陈瑞林；陶怡；邱可为；黄文辉；黄成辉；李娟
目的 制备白细胞介素21(IL-21)膜表面修饰的小鼠膀胱癌MB49细胞疫苗,评价其在小鼠膀胱癌皮下转移模型中诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL s)的效应和治疗作用.方法 将SA-IL-21锚定在经30％酒精灭活后的MB49细胞膜表面而制成IL-21膜表面修饰疫苗.建立C57BL/6小鼠皮下MB49膀胱癌模型,将荷瘤小鼠随机分为5组:IL-21膜表面修饰疫苗组、单纯游离IL-21组、GFP膜表面修饰疫苗组、单独灭活MB49肿瘤疫苗组、PBS组.利用上述制备的疫苗进行治疗,通过检测各组小鼠肿瘤体积变化及CTL来评价疫苗的抗肿瘤功能.结果 成功制备了IL-21膜表面修饰MB49疫苗.IL-21/MB49疫苗可显著抑制肿瘤生长并产生长期特异性免疫反应(P＜0.05).在同一效靶比下IL-21/MB49疫苗组的CTL杀伤活性显著高于其他组(P＜0.05).结论 采用蛋白膜锚定技术可将IL-21高效锚定于MB49细胞膜表面制备成IL-21膜表面修饰膀胱癌肿瘤疫苗,该疫苗既可保持IL-21生物学活性又可明显增强CTL杀伤Bca肿瘤活性.
作者：彭俊铭；石小军；陈定南；梁中锟；蓝开健；高基民；谭万龙 刊期： 2012年第06期
目的 评价基于三维技术的保护性肝切除治疗肝胆管结石的临床应用价值.方法 采用MI-3DVS软件对21例肝胆管结石患者上腹部64排多层螺旋CT薄层图像进行三维重建及可视化仿真手术,制定手术规划,指导临床施行保护性肝切除术.观察实际肝切除方式与仿真手术符合情况,平均手术时间及住院日,术中出血量,结石取尽情况及术中术后并发症发生情况等.结果 21例患者实际肝切除方式与仿真手术一致,与常规的规则性肝切除术相比,均不同程度的保留功能正常的肝脏组织,平均手术时间(215.2±51.3)min,住院时间(10.7±4.3)d,术中出血量(301.4±60.7)ml,结石取尽率为95.2％(20/21),手术并发症发生率为19.0％(4/21).结论 基于三维技术的保护性肝切除治疗肝胆管结石,在实现取尽结石、祛除病灶、解除狭窄、通畅引流的同时,能大程度保留残肝体积,并降低肝切除相关并发症的发生.
作者：方驰华；陈建新；范应方；杨剑；项楠；游锦华 刊期： 2012年第06期
目的 探索人胚胎肺组织中是否存在一种新的血管内皮生长因子(VEGF)基因可变剪切形式.方法 对1例4月龄引产胎儿肺组织的总RNA进行逆转录聚合酶链反应、克隆并测定扩增片段的序列.结果 用一对引物(引物5’端-21～7 bp,3’端554～576 bp)可扩增出3条片段,一条为长度正常的VEGF165(619 bp)全长序列,另一条为长度正常的VEGF121(487bp)全长序列,第三条为新的VEGF mRNA异常剪切片段.测序检测显示,此扩增片段长度为639 bp,同样为VEGF165全长核苷酸序列,但在VEGF165的第3和第4外显子之间插入了长度为20bp的碱基片段.序列分析显示此插入序列为滞留的第Ⅲ内含子终末序列,含内含子剪切信号.上述移码突变导致VEGF基因阅读框架发生改变,在第4外显子中游出现终止密码,故仅含-VEGF165外显子l～3及4部分序列,在蛋白水平上可能编码含97个氨基酸的新肽链.结论 在一引产胎儿的肺组织中发现了新的VEGF mRNA可变剪切形式,其生物学意义有待进一步研究.
作者：周忠江；叶海燕；崔凯；陈向辉；刘伊丽 刊期： 2012年第06期
对1例病因不明的“广泛皮疹、皮肤剥脱、无尿、全身浮肿、呼吸困难”患者行持续血液净化治疗,动态观察各器官损伤情况的变化,之后在患者病变部位行组织活检.患者病理结果为多发性肌炎/皮肌炎,持续性血液净化治疗开始后心、肝、肾、肺各项指标快速好转,表现为尿量快速增加,肺部炎症逐渐减轻,血肌酐、尿素、总胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶和乳酸脱氧酶水平快速回落,治疗结束后各项生化指标仍保持下降趋势,患者顺利出院.持续性血液净化在本例重症多发性肌炎/皮肌炎的治疗中疗效显著,在自身免疫性疾病,尤其是全身性炎症疾病的急性期可以作为一种治疗选择.
作者：刘占国；周健；岑仲然；唐颖；杨祥锐；常平 刊期： 2012年第06期
目的 探讨Ca2+激活的氯离子通道(CaCC)蛋白TMEM16A在胃癌中的表达和意义.方法 收集72例胃癌标本,采用免疫组织化学SP法检测TMEM 16A的表达,以癌旁胃粘膜组织和非肿瘤胃粘膜组织作为对照,胃间质瘤组织作为阳性对照.结果 TMEM 16A表达于胃癌细胞胞膜和胞质内,在72例胃癌中TMEM 16A呈不同程度阳性表达,在胃癌组织中TMEM 16A表达的总阳性率(“阳性”和“强阳性”)为80.56％(58/72)；而在相应的癌旁组织中TMEM 16A表达的总阳性率(“阳性”和“强阳性”)仅为4.17％ (3/72),两者之间差异显著(P＜0.005).结论 TMEM16A高表达于胃癌组织,可作为胃癌的分子诊断和靶向治疗的一个新的候选靶点.
作者：杨军；刘妮；康安静；靳耀锋；王军宁；苏宝山；陈晓黎；李宗芳 刊期： 2012年第06期
目的 建立一套简单有效的单个肿瘤干细胞分离及培养方法,提高研究的效率与质量.方法 在火焰上轻烤拉伸后的毛细管,与无菌塑料管连接建立口控毛细管单细胞分离装置.分离单个SW480细胞无血清培养筛选出克隆球,CD133、CK7荧光标记鉴定；消化克隆球吸取单个肿瘤干细胞并移至石蜡油封闭的微滴及96孔板中培养对比观察.结果 SW480细胞克隆形成率约为1.04％,其CD133表达强CK7表达弱；口控毛细管单细胞分离装置分离单个肿瘤干细胞的有效率可高达98.99％;单个肿瘤干细胞在微滴中培养与在96孔板中培养的比较:在分裂时间点上,前两次分裂时间相差无几(P＞0.05),在微滴中培养的细胞后续分裂需时较长；在持续扩增的数量上,微滴培养为11.5％(22/192)而96孔板为9.2％(17/184),两者差异无统计学意义(P＞0.05).结论 单个SW480细胞无血清培养可形成肿瘤干细胞球,口控单细胞分离装置能够有效分离单个肿瘤干细胞,石蜡油封闭微滴培养法和96孔板培养法均能够有效扩增单个肿瘤干细胞.但石蜡油封闭微滴培养法操作灵活、观察便捷、环境稳定,可作为培养单个肿瘤干细胞的首选.
作者：邓永键；蒋强；于莉娜；王红霞；胡纯婷；刘超；丁彦青 刊期： 2012年第06期
目的 探讨食管癌切除食管胃颈部机械吻合及手工吻合两种手术方式的并发症及防治.方法 2004年9月～2008年6月,将颈段及胸中、上段食管癌并具有手术适应症的患者随机分为两组即手工吻合组(手工组)和圆形吻合器机械吻合组(机械组),比较两组吻合口瘘、狭窄等的并发症.结果 手工组125例,机械组102例,吻合瘘发生率分别为14.4％(18/125)、2.9％(3/102),狭窄需扩张分别为8.8.％(11/125),3.9％(4/102).颈部吻合时间分别为(52±12)min和(25±5)rn in,差别显著(P＜0.01).结论 食管癌切除食管胃颈部采用圆形吻合器端侧吻合吻合口瘘发生率低,手术时间缩短,操作简便,易于掌握及标准化,有利于降低吻合口的并发症.
作者：蔡瑞君；李梅；熊刚；蔡开灿；王武军 刊期： 2012年第06期
目的 建立荧光定量PCR和环介导等温扩增技术(LAMP)检测隐球菌荚膜相关蛋白基因(CAP10)的方法,并比较和评价两种方法的优缺点.方法 针对新型隐球菌CAP10基因序列,使用在线软件设计引物,并构建质粒标准品,优化反应条件后用荧光定量PCR和LAMP两种方法检测定量的质粒,分析其敏感性和特异性,并检测临床标本.结果 荧光定量PCR检测CAP10质粒的敏感性为6.8×101拷贝,LAMP方法的敏感性为6.8×103拷贝,PCR检测阳性率比LAMP方法高.两种方法特异性好,对脑膜炎奈瑟菌、白色念珠菌、热带念珠菌、黄曲霉、黑曲霉和大肠埃希菌的检测结果均为阴性.结论 成功建立了检测CAP10基因的荧光定量PCR方法敏感性和特异性高,但是需要特殊仪器；LAMP方法敏感性较低,但其操作简单,无需特殊仪器和设备,加入核酸染料即能观察结果.两者均适用于新型隐球菌感染的检测.
作者：韩慧；胡子有；吴炳义 刊期： 2012年第06期
目的 评估geneX(R)骨水泥用于强化骨质疏松椎体的生物力学性能.方法 对30个新鲜小牛胸腰椎椎体标本(T9-L4)通过注射泵灌注稀盐酸脱钙建立骨质疏松椎体模型.随机分为3组,每组10例.制成压缩性骨折模型后,3组分别实施geneX(R)骨水泥、硫酸钙骨水泥(cSc)、聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥(PMMA)椎体成形术,记录骨水泥完本填充时的骨水泥注射量,测试标本的强度和刚度,记录各组的强度和刚度并进行比较.结果 30个小牛胸腰椎体初始骨密度为(1.425±0.072) g/cm2,脱钙后骨密度为(1.074±0.065)g/c m2,脱钙后骨密度明显低于脱钙前骨密度(P＜0 05).geneX(R)组、CSC组、PMMA组注射量分别(4.3±0.8)、(4 2±0.7)和(3.8±0.4) ml,3组之间无显著性差异(P＞0.05).geneX(R)组、CSC组、PMMA组强度分别(1198±529)、(1212±430)和(1672±704)N,geneX(R)组、CSC组显著低于PMMA组强度(P＜0.05),3组均明显高于椎体初始强度(P＜0.05).geneX(R)组、CSC组、PMMA组刚度分别为(233±130)、(242±191)与(323±145)N/mm,3组间无显著性差异(P＞0.05),3组刚度均低于椎体初始刚度,但统计学无明显差异(P＞0.05).结论geneX(R)水泥椎体成形术用于骨质疏松压缩性骨折能满足对椎体填充材料的生物力学要求.
作者：张树芳；江建明；朱青安；黄志平 刊期： 2012年第06期
目的 通过组织病理学观察联合应用乌司他丁和胸腺肽α1治疗严重脓毒症的效果.方法 采用经典大鼠CLP脓毒症模型,全部动物随机分为对照组、联合治疗组(乌司他丁+胸腺肽α1)、乌司他丁治疗组和胸腺肽α1治疗组.制模成功后分别于6、24、48和72 h经尾静脉或皮下注射给药,记录每天死亡数.制模后24、48、72和96h处死动物,留取心、肝、脾、肺、肾、小肠标本,以光镜进行病理学检查,脾脏标本行凋亡检测.结果 联合治疗组死亡率显著降低(P=0.0325)；组织病理学显示,对照组各脏器损害严重,单药组其次,联合用药组轻；此外,对照组脾脏细胞大量凋亡,联合用药组凋亡程度显著下降[ (47.4±10.9)％vs(39.3±11.4)％,P=0.0000].结论 乌司他丁和胸腺肽α1联合用药可以显著减轻脓毒症大鼠脏器损害,抑制脾脏细胞凋亡,提高脓毒症大鼠存活率.
作者：郭剑颖；邓群；郭旭升；刘双庆；张玉红；何忠杰；林洪远 刊期： 2012年第06期
目的 探讨B7-H1在同种异体小鼠角膜移植术后眼球组织表达情况,及其对角膜免疫赦免的影响.方法 建立同种异体小鼠角膜移植实验模型.按Sonoda方法对角膜混浊及新生血管指数进行评分,8周后将实验小鼠分为存活组和排斥组,并取8只正常小鼠为对照组.取3组小鼠眼球组织行免疫组化检测B7-H1表达情况.结果 正常小鼠角膜及虹膜睫状体表达B7-H1,移植术后存活小鼠角膜及虹膜睫状体高度表达B7-H1,而移植术后排斥的小鼠角膜及虹膜睫状体未见明显表达B7-H1.结论 B7-H1可能参与了同种异体小鼠角膜移植术后的免疫反应,可能在免疫赦免现象中发挥重要作用.
作者：黄晓环；吴京；于健；熊柯；马明 刊期： 2012年第06期
目的 构建能够同时表达人免疫调节因子IL-12,GM-CSF和B7.1的新型抗肿瘤免疫基因治疗剂pVAX-1L- 12-GB,验证以上免疫调节因子基因在293T细胞的表达以及IL-12基因在活体内的表达.方法 将人1L-12基因克隆到早期构建好的pVAX-IRES-GM-CSF-B7.1真核表达质粒的上游,将其构建成为pVAX-IL-12-GB重组质粒:利用脂质体法瞬时转染293T细胞,RT-PCR检测IL-12和GM-CSF-B7,1基因的转录,ELISA法检测细胞上清中上游IL-12基因和下游GM-CSF基因的蛋白表达,流式细胞术及免疫荧光检测下游B7.1基因的表达；利用电穿孔方法递送质粒进入小鼠股四头肌,免疫组化法检测IL-12基因在小鼠活体内的表达情况.结果 双酶切以及PCR鉴定获得的片段均与预期的片段大小一致,测序分析证实IL-12基因序列完全正确；瞬时转染293T细胞后,分别验证了人IL-12,GM-CSF和B7.1基因的mRNA转录和蛋白表达；电穿孔递送质粒后,活体肌肉组织内同样可以检测到IL-12基因的表达.结论 成功构建了可以同时表达人IL-12,GM-CSF和B7.1的新型抗肿瘤免疫基因治疗剂,为下一步开展肿瘤免疫基因治疗研究奠定了坚实的基础.
作者：董金凯；高江平；阎瑾琦；张亮；肖毅；王伟；王晓雄；于继云 刊期： 2012年第06期
目的 探讨信号传导和转录激活因子3(STAT3)及其蛋白抑制剂(PIAS3)在MRL/lpr狼疮小鼠肾组织中的表达.方法 以18周龄雌性MRL/Ipr小鼠作为狼疮肾炎组,相同周龄的BALB/C小鼠作为正常对照组.分别取两组小鼠肾组织,应用荧光定量RT-PCR法检测STAT3和PIAS3 mRNA的表达,采用Western blot和免疫组织化学方法检测磷酸化STAT3(p-STAT3)和STAT3的蛋白表达,司时检测小鼠实验室指标以及肾脏组织病理的表现.结果 MRL/Ipr小鼠尿蛋白、血尿素氮、血肌酐均高于BALB/C小鼠(P＜0.05).MRL/Ipr小鼠肾脏组织病理主要表现为肾小球系膜细胞增生,肾小管间质炎症细胞浸润,而BALB/C小鼠肾小球、肾小管无异常.MRL/lpr小鼠肾组织STAT3 mRNA和p-STAT3蛋白的表达均较BALB/C小鼠升高(P＜0.05),其PIAS3mRNA表达则较BALB/C小鼠明显降低(P＜0.01),而两组小鼠STAT3总蛋白的表达无明显差别.结论 MRL/lpr小鼠肾组织STAT3 mRNA和p-STAT3蛋白的表达均高于对照组,而其PIAS3 mRNA表达低于对照组.
作者：杨荟；徐安平；吕军；刘亚 刊期： 2012年第06期
目的 评估若干分子标志物及临床特征对恶性黑色素瘤(MM)预后的影响.方法 回顾性分析127例MM患者的临床资料；对127例MM标本以免疫组化法检测HMB45、S-100以及Vimentin蛋白的表达；COX比例风险回归模型对各临床病理指标进行单因素和多因素生存分析.结果 HMB45、S-100以及Vimentin在MM中的阳性表达率分别为89.8％、92.1％和78.0％；单因素分析提示影响MM预后的因素包括年龄、原发病灶是否溃疡、Clark分级、术后病灶切缘情况、AJCC分期、治疗方法及疗效、S-100蛋白(P＜0.05)；多因素分析发现年龄、术后切缘情况、Clark分级、S-100蛋白以及疗效是影响MM预后的独立因素.结论 年龄、术后切缘情况、Clark分级、S-100蛋白与疗效是影响MM预后的独立危险因素,HMB45和Vimentin蛋白表达水平与MM预后不相关.
作者：刘静；李荣；周小平；张军一；罗荣城 刊期： 2012年第06期
目的 为了准确地识别肝脏移植物的植入状态,探讨多聚酶链反应-短串联重复序列(PCR-STR)技术在肝移植后移植物抗宿主病中的预测和诊断意义.方法 建立荧光标记PCR-STR等位基因分析技术,采用单克隆磁珠提取DNA,四色荧光标记,于移植前和移植后1周内,采集供、受血液DNA作PCR-STR分析.结果 23例患者中,5例患者供受者HLA完全嵌合表达,其中2例发生移植物抗宿主病(GVHD),均治疗无效死亡,另外3例未发生GVHD,顺利恢复出院,GVHD发生率40％.18例患者术后未发生嵌合表达,其中1例发生GVHD,家属放弃治疗出院,GVHD发生率5.6％,两组有显著差别.结论 基于分子水平的多位点PCR-STR可以提供肝脏移植后供体植入信息,在肝移植后移植物抗宿主病的诊断中具有一定的预测意义.
作者：陈小平；骆利敏；罗敏；肖露露 刊期： 2012年第06期
目的 探讨退变椎间盘分型中转化生长因子(TGF-β1)表达的意义.方法 收集正常与退变椎间盘组织,并根据病理改变把退变椎间盘组织分为Ⅳ级,采用HE染色,Western bloting和RT-PCR方法分析TGF-β1的表达情况.结果 HE染色、Westernbloting和RT-PCR均显示:在正常组织中TGF-β1有表达；在病变组织中并随病理分型增加TGF-β1随之增加,退变与正常组比较以及IV型与I型比较具有及显著差异(P＜0.01).结论 TGF-β1是引起椎间盘退变的重要原因,并且与病理的形态学分型密切相关.
作者：杨旸；何晓峰；李彦豪；冯建宇；庞桦进；王江云；刘庆 刊期： 2012年第06期
目的 筛选慢性髓系白血病急性变相关关键基因,探寻疾病进展机制及潜在的生物标志物.方法 应用基因芯片技术筛选与慢性髓系白血病急变期相关基因,采用生物信息学方法对这些差异表达基因进行基因本体分类,亚细胞定位以及组织选择性分析,结合转录因子预测和网络谱图构建,找出差异表达基因中的关键分子并进行初步验证.结果 得到一组定位于白细胞膜的基因集,在整个调控网络中,CD40、CCR3、LGALS3、RGS3、CEACAM3及转录因子RAC1、CTNNB1、TP53、NF-kB处于网络节点位置,可能是疾病进展的关键调控基因,采用RT-PCR方法初步证实CEACAM3、RGS3、CTNNB1和RAC1在急变期患者表达显著增高.结论 CEACAM3、RGS3、CTNNB1和RAC1可能是慢性髓系白血病由慢性期向急变期转变的关键基因和生物标志物.
作者：骆许静；张进芳；刘晓力；杜庆锋；许娜；许露露；黄彬涛；肖小珍 刊期： 2012年第06期
目的 利用细胞电融合技术制备外周血来源树突状细胞(DC)和三阴乳腺癌细胞(MDA-MB-231)全抗原肿瘤疫苗,观察其特异性抗肿瘤免疫效应.方法 从健康人外周血中分离培养DC,利用电融合技术,将DC和三阴乳腺癌细胞融合；荧光显微镜观察融合疫苗的形态；流式细胞仪进行融合疫苗的表型鉴定；ELlSA试剂盒检测IL-12、IFN-y的分泌情况；CCK-8试剂盒测定融合疫苗刺激同源异体T淋巴细胞增殖和细胞毒性效应.结果 成功分离培养DC,其表面高表达DC的分子标记CD83、CD11c、CD86、HLA-DR;融合疫苗形态不规则,其表面共同表达DC和三阴乳腺癌的标记分子；T淋巴细胞增殖实验证明融合疫苗有很强的免疫刺激活性；细胞毒性实验证明融合疫苗具有比对照组更强的杀伤肿瘤细胞作用.结论 电融合技术成功诱导DC和三阴乳腺癌细胞融合,全抗原融合疫苗体外实验可显著增强抗肿瘤免疫效应.
作者：张鹏；刘瑞磊；姜华；刘宇；张翘楚；黄勇 刊期： 2012年第06期
目的 研究MnSOD单核苷酸多态性位点rs4880与广东鼻咽癌发生风险的关系.方法 选择105例经病理证实的鼻咽癌患者为病例组,136例同期经南方医院查体中心证实的健康体检者为对照组,应用PCR法检测MnSOD基因Ala-9Val的多态性分布,比较不同基因型与鼻咽癌的相关关系.结果 中国汉族广东人Ala携带者占19.1％.病例组和对照组3种基因型Val/Val、Val/Ala、Ala/Ala的频率分别为83.8％、14.3％、1.9％和80.9％、16.9％、2.2％,各基因型在两组间分布无显著性差异.基因型Val/Ala与鼻咽癌的淋巴结转移显著相关(OR=0.308,95％CI=0.095-0.996),进一步年龄分层,这种杂合子与肿瘤淋巴结转移的关系在年长人群(＞30岁)中同样存在(OR=0.227,95％C1=0.064-0.804),但在年青人群(≤30岁)中不存在,然而等位基因Ala的分布与淋巴结转移无显著关系(OR=1.987,95％CI=0.707-5.583).各基因型在不同T、M、临床分期和病理分型的鼻咽癌患者的等位基因表达频率均无明显差异.结论 MnSOD基因Ma-9Val多态性可能与地域、种族相关；基因型Val/Ala可能与鼻咽癌淋巴结转移有关,各基因型与广东地区鼻咽癌易感性无明显相关.
作者：叶尔佳；张应蒙；王宏梅；石玉生；陈龙华 刊期： 2012年第06期
目的 观察重组腺病毒三突变型低氧诱导因子-1cα(HIF-1α)对人微血管内皮细胞(hMVECs)增殖及VEGF蛋白表达的影响.方法 三突变型HIF-1α腺病毒载体(Ad-HIF-1α564/402/803)、野生型HIF-1α腺病毒载体(Ad-HIF-1αnature)、Ad-LacZ及空载腺病毒载体(Ad-Null)分别在HEK293A细胞大量扩增,氯化铯梯度离心纯化,终点稀释法测定病毒滴度；双荧光素酶报告系统检测三突变型HIF-1α与野生型HIF-1α的转录活性；各重组腺病毒载体以佳转染复数转染体外培养的hMVECs,Westem blotting测定HIF-1α和VEGF蛋白表达；MTS检测Ad-HIF-1α564/402/803对细胞增殖的影响.结果 三突变型HIF-1α转录活性显著高于野生型HIF-1α(P＜0.001):Ad-HIF-1α564/402/803组HIF-1α和VEGF蛋白表达量高于Ad-HIF-1αnature及其他组；VEGF蛋白表达水平与HIF-1α呈剂量依赖关系.Ad-HIF-1α564/402/803组第3、5天吸光度值均显著高于Ad-HIF-1αnature及其他组(P＜0.01).结论 三突变型HIF-1α在体外常氧条件下稳定高效表达,可诱导hMVECs VEGF蛋白表达上调,促进hMVECs增殖.
作者：裴静娴；王月刚；刘城；魏璇；李明琰；陈建威；吴平生 刊期： 2012年第06期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
