学术投稿

大鼠Atohl基因真核表达载体的构建及转染293T细胞的实验研究

郑国玺;祝康;朱珠;侯瑾;韦俊荣;许珉

关键词:感音神经性耳聋, Atohl, 基因克隆, 真核表达载体
摘要:目的 利用基因工程方法克隆SD大鼠Atohl基因CDS,构建大鼠核转录因子Atohl的真核表达载体并在真核细胞中表达.方法 从SD大鼠结肠粘膜提取总RNA,采用逆转录PCR法扩增Atohl基因CDS区序列并TA克隆至PMD-19T载体中.测序鉴定后将Atohl基因连接于含有EGFP和内部核糖体转入位点(internal ribosome entrysite,IRES)的真核细胞表达载体pIRES2-EGFP中,对重组质粒进行酶切鉴定和测序鉴定后,以脂质体介导法转染至293T细胞,荧光显微镜、PT-PCR和Western blot检测其在293T细胞中的表达.结果 扩增得到大鼠Atohl CDS区长1056 bp,编码351个氨基酸,与GeneBank公布的参考序列对比,有两处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致,两处碱基应为单核苷酸多态性(SNP),突变为无义突变,不影响蛋白表达.双酶切和测序结果证明Atohl已正确地克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,转染293T细胞48 h后,荧光显微镜下观察到荧光蛋白的表达,PT-PCR和Western blot证实Atohl 的mRNA和蛋白能在293T细胞中正确表达.结论 成功构建了真核表达载体pAtohl-IRES2-EGFP,并在293T细胞中成功表达,为进一步研究Atohl的功能、作用机制及感音神经性耳聋的基因治疗奠定了基础.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 性别对顺式阿曲库铵量效关系的影响

    目的 研究性别对顺式阿曲库铵量效关系的影响.方法 选取择期腹部手术患者80例,ASA I~Ⅱ级,分为男、女性别组,每组各40例,术前无酸碱平衡及水电解质紊乱,心肺、肝肾功能正常,酸碱4个剂量组,每组10例.记录拇内收肌四个成串刺激第1次反应大抑制的百分率并进行概率单位转换,将顺式阿曲库铵的首次剂量进行对数转换,用线性回归方法分别建立男、女患者顺式阿曲库铵剂量-反应曲线,并记录起效时间.结果 男性顺式阿曲库铵ED95值为67.4±4.4μg/kg,女性ED95值为48.7±1.0.μg/kg,两者差异有统计学意义(P<0.05),各剂量组起效时间在性别组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 性别对顺式阿曲库铵量效关系有显著影响,女性对顺式阿曲库铵较男性敏感.

    作者:石鸿金;梁启波 刊期: 2011年第07期

  • 结肠液囊管一期修复结肠吻合口漏的动物实验研究

    目的 研制结肠液囊管作为一种安全可靠的新技术对结直肠吻合口漏进行有效的一期修复.方法 将西藏小型猪随机分为2组,处理组与对照组,每组15头,处理组采用结肠液囊管对结肠吻合口漏进行一期修补,对照组以传统一期吻合口漏缝合近段结肠造瘘,二期结肠回纳手术.在修补术后第7、14、21天检测吻合口漏愈合情况:吻合口漏部位的愈合强度--爆破压、愈合部位组织中微血管密度及羟脯氨酸含量.结果 结肠液囊管能够修复结肠吻合口漏,两组均无动物死亡,无肠管狭窄及坏死.术后第7、14天处理组爆破压、羟脯氨酸含量、微血管密度均高于对照组,但术后第21天两组无显著性差别.结论 应用结肠液囊管技术一期修复结肠吻合口漏是安全、可靠且有效.特别是在结直肠吻合口漏48~72 h以上,腹腔严重感染的环境下能有效修复结直肠吻合口漏.

    作者:王纯忠;黄宗海;沈三弟;史福军;陈飞;李建国;张全安 刊期: 2011年第07期

  • 融合蛋白CAC免疫对大鼠海马内注射β-淀粉样肽的作用

    目的 观察融合蛋白CAC(HBcAg与β-淀粉样肽基因重组的原核表达产物)免疫对大鼠海马内注射聚集态β-淀粉样肽(Aβ)的作用.方法 用融合蛋白CAC免疫SD大鼠,通过ELISA方法检测其血清中的Aβ抗体的滴度.当滴度大于1:3000时,给大鼠海马CAl区注射聚集态Aβ1-40.2周后进行行为学测试,病理学检测.结果 融合蛋白免疫5次后,大鼠血清中Aβ体的滴度达到了1:3000.未经CAC免疫的大鼠,在海马内注射AB后,学习记忆能力显著减低,注射区可见细胞损伤和刚果红染色的淀粉样沉积,伴有大量的胶质细胞浸润.CAC免疫大鼠的学习记忆能力有明显改善,淀粉样沉积面积减少或几乎消失.结论 融合蛋白CAC免疫可抑制海马内注射Aβ的毒性作用,促进其降解和排出.

    作者:冯改丰;胡海涛;靳辉;王唯析;钱亦华 刊期: 2011年第07期

  • 调强或三维适形放疗联合TP方案化疗治疗局部中晚期食管癌的临床研究

    目的 观察评价调强或三维适形放疗联合多两他赛与顺铂治疗局部中晚期食管癌的疗效及不良反应.方法 局部中晚期的60例食管癌患者随机分为两组:A:30例调强放疗联合TP(多西他赛及顺铂)方案化疗组,B:30例三维适形放疗联合TP(多西他赛及顺铂)方案化疗组.放射剂量为64 Gy/30次/6周.结果 近期疗效,总有效率(CR+PR)调强化疗组的90%好于适形放疗组的80%,但两组比较差异没有统计学意义(P>0.05).1、2、3年生存率分别为调强化疗组86.7%、70.0%、66.7%及适形化疗组的70.0%、63.3%、63.3%,两组比较差异没有统计学意义(P>0.05).比较两组肺V20、V30,调强化疗组有优势(P<0.05),两组急性放射性食管炎比较差异不大,无统计学意义(P>0.05).结论 调强放疗联合TP(多西他赛及顺铂)方案化疗治疗局部中晚期食管癌在目前是一种较有效的方法.

    作者:林晓丹;石兴源;周同冲;张伟军 刊期: 2011年第07期

  • 一种基于图割的交互式脑膜瘤核磁共振图像分割方法

    为实现脑膜瘤核磁共振(MR)图像的精确分割,本文提出了一种新的基于图割的交互式图像分割算法.该方法首先提取高维图像特征,然后利用加权KNN(K-Nearest Neighbor)分类器估计待分类像素属于肿瘤与背景区域的概率,并构造新的能量函数;后采用图割优化方法对能量函数优化求解.对脑膜瘤MR图像的分割实验表明,本方法较基于灰度信息的图割方法在精度上有明显提高.

    作者:李拴强;冯前进;陈武凡;林亚忠 刊期: 2011年第07期

  • 邻苯二甲酸酐修饰卵清蛋白体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的活性研究

    目的 研究邻苯二甲酸酐修饰卵清蛋白(3-Hydroxyphthalic anhydride-modified ovalbumin,HP-OVA)体外对抗单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)的活性.方法 采用化学修饰的方法将3-羟基.邻苯二甲酸酐(HP)修饰卵清蛋白(OVA),合成酸酐修饰蛋白HP-OVA;选用HSV-2 333病毒株及非洲绿猴肾细胞(vero 细胞)靶细胞,采用MTT比色法检测HP-OVA的体外抗HSV-2病毒活性及其对Vero细胞的体外细胞毒性;镜检观察HP-OVA对17株阴道收集的乳酸杆菌的抑菌作用.结果 酸酐修饰卵清蛋白HP-OVA对HSV-2病毒具有明显抑制作用,其IC50为23.56±8.33 μg/ml,且其对病毒作用靶细胞毒性较低,CC50>1 mg/ml,对17株阴道乳酸杆菌均无明显抑制作用,MIC>1 mg/ml.结论 酸酐修饰蛋白HP-OVA体外有较好的抗HSV-2病毒的活性,有望被开发为预防性传播性疾病的候选杀微生物剂.

    作者:何丽丽;段江曼;裘佳寅;于飞;刘叔文;李琳 刊期: 2011年第07期

  • 血小板衍生生长因子-BB在增生肥厚黄韧带中的表达及意义

    目的 探讨血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)在增生肥厚黄韧带退变过程中的表达和作用.方法 增生肥厚退变黄韧带标本来自11例退变性腰椎管狭窄症患者(LSS),平均年龄57.8岁.10例腰椎间盘突出症患者(LDH)的黄韧带标本设为正常对照组,平均年龄53.5岁.术前采用MRI的Tl轴位加权像,经关节突平面精确测量两组黄韧带厚度;免疫组织化学染色法观察PDGF-β和PDGF-BB在黄韧带组织中的定位表达;实时定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测两组黄韧带中PDGF-BB mRNA的表达;免疫印迹法检(Western Blot)测两组黄韧带中PDGF-BB的蛋白表达.结果 退变增生肥厚的黄韧带厚度(5.30±1.12)mm明显厚于对照组(2.80±1.53)mm(P<0.001).两组患者年龄无显著性差异(P>0.05).PDGF-β和PDGF-BB主要在增生肥厚黄韧带内呈阳性表达.退变增生肥厚黄韧带的PDGF-BB mRNA表达显著高于对照组(P=0.013).退变增乍肥厚黄韧带的PDGF-BB蛋门表达显著高于对照组(P=0.023).结论 PDGF-BB在增生肥厚黄韧带内的过度表达,表明它在腰椎黄韧带增生退变导致纤维化的过程中起重要作用.

    作者:张宇;许学猛;吴少鹏;夏雄智;李参天;邓崇礼;陈建庭 刊期: 2011年第07期

  • 辛伐他汀对肢体缺血再灌注肺损伤大鼠肺组织中NF-κB及ICAM-1表达的影响

    目的 探讨辛伐他汀对肢体缺血再灌注(I/R)肺损伤大鼠肺组织核因子-κB(NF-κB)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响及其机制.方法 成年雄性SD大鼠48只,体质量250~300g,随机分为6组(n=8):假手术组(C组)、肢体缺血再灌注组(IR组)分别给予等容量的(1 ml)的蒸馏水、辛伐他汀1、5、10 mg/(kg·d)组(S1组、S5组、S10组)和辛伐他汀对照组(S组)分别于每日清晨将1、5、10、10 mg/(kg·d淬伐他汀溶于1 ml蒸馏水灌胃1次,连续3 d,IR组、S1组、S5组和S10组于后1次给药后2 h行肢体缺血再灌注.再灌注3 h末行血气分析,观察肺组织病理学变化,测定肺组织湿/干质量比(W/D)、多形核中性粒细胞(PMN)数目、MPO活性、NF-κB p65mRNA及ICAM-1蛋白的表达.结果 与C组比较,IR组肺组织病理损伤较重,PaO2降低,W/D、PMN计数和MPO活性升高(P<0.01);与IR组相比,S1组、S5组和S10组减轻了肺组织病理损伤,PaO2升高,W/D、PMN计数和MPO活性降低,NF-κB p65mRNA及ICAM-1蛋白表达下调(P<0.01).结论 辛伐他汀可减轻肢体I/R大鼠的肺损伤,其机制可能与抑制NF-κB激活,从而减少ICAM-1介导的中性粒细胞浸润有关.

    作者:孙晓峰;王俊科;杨军;赵宏 刊期: 2011年第07期

  • 蛋白S基因突变导致深静脉血栓形成的研究

    目的 了解1例青少年起病的复发性深静脉血栓形成(DVT)患者蛋白S(PS)缺乏的分子发病机制.方法 收集患者及其家系成员的血标本,进行凝血和抗凝指标的检测.凝血功能的检测采用一步凝固法,蛋白C、蛋白S的活性检测采用发色底物法,蛋白S抗原检测采用ELISA方法.对患者及其家系成员的PS基因各外显子片段及外显子内含子侧翼序列进行PCR扩增和产物送测序分析.结果 患者及其父亲为遗传性PS缺乏患者,其PS基因第10号外显子发生了C82792T杂合点突变,导致PS蛋白氨基酸肽链第314个精氨酸残基(R)被半胱氨酸残基(C)所替换,发生R314C杂合突变.结论 患者反复发作DVT系由PS基因错义杂合突变导致的遗传性PS缺乏所致,该基因突变为国际上首次报道.

    作者:叶絮;刘晓力;冯莹;周旭红;邢志芳 刊期: 2011年第07期

  • 肾脏原发恶性副神经节细胞瘤1例报告及文献复习

    副神经节瘤是一类起源于胚胎神经嵴细胞的非常少见的软组织神经内分泌肿瘤,原发于肾脏的恶性副神经节瘤极为罕见.本文报道1例原发于肾脏的恶性副神经节瘤.患者为女性55岁,患者因顽固性咳嗽、CT检查发现左肺内实性肿物而入院,入院后腹部超声显示左肾占位.行左肾和肿物全切除术,术后病理组织学证实肿瘤为来源于肾脏的恶性副神经节瘤.术后对病人随访了12个月,目前病人一般情况良好,超声检查未见复发征象.基于本病例资料,结合文献报道,探讨影像学检查对本病的诊断和临床意义.

    作者:吴武生;李绍林;黄凯滨;魏清柱 刊期: 2011年第07期

  • 葡萄糖耐量试验期间对动态血糖监测系统的精确性分析

    目的 分析葡萄糖耐量试验期间(OGTT)动态血糖值和静脉血糖值的一致性,评价在快速变化的血糖应激状态动态血糖监测系统的精确性.方法 对49例空腹血糖3.9~11.0 mmol/L的门诊志愿者,应用动态血糖监测系统(CGMS)进行连续3 d的血糖监测,并在第3天行OGTT,检测0、30、60、90、120min静脉血糖值,采用Pearson相关分析法、Clarke误差表格分析(EGA)分别评价整个OGTT期间及各血糖状态下CGMS的精确性.结果 CGMS测定值和静脉血糖值在整个OGTT期间、血糖稳定阶段、血糖急升阶段和血糖急降阶段时的r分别为0.928、0.901、0.924和0.902(P值均<0.001),EGA显示均有95%以上的结果落在A区和B区.结论 OGTT期间的CGMS测定值和静脉血糖值相关性良好,EGA结果在可接受范围内,CGMS可较精确性地反映OGTT期间快速血糖变化.

    作者:陈志;沈洁;徐玲玲;符霞军;李际敏;马媛媛 刊期: 2011年第07期

  • 枸杞多糖对血管紧张素Ⅱ诱导的血管内皮细胞衰老及P53和P16表达的影响

    目的 观察枸杞多糖对血管紧张素II(AngII)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)衰老及对细胞衰老相关基因P53和P16表达的影响,以探讨其抗衰老作用及机制.方法 体外培养HuVEcs加入终浓度10-6mol/L AngII诱导细胞衰老,建立内皮细胞衰老模型.实验分为空白对照组、AngII模型组和枸杞多糖组;β-半乳糖苷酶染色法鉴定内皮细胞衰老状态;流式细胞技术分析细胞周期变化;CCK-8法检测细胞存活率情况;Western blotting法检测P53、P16蛋白的表达.结果 AngII模型组与空白对照组比较,β-gal阳性染色率明显增多,细胞周期多停滞于G0/G1期,S期细胞逐渐减少,细胞存活率明显下降,P53、P16蛋白表达水平明显上调.给予枸杞多糖处理后改善了细胞衰老状态,β-gal阳性染色率减少,G0/G1期细胞减少,S期细胞逐渐增多,细胞存活率增多,P53、P16蛋白的表达较AngII组下调.结论 枸杞多糖能够抑制AngII 诱导HUVECs衰老,其作用机制可能是通过下调P53及P16的表达而实现的.

    作者:刘凌;王雪妮;刘泽;王鲁妮;吴军;王伟;封菊香 刊期: 2011年第07期

  • 结直肠癌转移相关基因PCR芯片的建立及初步应用

    目的 建立同时检测表达多个结直肠癌转移相关基因的PCR芯片,用于诊断结直肠癌转移和预测转移.方法 通过严格设计基因引物,探索各基因同时达到特异性扩增的PCR反廊条件;应用基因芯片筛选获得的29个结直肠癌转移相关基因,结合3个看家基因,建立同时检测32个基因的PCR芯片;应用该芯片检测不同转移潜能的结直肠癌细胞和临床直肠癌组织、癌旁正常粘膜.结果 成功构建同时检测32个基因的PCR芯片,各基因均获得特异性扩增;29个转移相关基因PCR芯片检测结果与基因芯片检测结果的吻合率为86%;PCR芯片检测伴有转移的结直肠原发癌与不伴有转移的结直肠癌组织,结果显示14个基因表达一致,15个基因表达有差异.结论 结肠癌转移PCR芯片结果可靠,可用于预测结直肠癌转移的研究.

    作者:肖小琴;唐娜;刘超;王红霞;蒋强;邓永键;丁彦青 刊期: 2011年第07期

  • 人CD96基因胞外区的原核表达及抗血清制备

    目的 原核表达并纯化人CD96胞外区蛋白,免疫家兔制备抗体.方法 构建pET32-CD96重组质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达,Ni2+-NTA树脂纯化蛋白并免疫家兔,以间接ELISA检测抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性.结果 质粒pET32-CD96经测序鉴定,通过SDS电泳显示能在BL21(DE3)中高效表达,相对分子质量约37 000;Western blot实验结果显示制备的多克隆抗体可与HL-60细胞提取蛋白及原核表达的人CD96蛋白胞外区特异性结合.结论 成功构建并表达人CD96胞外区蛋白,免疫家兔获得高滴度抗血清,为后续研究奠定了基础.

    作者:曾建明;刘飞;谭坪海;王丽娜;李沫;陈中华;李松;龙一飞;李有强;陈茶 刊期: 2011年第07期

  • 复方甘草酸苷对系统性红斑狼疮患者CD4+CD25+T细胞的表达及损伤指数的影响

    目的 研究复方甘草酸苷对系统性红斑狼疮(SLE)的治疗作用机制及其对SLE器官损害的远期疗效.方法 将2008~2010年住院及门诊的SLE患者68例,随机分为复方甘草酸苷治疗组34例(A组)和单纯西药治疗组34例(B组);正常健康组21例(C组),用流式细胞仪检测SLE患者治疗前后和正常对照者的外周血CD4+CD25+T细胞阳性率,评定SLE损伤指数.结果 A、B两组治疗前CD4+CD25+T细胞阳性率与C组比较,有显著性差异(P<0.05),治疗后A、B两组阳性率均有明显升高,两组之间比较有显著性差异(P<0.05);治疗后A组与与C组比较,无显著性差异(P>0.05),B组与C组比较,有显著性差异(P<0.05);SLE损伤指数积分显示A组比较稳定,B组较治疗前有明显增加.结论 复方甘草酸苷对SLE患者的CD4+CD25+T有明显升高作用,并对SLE的器官损害有明显的保护与修复作用.

    作者:李毓阳;戴永江;邓斌;粱雄安;谢志杰;陈海富 刊期: 2011年第07期

  • 生长抑素类似物奥曲肽对人胃癌p53和Ras蛋白表达的影响

    目的 探讨生长抑素类似物奥曲肽对人胃癌生长的抑制作用.方法 50例胃癌患者随机分为对照组25例,术前不用药物;奥曲肽组25例,术前奥曲肽100μg皮下注射,1次/d,共7d.术中切除标本送组织学研究.免疫组化法检测胃癌组织p53和Ras蛋白表达情况.结果 与对照组比较,奥曲肽组胃癌组织坏死差异有统计学意义(P<0.05),纤维组织增生明显(P<0.05),p53和Ras蛋白表达有统计学意义(P<0.05).结论 奥曲肽通过抑制人体内胃癌p53和Ras蛋白的表达,从而发挥抑制胃癌细胞生长的作用.

    作者:田蕾;李舒 刊期: 2011年第07期

  • 同种异体脂肪源干细胞移植对耐力训练大鼠血清生化指标及运动能力的影响

    目的 从筋膜学角度观察同种异体移植脂肪源干细胞(ADSCs)对耐力训练大鼠体内某些血清生化指标活性及运动能力的影响.方法 40只Wistar雄性大鼠随机分成安静对照组(空白对照组)、游泳训练照组(模型组)、安静移植细胞组(实验对照组)和游泳移植细胞组(实验组).模型组和实验组进行力竭游泳训练.力竭游泳训练1周后,实验组与实验对照纽经尾静脉输入ADSCs.游泳训练结束后,记录各组大鼠游泳力竭的时间以及检测血清尿素(BUN)、乳酸脱氢酶(LDH)、血乳酸(BLa)和血红蛋白(Hb)含量.结果 模犁组与空白对照组比较,Hb水平显著降低,血清BUN、LDH、BLa水平均显著升高(P<0.01),力竭时间显著延长(P<0.01);与模型组比较,实验组Hb显著提高(P<0.01),而BUN、LDH、BLa水平均明显降低(P<0.01),力竭时间有较大提高(P<0.01).结论 移植ADSCs可有效延缓了大鼠运动性疲劳的产生,提高了大鼠的运动能力.

    作者:杨会营;陶晖;余美春;杨春;曲戎梅;曾文钦;段富华;余磊;戴景兴;原林 刊期: 2011年第07期

  • 腰麻剖宫产低血压不同防治措施下胎盘的体视学研究

    目的 探讨一种有效防治剖官产低血压且对母婴有利的方法.方法 选择单胎足月择期行腰麻下剖宫产的初产妇40例,随机分为两组,分别给予静脉预注麻黄素和术前预充万汶防治腰麻后低血压.记录术中心率(HR)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、1 min及5 min的Apgar评分.抽取脐动脉血进行血气分析.同时,取胎盘组织进行常规免疫组织化学染色,通过抗CD34标记血管内皮细胞显示血管的方法,进行胎盘绒毛间质内微血管体视学研究.结果 麻黄素组心率,低血压发生率和脐动脉血乳酸值明显高于万汶组,差异有统计学意义(P<0.05),麻黄素组脐动脉血PH值明显低于万汶组,差异有统计学意义(P<0.05).两组微血管长度密度差异无统计学意义(P>0.05),麻黄素组微血管体积密度明显小于万汶组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 剖官产腰麻前应用万汶预扩容能增加母体有效循环血容量,维持母体循环稳定.通过体视学分析,扩容有利于增加子宫胎盘血量,从而改善胎儿血供和氧供.

    作者:帅兵;彭雪梅;李瑞满;李雅兰;胡东华 刊期: 2011年第07期

  • 胶原类基因mRNA在口腔鳞癌组织中的表达

    目的 研究胶原类基因COL1A1、COL1A2、COL4A1、COL4A2、COL5A2 mRNA在口腔鳞状细胞癌(OSCC)及配对正常口腔黏膜组织中的表达及意义.方法 采用RT-PCR方法检测30例OSCC患者肿瘤组织及其配对的正常口腔黏膜中胶原基因COL1A1、COL1A2、COL4A1、COL4A2、COL5A2 mRNA的表达;所得数据采用SAS6.12软件包进行t检验.结果 RT-PCR检测结果表明,COL1A1 mRNA在OSCC中的表达较其对照粘膜表达上调2.78倍(P<0.001).COL1A2、COL4A1、COL4A2、COL5A2 mRNA在OSCC中的表达较其对照黏膜分别上调1.07、1.15、1.27、1.16倍(P>0.05).结论 在OSCC癌变过程中,COL1A1 mRNA过表达,可能是OSCC的-个靶基因;COL1A1在OSCC分类诊断中有应用价值.

    作者:吕晓智;陈万涛;张陈平 刊期: 2011年第07期

  • 尘螨主要变应原蛋白的IgE结合表位序列分析

    目的 对屋尘螨主要变应原(Der P 1)蛋白分子中与过敏病人血清特异性IgE相结合的表位序列的鉴定.进而获得基于串联表位的小分子低毒过敏原以作为新的免疫治疗剂.方法 采用全蛋白序列重叠扫描法对DerP 1蛋白进行全表位筛选,即合成了覆盖DerP 1全蛋白222个氨基酸的31段各含15个氨基酸的多肽,且相邻肽段间有8个氨基酸的重叠.并将这些肽段按点状同相多肽合成法依顺序合成于纤维膜上.再将该膜与由数份过敏血清组成的血清池孵育,经抗人IgE-HRP二抗结合及X光片显影后对阳性点进行灰度比对及分析.结果 经对X光片阳性点的比对及分析,我们确定出了DerP 1过敏原蛋白中的3个强阳性表位序列.它们是位于第85~99位的氨基酸序列(表位1,Epl),第106~120位的氨基酸序列(表位2,Ep2)及第190~204位的氨基酸序列(表位3,Ep3).结论 我们获得了Der P 1中3个15肽的线性IgE结合表位(B细胞表位)序列.证实了Der P 1分子中存在IgE结合的线性表位.为进一步构建T/B细胞串联表位的小分子低毒过敏原提供了物质基础.

    作者:钟志美;郑传东;王方 刊期: 2011年第07期

南方医科大学学报杂志

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