学术投稿

成人骨髓基质干细胞的分离与纯化

赵子义;郭希民;王常勇;徐莘香;段翠密;董灵芝;李晶

关键词:基质干细胞, 骨髓, 神经生长因子受体, 分离和提纯, 组织工程
摘要:目的利用免疫磁珠分离成人骨髓神经生长因子受体(nerve growth factor receptor,NGFR)阳性细胞,获得同质性骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs).方法采用Percoll密度梯度离心法分离成人骨髓中单个核细胞(mononuclear cells,MNCs).对MNCs进行常规贴壁培养或应用磁分离技术分离NGFR+细胞.分别检测NGFR+细胞和常规贴壁培养所获BMSCs体外扩增和集落形成能力,分析其细胞表型和细胞周期,并进行成骨、成脂肪诱导.结果免疫磁珠分离获得NGFR+细胞的纯度为(90.4±4.7)%,NGFR+细胞较贴壁培养获得BMSCs具备更强增殖能力和成骨及成脂肪分化潜能.结论利用免疫磁珠分离骨髓NGFR+细胞可以获得同质性原始BMSCs.
中华创伤骨科杂志相关文献
  • 骨科医师的医疗风险(三)

    随着骨科器械的发展,特别是内置物的成功设计,骨科医生们变得越来越专业化.但这些内置物本身存在着失效的风险.骨科医生们应该对在应用这些产品的过程中潜在的危险保持警惕.医务工作作为工业化时代的一项大规模服务体系,正面临着飞速的发展,它已不仅仅是一种职业.这种变化不仅使患者的期望值越来越高,而且使医生的社会角色发生着深刻的改变.

    作者:鲁谊;吴新宝;王满宜 刊期: 2004年第07期

  • 胰岛素样生长因子-Ⅰ在大鼠骨骼肌运动性损伤卫星细胞再生中的作用

    目的通过研究胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)对骨骼肌运动损伤后卫星细胞再生的影响,探讨IGF-Ⅰ在骨骼肌运动损伤修复中的应用前景.方法使用SD大鼠1周力竭模型,首次力竭后第1、3、5天给予右侧腓肠肌中部的肌膜下分别注射外源性IGF-Ⅰ 300ng/ml(实验组)、生理盐水1ml(对照组),分别在首次力竭后7、9、11、17、24、30d取材,进行骨骼肌HE染色光镜观察,电镜超微结构观察和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的比较.结果首次力竭后7、11、17d实验组卫星细胞明显增多,对照组胶原纤维增多,30d实验组肌纤维塑形良好,对照组可见瘢痕愈合;电镜观察对照组可见肌浆网扩张,线粒体肿胀,还有凋亡细胞出现;实验组线粒体形态较正常,糖原颗粒增多,可见新生的肌纤维.PCNA指数实验组明显高于对照组(P<0.05).结论IGF-Ⅰ对运动性骨骼肌损伤后的卫星细胞再生有促进作用.

    作者:向峥;余斌;谢伟勇;孙林辉;杨建成;侯振海 刊期: 2004年第07期

  • 组织工程骨血管化的监测

    组织工程化人工骨修复骨缺损的关键环节是它的血管化,组织工程骨血管化的监测应当遵循灵敏、可定量、无创、无辐射、低成本的原则.本文对目前常用的一些监测方法进行综述,通过对比不同方法的哪优缺点,认为磁共振灌注法是监测组织工程骨血管化为适宜的方法下一步研究的方向.

    作者:王学明;裴国献 刊期: 2004年第07期

  • 成年恒河猴骨髓基质干细胞的体外培养

    目的对猴骨髓基质干细胞(BMSCs)进行体外培养及扩增,观察其原代及传代细胞的生长特点及生物学特点.方法抽取4只成年猴髂骨骨髓,用全骨髓培养法进行体外培养获得BMSCs,胰酶消化传代,用条件培养基培养传代细胞.逐日倒置显微镜观察细胞生长情况,对传代细胞进行HE染色及碱性磷酸酶(ALP)染色.结果成年雄性恒河猴BMSCs体外培养生长良好,原代细胞10~13d汇成单层,传代后4~7d长满瓶底.HE染色光镜下观察见BMSCs为单核细胞,细胞呈梭形、多角形,传代细胞碱性磷酸酶染色呈强阳性.结论猴BMSc的体外培养增殖能力强,可诱导为成骨细胞,可作为灵长类动物骨组织工程的种子细胞.

    作者:汪群力;裴国献;曾宪利;金丹;魏宽海;任高宏 刊期: 2004年第07期

  • 游离齿突小骨的影像学征象(附23例报告)

    目的经影像学研究探讨游离齿突小骨的影像学特征.方法回顾分析23例游离齿突小骨患者,其中10例有明确的外伤史.明确游离小骨的诊断后,须经影像学检查来明确寰枢关节的不稳定程度和颈脊髓的压迫.1例无症状的患者行保守治疗,22例行手术治疗.结果随访2~4年(平均2年8个月),23例患者的临床和影像学结果均较满意.结论对游离齿突小骨患者,无论有无寰枢椎不稳、有无症状和脊髓损伤的体征,均可成功进行影像学评估.建议对此类患者宜常规行颈椎正侧位、开口位、屈-伸侧位摄片和CT平扫,并根据实际情况尽可能行三维CT重建和MRI检查.

    作者:谭俊铭;叶晓健;李家顺;贾连顺;袁文;何海龙;许国华 刊期: 2004年第07期

  • 动力髋部螺钉(DHS)和股骨近端髓内钉(PFN)治疗老年股骨转子间骨折的疗效分析

    目的探讨老年股骨转子间骨折两种内固定的手术适应证和手术方式选择.方法随机选取64例高龄患者股骨转子间骨折,给予动力髋部螺钉(DHS)内固定术34例和股骨近端交锁髓内钉(PFN)内固定术30例,所有患者术前情况均采用100分制的量化评估标准进行手术适应性评估,记录两组术前、术中、术后的多项相关指标并予以统计学分析.结果所有患者均随访12~28个月至骨折愈合,平均16个月,无死亡个案;PFN组与DHS组相比,手术时间、切口长度、术中失血量、总输血量、术后引流量和术后近期并发症均表现出明显的统计学差异.结论高龄患者股骨转子间骨折需要术前给予100分制的量化标准进行评估,低于60分者应慎重手术;PFN内固定术具有适合高龄患者的骨质特点、固定牢靠、手术创伤小、并发症少的特性,较适用于老年人股骨转子间骨折.

    作者:潘晓华;肖德明;林博文;黄纲 刊期: 2004年第07期

  • 犬骨髓基质干细胞体外定向分化为软骨细胞

    目的体外诱导犬骨髓基质干细胞(BMSCs)定向分化为软骨细胞,探讨体外诱导成软骨的方法和条件.方法自犬肋骨取骨髓2~3ml,体外行原代和传代培养扩增,顺序加入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和转化生长因子β1(TGF-β1),以培养瓶内较高细胞浓度培养,诱导BMSCs分化为软骨细胞.甲苯胺蓝、阿新蓝染色检测软骨基质的分泌,免疫组织化学染色检测软骨特异性Ⅱ型胶原表达.结果诱导的软骨样细胞甲苯氨蓝异染性、阿新蓝染色阳性;Ⅱ型胶原免疫组织化学检测阳性.结论应用bFGF和TGF-β1体外可以诱导犬BMSCs分化为软骨细胞,诱导的软骨细胞可作为软骨组织工程较理想的种子细胞.

    作者:蔡道章;王其友;徐义春;卢华定;金文涛 刊期: 2004年第07期

  • 成人骨髓基质干细胞的分离与纯化

    目的利用免疫磁珠分离成人骨髓神经生长因子受体(nerve growth factor receptor,NGFR)阳性细胞,获得同质性骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs).方法采用Percoll密度梯度离心法分离成人骨髓中单个核细胞(mononuclear cells,MNCs).对MNCs进行常规贴壁培养或应用磁分离技术分离NGFR+细胞.分别检测NGFR+细胞和常规贴壁培养所获BMSCs体外扩增和集落形成能力,分析其细胞表型和细胞周期,并进行成骨、成脂肪诱导.结果免疫磁珠分离获得NGFR+细胞的纯度为(90.4±4.7)%,NGFR+细胞较贴壁培养获得BMSCs具备更强增殖能力和成骨及成脂肪分化潜能.结论利用免疫磁珠分离骨髓NGFR+细胞可以获得同质性原始BMSCs.

    作者:赵子义;郭希民;王常勇;徐莘香;段翠密;董灵芝;李晶 刊期: 2004年第07期

  • 骨髓基质干细胞及其应用研究进展

    骨髓基质干细胞(BMSCs)作为一种干细胞,由于具有很强的自我更新能力和多分化潜能,近年来引起了广泛的注意,体内外试验中已发现BMSCs可以分化为骨组织和软骨组织、神经组织等组织的细胞,并且具有修复以上各组织缺损的能力;同时发现BMSCs是一种理想的基因载体,从而达到基因治疗的目的.本文旨在对BMSCs的分离、培养、生物学特性、基因治疗及其组织修复中的应用研究进展作一综述.

    作者:杨光诗;许扬滨 刊期: 2004年第07期

  • 组织工程在创伤骨科领域的研究进展

    组织工程作为生命科学研究领域的一门崭新学科,其研究范围涉及骨、软骨、肌腱、神经、血管等多种组织的再造与修复,与创伤骨科的研究与治疗范围有非常大的交叉.本文仅就组织工程在创伤骨科领域的研究进展,从骨、软骨、肌腱、血管等创伤骨科治疗中涉及较多的组织构建方面作一简要概述.

    作者:曹谊林;崔磊;刘伟 刊期: 2004年第07期

  • 经皮椎体成形术治疗骨质疏松的椎体压缩性骨折

    椎体压缩性骨折是骨质疏松常见的并发症之一.它有相当的发病率,对部分患者造成持续且严重的疼痛.椎体成形术是经皮向骨折塌陷的椎体内注射骨水泥,这种方法已被用来治疗骨质疏松的椎体压缩性骨折,解除患者的疼痛.为介绍该法并探讨安全性和有效性,通过回顾多位作者的报道,我们发现椎体成形术对于疼痛的缓解率可达到67%~100%.短期的并发症主要包括骨水泥的外渗,这不但会增加疼痛,还会散热并压迫脊髓或神经根.合理的选择患者和完善的操作会减低这些并发症,因此,极少需外科减压的手术.但它的长期并发症,如骨水泥-骨接触面的异物反应,骨水泥的老化,由于应力改变而造成相邻椎体骨折的风险增加等尚未完全阐明.因此椎体成形术还需更长时间随访.

    作者:李楠;张贵林;张波;公茂琪;王满宜 刊期: 2004年第07期

  • 髋臼骨折--手术治疗效果欠佳的不利因素

    现有文献中没有确定性的治疗髋臼移位骨折的佳方法.一般情况下倾向于开放复位内固定.但是,由于缺少不同特定内固定物间的比较,因此难以做出推荐.报道一致认为,导致结果差和一般的潜在不利因素包括老龄、术后复位不良、严重的骨折、股骨头损伤,以及延迟处理.

    作者:Beate P.Hanson;David L.Helfet;Suthorn Bavonratanavech;Ian Harris;陈国奋;顾立强 刊期: 2004年第07期

  • 等离子刀与机械清理在治疗膝关节骨关节炎中的作用分析

    目的比较等离子刀与机械清理在治疗膝关节骨关节炎中的作用.方法采用随机对照前瞻性研究,等离子刀治疗组24例,机械刨削对照组36例,全部病例获得6~24个月(平均12.4个月)随访.随访结果采用Lysholm膝关节功能评分.结果对于软骨退变Ⅱ级和Ⅱ~Ⅲ级的病例,等离子刀治疗组的膝关节功能评分优于对照组(P<0.05);而对于软骨退变Ⅲ~Ⅳ级的病例,等离子刀治疗组与对照组无明显差异(P>0.05).结论等离子刀技术对于软骨退变Ⅲ级以下的病例是首选治疗方法.

    作者:王黎明;桂鉴超;宋华荣;黄河 刊期: 2004年第07期

  • 青少年腰椎终板后缘离断症的临床分析

    目的探讨青少年腰椎终板后缘离断症的诊断、治疗方法.方法回顾分析12例青少年腰椎终板后缘离断症病例,根据症状、体征及辅助检查,明确诊断并行手术治疗.结果随访6个月~3年,腰腿痛症状完全消失9例,明显改善3例.结论提高对青少年腰椎终板后缘离断症的认识,根据病情采取相应治疗措施,可以取得满意疗效.

    作者:李利昕;王卫东;魏振;李祥鹏 刊期: 2004年第07期

  • 脊柱后路显微内窥镜下手术治疗腰椎间盘突出症的临床应用

    目的探讨脊柱后路显微内窥镜下椎间盘切除术(MED)治疗腰椎间盘突出症的临床效果和应用价值.方法自1999年9月~2002年10月,对腰椎间盘突出症152例患者采用椎板间隙入路显微内窥镜下椎间盘切除术治疗,随访观察临床疗效.结果113例获得3~19个月随访,按Macnab疗效评定标准,优86例,良21例,可4例,差2例,手术优良率94.6%.结论只要掌握好适应证,应用椎板间隙入路显微内窥镜下椎间盘切除术治疗腰椎间盘突出症具有创伤小、术后恢复快、手术安全性好等优点,疗效可靠.

    作者:林定坤;陈博来 刊期: 2004年第07期

  • 前臂缺血性肌挛缩的早期外科治疗远期随访分析

    目的探讨前臂缺血性肌挛缩早期显微外科治疗的临床意义及治疗效果.方法应用显微外科技术早期为28例Ⅰ病程为1.5~9个月的前臂缺血性肌挛缩患者行神经、肌腱松解术.结果术后2~15年系统随访,其优良率为82%.手的外形及运动和感觉功能得到了良好的恢复.结论前臂缺血性肌挛缩早期显微外科治疗是可行性.

    作者:张振伟;廖坚文;林冷;陈泽华;卓浩;张家俊;庄加川;詹伟鹏 刊期: 2004年第07期

  • AO肩锁钩钢板治疗肩锁关节完全脱位临床疗效评价

    目的评价AO肩锁钩钢板治疗肩锁关节完全脱位的临床疗效.方法本组43例,其中23例采用AO肩锁钩钢板、辅以肩锁韧带与喙锁韧带可吸收缝线修补术;20例采用克氏针内固定术.结果根据术后X线片和关节功能恢复情况评定疗效,两者的疗效优良率分别为95.6%、65%,疗效差异有统计学显著性意义.结论应用AO肩锁钩钢板、重建喙锁韧带和肩锁韧带治疗肩锁关节完全脱位疗效可靠.

    作者:周军杰;曹成福;纪斌;丁浩 刊期: 2004年第07期

  • PLGA生物膜和延长的神经轴突束构建人工神经的体外研究

    目的探索新的构建人工神经的方法,寻找合适的支持周围神经移植的基质材料.方法将鼠胚皮质神经元细胞种在PLGA生物膜支架上,用自制的神经轴突延长装置对其延长.观察神经元细胞及轴突生长情况,测定轴突延长后轴膜的渗透性.同时用免疫组化方法对神经微丝蛋白进行染色.结果鼠胚的神经元和神经轴突束可以在PLGA生物膜上延长和继续培养.这些神经元和延长后的轴突束可以保持正常形态和功能.结论这种复合神经元轴突束的三维支架结构具有人工神经的基本特征.本研究为用延长的神经轴突束修复神经缺损打下基础.

    作者:程飚;陈峥嵘;吴志伟 刊期: 2004年第07期

  • 面向21世纪的组织工程学研究趋势与策略

    经过20余年的飞速发展,组织工程研究已进入一个非常关键的发展时期.当前组织工程研究的热点、重点与组织工程发展的初期有很大不同,已正在逐步走向围绕临床应用与产品开发的研究方向上来.本文结合本期骨科组织工程的专题论文,指出基础研究须与临床应用、产业化紧密结合,组织或器官的构建须由单一、简单的方式向复杂仿生化、智能化方向转变,组织工程组织的初步临床应用、安全性评价、组织工程相关产品的产业化开发等方面的研究是今后组织工程发展的趋势与方向,并对相关研究的策略进行评述.

    作者:裴国献 刊期: 2004年第07期

  • 体外构建与体内构建组织工程骨的血管化研究

    目的比较骨髓基质干细胞(BMSCs)与生物衍生骨体内、体外复合所构建的组织工程骨修复山羊胫骨大段骨-骨膜缺损的血管化进程以及血管化与成骨的关系,以探讨修复大段负重骨缺损的佳途径.方法22只山羊制备成胫骨中段20mm的骨-骨膜缺损,随机分为2组,分别植入BMSCs与生物衍生骨体外构建和体内构建的组织工程骨,常规钢板螺钉内固定,在2、4、6、12周时间点分别用墨汁灌注透明标本、血管面积图像分析和X线片观察血管化过程及成骨情况.结果体外构建组与体内构建组血管化进程无明显区别,各时间点血管面积差异无显著性意义(P>0.05),12周均能达到完全血管化,但X线片见体外构建组新骨形成较快,缺损区密度高,体内构建组以上各变化较前者慢大约2~4周.结论BMSCs与生物衍生骨体外构建和体内构建的组织工程骨均能快速血管化并成骨,但是体内构建方式成骨较体外构建慢.

    作者:戚超;黄富国;罗静聪;廖文波;蔡琰;祁洁;杨志明 刊期: 2004年第07期

中华创伤骨科杂志

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主办:中华医学会