孔令泉；蒲莹晖；马仕坤；涂刚；任国胜
目的 应用抑制性消减杂交技术构建人肾癌差异表达基因文库并进行差异表达基因筛选.方法 以肾癌细胞株RLC-310和肾近曲小管细胞株HK-2互为实验组和对照组,提取mRNA,应用抑制性消减杂交技术进行正反两向消减杂交,获得人肾癌细胞差异表达基因文库,结合反向Northern斑点印迹杂交,筛选差异基因克隆,并进行测序分析.结果 正向和反向文库共包含1200多个阳性克隆,经斑点杂交筛选后,对213个差异克隆进行测序并经BLAST分析,得到144个差异表达基因,与肾癌相关的高表达基因67个,低表达基因77个,其中新EST 14个,未知功能基因21个;对测序基因进行聚类分析发现与细胞生长、黏附、凋亡等肿瘤细胞生物学行为相关.结论 该文库质量可靠,所筛选出的差异基因和新的基因为进一步筛选肾癌特异性相关基因,绘制肾癌差异基因表达谱,终阐明肾癌发生、发展、转移机制提供了实验材料和研究靶点.
作者：王莹；陈葳；李旭 刊期： 2008年第01期
目的 探讨热休克蛋白27(HSP27)表达与大肠癌淋巴结转移的关系.方法 应用免疫组化方法检测68例临床大肠癌组织标本中Hsp27的表达情况.应用RT-PCR、Western blotting和免疫组化方法检测不同转移潜能大肠癌细胞株中Hsp27 mRNA和蛋白的表达情况.结果 在大肠癌组织中,热休克蛋白27的表达率与年龄、性别、淋巴结转移、临床分期无相关性(χ2test,P＞0.05),但其过表达和大肠癌淋巴结转移显著负相关(Fisher's exact test,P=0.035).应用RT-PCR、Western blotting和免疫组化方法检测结果显示Hsp27基因和蛋白在高淋巴结转移潜能的SW620细胞中呈低表达,在低淋巴结转移潜能的SW480细胞中呈高表达.结论 Hsp27和大肠癌肿瘤细胞的转移行为可能为负相关,可能在阻止其转移中发挥重要作用.
作者：赵亮；李祖国；丁彦青 刊期： 2008年第01期
目的 观察六味地黄丸对自发性2型糖尿病大鼠模型血浆脂联素水平的影响.方法 自发性2型糖尿病大鼠OLETF鼠40只,随机分为六味地黄丸干预组和对照组,LETO鼠10只作为正常对照组.干预组从8周龄起以六味地黄丸2.4 mg·kg-1·d-1灌胃给药,其余两组以等量清水灌胃.定期OGTT试验,监测各组大鼠摄食及体质量增长情况,每周称量大鼠体质量和摄食量.于8、32和40周龄时分批宰杀大鼠.检测血浆脂联素、血浆胰岛素水平.结果 与对照组相比,干预组的血浆脂联素水平均明显增加.对照组血浆脂联素水平与LETO组相比显著降低.结论 OLETF鼠血浆脂联素水平与胰岛素敏感性呈正相关.六味地黄丸早期干预能明显增加OLETF鼠血浆脂联素水平,改善OLETF鼠胰岛素抵抗.
作者：钱毅；薛耀明；李佳；朱波；潘永华；张燕 刊期： 2008年第01期
目的 探讨静脉应用丙氨酰-谷氨酰胺(Aln-Gln)对重症胰腺炎患者血清白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平的影响及临床意义.方法 50例患者随机均分为GLN组(n=25)和对照组(n=25),两组患者入院确诊后给予等氮等热量的全肠外营养,GLN组静脉滴注Aln-Gln 1周,对照组静脉滴注等容量的生理盐水作为安慰剂.补充Gln前1 d和补充后第7天高效液相色谱法检测血浆Gln水平,ELISA法检测血清IL-8和TNF-α水平.结果 GLN组补充Gln后第7天血清Gln水平较对照组显著升高(P＜0.01),7 d后GLN组血清IL-8和TNF-α水平较对照组显著降低(P＜0.05).7d后GLN组病人血清白蛋白水平、体脂含量较对照组明显升高(P＜0.05),而留院时间缩短(P＜0.05).结论 重症胰腺炎患者补充Gln可明显改善临床恢复结果,其机制可能与降低血清IL-8和TNF-α水平有关.
作者：杨四清；徐建国；李立涛；徐俊 刊期： 2008年第01期
目的 探讨快、慢转法及不同滤膜和显色检测法在Western blotting中的应用及各实验环节分析.方法 采用MDA-MB-231细胞制备细胞蛋白,应用不同印迹膜[硝酸纤维素膜、聚偏乙烯二氟(PVDF)膜和阳离子尼龙膜]分别采用快转法和慢转法进行增强化学发光法(ECL)和DAB化学显色法检测,并对Western blotting的各实验环节进行了分析.结果 (1)在快、慢转法中硝纤膜的蛋白预染marker条带略强于尼龙膜,而尼龙膜又略强于PVDF膜;PVDF膜和尼龙膜的正反面易于混淆,而硝纤膜的正反面不易混淆.(2)在快、慢转法中,PVDF膜的DAB化学显色法图像略强于尼龙膜和硝纤膜,而尼龙膜和硝纤膜无明显差异;与慢转法相比,快转的硝纤膜和尼龙膜中的蛋白条带略呈波浪状.(3)在慢转法中三种膜化学发光法的图像无明显背景,但在快转法中尼龙膜的背景较明显,而硝纤膜和PVDF膜亦无明显背景.结论 应根据实验需要选用不同的印迹膜;慢转法通常优于快转法,增强化学发光法优于DAB化学显色法;增强化学发光法特异胜强、灵敏度高,是分析蛋白质表达较为理想的方法.
作者：孔令泉；蒲莹晖；马仕坤；涂刚；任国胜 刊期： 2008年第01期
目的 探讨采用体外化学合成的小干扰RNA(siRNA)结合阳离子脂质体是否能有效在体转染乳腺癌细胞,以期为RNAi的在体实验研究提供实验数据和理论依据.方法 (1)建立裸鼠肿瘤动物模型,计算成瘤率.(2)体外转染乳腺癌细胞,常规动物接种,测量肿瘤体积和动物重量,计算肿瘤抑制率.(3)采用免疫组化和Western blotting技术测定肿瘤组织的表皮生长因子受体蛋白水平,采用Real-time PCR检测表皮生长因子受体基因水平,采用ELISA检测动物血清及肿瘤抽提蛋白中EGF含量.结果 MDA-MB-231、ZR-75细胞成瘤率依次为30.00%、88.89%,MDA-MB-231细胞的成瘤能力明显弱于ZR-75细胞.ELISA检测结果证实dsRNA-表皮生长因子受体可将血清及肿瘤组织抽提蛋白中的EGF含量分别降低16.77%、12.59%.Real-time PCR结果表明dsRNA-表皮生长因子受体可将表皮生长因子受体基因表达下调21.05%.结论 (1)采用体外化学合成的siRNA结合阳离子脂质体可有效在体转染乳腺癌细胞.(2)在体实验中RNAi效应持续的时间明显长于体外实验.(3)针对表皮生长因子受体基因序列设计的siRNA可作为极具开发前途的抗肿瘤新药,其在体实验中触发RNAi可能的作用机制尚需进一步深入探讨.
作者：吴伟东；方驰华；杨正心；包佳巾 刊期： 2008年第01期
目的 研究trophinin在人卵母细胞、着床前胚胎细胞上的表达与意义.方法 采用间接免疫荧光技术、应用激光扫描共聚焦显微镜对9个卵母细胞、16个分裂胚胎及12个囊胚进行了荧光检测.结果 trophinin蛋白在人卵母细胞、分裂胚胎以及囊胚上均有表达,且表达逐渐显著增强(P＜0.05).结论 人囊胚可能通过trophinin与表达有相同粘附分子的着床窗期子宫内膜发生同种粘附,从而在人胚胎着床过程中起重要作用.
作者：王华云；邢福祺；陈士岭；罗琛 刊期： 2008年第01期
目的 通过对胸部DR影像上孤立性肺结节检出准确率的比较来评价PACS影像诊断工作站所应用的不同分辨率的医用显示器的诊断效能.方法 选取经CT证实的具有非钙化孤立性肺结节(DR胸片上直径＜30 mm=100例,多发肺结节(直径＜30 mm,两肺数目不超过3个并散在分布24例和疑似病例15例.2位高年资医生(工作经验≥10年)和3位低年资医生(工作经验≤4年)在PACS系统的2种显示器(Barco MGD521 MKII(2560×2048,75Hz)21英寸医用单色RCT和EIZO RadiForce G20(1200×1600,60Hz)21英寸医用单色LCD)上分别使用或不使用放大后处理功能集中进行4次独立阅片,分别对胸片上是否有肺结节及结节个数进行判断,并记录结节的具体位置,评价的标准采用5分法:肯定有、可能有、不确定、可能没有、肯定没有;每次阅片时间间隔为1个月,每位医师每次均可根据需要使用窗宽、窗位调节功能,阅片时间不限.数据结果采用SPSS 13.0软件受试者工作特征(ROC)曲线法进行统计分析,计算和比较采用每种显示系统的诊断精确度(用曲线下面积-Az值来表示).结果 ①采用放大后处理功能后,各位医师的诊断准确率都能得到一定程度的改善,尤其在低年资医师更明显,在两种显示器上的Az值增加幅度都明显高于高年资医师(P＜0.05);而高年资医师采用2 k显示器阅片时,在使用放大后处理功能前后其Az值基本相同(Az=0.765～0.769,平均P=0.314＞0.05).在各种情况下阅片,高年资医师的诊断准确率都明显高于低年资医师(P＜0.05).②2位高年资医师在1 k显示器加用放大功能时所获得Az值(平均Az=0.742)都达不到2 k显示器不加用放大功能时的Az值(平均Az=0.771),之间存在小的但具有统计学显著性意义的差别(P=0.042＜0.05);而3位低年资医师使用1 k显示器加用放大功能,其平均Az值(Az=0.674)高于2 k显示器不加用放大功能时的平均Az值(Az=0.651),之间亦存在小的但具有统计学显著性意义的差别(P=0.044＜0.05).对所有医师而言,使用1 k显示器加用放大功能(Az=0.702)与2 k显示器不加用放大功能(Az=0.703)的诊断效能无明显差别(P=0.475＞0.05).结论 ①使用放大功能可以提高影像分辨率,进而提高诊断效能.相比于高年资医师而言,影像分辨率的增加更能改善低年资医师的诊断水平,并在一定程度上能减低诊断医师个体差别所造成的影响.②出于成本效益的考虑,科室可以安排低年资医师使用1 k医用显示器完成初步诊断,但是要求常规使用放大后处理功能,高年资医师应使用2 k医用显示器以保证终诊断结果的可靠性;低年资医师在处理急诊报告时,仍然应当采用1k医用显示器.
作者：程勇；蔡裕兴；陈卫国；陈平雁；张雪林；吴元魁；王刚；刘国清 刊期： 2008年第01期
目的 研究荷S-180肉瘤小鼠血清干扰素γ(IFN-γ)含量的变化,并采用具有调节免疫功能的药物进行干预,探讨内源性IFN-γ在抗小鼠移植瘤方面的意义.方法 建立荷S-180实体瘤小鼠动物模型,分别用灵芝多糖(GLP)、环孢素A(CsA)灌胃给药,每天1次,连续9 d,用ELISA试剂盒检测小鼠血清中IFN-γ的含量,并分离肿瘤称重.结果 首次发现荷S-180实体瘤小鼠血清中IFN-γ含量在所观察的接种后20 d内随荷瘤时间的延长而升高.GLP(400、200、100 mg/kg)使荷瘤小鼠血清中的IFN-γ含量增加、肿瘤重量减轻,但增加IFN-γ含量以高剂量为明显,抑瘤效应以中剂量佳,两者之间相关关系无统计学意义.CsA(20、10、5 mg/kg)可降低荷瘤小鼠血清中IFN-γ的含量,但对肿瘤重量无明显影响,两者之间无相关关系.结论 灵芝多糖增加荷瘤小鼠血清中IFN-γ含量与抑瘤效应无明显相关,环孢素A降低荷瘤小鼠血清中IFN-γ的含量对肿瘤重量无明显影响,提示内源性IFN-γ在抗小鼠S-180移植瘤方面并不是主要的免疫调节因素.
作者：李丽；雷林生；余传林；朱正光；张群；李建军；陈娜娜；吴曙光 刊期： 2008年第01期
目的 利用犬深低温停循环(DHCA)动物模型,观察左旋精氨酸(L-arg)预处理对深低温停循环中犬脑组织代谢的影响.方法 健康成年杂种犬15只,随机分为3组(n=5).对照组:生理盐水假处理;L-arg预处理组:停循环前60 min给予L-arg 100 mg/kg预处理;联合处理组:停循环前60 min给予L-arg 100 mg/kg、7-Ni 25 mg/kg联合处理.按临床方法建立体外循环转流降温至鼻咽部温18 ℃停循环,90 min后恢复循环复温.分别于停循环前30 min、停循环时(0 min)、停循环45 min、停循环90 min、复温再灌注60 min抽取颈静脉、颈动脉血测乳酸含量,取脑顶叶皮质测ATP酶活性.实验犬处死后立刻取脑测干湿重.结果 L-arg预处理和联合处理脑乳酸净生成及ATP消耗均小于对照组(P＜0.05),二处理组间差异无统计学意义(P＞0.05).联合处理组DHCA后脑组织含水量低,L-arg处理次之,对照组高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 DHCA前给予L-arg预处理能降低脑组织代谢水平,有助于脑保护.
作者：高勇；邹小明；王武军；刘亚湘；毛向辉 刊期： 2008年第01期
目的 探讨链脲佐菌素(streptozotocin)糖尿病模型动物血糖和体征动态变化的特点.方法 链脲佐菌素1次或多次腹腔注射,分别建立大鼠和小鼠糖尿病模型;检测血糖变化,以进食量(g)/体质量(g),饮水量(ml)/体质量(g)计算进食量系数和饮水量系数.结果 雄性大鼠链脲佐菌素60 mg/kg糖尿病成模率为65.0%,血糖在注射后15 d达到高峰,15～25 d保持在较高水平,25d后出现明显的下降.小鼠链脲佐菌素200 mg/kg分5次建立糖尿病成模率为90.0%,血糖的动态变化与大鼠类似,但血糖下降不明显.在这两个糖尿病模型中,动物的饮水量系数变化与血糖水平变化的相关性高,相关系数r＞0.97.结论 链脲佐菌素糖尿病模型动物的血糖水平在造模开始后的15～25 d维持在较高水平,可作为观察降血糖药物疗效的适宜时段.饮水量系数是反映血糖的水平变化的适宜指标.
作者：余传林；朱正光；雷林生；陈娜娜；吴曙光 刊期： 2008年第01期
目的 比较两种全自动生化仪分析结果的准确性和一致性.方法 以ROCHE P800全自动生化分析仪为对比方法,OLYMPUS AU600全自动生化分析仪为实验方法,用患者血清对AST、ALT、Glu等14个生化项目进行检测,用回归统计法分析实验方法和对比方法测定结果的相对偏差,对两分析系统的预期偏差进行预期评估.结果 和结论两种全自动生化分析仪检测系统在14项指标上的检测结果存在着一定的偏差,分析结果的预期偏差可以接受.
作者：张韶斌；张旭；何国坚；罗莞超；陈斯亮；高映萍；罗秋红 刊期： 2008年第01期
目的 研究马尔尼菲青霉对巨噬细胞模式识别受体TLR-2、TLR-4、Dectin-1的表达及促炎因子TNF-α分泌的影响.方法 马尔尼菲青霉酵母相菌液与小鼠腹腔巨噬细胞共培养24 h,采用流式细胞技术检测巨噬细胞TLR-2、TLR-4及Dectin-1的平均荧光强度;共聚焦显微镜观察荧光染色的受体;ELISA法测定培养液上清中TNF-α的浓度;Real time PCR检测不同时间段TNF-α的mRNA表达.结果 马尔尼菲青霉可使巨噬细胞TLR-2、TLR-4、Dectin-1的平均荧光强度均增高,并激活巨噬细胞产生TNF-α.结论 马尔尼菲青霉上调了巨噬细胞模式识别受体TLR-2、TLR-4及Dectin-1的表达,巨噬细胞的激活与TLR-2、TLR-4及Dectin-1的表达上调相关.
作者：赵文杰；席丽艳；马黎；张军民；李希清；鲁长明；李飞；曾翰翔 刊期： 2008年第01期
目的 以硬脂酸、聚乙二醇6000和单硬脂酸甘油酯为辅料,制备肉桂油缓释胶囊.方法 应用熔融法制备固体分散体后,以溶出度的测定为主要评价指标,采用正交设计对工艺及处方优化,并用红外光谱法考察药物与载体是否具有相互作用.结果 所得优化处方体外释放符合Higuchi模型,体外可持续释药12 h,红外光谱分析表明药物与辅料发生了相互作用,形成了固体分散体.结论 通过以上处方和工艺制得的固体分散体胶囊具有明显缓释作用,工艺简单,重现性好.
作者：姚琳；邓康颖；罗佳波 刊期： 2008年第01期
目的 观察杀草强对FRTL-5细胞中甲状腺球蛋白基因(tg)、甲状腺过氧化物酶基因(tpo)、钠碘转运体蛋白基因(nis)、促甲状腺激素受体基因(tshr)、甲状腺转录因子基因1(ttf-1)和双链复合蛋白8基因(pax-8)转录的影响,初步探索其干扰甲状腺激素活性的机制.方法 0.001、0.01和0.1 mg/ml杀草强分别处理FRTL-5细胞24 h,收集细胞并提取细胞总RNA,用RT-PCR观察杀草强对tg、tpo、nis、tshr、pax-8和ttf-1基因转录的影响.结果 杀草强各剂量组使tg基因转录均显著增强;杀草强高剂量组使pax-8和tshr基因转录显著降低,使ttf-1基因转录显著降低;杀草强各剂量组对tpo和nis基因无显著影响.结论 杀草强干扰甲状腺激素活性可能与其对tg,tshr,pax-8和ttf-1基因的影响有关.
作者：潘红梅；张立实；吴德生；王津涛 刊期： 2008年第01期
目的 探讨保肝宁抗肝纤维化的作用机制.方法 采用复合因素建立肝纤维化大鼠模型,采用同位素放射免疫分析法检测血清瘦素水平.用免疫组化方法观察保肝宁对肝纤维化大鼠肝组织瘦素、瘦素受体表达的影响.结果 与正常组比较,模型组及各药物组血清瘦素水平均明显升高(P＜0.01).与模型组比较,保肝宁药物组血清瘦素水平明显下降,差异有显著性意义(P＜0.01),保肝宁明显抑制模型大鼠肝组织瘦素、瘦素受体的表达.与模型组比较,差异有显著性意义(P＜0.01).结论 保肝宁可有效防治大鼠肝纤维化,其作用机制可能与通过降低血清瘦素水平,抑制模型大鼠肝组织瘦素、瘦素受体的表达密切相关.
作者：贺松其；文彬；侯丽颖；吕志平 刊期： 2008年第01期
目的 探讨内侧手术入路治疗肱骨骨折的临床效果.方法 采用内侧手术入路对肱骨干骨折复位和内固定,观察术中、术后并发症;术后病人随访1～5年,观察术后骨折愈合情况和并发症.结果 观察组和对照组骨折愈合时间无显著性差异(P＞0.05),术中无副损伤,术后无感染、固定失败、长期的挠神经麻痹、骨不连等并发症,肩和肘的功能好.患肢感觉、肌力和血液循环好.结论 此种手术入路是可行的,对有上臂内侧伤口和美观要求较高的病人尤其适用.
作者：裴宪武；孙绍斌；王金伟；宋金辉；柏传毅；王坤正 刊期： 2008年第01期
目的 采用顶空进样毛细管气相色谱法测定雷诺嗪原料药中甲醇、乙醇、甲苯、二氯甲烷及二氧六环5种有机溶剂的残留量.方法 使用HP-INNOWAX毛细管色谱柱(0.32 mm×30 m×0.25 μm),柱温45 ℃,FID检测器,以水为溶剂,载气为氮气,进样口温度180 ℃,检测器温度250 ℃.结果 5种有机溶剂分离完全,线性范围分别为甲醇3.96～39.6 μg·ml-1,乙醇7.89～78.9 μg·ml-1,二氯甲烷3.34～33.4 μg·ml-1,甲苯11.2～111.8 μg·ml-1,二氧六环8.80～88.0 μg·ml-1.在所考察的浓度范围内线性关系良好,r为0.9 994～0.9 988,平均回收率为89.4%～104.0%,精密度、重复性RSD均小于8%.结论 本方法适用于雷诺嗪原料药中有机溶剂残留量的测定.
作者：叶亚琳；杨雪梅 刊期： 2008年第01期
目的 对研究中药白花蛇舌草化学成分.方法 采用各种色谱技术进行分离,应用波谱数据及理化性质,对分离得到的化合物进行结构鉴定.结果 自白花蛇舌草中分离得到7个化合物,分别鉴定为对香豆酸(Ⅰ),对香豆酸甲酯(Ⅱ),2-醛基-5-羟甲基呋喃(Ⅲ),槲皮素(Ⅳ),山柰酚(Ⅴ),β-谷甾醇(Ⅵ),胡萝卜苷(Ⅶ).结论 化合物Ⅱ,Ⅲ为首次从该种植物中分离得到.
作者：张永勇；罗佳波 刊期： 2008年第01期
目的 观察慢性盐负荷对AngⅡ模型大鼠血压及血管平滑肌钙激活性氯通道(mCLCA4)表达的影响.方法 选取12周龄SD大鼠随机分为AngⅡ模型组和对照组.模型组用AngⅡ药泵(100 ng·kg-1·min-1)皮下输注2周;对照组除不给予AngⅡ干预外与模型组相同,正常饲养2周.2周后去除模型组药泵,于2组中各选6只取材分析后,再将模型组和对照组各分为高盐组(4% NaCl)和正常盐组(0.6% NaCl)干预12周.观察大鼠的钠代谢及血压变化.自盐负荷起,每隔4周取材用标记好的寡核苷酸探针通过原位杂交观察各组大鼠动脉血管平滑肌钙激活性氯通道mCLCA4 mRNA的表达变化.结果 输注AngⅡ2周的模型组大鼠较对照组血压明显升高(P＜0.05),但血管平滑肌mCLCA4 mRNA的表达在两组间无明显差别.模型大鼠的高盐组与正常盐组在各时点的血压均无明显差异;高盐干预4周时,血管平滑肌mCLCA4 mRNA的表达在两组间无显著差别;高盐干预至8周及12周时,高盐组mCLCA4 mRNA的表达明显高于同时点正常盐组(P＜0.01).对照组中,高盐组各时点血管平滑肌mCLCA4的表达水平均比正常盐组明显升高(P＜0.05),但两组间各时点血压并无明显差异.结论 给SD大鼠AngⅡ(100 ng·kg-1·min-1)皮下慢性输注,可使其血压升高,但AngⅡ引起血压升高的机制可能和mCLCA4的表达变化无直接联系.AngⅡ输注2周可对抗短期高盐干预(4周)使mCLCA4 mRNA表达上调的作用.高盐摄入对正常SD大鼠血管平滑肌mCLCA4 mRNA的表达有上调作用,但对其血压无显著升压作用,说明mCLCA4的表达上调可能拮抗盐的升压作用.
作者：方媛；刘治全；郑勇；叶涛；何岚；王毅 刊期： 2008年第01期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
