吴元洁；吴元波；郑书国；王玉凤；刘晓丽；张晓军；吕明安
目的：观察齐墩果酸（OA）协同环孢素A（CsA）对大鼠移植肾存活的影响，探讨将齐墩果酸应用于肾移植术后免疫抑制治疗的临床价值。方法以BN大鼠为供体，LEW大鼠为受体，建立大鼠同种异体肾移植模型。将40只受体大鼠随机均分为对照组、OA组、CsA组、OA+CsA组，术前1 d开始进行干预。记录肾移植大鼠存活时间，并监测其血清肌酐浓度。术后第5天，免疫组化法检测移植肾CD4+和CD8+T细胞的浸润；多功能流式点阵仪（Luminex）检测以下因子的血清浓度：促炎细胞因子白介素-1β（IL-1β）、干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-2（IL-2）、白介素-4（IL-4）、白介素-17（IL-17）和抗炎细胞因子白介素-10（IL-10），以及趋化因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、干扰素诱导的蛋白-10（IP-10）、巨噬细胞炎性蛋白（MIP）和IFN-γ诱导的单核细胞因子（Mig）；酶联免疫斑点法（ELISpot）检测表达IFN-γ、IL-10、IL-4和IL-17的T细胞频率。结果与其它各组比较，OA+CsA组的移植肾存活时间显著延长，浸润移植肾的CD4+和CD8+T细胞数量显著降低。与对照组比较，处理组的IL-1β、IP-10、MCP-1、Mig、MIP和IFN-γ、IL-17、IL-4的T细胞频率显著降低，但IL-10和IL-10的T细胞频率则显著升高。其中OA+CsA组较其他2个处理组的差异更为明显。结论 OA能协同CsA减轻肾移植大鼠排斥反应和炎症反应，延缓大鼠移植肾功能衰竭，延长大鼠移植肾存活时间。在临床肾移植领域，OA具有协同CsA促进移植肾存活的潜力。
作者：钱坤；廖雯婷；李建军；蒋鸿涛；周浩；龙建华；秦国庆；王毅 刊期： 2014年第06期
结合文献总结我院收治的1例多发性内分泌腺瘤病（MEN）2A型的诊治经验，探讨MEN 2A型的临床特点及治疗方法。MEN 2A型的诊断主要依赖相应的超声、CT及实验室检查，早期诊断、早期治疗是提高疗效的关键，RET基因检测是早期诊断MEN 2A及MEN 2B的“金标准”；手术是目前主要的治疗手段。
作者：于若飞；吴自勍；李爱民；金国萍；罗荣城 刊期： 2014年第06期
目的：探讨利用二乙基亚硝胺（DEN）致中毒性肝损伤的方法构建斑马鱼肝纤维化模型的可行性。方法3月龄野生型斑马鱼120条，随机等分为对照组和DEN处理组，分别观察两组斑马鱼生存率及行为学改变，在DEN处理2周、4周和6周末，分别从两组中随机抽取等量样本测量肝指数，并制作石蜡切片，采用HE染色、Gomori氏网状纤维染色及天狼星红苦味酸染色方法观察肝纤维化病变。结果 DEN处理组斑马鱼在造模期间未见明显行为学改变，与对照组斑马鱼相比，DEN处理组斑马鱼肝指数在2周、4周和6周末均无统计学差异。病理染色结果显示造模4周末，DEN处理组斑马鱼肝细胞变性坏死，30%斑马鱼肝脏网状纤维合成分泌增多；6周末，DEN处理组斑马鱼结构紊乱，80%斑马鱼肝脏纤维过度沉积，网状纤维和胶原纤维合成分泌异常增多，可见纤维结节形成。结论采用DEN诱导中毒性肝损伤方法能够成功地构建稳定的斑马鱼肝纤维模型，为进一步探讨肝纤维化的发病机制以及药物筛选奠定了实验基础。
作者：王坤元；刘莉；戴文聪；陈小辉；郑新春；侯金林 刊期： 2014年第06期
目的：评价兰州生物制品研究所研发的人心脏型脂肪酸结合蛋白（heart-type fatty acid-binding protein, H-FABP）ELISA检测试剂盒与已批准上市的同类试剂盒用于临床诊断急性冠脉综合症（acute coronary syndrome, ACS）的等效性及临床符合性。方法样本为中国人民解放军总医院住院的疑诊ACS患者的血浆或血清，根据入选标准和排除标准共入选160例样本，分别采用兰州与荷兰H-FABP试剂盒进行平行、对照试验标准检测，两种试验产品结果的一致性采用Kappa检验和相关分析。结果兰州试剂盒检测H-FABP诊断ACS的灵敏度为91.8%，特异度为88.7%，正确率为90.4%。荷兰试剂盒检测H-FABP诊断ACS的灵敏度为90.3%，特异度为86.8%，正确率为88.8%。两种产品测定结果在统计学上无差异（P=0.668，>0.05）。具有良好的一致性（Kappa=0.726，P<0.01）。结论兰州生物研究所生产的H-FABP与荷兰HBT公司生产的H-FABP检测试剂盒用于诊断ACS具有等效性且临床符合性良好，在临床上具有推广应用价值。
作者：刘亚巍；田苗；蒋知新；洛佳坤；衣志勇 刊期： 2014年第06期
目的：探讨一种新的第一骶椎（S1）骶髂螺钉定位方式，为导向器引导经皮骶髂螺钉固定的可行性提供应用解剖学基础。方法纳入100例正常成人骨盆CT原始数据，重建骨盆三维模型。利用Mimics软件中的相关功能寻找到以体表骨性标志定位的S1骶髂螺钉理想操作平面，继而逐步测量该平面上的置钉参数，包括进针点、进针角度γ及安全范围，后利用数字模型检验新的置钉参数的准确性。结果（1）髂前后上棘骨性突出点（分别为A、B）与S1椎体棘突中点构成的平面可作为操作平面；（2） AB连线中后1/3交点可作为此平面上的有效进针点；（3）男性角γ范围：101.4°~117.2°，女性：109.5°~120.78°，左右无差异，性别间有差异；（4）按照新的参数置钉，80例半骨盆模型中置钉成功率统计：男性成功率：92.5%，女性成功率：90%。结论以A、B和S1椎体棘突中点定位操作平面，AB连线中后1/3交点为进针点，男性采取角γ=110°，女性采取γ=115°置钉满意，可作为新的螺钉定位方式及进一步研发经皮导向器设计的应用解剖学依据。
作者：卢超；宋迎春；高波华；王钢 刊期： 2014年第06期
目的：研究HBV复制和不同基因表达是否会影响肝细胞内CDC37的表达水平。方法首先扩增HBV 6种基因P、preS1、preS2、S、C和X，并构建至pCMV表达载体，分别转染Huh7和HepG2细胞系，Western blot检测CDC37表达水平；另外将含CDC37基因启动子序列的荧光素酶报告质粒pGL3与HBV的6种基因表达质粒分别共转染Huh7和HepG2细胞系，检测荧光素酶信号。其次分别构建B、C、D和CD重组体4种HBV基因型毒株的1.28拷贝全基因质粒，运用AdEasy腺病毒系统进行重组和包装后分别感染Huh7和HepG2细胞系，并检测CDC37表达水平。结果基因表达结果显示，HBV 6种基因的表达对肝癌细胞系内CDC37的表达水平无明显影响，而且HBV 6种不同蛋白的表达对CDC37启动子的活性无明显影响。1.28拷贝HBV全基因质粒的感染结果显示，HBV不同基因型毒株的复制对CDC37基因的表达水平亦无明显影响。结论 HBV的复制和不同基因的表达不会明显影响CDC37的表达水平。
作者：陈朝武；周彬；徐莹；杨贵奉；王战会 刊期： 2014年第06期
目的：探讨实时超声造影技术在肾脏实性占位病变中诊断及鉴别诊断的临床应用价值。方法对140例肾脏实性占位病变患者，年龄22~87岁（平均61.3±15.5岁），共152个病灶，大小0.6~9.7 cm（平均3.1±1.9 cm）。采用经外周静脉团注声诺维（SonoVue），使用对比脉冲序列（CPS）技术进行实时超声造影检查，观察肾脏实性占位病变造影剂的灌注过程，分析其灌注特点。结果经病理学证实，137个为恶性病变（127个肾透明细胞癌、8个肾乳头状癌及2个肾嫌色细胞癌）；15个为良性病变（13个肾血管平滑肌脂肪瘤及2个肾嗜酸性细胞瘤），均表现出不同的增强特征。137个恶性病变中98个（71.5%）表现为造影剂皮质期快速增强，104个（75.9%）表现为髓质晚期或延迟期快速廓清，即“快进快出”，并125个（91.2%）具有假包膜的恶性病灶周边环状高增强。病灶直径D≤2 cm，表现为均匀增强为主；2 cm4 cm，表现为不均匀增强伴大片坏死。15个良性病变表现为造影剂皮质期缓慢或与肾实质同步增强，随后延迟期缓慢廓清，即“慢进慢出”。与病理诊断比较，实时超声造影技术诊断的特异性、准确性及阳性预测值分别为94.9%、96.1%、73.7%，均高于常规超声诊断（分别为72.3%、71.1%、19.1%），并差异有统计学意义（P<0.001）；而实时超声造影技术诊断的敏感性及阴性预测值分别为93.3%及99.2%，均高于常规超声诊断（分别为60%及94.3%），但差异无统计学意义（P=0.084及0.062，>0.05）。结论实时超声造影技术对肾脏实性占位病变诊断及鉴别诊断具有一定的临床应用价值。
作者：李鑫；梁萍；于晓玲；于杰；程志刚；韩志宇；刘方义；穆梦娟 刊期： 2014年第06期
目的：探讨建立人肝细胞L-02单纯肝脂肪变性细胞模型的方法与模型的应用。方法体外用1640培养基培养L-02细胞，分为模型组和正常组。当细胞融合达到70%~80%，正常组换用新鲜1640培养液，而模型组改为含有游离脂肪酸（油酸和棕榈酸）混合物的1640培养基诱导培养24 h。以油红O染色定性观察细胞内脂滴并通过显色比较各组间总脂质差别，模型鉴定采用观察细胞内脂滴形态，检测细胞内甘油三酯和细胞培养上清丙二醛含量，并检测细胞凋亡情况；同时利用此模型观察护肝清脂片对脂肪变性肝细胞内脂滴的影响。结果模型组L-02细胞内脂滴大量形成，且甘油三酯明显升高，而培养液中肝酶释放量及丙二醛较正常组没有明显升高，且凋亡率没有明显增加；护肝清脂片含药血清两次给药，可以使细胞内脂滴和甘油三酯明显减少。结论采用油酸和棕榈酸混合物（油酸∶棕榈酸=2∶1）可以成功诱导L-02细胞脂肪变性，该模型适用于治疗脂肪肝药物的研究。
作者：殷锦锦；唐外姣；曾璐；周本杰 刊期： 2014年第06期
目的：观察沙格列汀对脂肪肝合并糖尿病大鼠模型干预疗效，探讨其改善脂肪肝的可能机制。方法利用高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素（STZ）建立非酒精性脂肪肝（NAFLD）合并2型糖尿病（T2DM）大鼠模型。实验动物分为3组，分别是正常对照组、模型对照组及沙格列汀干预组，干预组给予沙格列汀溶液（10 mg/kg/d）灌胃8周，对照组给予同体积生理盐水灌胃。实验结束后检测各组大鼠空腹血糖、胰岛素、血脂、肝功能、肝指数、肝组织氧化应激指标及病理改变，透射电镜检测肝细胞超微结构，免疫组化及Western blot检测凋亡蛋白Bcl-2、Bax在肝组织的表达。结果与模型组比，干预组血糖、胰岛素、HOMA-IR、肝功能、肝质量、肝指数均显著降低（P<0.01)，体质量、血脂略有降低，但差异不显著（P>0.05），SOD显著升高（P<0.01），MDA显著降低（P<0.05）；与正常组比，干预组谷草转氨酶无显著差异（P>0.05）。HE及油红染色结果显示：与模型组比，干预组肝细胞内脂肪滴减少。电镜结果显示：模型组细胞浆内见大量脂肪滴，粗面内质网水肿，离散，线粒体数目减少，结构紊乱，肿胀。干预组细胞浆内脂肪滴减少，内质网围绕核膜排列整齐，线粒体结构较清晰。免疫组化法、Western blot检测结果显示：与正常组比，模型组Bax表达增多，Bcl-2表达减少；与模型组比，干预组Bax表达减少，Bcl-2表达增多。结论沙格列汀对高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素诱导的脂肪肝合并糖尿病大鼠有较好的治疗作用。其可能通过有效降糖，缓和胰岛素抵抗及降低氧化应激反应、保护细胞器结构、增加抗凋亡蛋白基因表达等发挥对非酒精性脂肪性肝病的治疗作用。
作者：刘艳；张振；陈容平；孙嘉；陈宏 刊期： 2014年第06期
目的：探讨胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）对正常人支气管上皮细胞（16HBE）通透性的影响。方法体外培养16HBE，待细胞状态稳定后，用四唑盐（MTT）比色法检测TSLP（0.1、1、10、100 ng/ml）对16HBE细胞活力的影响。使用无血清1640培养基同步化12 h后，分别加入TSLP刺激液0.1 ng/ml和1ng/ml，分别刺激0、0.5、6、12、24 h，使用跨细胞电阻(TER)及异硫氰酸萤光素-右旋糖酐（FITC-DX）透过率检测不同时间及浓度下的TSLP刺激对16HBE单层细胞通透性的影响。Western blotting法检测TSLP对16HBE粘附连接蛋白E钙粘蛋白（E-cadherin）表达的影响。结果<1 ng/ml TSLP刺激对16HBE细胞活力无影响，10 ng/ml TSLP可显著促进细胞增殖（P<0.05）；浓度为0.1 ng/ml及1 ng/ml的两个TSLP处理组与对照组相比，TER值均显著升高（P<0.001），FITC-DX透过率均明显下降（P<0.05），本效应无明显浓度依赖；E-cadherin表达在0.1 ng/mlTSLP处理组较其余两组明显升高；TSLP处理不同时间后，处理24 h组的TER值及E-cadherin表达量较其余组显著升高（P<0.05），FITC-DX透过率在处理12 h组及24 h组均明显下降（P<0.05），其处理12 h组效果更明显。结论 TSLP可明显改善正常支气管上皮屏障功能。
作者：李文嘉；赵海金；董航明；邹飞；蔡绍曦 刊期： 2014年第06期
目的：探讨阿托伐他汀钙是否通过调节PPARγ和NF-κB活性来抑制Ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞泡沫化形成。方法THP-1巨噬细胞与10、20、40μmol/L阿托伐他汀钙分别预孵育2 h，PBS洗2次，然后与60μg/ml ox-LDL共孵育48 h后，通过酶荧光法检测细胞胆固醇酯与总胆固醇比值，油红O染色观察细胞胞浆内脂质蓄积情况，Western blot分析清道夫受体CD36、SRA的表达，p-iκB和PPARγ的表达，以及ATP结合盒转运蛋白A1（ABCA1）的表达变化。用荧光探针DIL标记ox-LDL的方法，观察阿托伐他汀钙对THP-1巨噬细胞结合ox-LDL能力的影响。结果阿托伐他汀钙浓度依赖性降低THP-1巨噬细胞脂质蓄积和抑制清道夫受体CD36和SRA的表达，同时上调ABCA1表达，并减弱PPARγ和p-iκB活性（P<0.05）。荧光探针DIL标记ox-LDL的方法显示阿托伐他汀钙浓度依赖性降低THP-1巨噬细胞结合ox-LDL能力（P<0.05）。结论阿托伐他汀钙抗动脉硬化作用可能部分通过降低PPARγ和p-iκB活性来抑制脂质蓄积。
作者：成小凤；刘小燕；宋凌鲲；何云；李小庆；张浩 刊期： 2014年第06期
目的：初步分析亚洲人乳腺癌差异表达基因及可能涉及的信号通路。方法从GEO数据库下载5套亚洲人乳腺癌基因芯片数据集（GSE6367、GSE9309、GSE15852、GSE33447和GSE45255），共获得318例乳腺癌和60例正常乳腺组织的基因表达谱数据，进行基因差异表达谱和信号通路分析，并用荧光定量PCR法检测32对乳腺癌患者癌和癌旁标本，验证其中部分基因的差异表达。结果大样本芯片数据分析显示，436个基因在乳腺癌组织出现差异表达，其中上调的有259个，下调的有177个。Pathway分析发现代谢相关的信号通路可能参与了亚洲人乳腺癌发生发展过程。经荧光定量PCR验证，KRT19、ADIPOQ、CFD、RBP4、LPL、ABCA8、CD36基因表达情况与芯片数据分析结果一致。结论本研究比较完整地揭示了亚洲人乳腺癌基因差异表达谱特征和所涉及的重要信号通路，其中CD36基因可能与亚洲人乳腺癌发病密切相关，ABCA8基因可能是亚洲人乳腺癌新的致病基因。
作者：陈路嘉；叶长生；黄仲曦；李欣；姚广裕；刘民锋；胡晓磊；董建宇；郭昭泽 刊期： 2014年第06期
目的：选择合适剂量的链脲佐菌素（STZ）诱导形成糖尿病鼠，而后用该鼠构建小鼠淋巴瘤的荷瘤模型。方法健康雄性Balb/c小鼠200只随机分为正常对照组（50只）和实验组（75、150、200 mg/kg d STZ，各50只）。一次性腹腔注射不同剂量STZ，定期监测小鼠体质量和血糖变化，观察各组造模成功率及死亡率，生存时间。糖尿病造模成功后皮下或尾静脉注射A20淋巴瘤细胞，分别在1个月后、3个月后观察成瘤率、死亡率，生存时间。结果 STZ 150 mg/kg组和STZ 200 mg/kg组与对照组相比，体重均显著降低，血糖显著升高(均P<0.05)，而STZ 75 mg/kg组改变不明显。STZ 200 mg/kg组死亡率明显高于STZ 150 mg/kg组，生存时间明显缩短（均P<0.05）。正常对照组、STZ 150 mg/kg组、STZ 200 mg/kg组皮下注射A20淋巴瘤细胞死亡率、成瘤率无统计学差异（P>0.05），尾静脉注射3个月后有统计学意义（P<0.05）。结论一次性腹腔注射STZ 150 mg/kg死亡率低，糖尿病成模率高，生存时间长，是构建Balb/c小鼠移植瘤模型的理想剂量。
作者：汤瑶；雷翔慧；简文静；严金海；吴自勍；赵彤 刊期： 2014年第06期
目的：研究在缺氧环境下，两性霉素B（AmB）对食管癌Eca109细胞侵袭迁移能力的影响及其可能的机制。方法取常规培养（37℃，5%CO2，95%空气）对数生长期Eca109细胞，分别加入0、1.25、2.5、5μg/ml的AmB，放入三气培养箱（37℃，3%O2，5%CO2，92%N2）中缺氧培养24 h；采用细胞划痕实验、Transwell侵袭实验检测各组细胞迁移及侵袭能力；采用Real-time PCR和Western Blot检测各组细胞HIF-1α、MMP-2和E-cadherin mRNA及蛋白水平的表达。结果与对照组（0μg/ml）比较，各AmB处理组Eca109细胞体外迁移能力均显著降低（P<0.05），Eca109细胞体外穿过Matrigel胶的细胞数量均显著减少（P<0.05）；与对照组（0μg/ml）比较，各AmB处理组Eca109细胞MMP-2 mRNA及蛋白表达水平均显著下调（P<0.05），E-cadherin mRNA及蛋白表达水平均上调（P<0.05），HIF-1α蛋白水平均下调（P<0.05），HIF-1αmRNA水平无明显变化（P>0.05）。结论 AmB能抑制缺氧条件下食管癌细胞Eca-109细胞的侵袭迁移能力，其机制可能为通过调控HIF-1α及其下游MMP-2、E-cadherin的表达。
作者：康强强；唐敏；侯妍利；段丽群；陈兴月；舒锦；吴府容；王颖；李少林 刊期： 2014年第06期
基于三维Hessian矩阵的肺结节检测方法具有很高的敏感性，却很难避免血管交叉区域产生假阳性。本文提出了一种基于自适应体窗结构分析的方法，首先利用体素的Hessian矩阵特征值设计结构系数分析其灰度分布特征；然后根据结构系数构建三维自适应体窗分析组织的局部结构特征；后使用判别函数检测出结节。通过对17套真实肺部CT图像序列进行实验，结果表明本方法可以检测出不同大小和类型的30个结节，并有效减少了血管交叉区域产生的假阳性。结合自适应体窗的Hessian矩阵检测方法可以提高检测效率，减轻医生工作量，为肺结节后续的分割和治疗提供有力的支持。
作者：王凯；张煜；刘哲星；林炳权；吴志强；曹蕾 刊期： 2014年第06期
目的：研究唾液与血浆微小RNA（miR）-21对早期食管癌的诊断价值并作对比。方法收集50例Ⅰ期和50例Ⅱ期食管癌患者和50例正常对照组的唾液、血浆标本并进行总RNA抽提行qPCR定量检测miR-21，计算miR-21在唾液与血浆的相对表达量，并分析两者对Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅰ期+Ⅱ期食管癌的诊断价值。结果唾液和血浆miR-21表达水平在Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅰ期+Ⅱ期食管癌患者中显著高于正常对照组，血浆miR-21诊断Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅰ期+Ⅱ期食管癌的敏感性分别为96%、64%和97%，特异性分别为44%、84%和56%；唾液miR-21诊断敏感性分别为90%、88%和89%，特异性均为64%。不论分期如何，两者表达水平显著正相关，诊断价值的差异性没有统计学意义。结论唾液、血浆miR-21均是食管癌诊断的敏感性标志物；检测miR-21在唾液中的表达以诊断食管癌有望代替血浆检测。
作者：叶敏华；叶鹏辉；张伟珠；饶珈琦；谢子钧 刊期： 2014年第06期
目的：构建TM4SF1的真核表达载体并研究其对结直肠癌细胞株HCT116、DLD1迁移及侵袭功能的生物学特性影响。方法根据GenBank：BC034145.1中的TM4SF1的序列设计两条引物，用逆转录的方法获得开放阅读框（ORF区），并将其连接到质粒上，经鉴定后瞬时转染结直肠癌细胞株HCT116及DLD1，应用Western blot及细胞免疫化学方法检测其转染效果及表达情况，采用划痕及transwell实验观察其对细胞迁移及侵袭能力的影响。结果成功构建PEZ-M29/TM4SF1真核表达载体， Western blot及细胞免疫化学实验结果显示TM4SF1表达上调可以促进结直肠癌细胞株的迁移及侵袭能力。结论成功构建TM4SF1真核表达载体，TM4SF1的上调表达可提高结直肠癌细胞株HCT116、DLD1的迁移及侵袭能力，提示TM4SF1与结直肠癌侵袭转移密切相关，为进一步阐明TM4SF1在结直肠癌转移中的作用及相关机制奠定基础。
作者：王丹；陈娜；彭曼；徐琼；周军 刊期： 2014年第06期
目的：了解刺激声强度差异对正常人气导短纯音诱发的眼肌前庭诱发肌源性电位（ocular vestibular-evoked myogenic potential, oVEMP）和颈肌前庭肌源性诱发电位（cervical vestibular-evoked myogenic potential, cVEMP）的影响。方法选择国人正常人35例作为研究对象，男16例，女19例，年龄4~40岁（20.80±8.89），以500Hz tone brust为刺激音，按照100、95、90、85、80、75 dB nHL依次进行气导oVEMP和cVEMP检测，计算VEMP在不同刺激声强度的引出率、nI潜伏期、pI潜伏期、nI-pI波间期、振幅值和AR值，进行波形参数计算和声强度组间对比。结果全组正常人oVEMP和cVEMP的阈值分别为86.5±4.37 dB nHL、83.57±4.52 dB nHL。随着刺激声强度的减弱，无论oVEMP还是cVEMP，均表现出引出率下降、振幅减低等特点。在刺激声强度为100 dB nHL和95 dB nHL时，oVEMP和cVEMP的引出率均为100%，两者之间图形参数差异并不显著。结论随着刺激声强度的减弱，oVEMP和cVEMP出现引出率下降、振幅减低的趋势。对于40岁以下的国人人群，建议采用95 dB nHL作为VEMPs测试的大起始刺激强度。
作者：张睿；许珉；张青；杨引通；陈彦飞 刊期： 2014年第06期
目的：构建SDF-1/54R的原核可溶表达载体，并考查其对CXCR7的抑制作用。方法将PCR扩增的SDF-1/54r基因插入带有GST标签的可溶表达载体pET-41a+，并转化BL21（DE3）菌株，IPTG诱导表达的融合蛋白GST-SDF-1/54R通过SDS-PAGE和Western blotting进行检测，并利用GST亲和层析纯化。纯化产物经肠激酶酶切和纯化后得到目的蛋白SDF-1/54R。用SDF-1/54R处理CXCR7高表达的MCF-7细胞，利用MTT和趋化实验评价其对乳腺癌细胞增殖和转移的影响。结果利用新构建的可溶表达系统成功得到了目的蛋白SDF-1/54R，MTT和趋化实验证实SDF-1/54R对乳腺癌细胞MCF-7的增殖和转移具有明显的抑制作用。结论重组载体表达的可溶蛋白SDF-1/54R是一种良好的CXCR7特异性拮抗剂，具有开发成抗肿瘤药物的潜在应用价值。
作者：曹园芝；杨飞华；马伟峰 刊期： 2014年第06期
目的：探讨RNA结合蛋白HuR 118位苏氨酸对热应激状态下的双特异性磷酸酶1（DUSP1）转录后调控机制。方法构建HuR 118位苏氨酸突变体真核表达质粒，并用脂质体转染NIH 3T3细胞，Real-time PCR检测其对DUSP1 mRNA水平的影响， Western blotting检测其对DUSP1蛋白表达的效应。结果（1）小鼠HuR不同突变体真核表达载体质粒构建成功；（2）热休克刺激后，HuR T118磷酸化明显增强；（3）过表达HuR(WT)与HuR（T118E），经过热休克刺激后，DUSP1 mRNA水平明显升高，其蛋白表达也有上调；过表达HuR(T118E)时，DUSP1的mRNA水平明显上调，而蛋白水平在热休克刺激前后均上调，其表达变化无差异而过表达HuR（T118A），热休克刺激前后DUSP1 mRNA水平及蛋白表达均下调；（4）热休克刺激下，HuR（WT）可以从细胞核内转位到细胞质并形成颗粒；当过表达HuR（T118E）时，在静息状态下，HuR（T118E）弥散分布于细胞质，热休克刺激会使其在细胞质形成明显的颗粒；而过表达HuR（T118A）时，热休克刺激并不能使其移位出核。结论 RNA结合蛋白HuR参与了DUSP1的转录后调控，可以通过其118位的苏氨酸磷酸化提高热休克刺激后的DUSP1的基因及蛋白水平。
作者：张传丽；罗海华；姜勇 刊期： 2014年第06期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
