学术投稿

骨髓基质细胞体外培养的生物学特性和成骨能力初步鉴定

涂小丽;刘宏伟;李才良;任肖华

关键词:骨髓基质细胞, 生物学特性, 成骨潜能, 细胞培养
摘要:目的体外分离培养狗的骨髓基质细胞(BMSCs),诱导其向成骨细胞分化,初步鉴定其成骨潜能和生物学特性.方法抽取毕格犬髂骨骨髓体外分离培养获得BMSCs,DMEM、新生牛血清培养基进行原代培养,部分传代细胞以含10mmol/L地塞米松、50μg/ml抗坏血酸和10 mmol/L β-甘油磷酸钠的矿化培养液诱导其向成骨细胞增殖分化.倒置相差显微镜进行细胞形态学和细胞生长增殖观察,Von Kossa法染色检测体外矿化结节形成,细胞碱性磷酸酶染色检测BMSCs的成骨活性.结果体外分离培养的BMSCs经条件培养基诱导后表现出明显的成骨活性,体外矿化(骨样)结节的VonKossa染色阳性;传代BMSCs碱性磷酸酶染色阳性.结论体外分离培养的BMSCs中含有骨源性前体细胞,传代细胞具有较强的成骨潜能.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 胰头癌姑息性手术的手术方式选择

    目的探讨中晚期胰头癌姑息性手术的术式选择.方法对1995年1月至2003年6月期间收治的142例中晚期胰头癌患者的临床资料进行回顾性分析.结果单纯胆囊空肠吻合术30内死亡率为14.2%,术后黄疸或胆管炎复发率为61.9%,生存期为7.1月;肝(胆)总管空肠吻合术死亡率为5.7%,黄疸和胆管炎复发率仅为6.8%,生存期10.3月,但31.8%的病人术后半年内出现十二指肠梗阻;胆肠吻合加胃空肠吻合术生存期比前两组均高(13.9月),术后无出现十二指肠梗阻.结论胰头癌姑息性手术术式应尽量选择Roux-en-Y式的肝(胆)总管空肠吻合术,同时应作预防性胃空肠吻合术.

    作者:刘宇斌;黄亮;冼志勇;郭文龙;简志祥;刘子贤 刊期: 2006年第01期

  • CD25+细胞在鼻咽癌中的表达及与EBV的关系

    目的探讨CD25+细胞在鼻咽癌组织中的表达情况及EB病毒感染对CD25表达的影响.方法用免疫组织化学方法检测CD25+细胞在鼻咽癌组织和鼻咽慢性炎症组织中的表达情况,并用组织原位杂交技术检测EB病毒对其表达的影响.对照组选取鼻咽慢性炎症组织.结果CD25+淋巴细胞在鼻咽癌组织中比在鼻咽慢性炎症组织中的表达明显升高,差异具有显著性意义(P<0.001),且在未分化癌中表达高于角化型癌和非角化型癌(P<0.05).原位杂交显示EB病毒与CD25+淋巴细胞高表达有关.结论CD25+淋巴细胞在鼻咽癌组织中表达高于慢性炎症组织,EB病毒感染与CD25+淋巴细胞表达间存在相关性.

    作者:刘巍;韩慧霞 刊期: 2006年第01期

  • 大鼠应激性溃疡自愈过程中环氧合酶表达的变化

    目的研究大鼠应激性溃疡自愈过程中环氧合酶的表达;探讨环氧合酶在应激性溃疡自愈过程的作用机制.方法应用免疫组织化学和RT-PCR方法检测大鼠应激性溃疡自愈过程中环氧合酶蛋白和mRNA的表达变化.结果对照组的大鼠胃粘膜COX-2表达极低,而在溃疡自愈过程中其表达显著增加(P<0.05),并随自愈时间而减弱;COX-1在应激性溃疡自愈各组和对照组中均表达,自愈各组与对照组相比没有明显差异(P>0.05).结论大鼠应激性溃疡自愈过程中COX-1和COX-2均有表达,参与了应激性溃疡的自愈过程,其作用可能主要与COX介导分泌的前列腺素有关.

    作者:徐俊;宋于刚;桑显富;鲍光欣;李旭;武钢;陈东升 刊期: 2006年第01期

  • 脑卒中患者焦虑与抑郁的调查分析及相应护理对策

    目的探讨脑卒中后患者焦虑与抑郁状况,为临床心理护理提供依据.方法采用Zung氏焦虑自评量表(SAS)和抑郁自评量表(SDS)对69例脑卒中患者进行问卷调查.结果和结论69例脑卒中患者中存在抑郁状态39例(占56%),焦虑状态30例(占44%),进行统计分析,脑卒中SAS、SDS的评分结果均高于国内常模.了解脑卒中患者的心理状况,开展有针对性的心理护理,有助于提高患者的生活质量.

    作者:刘丽红;张文静;徐清秀 刊期: 2006年第01期

  • 颅内外伤性跨窦血肿36例临床分析

    目的探讨跨窦血肿与静脉窦损伤的关系及手术方法.方法通过对36例跨窦血肿回顾性总结,观察跨窦血肿合并静脉窦损伤的发生率及手术处理原则,并结合文献进行讨论.结果36例跨窦血肿中有29例合并各种静脉窦损伤,其发生率为80.56%,并且适当的手术处理可以取得较好疗效.结论颅内跨窦血肿大多数合并静脉窦损伤,术前要充分估计手术风险,以便从容应对各种静脉窦损伤,提高手术成功率.

    作者:尹善浪;陈善成;郑阳;叶泽亮 刊期: 2006年第01期

  • 郑州市大学生亚健康现状及相关因素分析

    目的了解郑州市大学生亚健康状态的发生率及其影响因素.方法采用自行设计的亚健康调查表,对郑州市2200名在校大学生进行亚健康调查,并用各种描述性分析、χ2检验以及Logistic回归方法分析与亚健康相关的影响因素.结果2005名大学生中,亚健康发生率为62.44%,亚健康状态发生频率与大学生性别、不同专业、年级、是否独生子女有关;亚健康主要危险因素包括睡眠不足、人际关系不融洽、对现状不满、对自我形象不满意、就业压力大、学习压力加大、家庭负担过重、缺乏身体锻炼等.结论大学生的健康状况不容乐观,学校、教师、家庭以及全社会应针对学生亚健康状况,采取积极的预防干预措施.

    作者:李玉良;王成申;周红斌;魏小健 刊期: 2006年第01期

  • 虫类中药治疗痰证心法

    痰证临床上多见,因其致病因素属重阴之邪,其性粘滞,故临证时多胶着难治.经多年临床实践体会,治疗痰证时,在辨证用药的基础上,加用通窜搜剔作用的虫类中药,如治疗癫痫、中风、眩晕、痹证、水肿时,选加全蝎、蜈蚣、地龙、僵蚕、水蛭、白花蛇、乌梢蛇肉等虫类药,能达到除痰通络提高疗效目的.

    作者:钟洪 刊期: 2006年第01期

  • 沙棘油治疗烧伤创面的临床观察

    目的效果观察沙棘油的治疗烧伤创面.方法将沙棘油与纱布制成沙棘油纱布作为内层敷料贴缚于创面,然后以无菌纱布覆盖包扎,隔日更换1次直至创面愈合.结果151例烧伤病人创面用药组和对照组用凡士林油治疗创面结果显示,沙棘油具有减少创面渗出、缓解疼痛、促进上皮和肉芽组织生长、加速创面愈合作用.统计学分析两组具有显著性差异(P<0.01).结论沙棘油是医学上有广泛用途的珍贵药用油,作为一种治疗烧伤创面的外用药,具有肯定的疗效.

    作者:王志远;罗小林;何彩萍 刊期: 2006年第01期

  • 基于Hermite微分算子的水平集MR图像分割方法

    本文介绍一种基于Hermite微分算子用于MR图像分割的水平集方法.该方法采用Hermite微分算子来代替传统一阶差分算子,即在水平集曲线演化时函数微分用像素点的二阶邻域差值求得,而不是传统方法由一阶邻域决定.实验结果表明,对于相同的分割过程,运用了Hermite微分算子的水平集方法,其分割结果更加精确.尤其是对于由噪声等因素所引起的退化图像,其分割效果明显优于传统方法,而运算速度与传统方法相差无几.

    作者:杨丰;金大年;陈武凡;罗敏 刊期: 2006年第01期

  • Fas和FasL在急性胰腺炎中的共表达及其与凋亡的关系

    目的探讨凋亡调控基因Fas、FasL在大鼠急性胰腺炎中的表达及其与腺泡细胞凋亡的关系.方法通过胰胆管内逆行注射不同浓度的牛磺胆酸钠,建立不同严重程度的急性胰腺炎模型,用RT-PCR、免疫组化法检测胰腺组织Fas、FasLmRNA及蛋白的表达,原位末端标记法检测各组大鼠胰腺腺泡细胞凋亡.结果在正常的胰腺腺泡细胞中即存在着Fas、FasL mRNA及蛋白的表达,且呈现共区域化特点,凋亡细胞极少.在炎症程度较轻的胰腺组织,Fas和FasLmRNA的表达水平显著提高,腺泡细胞凋亡指数亦明显提高,随胰腺炎症程度的加重,Fas和FasLmRNA的表达逐渐下降,腺泡细胞凋亡指数亦逐渐下降.结论Fas/FasL系统可能参与了正常胰腺组织的细胞更新和自稳;是介导急性胰腺炎时腺泡细胞凋亡的一个重要途径.

    作者:李震东;马清涌;徐军;李明 刊期: 2006年第01期

  • 实时定量PCR评价小鼠胸腺功能方法的建立

    目的建立实时定量PCR检测小鼠胸腺及脾脏T淋巴细胞中信号结合T细胞受体删除环(sjTRECs)水平的方法,推测其中的初始T细胞的数目,评价胸腺功能,从而为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法.方法提取小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞基因组DNA,PCR扩增目的片段.纯化构建标准质粒的RAG2片段,构建标准重组质粒并鉴定.优化PCR体系后,实时定量PCR反应建立标准曲线,并检测不同品系(BALB/c和C57BL/6)成年小鼠胸腺及脾脏淋巴细胞siTRECs含量.结果成功构建标准质粒.确定适实时定量PCR反应条件后,在实时定量PCR中建立可信度高的标准曲线.建立的方法分析表明,这两个不同品系的sjTRECs含量统计学差异不显著.结论成功建立定量检测小鼠T淋巴细胞中sjTRECs含量从而推测其中的初始T细胞数目的方法,为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法.

    作者:张华华;曾耀英;何贤辉;刑飞跃 刊期: 2006年第01期

  • 冠心病患者ABCA1基因全部编码区SNP的检测及意义

    目的检测112例冠心病患者ABCA1基因全部编码区的单核苷酸多态性(SNP).方法通过聚合酶链反应-单链构象多态性分析结合银染后胶回收、DNA测序和限制性内切酶酶切分析方法检测112例明确冠心病诊断患者的AB-CA1基因全部编码区50个外显子的SNP.结果我国冠心病病人群中存在着国内外均已报道的R219K和M883I两个位点SNP的改变,并在外显子7中发现了国内外均未见报道的A1092G新碱基位点的改变,并导致氨基酸改变为M233V,通过108例正常人限制性内切酶酶切分析方法证实其为SNP.结论我国冠心病病人群中不仅存在着已报道的R219K、M883I位点SNP,并首次发现存在新的M233V位点SNP.新SNP位点M233V型ABCA1基因可能增加冠心病的危险性,其功能学研究需进一步流行病学调查证实.

    作者:王琦光;郭志刚;赖文岩;查政;刘亚洋;刘凌 刊期: 2006年第01期

  • 微囊化大鼠胰岛细胞的冷冻保存

    目的探讨海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸微囊在胰岛细胞冷冻保存过程中的作用.方法将分离纯化后的大鼠胰岛细胞分为微囊化组和游离组.经冷冻保存1月后在RPMI 1640中培养过夜,分别测定两组的胰岛细胞回收率、胰岛细胞直径并进行胰岛素刺激释放试验.结果微囊组胰岛细胞回收率为98.2%±1.4%,较游离组71.6%±2.9%显著提高(P<0.05).在高糖(16.7mmol/L)刺激下,微囊组胰岛素分泌量较游离组高(22.6±1.8mU/L vs 11.7±1.5mU/L,P<0.05).在含有茶碱的高糖溶液中,微囊组的刺激指数为游离组的3倍.结论海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸微囊可显著提高胰岛细胞冷冻保存后的回收率,并改善胰岛细胞的功能.

    作者:侯军;薛武军;田小辉;庞新路;藤焱;冯新顺 刊期: 2006年第01期

  • 寡聚脱氧核苷酸抑制巨噬细胞NF-κB活性的实验研究

    目的观察寡聚脱氧核苷酸(ODN)对THP-1细胞NF-κB核转位及细胞核内结合活性的抑制作用.方法用脂质体将寡聚脱氧核苷酸转入细胞后,以细菌脂多糖(LPS)刺激30min,分别通过免疫细胞化学、电泳迁移率分析(EMSA)和RT-PCR检测细胞NF-κB的核移位和细胞核内NF-κB结合活性.结果免疫细胞化学显示转入ODN后以LPS刺激,NF-κB表达仍位于细胞浆内,EMSA显示ODN可明显抑制细胞核内结合活性,RT-PCR显示ODN能够明显抑制NF-κB相关炎性因子TNF-αmRNA的合成.结论ODN能有效抑制THP-1细胞NF-κB的核移位和细胞核内NF-κB结合活性,从而抑制相关炎性基因的启动和转录.

    作者:崔忠林;周杰 刊期: 2006年第01期

  • 黑斑息肉综合征临床分类研究

    目的探讨黑斑息肉综合征(PJS)临床分类方法.方法回顾分析1980~2003年间治疗的52例PJS患者的临床资料.结果24位患者有家族史,平均年龄19岁.胃息肉的发生率为64.4%,大肠息肉的发生率为76%,小肠息肉的发生率为95%.19/31位患者胃息肉在50颗以上,18/38位患者大肠息肉在50颗以上,8/19位患者小肠息肉数量在50颗以上,病理以错构瘤性息肉(63/108)为主,恶性肿瘤发生率13.5%(7/52).结论PJS患者可以依患者息肉的部位、数量及病理情况进行分类.息肉数量50颗以上的PJS患者大部分需要手术配合治疗,建议以50颗息肉作为多息肉型和少息肉型PJS的界线.少息肉型患者以内镜下治疗为主,对多息肉型患者及小肠息肉型患者选择剖腹探查,配合手术中的内镜治疗.

    作者:戴益琛;宋于刚;肖冰;张亚历;智发朝;姜泊;周殿元 刊期: 2006年第01期

  • 骨髓基质细胞体外培养的生物学特性和成骨能力初步鉴定

    目的体外分离培养狗的骨髓基质细胞(BMSCs),诱导其向成骨细胞分化,初步鉴定其成骨潜能和生物学特性.方法抽取毕格犬髂骨骨髓体外分离培养获得BMSCs,DMEM、新生牛血清培养基进行原代培养,部分传代细胞以含10mmol/L地塞米松、50μg/ml抗坏血酸和10 mmol/L β-甘油磷酸钠的矿化培养液诱导其向成骨细胞增殖分化.倒置相差显微镜进行细胞形态学和细胞生长增殖观察,Von Kossa法染色检测体外矿化结节形成,细胞碱性磷酸酶染色检测BMSCs的成骨活性.结果体外分离培养的BMSCs经条件培养基诱导后表现出明显的成骨活性,体外矿化(骨样)结节的VonKossa染色阳性;传代BMSCs碱性磷酸酶染色阳性.结论体外分离培养的BMSCs中含有骨源性前体细胞,传代细胞具有较强的成骨潜能.

    作者:涂小丽;刘宏伟;李才良;任肖华 刊期: 2006年第01期

  • HPV16 E5蛋白原核表达、鉴定及真核表达稳定株的筛选

    目的研究HPV16 E5蛋白的生物学特性及其细胞转化机制,对HPV16 E5蛋白原核和真核表达质粒进行构建、表达和鉴定.方法以临床确诊的HPV16感染患者子宫颈细胞DNA为模板,采用PCR方法扩增HPV16 E5基因,经BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后插入相同酶切的pET32a(+)载体,转染JM109感受态细胞,并进行阳性克隆筛选.经IPTG对重组质粒进行蛋白诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting检测目标蛋白表达情况.将BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切pET32(+)/E5质粒后取得的E5全基因片段转入pcDNA3.1(+)空质粒,构建pcDNA3.1(+)/E5真核表达质粒并对NIH3T3细胞进行转染,后用G418进行稳定表达株的筛选,并采用RT-PCR鉴定细胞内HPV16E5基因表达情况.结果成功构建了原核表达质粒pET32/E5,在1 mmol/LIPTG、28℃诱导条件下BL21(DE3)菌体中HPV16 E5-TRX融合蛋白占菌体总蛋白的10%左右.真核表达质粒pcDNA3.1(+)/E5在成功转染NIH3T3细胞后于250μg/ml G418浓度时筛选21d得到了E5基因稳定表达株,RT-PCR产物测序得到了HPV16 E5基因全序列.结论成功构建了pET32/E5原核和pcDNA3.1(+)/E5真核表达质粒,HPV16E5蛋白在大肠杆菌和NIH3T3细胞中的稳定表达,这些结果为进一步深入研究HPV16 E5蛋白的生物学特性及其致细胞转化的作用奠定了坚实基础.

    作者:施桥发;魏晓丽;李虹;王保宁;张卫东;蒋忠华;曹康;李明远 刊期: 2006年第01期

  • △LuxS的表型分析及其在GBS毒力调控机制研究中的应用

    目的采用LuxS缺失突变株模型对B型链球菌中数量感应相关分子LuxS的功能及与其相关的自诱导因子-2数量感应通路进行研究,以探索其毒力调控机制.方法采用RT-PCR法、菌落印迹分析、生长曲线测定、cAMP因子测定等方法对该缺失突变菌株的表型特性进行了研究.后应用哈氏弧菌作为报告菌株,通过生物发光测定法分析了突变株对B型链球菌诱导报告菌株中的生物发光活性的影响.结果发现此缺失突变可导致B型链球菌中scpB基因表达的上调;与野生株相比,突变株的生物发光诱导活性比野生株降低了大约两倍.结论本研究结果证实了LuxS在GBS中AI-2数量感应通路中的重要性,并为GBS中毒力调控机制的进一步研究提供了新的线索.

    作者:欧阳谦;马文丽;刘翠华;石嵘;郑文岭 刊期: 2006年第01期

  • 动脉化静脉皮瓣修复手部软组织缺损的临床研究

    目的报道动脉化静脉皮瓣在修复手部软组织缺损中的临床应用.方法选取前臂远端及足背、趾蹼处静脉皮瓣用于修复手指及手背皮肤软组织缺损52例.结果其中50例皮瓣存活.其余2例皮瓣周缘皮肤0.5 cm宽坏死,约3周脱痂后,创面愈合.结论用动脉化静脉皮瓣修复手指及手背软组织缺损是一种比较适宜的术式选择.

    作者:谢广中;李敬矿;陆晓强;王光耀;黄潮桐 刊期: 2006年第01期

  • 重度热射病合并内毒素血症大鼠模型的建立

    目的建立热射病合并内毒素血症大鼠的动物模型,为进一步探讨重度热射病的发病机制奠定基础.方法雄性SPF级Wistar大鼠随机分为:常温生理盐水组(C组)、高温生理盐水组(H组)、常温细菌脂多糖组(L组)、高温细菌脂多糖组(HL组).持续监测动物肛温、心率、平均动脉压、呼吸频率的动态变化,观察致伤0、40、80、120min的外周血白细胞计数、肺病理改变.结果(1)HL组动物肛温上升到(43.04±0.11)℃,心率加快到(660±42)次/min,呼吸频率加快到(150±11)次/min,平均动脉压下降到(49.0±3.5)mmHg;其中动物肛温、心率、呼吸频率、平均动脉压与L组之间存在显著性差异,心率、平均动脉压与H组之间存在显著性差异;(2)L组、HL组白细胞计数显著下降而H组白细胞计数显著上升,L组、HL组白细胞计数与H组之间存在显著性差异;(3)HL组动物肺组织出现急性微血管损伤改变.结论本研究较好地模拟了临床热射病合并感染发展为重度热射病的过程,是重度热射病多器官损伤肺启动机制研究较好的模型.

    作者:林晓静;邹飞;李亚洁;王斌;贺文静;赵志荣;朱顺芳 刊期: 2006年第01期

南方医科大学学报杂志

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主管:广东省教育厅

主办:南方医科大学