学术投稿

SETD4蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒系统的表达

雷烨铭;崔航;钟玙沄;王义乾;黄穗;赵舒祺;蔡军伟;姜勇;刘靖华

关键词:SETD4蛋白, 杆状病毒表达系统, 表达, 纯化
摘要:目的:通过昆虫杆状病毒表达系统表达SETD4(SET domain-containing 4)蛋白,并纯化SETD4蛋白,为深入探讨SETD4的功能奠定基础。方法提取小鼠正常肝组织的RNA,通过RT-PCR扩增SETD4基因,并克隆至pFastBac-HTB构建重组载体,再转座获得重组杆粒;通过脂质体介导将重组杆粒转染SF9细胞产生重组病毒,扩增病毒感染细胞并获得重组蛋白;利用Ni2+亲和柱来纯化蛋白,并通过Western Blot及考马斯亮蓝染色鉴定SETD4蛋白。结果经双酶切鉴定及测序证实SETD4基因插入了供体质粒;经PCR鉴定证实SETD4基因插入了穿梭载体;经考马斯亮蓝染色证实纯化得到重组蛋白,用His-Tag抗体和SETD4特异性抗体在50 kD处可检测到目的条带。结论成功利用昆虫杆状病毒表达系统够表达了SETD4,并纯化了SETD4。
中国临床解剖学杂志相关文献
  • 胃癌合并小肠禁锢症1例

    患者,男,66岁。因“上腹部饱胀不适,伴阵发性疼痛1个月”于2013-5-13入院。查体:患者发育正常,营养中等,体型正常;浅表淋巴结未触及肿大;腹部平坦,未见胃肠型及蠕动波,腹部无压痛、反跳痛,腹部未触及包块,肠鸣音正常。患者有“高血压、冠心病”病史,无手术史。实验室检查基本正常,肿瘤标记物(CEA、CA72-4、CA19-9)在正常范围内。胃镜诊断:胃窦小弯侧见不规则肿物,凹凸不平,累及胃角。病理结果:(胃活检)低分化腺癌。上腹部CT检查:胃窦部胃壁不规则增厚,浆膜面毛糙,增强扫描可见不均匀强化;大网膜密度略增高。

    作者:邹磊;侯庆生;姜明静;管杰 刊期: 2015年第04期

  • 宫颈癌患者盆腔静脉CT成像的优化及应用研究

    目的:探索宫颈癌患者盆腔脏器亚毫米CT静脉成像的佳时间,为CT诊断及三维重建提供实践基础。方法将45名不同期别宫颈癌患者随机分为3组,每组15人,自注射造影剂起分别延时70s(A组)、90s(B组)、120s(C组)进行扫描。所得图像由两位放射科医师分别在诊断工作站进行观察,并对图像质量进行评级和评分。对评级评分数据进行统计学分析。结果各组宫颈癌患者静脉期扫描图像评价中B组总体评分高,增强扫描后经统计学分析,三组延迟增强扫描效果均有统计学差异,B组图像整体增强效果佳。结论自注射造影剂起延时90s行静脉期扫描,可获得图像质量好的扫描数据,从而有利于宫颈癌的诊断及为三维重建提供实践基础。

    作者:朱洪磊;王显龙;何援利;彭冬先;王燕钰 刊期: 2015年第04期

  • Wnt/β-catenin信号通路对孤独症模型大鼠重复呆板样行为的影响

    目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路对孤独症发生过程中重复呆板样行为的影响。方法利用丙戊酸(valproic acid,VPA)孤独症动物模型,检测了经典Wnt信号通路关键信号分子β-catenin及其负性调节因子GSK-3β在孤独症模型大鼠小脑脑区的表达变化;同时检测孤独症模型大鼠重复呆板样行为变化。Western blotting法检测GSK-3β、β-catenin总蛋白及磷酸化蛋白表达,运用旷场实验检测重复呆板样行为持续的时间、次数。结果与对照组相比,在小脑脑区模型组GSK-3β磷酸化蛋白表达增加,β-catenin磷酸化蛋白表达减少;重复呆板样行为持续的时间、次数均增加。结论孤独症大鼠小脑脑区经典wnt信号通路活性增加,运动亢进,提示经典Wnt信号通路活性增加可能导致重复呆板样行为变化,进而导致对孤独症的易感性增加。

    作者:张应花;贾云杰;张天然;崔卫刚;王中平;小军 刊期: 2015年第04期

  • MRI三维重建及旋转分割法对膝关节骨性关节炎患者半月板形态、位置变化的临床对比研究

    目的:利用MRI三维重建及旋转分割方法对膝骨性关节炎患者及正常人半月板的形态及位置进行定量测量并对比分析,探讨膝骨性关节炎患者半月板的形态、位置变化及其临床意义。方法选取2013年1月-2014年2月在我院诊治的膝骨性关节炎II、III级患者20例(共20膝)作为关节炎组,另选择年龄、性别、体重指数相匹配的正常人10例(共10膝)作为正常组。所有研究对象先行MRI 3D薄层扫描,后行三维重建及旋转分割,在分割后的图像上对半月板进行定量测量,以半月板整体宽度、半月板覆盖胫骨平台宽度和半月板厚度作为量化指标进行两组间对比研究。结果内侧半月板整体宽度在所有方向上两组间差异无统计学意义;覆盖胫骨平台宽度从60°~120°位关节炎组明显变小,两组间差异具有统计学意义;厚度在60°~130°位关节炎组明显变厚,两组间差异具有统计学意义。外侧半月板整体宽度及覆盖胫骨平台宽度在10°~50°及140°~170°位关节炎组显著变宽,两组间差异具有统计学意义;厚度在120°~170°位关节炎组明显变厚,两组间差异有统计学意义。结论本研究为临床上半月板的MRI检查提供了一个新的方法和思路;通过测量发现膝骨性关节炎患者半月板的形状、位置与正常人相比发生了明显的变化,且这种变化同膝关节骨性关节炎具有一定相关性。

    作者:孔令伟;崔志新;王瑜;赵景新;纪海茹;孔祥玉;金宇 刊期: 2015年第04期

  • 正常成人松果体MRI研究

    目的:建立正常成人松果体MRI测量标准,并分析其性别差异及年龄变化规律。方法MRI扫描327例正常成人头颅,测量并分析松果体相关数据。结果松果体矢径女性(7.12±1.11)mm,男性(6.52±1.01)mm(女性>男性,P<0.05);松果体横径女性(5.72±0.98)mm,男性(5.38±1.07)mm;松果体高女性(4.38±0.43)mm,男性(4.03±0.62)mm;松果体体积女性(88.92±27.90)mm3,男性(74.35±23.62)mm3(女性>男性,P<0.05)。结论松果体矢径和体积女性大于男性,松果体体积性别差异出现在31~60岁。

    作者:邓玲;钱学华;周庭永;刘敏;白桂芹;吕发金 刊期: 2015年第04期

  • 人肝脏分段分色血管铸型透明标本制作

    随着现代肝脏外科的发展,肝移植、半肝切除及肝段切除等手术已经成为临床治疗肝脏疾病的重要手段,随之而来的是传统Couinaud肝段划分方法不足的逐渐凸显。虽然有各种影像学定位手段辅助进行肝段定位,但有学者认为实际手术过程中,仅靠肝脏表面的解剖学标志并没有为肝切除带来实质的进展[1],联合应用术中超声以及Pringle法等血管阻断技术,虽然可以实现解剖性肝段切除,但该技术对肝脏解剖及术中超声技术要求极高,在合并肝硬化或部分肝萎缩时还存在解剖标志难以辨识的缺点。因此将传统的肝段、肝裂定位方法简单应用于目前的精准肝切除、个体化肝段划分仍显不足。本研究在前期工作的基础上[2,3],将分段分色血管铸型技术及铸型透明技术相结合,在保留肝脏外形与周围韧带、裂隙等解剖结构同时将各肝段以不同颜色进行显示,制作人肝分段分色血管铸型透明标本,为临床肝段、肝裂基础研究提供新方法。

    作者:张健飞;郑楠;宫瑾;张国伟;于胜波;迟彦艳;徐强;王晓梅;王滨;隋鸿锦 刊期: 2015年第04期

  • 颈椎和腰椎并发椎管狭窄症Ⅰ期手术减压的临床疗效

    目的:观察Ⅰ期手术减压治疗颈腰椎并发的椎管狭窄症的疗效及其安全性。方法回顾22例Ⅰ期手术减压治疗颈、腰椎并发的椎管狭窄症的临床资料及围手术期并发症,平均年龄(68.7±9.3)岁(55~83岁),随访24~58个月,记录手术时间、出血量、住院时间;术前、术后1月和随访末期JOA评分(颈椎17分法、腰椎29分法)及其改善率;患者满意度;并分析围手术期并发症。结果平均手术时间、失血量、住院时间分别是(189±49)min、(490±70)ml、15.9 d;随访末期JOA改善率分别达到67.9%(C-JOA)、63.5%(L-JOA),较术前显著改善(P<0.05),病人满意度73.9%;围手术期并发症发生率18.1%,包括急性失血、脑脊液漏、深部感染、短暂性神经损害各1例。结论Ⅰ期手术减压治疗颈腰椎并发的椎管狭窄症疗效满意;围手术期并发症并未因此增加,但应严格手术指征。

    作者:申连成;龙厚清;徐晶辉;黄阳亮;李佛保 刊期: 2015年第04期

  • Sulindac对人肝癌细胞HepG2增殖及β-catenin表达的影响

    目的:观察Sulindac对人肝癌细胞HepG2增殖、凋亡及β-catenin蛋白表达的影响,探讨Sulindac抗肝癌的可能机制。方法不同浓度的Sulindac作用HepG2细胞后,采用MTT实验检测细胞增殖抑制作用;采用Hoechst33258染色法检测Sulindac对HepG2细胞凋亡的影响;利用RT-PCR及Western blotting检测HepG2细胞在Sulindac作用后Wint通路中β-catenin的表达变化。结果 Sulindac对人肝癌细胞HepG2有增殖抑制作用,且呈剂量时间依赖关系;Hoechst33258结果显示,Sulindac作用24 h后HepG2细胞凋亡数目明显增多;随着Sulindac浓度的增加,β-catenin mRNA及蛋白表达量逐渐下降。结论 Sulindac能够抑制人肝癌细胞HepG2增殖,通过阻断Wnt信号传导通路,降低β-catenin表达,诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡。

    作者:邓晓慧;张应花;方方;宋海岩;付升旗 刊期: 2015年第04期

  • LPS直接及间接作用致小鼠急性肺损伤模型的建立

    目的:呼吸系统的急性炎症所致的急性肺损伤(ALI)是临床常见的急症、重症,也是目前实验研究的热点。在对其发病机制和治疗手段的探讨过程中,动物模型的有效建立极其重要。方法本实验比较了气道内直接滴入和腹腔注射给入两种LPS给入方式,通过组织学病理评价、炎症细胞的细胞学反应,炎症反应细胞分泌物蛋白水平的变化等炎症反应指标,评价了LPS两种不同的给入方式对小鼠急性肺损伤(ALI)模型建立的有效性。结果组织学水平显示,气道内直接滴入LPS肺组织炎性细胞浸润的病理改变较腹腔注射LPS组更明显,肺损伤的组织学病理改变也更明显;细胞学水平,气道内直接给入LPS组肺泡灌洗液可见较多中性粒细胞渗出,而腹腔注射LPS组肺泡灌洗液中性粒细胞渗出少,与腹腔注射生理盐水组无差别;细胞因子水平,气道内直接滴入LPS肺组织组肺泡灌洗液蛋白水平明显升高,高于生理盐水对照组和腹腔注射LPS组。结论气道内直接滴入LPS是一种有效的小鼠急性肺损伤模型制备方法,可通过LPS的直接气道内分散和刺激至直接肺损伤。

    作者:陈英华;吕嘉文;翟启良;谢哲凡;胡国栋 刊期: 2015年第04期

  • 产前超声诊断胎儿肢体畸形的技术探讨

    目的:探讨通过产前超声提高胎儿肢体畸形诊断率的操作技巧。方法采用连续顺序追踪法对2014年1月至2015年1月142,17例孕16~37周孕妇常规行胎儿肢体超声成像。结果全部胎儿中发现肢体畸形41例,检出率为0.28%,其中包括肢体大部分缺失1例,肢体部分缺失4例,桡骨缺失6例,马蹄内翻足9例,裂手畸形2例,腓骨缺失2例,多指(趾)2例,羊膜束带综合征2例,手姿势异常4例,先天性多发性关节挛缩2例,并腿畸形3例,严重短肢畸形4例。漏诊16例,占所有畸形的28%,包括7例并指畸形,5例多指(趾)畸形,4例重叠指,误诊2例马蹄内翻足,均经引产或出生后证实。结论产前超声能直观显示胎儿肢体结构,是诊断胎儿肢体畸形的首选方法,熟练的操作技术及操作技巧是产前超声诊断胎儿肢体畸形的关键。

    作者:焦阳;杜冬;董发进;范海波;郑静 刊期: 2015年第04期

  • 人参皂苷Rbl对大鼠局灶性脑缺血白质重塑的影响

    目的:探讨人参皂苷Rbl(Ginsenoside Rb1,GSRb1)对大鼠局灶性脑缺血白质重塑的影响。方法大鼠随机分为假手术组、溶媒处理组和人参皂苷Rbl处理组,采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion, MCAO/R)损伤模型,用LFB染色观察大鼠胼胝体和内囊的髓鞘变化,用免疫组化染色法检测缺血侧胼胝体GFAP和APP的表达以评估星形胶质细胞和轴突的改变。结果缺血2 h再灌72 h后,溶媒处理组胼胝体和内囊有明显的髓鞘紊乱、脱失,胼胝体GFAP和APP表达显著增加。与溶媒处理组相比,GSRb1处理组髓鞘脱失有明显改善(P<0.01, P<0.05)且胼胝体GFAP和APP表达显著减少(P<0.05)。结论 GSRb1可能促进大鼠局灶性脑缺血后脑白质重塑。

    作者:胡光强;张慧;萧洪文;高小青;杨朝鲜;余录 刊期: 2015年第04期

  • 股神经阻滞的应用解剖学定位研究

    目的:为股神经阻滞的定位提供解剖学基础。方法①新鲜成人尸体5具,行羧甲基纤维素/氧化铅水凝胶行一次性全身动脉造影,CT扫描与三维重建。②乳胶灌注标本5具,层次解剖股前内侧区,重点观测股三角内股动脉及其主要分支与股神经的位置关系。结果与股神经阻滞相关的结构位于腹股沟韧带与经股骨大转子的平行线之间,两直线间的距离为(5.8±1.6)cm。股深动脉恰于平行线水平与股神经相交(85%)。结论①股神经阻滞的安全区域位于腹股沟韧带与其平行线之间;②直接体绘制方法可用于对血管及其它器官定位的基础研究。

    作者:谢宇平;郑俊;习珊珊;周小兵 刊期: 2015年第04期

  • 微种植支抗压低犬前牙过程中牙周组织基质金属蛋白酶-2的表达变化

    目的:观察应用微型种植支抗使犬牙齿移动过程中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达变化,探讨其在骨改建中的作用。方法建立应用微型种植支抗压低犬上颌右侧第二切牙的实验模型。对其施加100 g的牵引力后,分别于加力后6、12、24、36周处死。选择一侧第2切牙连同牙龈、牙槽骨完整切取,进行HE染色观察组织形态,免疫组织化学检测MMP-2表达变化及时间分布特点。左侧上颌第2切牙不予施加力作为对照组,并选取同名牙周围组织进行HE及免疫组化检测。结果 HE显示对照组中犬牙齿根尖部有大量牙骨质,而被压低牙齿根尖可见牙骨质吸收。免疫组化显示牙周组织中MMP-2的表达在加力6周后开始增加,24周达高峰,其后开始下降,结果提示差异有统计学意义(P<0.05)。结论在压低犬切牙过程中,MMP-2参与了牙周组织的改建。

    作者:刘效文;黄敏;赵悦 刊期: 2015年第04期

  • SETD4蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒系统的表达

    目的:通过昆虫杆状病毒表达系统表达SETD4(SET domain-containing 4)蛋白,并纯化SETD4蛋白,为深入探讨SETD4的功能奠定基础。方法提取小鼠正常肝组织的RNA,通过RT-PCR扩增SETD4基因,并克隆至pFastBac-HTB构建重组载体,再转座获得重组杆粒;通过脂质体介导将重组杆粒转染SF9细胞产生重组病毒,扩增病毒感染细胞并获得重组蛋白;利用Ni2+亲和柱来纯化蛋白,并通过Western Blot及考马斯亮蓝染色鉴定SETD4蛋白。结果经双酶切鉴定及测序证实SETD4基因插入了供体质粒;经PCR鉴定证实SETD4基因插入了穿梭载体;经考马斯亮蓝染色证实纯化得到重组蛋白,用His-Tag抗体和SETD4特异性抗体在50 kD处可检测到目的条带。结论成功利用昆虫杆状病毒表达系统够表达了SETD4,并纯化了SETD4。

    作者:雷烨铭;崔航;钟玙沄;王义乾;黄穗;赵舒祺;蔡军伟;姜勇;刘靖华 刊期: 2015年第04期

  • 腹膜瓣的解剖学基础及临床应用研究进展

    早在20世纪90年代,腹膜瓣因其柔软、再上皮化特性而用于修复口腔黏膜缺损,并获得成功。自此,国内外学者才先后开展腹膜瓣的解剖学基础研究,结果表明:腹膜瓣由知名血管供血、血管蒂位置恒定、管径粗大;腹膜可切取范围大、易制备、质软等优势,因而带蒂或者游离的腹膜瓣可用于修复口腔黏膜、食道、输尿管、膀胱、尿道、阴道缺损等。随着腹膜瓣临床应用的不断普及,其解剖学基础研究亟待进一步完善,尤其对细小分支血管的构造及分布情况需着重研究。目前解剖学基础研究少见,临床应用广泛。基于此现状,本文回顾国内外关于腹膜瓣的文献报道,总结其现有解剖学基础研究结果、结论,对腹膜瓣在各领域的临床应用进行综述。

    作者:李武(综述);周晓(审校) 刊期: 2015年第04期

  • 可视喉镜在解剖结构异常的困难气道脑动脉瘤栓塞术患者的应用

    目的:评价UE可视喉镜在解剖结构异常的困难气道脑动脉瘤栓塞术患者气管插管的临床应用价值。方法20例脑动脉瘤栓塞术的患者,ASAII~III级,Mallampati气道分级Ⅲ~IV级,随机分为UE可视喉镜组(A组)和Macintosh直视喉镜组(B组),每组10例。记录两组患者插管时间,插管成功率,气管插管前(T0)、置入气管导管时min(T1)、置入气管导管后1min(T2)、3min(T3)和5min(T4)的Sp02、HR、SBP及DBP,以及气管插管不良反应的发生情况。结果 T1、T2和T3时B组的HR、SBP及DBP高于A组,差异有统计学意义(P<0.05);T4时B组患者HR、SBP及DBP高于A组,差异均无统计学意义(P>0.05)。A组患者插管时间显著低于B组患者,总的不良反应发生率A组显著低于B组。结论 UE可视喉镜可减轻解剖结构异常的困难气道脑动脉瘤栓塞术患者气管插管时的应激反应,能有效保障患者围麻醉期的安全。

    作者:刘喜成;杜冬;吴文燕;张耀贤 刊期: 2015年第04期

  • 经皮椎间孔镜治疗老年腰椎间盘突出症临床疗效分析

    目的:观察经皮椎间孔镜治疗保守治疗无效的老年腰椎间盘突出症患者的近期疗效。方法通过TESSYS椎间孔镜技术治疗24例老年性单节段腰椎间盘突出症,并使用VAS评分、ODI指数、及改良Macnab标准评价术后疗效。结果术后末次随访VAS评分为(1.83±0.48),明显低于术前(7.67±0.82)。术后末次随访ODI指数为(14.42±2.04)%,明显低于术前(69.83±2.82)%。改良Macnab疗效评价为:优20例,良3例,可1例。术后患者腿痛症状均得到有效缓解。结论经皮椎间孔镜治疗老年人腰椎间盘突出症近期疗效良好,远期效果还需进一步观察。

    作者:肖隆艺;禤天航;曹正霖 刊期: 2015年第04期

  • 辛伐他汀对BMSCs成骨分化过程中TGF-β1/smad信号通路的影响

    目的:探讨辛伐他汀(simvastatin,SIM)是否可以通过调节TGF-β1/Smad通路从而促进大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells , BMSCs)分化为成骨样细胞。方法复苏、培养大鼠BMSCs并诱导其向成骨样细胞分化。实验组加入不同浓度的SIM(10-8 mol/L、10-7 mol/L、10-6 mol/L),对照组不给予药物干预。加入成骨诱导液,7d后运用碱性磷酸酶染色法观察细胞成骨能力,21d后用茜素红染色检测细胞钙化水平,Western blot法检测TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白的表达水平。结果应用10-8 mol/L~10-6 mol/L SIM处理细胞7d均可使细胞ALP活性显著增加,其中浓度为10-7 mol/L时效果显著;应用10-8 mol/L~10-6mol/L SIM处理细胞21d后可使细胞钙化结节明显增多;应用10-8 mol/L~10-6 mol/L SIM处理细胞7d后细胞内TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白水平明显增高。结论辛伐他汀可促进大鼠BMSCs分化为成骨细胞,其作用机制可能与上调TGF-β1/Smad信号通路中相关基因的表达水平有关。

    作者:桑遥彩;包翠芬;武蕾;张苗苗;王艳;秦书俭 刊期: 2015年第04期

  • 不同内固定方法对胫腓连结固定效果的实验研究

    目的:探讨胫腓连结的活动度及不同内固定方法对胫腓连结效果的影响。方法新鲜冷藏的成人小腿标本8侧,常温下解冻,自踝关节离断,剔除皮肤、肌肉等软组织,保留胫腓关节、胫腓连结和骨间膜的完整,置于SWD10万能材料实验机上,测量胫腓连结的正常活动度,完全切断胫腓连结,分别用普通螺丝钉、拉力螺丝钉和“U”形钉固定,测量固定后的活动度。结果胫腓连结正常的生理活动度为前→后(1.83±0.38) mm、后→前(1.89±0.38) mm、外→内(1.42±0.34) mm、内→外(1.36±0.65) mm。胫腓连结用普通螺丝钉和拉力螺钉固定后,外踝的活动明显受限,虽然拉力螺钉固定更牢,但二者相差不显著,与正常比较相差非常显著;用“U”形钉固定后,活动度与正常比较相差不显著。结论胫腓连结是一个具有一定活动度的弹性结构,用螺丝钉固定后活动度明显变小,使用胫腓连结钩或“U”形钉进行弹性固定可保留胫腓连结的生理活动。

    作者:甘煜东;丁晶;侯春林;黄志伟;徐永清 刊期: 2015年第04期

  • 基于人脑纹状体与海马结构的断层影像学研究

    目的:探讨纹状体与海马结构的相关性,为临床影像诊断提供形态学依据和相关测值。方法采集100例经诊断无病变的成人头部磁共振图像,按照年龄16~25、26~35、36~45、46~55、56~65岁进行分组,每组男、女各10例。观测纹状体与海马结构的面积、横径、矢径等线性指标,标准化前、后数据均进行相应统计学处理。结果数据经标准化处理后,运用单因素方差分析显示:纹状体面积无性差,尾状核头矢径、海马面积、海马横径、矢径存在性差(女性>男性),颞角宽度存在性差(女性<男性);尾状核头横径存在侧差(左>右),壳面积、壳矢径存在侧差(左<右)。利用Pearson相关分析显示:纹状体面积与年龄、颞叶钩回间距呈负相关,与颞角宽度呈正相关;海马面积与尾状核头面积、颞角宽度呈正相关。结论成年人纹状体面积随着年龄增长而缩小;海马结构与纹状体在形态结构上具有相关性;壳面积右侧大于左侧;女性海马面积大于男性;颞角宽度可以作为研究纹状体与海马结构形态变化的共同参考指标。

    作者:白桂芹;刘尚清;张华;邓世山;谢兴国;蔡昌平;黄小华;张小明 刊期: 2015年第04期

中国临床解剖学杂志

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主管:中国科学技术协会

主办:中国解剖学会