PAK4－siRNA和LIMK1质粒共转染A549和NCI－H520细胞后，迁移和侵袭细胞数均高于PAK4－siRNA转染组（ P＜0．05）。结论： PAK4通过直接磷酸化LIMK1而促进非小细胞肺癌的迁移及侵袭能力。
作者：李冬霞；王永玲；蔡松旺 刊期： 2015年第12期
目的：探讨Notch－1下调对双氢青蒿素抗人骨肉瘤细胞株U－2OS细胞存活率的影响及其作用机制。方法：双氢青蒿素（5、10、15和20μmol／L）孵育U－2OS细胞后，采用免疫印迹和实时荧光定量聚合酶链反应检测骨肉瘤细胞中Notch－1、基质金属蛋白酶（ MMP）－2、MMP－9和Notch－1通路下游基因Hes－1的蛋白和mRNA的表达水平。下调Notch－1表达后，采用MTT法、免疫印迹法和细胞迁移实验检测在双氢青蒿素作用下U－2OS细胞的存活率，MMP－2、MMP－9和Hes－1的蛋白表达以及U－2OS细胞的迁移能力。结果：免疫印迹法与逆转录聚合酶链反应结果显示双氢青蒿素呈剂量依赖性降低U－2OS细胞中Notch－1、MMP－2、MMP－9和Hes－1的蛋白和mRNA的表达水平（P＜0．05）；下调Notch－1表达后，增强了双氢青蒿素抑制U－2OS细胞生长的作用，MMP－2、MMP－9和Hes－1的蛋白表达及细胞迁移能力进一步降低，显著低于加药组（ P＜0．05）。结论：双氢青蒿素可抑制U－2OS细胞中Notch－1通路的活性；下调Notch－1的表达可增强双氢青蒿素抗骨肉瘤的作用。
作者：齐磊；段永刚；丁英奇；张龙；刘玉章；唐晓龙；伍骥 刊期： 2015年第12期
目的：观察血清型A肉毒杆菌神经毒素重链（ botulinum neurotoxin serotype A heavy chain ，BoNT／A HC）对Neuro－2a细胞的促神经突起再生作用并探讨与其相关的细胞内信号机制。方法：采用体外细胞培养技术，在培养液中加入不同浓度的BoNT／A HC（0．01 nmol／L、0．1 nmol／L、1 nmol／L和10 nmol／L）进行干预，于24 h、48 h和72 h时收集细胞进行免疫荧光染色，再计算细胞突起长度及有突起细胞的百分比；在此基础上，选择有效的BoNT／A HC浓度作为处理剂量加入细胞培养液，于BoNT／A HC作用后不同时点收集全细胞蛋白，采用Western blot检测p－ERK1／2及p－Akt的蛋白水平。结果：当BoNT／A HC浓度为0．1 nmol／L、1 nmol／L和10 nmol／L时，细胞突起的长度及有突起细胞的百分比与对照组相比皆明显增加，差异显著（ P＜0．05），其中1 nmol／L效果显著。在细胞培养液内加入1 nmol／L BoNT／A HC 后，p－ERK1／2的蛋白水平呈增加趋势，其中BoNT／A HC作用60 min后，p－ERK1／2的增加与对照组相比差异显著（P＜0．05）；与p－ERK1／2变化趋势类似，细胞培养液内加入1 nmol／L的BoNT／A HC后， p－Akt的蛋白水平也呈增加趋势，其中BoNT／A HC作用15 min和60 min 时，p－Akt增加显著（P＜0．05）。结论：一定剂量的BoNT／A HC可以促进神经细胞突起再生和生长； BoNT／A HC对Neuro－2a细胞的促神经突起再生作用机制可能通过激活与神经再生相关的信号蛋白ERK1／2和Akt的磷酸化而实现。
作者：高美玲；王红；张彩云；兰婧；李夏青 刊期： 2015年第12期
中国病理生理杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国病理生理学会
