目的:探讨塞来昔布(celecoxib)在人食管癌细胞是否影响卡铂介导的细胞毒作用。方法 MTT法检测卡铂单独及联合celecoxib后对食管癌亲代细胞EC109及耐药细胞EC109/CDDP的细胞毒作用。Western blot方法检测卡铂单独及联合celecoxib后caspase-3的活化、PARP蛋白的剪切,以及CTR1蛋白的表达。Caspase-3/7 Assay试剂盒检测细胞caspase-3酶活性。流式细胞仪检测卡铂单独及联合celecoxib作用下细胞凋亡比率。ICP-MS检测卡铂单独及联合celecoxib作用下细胞内卡铂蓄积量。结果卡铂在EC109及EC109/CDDP细胞的IC50在联合应用celecoxib后显著增加,说明celecoxib拮抗了卡铂介导的细胞毒作用。在联合应用celecoxib后caspase-3及PARP蛋白的剪切较单独应用卡铂时明显减少,且caspase-3酶活性较单独应用卡铂时显著降低。此外,联合应用celecoxib后,EC109和EC109/CDDP细胞凋亡率比单独应用卡铂时明显降低,而细胞存活率明显增加。联合应用celecoxib后,EC109和EC109/CDDP细胞内卡铂蓄积量比单独应用卡铂时显著降低,而CTR1蛋白的表达无明显改变。结论 Celecoxib拮抗卡铂在食管癌细胞介导的细胞毒作用,通过降低细胞内卡铂蓄积量抑制卡铂介导的食管癌细胞凋亡。
作者:时粒笠;钟德胜;古春萍;余乐 刊期: 2014年第06期
目的:构建SDF-1/54R的原核可溶表达载体,并考查其对CXCR7的抑制作用。方法将PCR扩增的SDF-1/54r基因插入带有GST标签的可溶表达载体pET-41a+,并转化BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达的融合蛋白GST-SDF-1/54R通过SDS-PAGE和Western blotting进行检测,并利用GST亲和层析纯化。纯化产物经肠激酶酶切和纯化后得到目的蛋白SDF-1/54R。用SDF-1/54R处理CXCR7高表达的MCF-7细胞,利用MTT和趋化实验评价其对乳腺癌细胞增殖和转移的影响。结果利用新构建的可溶表达系统成功得到了目的蛋白SDF-1/54R,MTT和趋化实验证实SDF-1/54R对乳腺癌细胞MCF-7的增殖和转移具有明显的抑制作用。结论重组载体表达的可溶蛋白SDF-1/54R是一种良好的CXCR7特异性拮抗剂,具有开发成抗肿瘤药物的潜在应用价值。
作者:曹园芝;杨飞华;马伟峰 刊期: 2014年第06期
目的:从分子的遗传变异和表达水平综合探讨卵巢癌的发病机制,为临床诊疗提供新思路。方法从TCGA数据门户上下载大样本的高浆液性卵巢癌DNA拷贝数数据和mRNA表达数据,使用GISTIC对拷贝数变异进行分析,利用SAM软件包samr筛选差异表达基因;并利用GSEA等工具进行生物信息学分析。结果 GISTIC发现45个拷贝数扩增区域;SAM和Fisher's exact test发现拷贝数扩增区域中有40个拷贝数变异的基因能引起表达差异;GSEA富集分析发现这些拷贝数变异基因主要富集在多个有关癌症基因集的研究报告中。结论利用生物信息学方法综合分析拷贝数变异数据和基因表达数据,能充分有效地获取信息,为确定卵巢癌的早期诊断和治疗靶点提供新的思路。
作者:邓祯祥;王文辉;李金明 刊期: 2014年第06期
目的:研究唾液与血浆微小RNA(miR)-21对早期食管癌的诊断价值并作对比。方法收集50例Ⅰ期和50例Ⅱ期食管癌患者和50例正常对照组的唾液、血浆标本并进行总RNA抽提行qPCR定量检测miR-21,计算miR-21在唾液与血浆的相对表达量,并分析两者对Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅰ期+Ⅱ期食管癌的诊断价值。结果唾液和血浆miR-21表达水平在Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅰ期+Ⅱ期食管癌患者中显著高于正常对照组,血浆miR-21诊断Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅰ期+Ⅱ期食管癌的敏感性分别为96%、64%和97%,特异性分别为44%、84%和56%;唾液miR-21诊断敏感性分别为90%、88%和89%,特异性均为64%。不论分期如何,两者表达水平显著正相关,诊断价值的差异性没有统计学意义。结论唾液、血浆miR-21均是食管癌诊断的敏感性标志物;检测miR-21在唾液中的表达以诊断食管癌有望代替血浆检测。
作者:叶敏华;叶鹏辉;张伟珠;饶珈琦;谢子钧 刊期: 2014年第06期
目的:研究HBV复制和不同基因表达是否会影响肝细胞内CDC37的表达水平。方法首先扩增HBV 6种基因P、preS1、preS2、S、C和X,并构建至pCMV表达载体,分别转染Huh7和HepG2细胞系,Western blot检测CDC37表达水平;另外将含CDC37基因启动子序列的荧光素酶报告质粒pGL3与HBV的6种基因表达质粒分别共转染Huh7和HepG2细胞系,检测荧光素酶信号。其次分别构建B、C、D和CD重组体4种HBV基因型毒株的1.28拷贝全基因质粒,运用AdEasy腺病毒系统进行重组和包装后分别感染Huh7和HepG2细胞系,并检测CDC37表达水平。结果基因表达结果显示,HBV 6种基因的表达对肝癌细胞系内CDC37的表达水平无明显影响,而且HBV 6种不同蛋白的表达对CDC37启动子的活性无明显影响。1.28拷贝HBV全基因质粒的感染结果显示,HBV不同基因型毒株的复制对CDC37基因的表达水平亦无明显影响。结论 HBV的复制和不同基因的表达不会明显影响CDC37的表达水平。
作者:陈朝武;周彬;徐莹;杨贵奉;王战会 刊期: 2014年第06期
目的:观察齐墩果酸(OA)协同环孢素A(CsA)对大鼠移植肾存活的影响,探讨将齐墩果酸应用于肾移植术后免疫抑制治疗的临床价值。方法以BN大鼠为供体,LEW大鼠为受体,建立大鼠同种异体肾移植模型。将40只受体大鼠随机均分为对照组、OA组、CsA组、OA+CsA组,术前1 d开始进行干预。记录肾移植大鼠存活时间,并监测其血清肌酐浓度。术后第5天,免疫组化法检测移植肾CD4+和CD8+T细胞的浸润;多功能流式点阵仪(Luminex)检测以下因子的血清浓度:促炎细胞因子白介素-1β(IL-1β)、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)、白介素-17(IL-17)和抗炎细胞因子白介素-10(IL-10),以及趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、干扰素诱导的蛋白-10(IP-10)、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)和IFN-γ诱导的单核细胞因子(Mig);酶联免疫斑点法(ELISpot)检测表达IFN-γ、IL-10、IL-4和IL-17的T细胞频率。结果与其它各组比较,OA+CsA组的移植肾存活时间显著延长,浸润移植肾的CD4+和CD8+T细胞数量显著降低。与对照组比较,处理组的IL-1β、IP-10、MCP-1、Mig、MIP和IFN-γ、IL-17、IL-4的T细胞频率显著降低,但IL-10和IL-10的T细胞频率则显著升高。其中OA+CsA组较其他2个处理组的差异更为明显。结论 OA能协同CsA减轻肾移植大鼠排斥反应和炎症反应,延缓大鼠移植肾功能衰竭,延长大鼠移植肾存活时间。在临床肾移植领域,OA具有协同CsA促进移植肾存活的潜力。
作者:钱坤;廖雯婷;李建军;蒋鸿涛;周浩;龙建华;秦国庆;王毅 刊期: 2014年第06期
目的:探讨建立人肝细胞L-02单纯肝脂肪变性细胞模型的方法与模型的应用。方法体外用1640培养基培养L-02细胞,分为模型组和正常组。当细胞融合达到70%~80%,正常组换用新鲜1640培养液,而模型组改为含有游离脂肪酸(油酸和棕榈酸)混合物的1640培养基诱导培养24 h。以油红O染色定性观察细胞内脂滴并通过显色比较各组间总脂质差别,模型鉴定采用观察细胞内脂滴形态,检测细胞内甘油三酯和细胞培养上清丙二醛含量,并检测细胞凋亡情况;同时利用此模型观察护肝清脂片对脂肪变性肝细胞内脂滴的影响。结果模型组L-02细胞内脂滴大量形成,且甘油三酯明显升高,而培养液中肝酶释放量及丙二醛较正常组没有明显升高,且凋亡率没有明显增加;护肝清脂片含药血清两次给药,可以使细胞内脂滴和甘油三酯明显减少。结论采用油酸和棕榈酸混合物(油酸∶棕榈酸=2∶1)可以成功诱导L-02细胞脂肪变性,该模型适用于治疗脂肪肝药物的研究。
作者:殷锦锦;唐外姣;曾璐;周本杰 刊期: 2014年第06期
目的:为精确且快速进行低剂量稀疏角度锥束CT图像重建,本文提出一种基于分裂Bregman数学方法的紧框架约束的图像重建算法。方法首先选择紧框架(Tight Frame)作为正则化项,根据压缩感知原理建立小化目标函数,利用分裂Bregman数学方法将求解问题分为3步:(1)使用改进的前向投影算法快速计算出投影矩阵;(2)引入中间量,用分裂Bregman原理将无法直接差分的L1正则化问题转化为可直接差分的L2正则化问题,并利用共轭梯度算法求解;(3)利用分裂Bregman原理中的收缩公式更新中间量。结果仿真和实际重建的CT图像实验表明,相比于传统的带有正则化约束的凸集投影(POCS)代数迭代重建模式,分裂Bregman方法在图像保真和计算时间等方面均取得了上佳的效果,并且具有广泛的适用性。结论在稀疏角度锥束CT图像迭代重建条件下,本文提出的方法能够快速精确重建出满意的锥束CT图像,且图像重建速度和图像质量较凸集投影方法有较大提高。
作者:杨柳;齐宏亮;徐圆;甄鑫;卢文婷;周凌宏 刊期: 2014年第06期
目的:探讨实时超声造影技术在肾脏实性占位病变中诊断及鉴别诊断的临床应用价值。方法对140例肾脏实性占位病变患者,年龄22~87岁(平均61.3±15.5岁),共152个病灶,大小0.6~9.7 cm(平均3.1±1.9 cm)。采用经外周静脉团注声诺维(SonoVue),使用对比脉冲序列(CPS)技术进行实时超声造影检查,观察肾脏实性占位病变造影剂的灌注过程,分析其灌注特点。结果经病理学证实,137个为恶性病变(127个肾透明细胞癌、8个肾乳头状癌及2个肾嫌色细胞癌);15个为良性病变(13个肾血管平滑肌脂肪瘤及2个肾嗜酸性细胞瘤),均表现出不同的增强特征。137个恶性病变中98个(71.5%)表现为造影剂皮质期快速增强,104个(75.9%)表现为髓质晚期或延迟期快速廓清,即“快进快出”,并125个(91.2%)具有假包膜的恶性病灶周边环状高增强。病灶直径D≤2 cm,表现为均匀增强为主;2 cm4 cm,表现为不均匀增强伴大片坏死。15个良性病变表现为造影剂皮质期缓慢或与肾实质同步增强,随后延迟期缓慢廓清,即“慢进慢出”。与病理诊断比较,实时超声造影技术诊断的特异性、准确性及阳性预测值分别为94.9%、96.1%、73.7%,均高于常规超声诊断(分别为72.3%、71.1%、19.1%),并差异有统计学意义(P<0.001);而实时超声造影技术诊断的敏感性及阴性预测值分别为93.3%及99.2%,均高于常规超声诊断(分别为60%及94.3%),但差异无统计学意义(P=0.084及0.062,>0.05)。结论实时超声造影技术对肾脏实性占位病变诊断及鉴别诊断具有一定的临床应用价值。
作者:李鑫;梁萍;于晓玲;于杰;程志刚;韩志宇;刘方义;穆梦娟 刊期: 2014年第06期
目的:以京尼平交联制备丝素蛋白-壳聚糖微球,以牛血清白蛋白(BSA)作为模型蛋白,评价丝素蛋白-壳聚糖微球的缓释能力。方法以无机乳化交联法,京尼平为交联剂,制备缓释BSA的丝素蛋白-壳聚糖微球,通过扫描电镜观察微球表面形态并测量微球的粒径,X-射线衍射及傅里叶红外光谱对微球表征分析,以BCA法测定微球的包封率,载药率和21 d的累积缓释率。结果以京尼平交联制备的丝素蛋白-壳聚糖微球,微球形态较为规则,表面较光滑,粒径分别为7.84±0.97μm,包封率为50.16%±4.32%,载药率为1.25%±0.11%,21 d的累积释放率为75.2%±2.53%。结论以京尼平交联制备的丝素蛋白-壳聚糖微球载药率高,缓释能力显著。
作者:叶漫文;曾曙光;高文峰;容明灯;郭泽鸿;石勇;干辉勇 刊期: 2014年第06期
目的:初步分析亚洲人乳腺癌差异表达基因及可能涉及的信号通路。方法从GEO数据库下载5套亚洲人乳腺癌基因芯片数据集(GSE6367、GSE9309、GSE15852、GSE33447和GSE45255),共获得318例乳腺癌和60例正常乳腺组织的基因表达谱数据,进行基因差异表达谱和信号通路分析,并用荧光定量PCR法检测32对乳腺癌患者癌和癌旁标本,验证其中部分基因的差异表达。结果大样本芯片数据分析显示,436个基因在乳腺癌组织出现差异表达,其中上调的有259个,下调的有177个。Pathway分析发现代谢相关的信号通路可能参与了亚洲人乳腺癌发生发展过程。经荧光定量PCR验证,KRT19、ADIPOQ、CFD、RBP4、LPL、ABCA8、CD36基因表达情况与芯片数据分析结果一致。结论本研究比较完整地揭示了亚洲人乳腺癌基因差异表达谱特征和所涉及的重要信号通路,其中CD36基因可能与亚洲人乳腺癌发病密切相关,ABCA8基因可能是亚洲人乳腺癌新的致病基因。
作者:陈路嘉;叶长生;黄仲曦;李欣;姚广裕;刘民锋;胡晓磊;董建宇;郭昭泽 刊期: 2014年第06期
目的:探讨使用普通胰岛素建立大鼠糖尿病血糖波动模型。方法雄性SD大鼠随机分成正常组和模型组,腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,将模型大鼠随机分成持续高血糖组和波动血糖组,血糖波动组大鼠每日2次皮下注射普通胰岛素或灌服葡萄糖诱导建立糖尿病血糖波动模型。观察大鼠一般情况、体质量、一日5次血糖水平、血糖日平均水平(MBG)、日平均血糖的标准差(SDBG)、大血糖波动幅度(LAGE)、血清胰岛素水平(FINS)、胰腺组织病理学改变情况。结果波动血糖组和持续高血糖组大鼠多食、多饮、多尿症状明显;大鼠体质量在不同时间的差别有统计学意义(P<0.01),组间体质量差异无统计学意义(P>0.05)。血糖波动6周后,持续高血糖组、波动血糖组大鼠血糖日平均水平(MBG)、日平均血糖的标准差(SDBG)、大血糖波动幅度(LAGE)明显高于正常组(P<0.01),血清胰岛素水平低于正常组(P<0.05);波动血糖组大鼠SDBG、LAGE明显高于持续高血糖组(P<0.01),MBG、FINS低于持续高血糖组,但差异无统计学意义(P>0.05);成模的糖尿病大鼠胰岛萎缩,形态不规则,分布较为稀疏,数量明显减少,其中以波动血糖组变化更为明显。结论使用每日皮下注射2次普通胰岛素或灌服葡萄糖的方法能成功制作出糖尿病大鼠血糖波动模型。
作者:吴元洁;吴元波;郑书国;王玉凤;刘晓丽;张晓军;吕明安 刊期: 2014年第06期
目的:观察沙格列汀对脂肪肝合并糖尿病大鼠模型干预疗效,探讨其改善脂肪肝的可能机制。方法利用高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素(STZ)建立非酒精性脂肪肝(NAFLD)合并2型糖尿病(T2DM)大鼠模型。实验动物分为3组,分别是正常对照组、模型对照组及沙格列汀干预组,干预组给予沙格列汀溶液(10 mg/kg/d)灌胃8周,对照组给予同体积生理盐水灌胃。实验结束后检测各组大鼠空腹血糖、胰岛素、血脂、肝功能、肝指数、肝组织氧化应激指标及病理改变,透射电镜检测肝细胞超微结构,免疫组化及Western blot检测凋亡蛋白Bcl-2、Bax在肝组织的表达。结果与模型组比,干预组血糖、胰岛素、HOMA-IR、肝功能、肝质量、肝指数均显著降低(P<0.01),体质量、血脂略有降低,但差异不显著(P>0.05),SOD显著升高(P<0.01),MDA显著降低(P<0.05);与正常组比,干预组谷草转氨酶无显著差异(P>0.05)。HE及油红染色结果显示:与模型组比,干预组肝细胞内脂肪滴减少。电镜结果显示:模型组细胞浆内见大量脂肪滴,粗面内质网水肿,离散,线粒体数目减少,结构紊乱,肿胀。干预组细胞浆内脂肪滴减少,内质网围绕核膜排列整齐,线粒体结构较清晰。免疫组化法、Western blot检测结果显示:与正常组比,模型组Bax表达增多,Bcl-2表达减少;与模型组比,干预组Bax表达减少,Bcl-2表达增多。结论沙格列汀对高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素诱导的脂肪肝合并糖尿病大鼠有较好的治疗作用。其可能通过有效降糖,缓和胰岛素抵抗及降低氧化应激反应、保护细胞器结构、增加抗凋亡蛋白基因表达等发挥对非酒精性脂肪性肝病的治疗作用。
作者:刘艳;张振;陈容平;孙嘉;陈宏 刊期: 2014年第06期
目的:研究卵胞浆内单精子注射技术(ICSI)中不同来源精子对卵母细胞受精、胚胎质量及发育潜能的影响。方法回顾性分析我中心因单纯男性因素行ICSI助孕治疗的197例患者的临床资料,按不同精子来源分为射精组(n=102)、PESA组(n=68)、TESA组(n=27)3组,其中将射精组又分为严重少弱畸精子症组(n=67)和隐匿精子症组(n=35)。比较4组间受精率、优质胚胎率、新鲜胚胎移植周期的着床率及妊娠率,以及低质胚胎继续培养的优质囊胚形成率。结果少弱畸精子射精组、隐匿精子射精组、PESA组、TESA组的正常受精率分别为64.8%、62.1%、75.6%、61.6%,其中PESA组明显高于其它3组(P<0.05),4组的优质胚胎率、新鲜胚胎移植周期的着床率及妊娠率无明显差异(P>0.05)。4组间低质胚胎继续培养的优质囊胚形成率也无显著差异(P>0.05)。结论PESA来源的精子ICSI中正常受精率较高,但在ICSI中不同来源精子对胚胎质量及发育潜能无显著影响。
作者:谢多;邱卓琳;罗琛;褚庆军;全松 刊期: 2014年第06期
Wnt/β-catenin信号通路与肿瘤有着密切的关系,此通路的异常活化参与人类多种癌症的发病过程。肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)在全球肿瘤中死亡率位居第3,但其发生发展的分子机制仍不清楚。目前,研究表明Wnt/β-catenin信号通路及其他相互作用信号通路,以及乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒相互作用蛋白等共同在HCC的发生发展过程中起着关键作用,因而,揭示该信号通路在HCC中的作用可为其早期诊断、治疗以及预后提供理论基础。现对Wnt/β-catenin信号通路在HCC中的作用及目前研究状况作一简要综述。
作者:谢亮海;蒋晗;吴福生 刊期: 2014年第06期
目的:研究在缺氧环境下,两性霉素B(AmB)对食管癌Eca109细胞侵袭迁移能力的影响及其可能的机制。方法取常规培养(37℃,5%CO2,95%空气)对数生长期Eca109细胞,分别加入0、1.25、2.5、5μg/ml的AmB,放入三气培养箱(37℃,3%O2,5%CO2,92%N2)中缺氧培养24 h;采用细胞划痕实验、Transwell侵袭实验检测各组细胞迁移及侵袭能力;采用Real-time PCR和Western Blot检测各组细胞HIF-1α、MMP-2和E-cadherin mRNA及蛋白水平的表达。结果与对照组(0μg/ml)比较,各AmB处理组Eca109细胞体外迁移能力均显著降低(P<0.05),Eca109细胞体外穿过Matrigel胶的细胞数量均显著减少(P<0.05);与对照组(0μg/ml)比较,各AmB处理组Eca109细胞MMP-2 mRNA及蛋白表达水平均显著下调(P<0.05),E-cadherin mRNA及蛋白表达水平均上调(P<0.05),HIF-1α蛋白水平均下调(P<0.05),HIF-1αmRNA水平无明显变化(P>0.05)。结论 AmB能抑制缺氧条件下食管癌细胞Eca-109细胞的侵袭迁移能力,其机制可能为通过调控HIF-1α及其下游MMP-2、E-cadherin的表达。
作者:康强强;唐敏;侯妍利;段丽群;陈兴月;舒锦;吴府容;王颖;李少林 刊期: 2014年第06期
目的:探讨胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对正常人支气管上皮细胞(16HBE)通透性的影响。方法体外培养16HBE,待细胞状态稳定后,用四唑盐(MTT)比色法检测TSLP(0.1、1、10、100 ng/ml)对16HBE细胞活力的影响。使用无血清1640培养基同步化12 h后,分别加入TSLP刺激液0.1 ng/ml和1ng/ml,分别刺激0、0.5、6、12、24 h,使用跨细胞电阻(TER)及异硫氰酸萤光素-右旋糖酐(FITC-DX)透过率检测不同时间及浓度下的TSLP刺激对16HBE单层细胞通透性的影响。Western blotting法检测TSLP对16HBE粘附连接蛋白E钙粘蛋白(E-cadherin)表达的影响。结果<1 ng/ml TSLP刺激对16HBE细胞活力无影响,10 ng/ml TSLP可显著促进细胞增殖(P<0.05);浓度为0.1 ng/ml及1 ng/ml的两个TSLP处理组与对照组相比,TER值均显著升高(P<0.001),FITC-DX透过率均明显下降(P<0.05),本效应无明显浓度依赖;E-cadherin表达在0.1 ng/mlTSLP处理组较其余两组明显升高;TSLP处理不同时间后,处理24 h组的TER值及E-cadherin表达量较其余组显著升高(P<0.05),FITC-DX透过率在处理12 h组及24 h组均明显下降(P<0.05),其处理12 h组效果更明显。结论 TSLP可明显改善正常支气管上皮屏障功能。
作者:李文嘉;赵海金;董航明;邹飞;蔡绍曦 刊期: 2014年第06期
目的:建立兔烫伤合并海水浸泡的实验模型,探讨烫伤合并海水浸泡复合损伤对肠道损害的影响。方法新西兰兔63只,制作20%TBSA动物烫伤模型后,随机分为单纯烫伤对照组(A组)(n=21)、烫伤后浸泡淡水组(B组)(n=21)和烫伤后浸泡海水组(C组)(n=21),每小组分别在伤后2、4和8 h处死7只动物,抽取心室血及取标本。检测血浆中超氧化物歧化酶(SOD)和脂质过氧化物(LPO)水平,检测肠道组织中PGs含量,形态学观察小肠的炎症反应情况及结构损伤状况,采用SP法检测小肠粘膜细胞中Bax和Bcl-2蛋白的表达情况。结果小肠形态学观察,总体上C组小肠组织炎症反应情况、结构损伤状况较A组和B组严重;C组兔小肠组织中PGs含量、血浆中SOD活力在海水浸泡2、4、8 h后较同期A组和B组明显减少,组间差异有显著性(P<0.01),各时相点间差异有显著性(P<0.01),随着浸泡(或致伤)时间延长含量或活力逐渐减少;C组兔血浆中LPO含量在海水浸泡2、4、8 h后较同期A组和B组明显增加,组间差异有显著性(P<0.01),不同时相点间差异有显著性(P<0.01),随着浸泡(或致伤)时间延长含量逐渐升高;C组兔小肠粘膜组织中凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达在海水浸泡4、8 h后较同期A组和B组明显增强,组间差异有显著性(P<0.01),不同时相点间差异有显著性(P<0.01),随着浸泡(或致伤)时间延长Bax和Bcl-2表达逐渐增强。结论烧伤合并海水浸泡会加重肠粘膜结构破坏和屏障功能损伤,表现在小肠炎症反应和结构损伤状况的加重,小肠组织中PGs含量和血浆中SOD活力降低,血浆中LPO含量升高,小肠粘膜上皮细胞中凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达增强。
作者:徐沛;王甲汉;史鹏伟;马军 刊期: 2014年第06期
目的:构建TM4SF1的真核表达载体并研究其对结直肠癌细胞株HCT116、DLD1迁移及侵袭功能的生物学特性影响。方法根据GenBank:BC034145.1中的TM4SF1的序列设计两条引物,用逆转录的方法获得开放阅读框(ORF区),并将其连接到质粒上,经鉴定后瞬时转染结直肠癌细胞株HCT116及DLD1,应用Western blot及细胞免疫化学方法检测其转染效果及表达情况,采用划痕及transwell实验观察其对细胞迁移及侵袭能力的影响。结果成功构建PEZ-M29/TM4SF1真核表达载体, Western blot及细胞免疫化学实验结果显示TM4SF1表达上调可以促进结直肠癌细胞株的迁移及侵袭能力。结论成功构建TM4SF1真核表达载体,TM4SF1的上调表达可提高结直肠癌细胞株HCT116、DLD1的迁移及侵袭能力,提示TM4SF1与结直肠癌侵袭转移密切相关,为进一步阐明TM4SF1在结直肠癌转移中的作用及相关机制奠定基础。
作者:王丹;陈娜;彭曼;徐琼;周军 刊期: 2014年第06期
目的:利用Red重组系统构建肠出血型大肠埃希菌(EHEC)O157:H7 ppk基因缺失株,并研究其生物特性。方法设计并合成一对同源臂引物,每条引物5'端与ppk基因同源,3'端与卡那霉素抗性基因同源,扩增卡那霉素抗性基因片段;制备含有pKD46质粒的EHEC O157:H7 EDL933w感受态细菌,然后将该抗性基因片段电击转化入制备的感受态菌株中;利用pKD46介导的Red重组系统,通过同源重组替换EHEC O157:H7 EDL933w ppk基因,PCR和测序验证;通过革兰染色、测D600值、吉姆萨染色比较EHEC O157:H7 EDL933w野生株和突变株的形态结构、生长能力和黏附性。结果构建了ppk基因缺失并含有卡那霉素抗性的EHEC O157:H7 EDL933w突变菌株(EHEC O157:H7 EDL933wΔppk),初步探索了EHEC O157:H7 EDL933w野生株和突变株的生物学特性。结论本研究运用Red重组系统构建了肠出血型大肠埃希菌O157:H7 ppk基因缺失株,为进一步研究肠出血型大肠埃希菌中ppk基因的调控机制奠定了基础。
作者:韩朋;孙琦;赵素慧;张其威;万成松 刊期: 2014年第06期