林晓静；邹飞；李亚洁；王斌；贺文静；赵志荣；朱顺芳
目的构建哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因的消减cDNA文库.方法采用新近建立的抑制消减杂交方法,哮喘治疗前后的嗜酸细胞为试验和对比材料,分离哮喘病人嗜酸细胞中差异表达基因的cDNA片段,将其与T载体进行T/A连接构建文库,将连接产物用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行文库扩增和蓝白斑筛选,随机挑取100个白色克隆用菌落PCR进行鉴定.结果扩增消减cDNA文库获得3000余个白色阳性克隆,随机挑取100个白色克隆用PCR进行扩增,90%的克隆中均有200～600 bp的插入片段,这些片段可能是哮喘嗜酸细胞差异表达基因的cDNA片段.结论用SSH法及T/A克隆技术成功构建了哮喘病人治疗前后嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库,该消减cDNA文库的建立为进一步筛选、克隆哮喘病人嗜酸细胞差异表达的新基因奠定了基础.
作者：徐劲松；蔡绍曦；邹飞；佟万成；万为人；赵海金 刊期： 2006年第01期
目的探讨CD25+细胞在鼻咽癌组织中的表达情况及EB病毒感染对CD25表达的影响.方法用免疫组织化学方法检测CD25+细胞在鼻咽癌组织和鼻咽慢性炎症组织中的表达情况,并用组织原位杂交技术检测EB病毒对其表达的影响.对照组选取鼻咽慢性炎症组织.结果CD25+淋巴细胞在鼻咽癌组织中比在鼻咽慢性炎症组织中的表达明显升高,差异具有显著性意义(P＜0.001),且在未分化癌中表达高于角化型癌和非角化型癌(P＜0.05).原位杂交显示EB病毒与CD25+淋巴细胞高表达有关.结论CD25+淋巴细胞在鼻咽癌组织中表达高于慢性炎症组织,EB病毒感染与CD25+淋巴细胞表达间存在相关性.
作者：刘巍；韩慧霞 刊期： 2006年第01期
目的建立热射病合并内毒素血症大鼠的动物模型,为进一步探讨重度热射病的发病机制奠定基础.方法雄性SPF级Wistar大鼠随机分为:常温生理盐水组(C组)、高温生理盐水组(H组)、常温细菌脂多糖组(L组)、高温细菌脂多糖组(HL组).持续监测动物肛温、心率、平均动脉压、呼吸频率的动态变化,观察致伤0、40、80、120min的外周血白细胞计数、肺病理改变.结果(1)HL组动物肛温上升到(43.04±0.11)℃,心率加快到(660±42)次/min,呼吸频率加快到(150±11)次/min,平均动脉压下降到(49.0±3.5)mmHg;其中动物肛温、心率、呼吸频率、平均动脉压与L组之间存在显著性差异,心率、平均动脉压与H组之间存在显著性差异;(2)L组、HL组白细胞计数显著下降而H组白细胞计数显著上升,L组、HL组白细胞计数与H组之间存在显著性差异;(3)HL组动物肺组织出现急性微血管损伤改变.结论本研究较好地模拟了临床热射病合并感染发展为重度热射病的过程,是重度热射病多器官损伤肺启动机制研究较好的模型.
作者：林晓静；邹飞；李亚洁；王斌；贺文静；赵志荣；朱顺芳 刊期： 2006年第01期
目的采用LuxS缺失突变株模型对B型链球菌中数量感应相关分子LuxS的功能及与其相关的自诱导因子-2数量感应通路进行研究,以探索其毒力调控机制.方法采用RT-PCR法、菌落印迹分析、生长曲线测定、cAMP因子测定等方法对该缺失突变菌株的表型特性进行了研究.后应用哈氏弧菌作为报告菌株,通过生物发光测定法分析了突变株对B型链球菌诱导报告菌株中的生物发光活性的影响.结果发现此缺失突变可导致B型链球菌中scpB基因表达的上调;与野生株相比,突变株的生物发光诱导活性比野生株降低了大约两倍.结论本研究结果证实了LuxS在GBS中AI-2数量感应通路中的重要性,并为GBS中毒力调控机制的进一步研究提供了新的线索.
作者：欧阳谦；马文丽；刘翠华；石嵘；郑文岭 刊期： 2006年第01期
目的体外分离培养狗的骨髓基质细胞(BMSCs),诱导其向成骨细胞分化,初步鉴定其成骨潜能和生物学特性.方法抽取毕格犬髂骨骨髓体外分离培养获得BMSCs,DMEM、新生牛血清培养基进行原代培养,部分传代细胞以含10mmol/L地塞米松、50μg/ml抗坏血酸和10 mmol/L β-甘油磷酸钠的矿化培养液诱导其向成骨细胞增殖分化.倒置相差显微镜进行细胞形态学和细胞生长增殖观察,Von Kossa法染色检测体外矿化结节形成,细胞碱性磷酸酶染色检测BMSCs的成骨活性.结果体外分离培养的BMSCs经条件培养基诱导后表现出明显的成骨活性,体外矿化(骨样)结节的VonKossa染色阳性;传代BMSCs碱性磷酸酶染色阳性.结论体外分离培养的BMSCs中含有骨源性前体细胞,传代细胞具有较强的成骨潜能.
作者：涂小丽；刘宏伟；李才良；任肖华 刊期： 2006年第01期
目的探讨跨窦血肿与静脉窦损伤的关系及手术方法.方法通过对36例跨窦血肿回顾性总结,观察跨窦血肿合并静脉窦损伤的发生率及手术处理原则,并结合文献进行讨论.结果36例跨窦血肿中有29例合并各种静脉窦损伤,其发生率为80.56%,并且适当的手术处理可以取得较好疗效.结论颅内跨窦血肿大多数合并静脉窦损伤,术前要充分估计手术风险,以便从容应对各种静脉窦损伤,提高手术成功率.
作者：尹善浪；陈善成；郑阳；叶泽亮 刊期： 2006年第01期
目的研究大鼠应激性溃疡自愈过程中环氧合酶的表达;探讨环氧合酶在应激性溃疡自愈过程的作用机制.方法应用免疫组织化学和RT-PCR方法检测大鼠应激性溃疡自愈过程中环氧合酶蛋白和mRNA的表达变化.结果对照组的大鼠胃粘膜COX-2表达极低,而在溃疡自愈过程中其表达显著增加(P＜0.05),并随自愈时间而减弱;COX-1在应激性溃疡自愈各组和对照组中均表达,自愈各组与对照组相比没有明显差异(P＞0.05).结论大鼠应激性溃疡自愈过程中COX-1和COX-2均有表达,参与了应激性溃疡的自愈过程,其作用可能主要与COX介导分泌的前列腺素有关.
作者：徐俊；宋于刚；桑显富；鲍光欣；李旭；武钢；陈东升 刊期： 2006年第01期
目的从中国蝮蛇蛇毒中分离纯化出一种新的磷脂酶A2(PLA2)同源物,并研究其对Hep3B细胞基因谱的影响.方法用C18反相高效液相层析从蛇毒粗毒中分离纯化出PLA2同源物,并检测其纯度.用电喷雾质谱仪测定PLA2同源物分子量.体外培养Hep3B细胞,以139μg/ml PLA2同源物处理12 h,应用基因芯片检测基因表达的改变.结果从蛇毒粗毒中分离纯化出一种新的PLA2同源物,纯度为97.2%,相对分子质量为13 900.139μg/mlPLA2同源物处理Hep3B细胞12 h后,19个基因表达下调,20个基因表达上调.表达改变的基因按功能分主要为以下6类:细胞周期控制和DAN损伤修复类、细胞调亡和衰老类信号转导分子和转录因子、细胞黏附类、血管生成类以及肿瘤细胞入侵和转移类.结论PLA2同源物作用于Hep3B细胞后,可影响细胞多种基因的表达,表达改变的基因主要参与肿瘤细胞的生长和转移.本研究为进一步深入研究PLA2对肿瘤细胞的作用机制提供线索和依据.
作者：马安德；吴少瑜；张嘉杰；李志琴；徐伟；文晓芸；余乐；吴曙光 刊期： 2006年第01期
目的利用RNAi技术抑制鼻咽癌细胞5-8F表皮生长因子受体(EGFR)表达,观察细胞生长变化,探讨EGFR与鼻咽癌发生发展之间的相关性.方法利用体外转录法合成EGFR特异性siRNA,将其瞬时转染5-8F,收集转染后细胞总RNA和蛋白,利用RT-PCR和Westem blot法测定EGFR表达水平的变化,并检测EGFR表达抑制后细胞生长速度和生长周期的变化.结果合成的3对siRNA中,有一对使EGFRmRNA表达下降67.5%,蛋白表达下降77%.EGFR表达抑制后5-8F生长速度减慢,并诱导细胞周期停止在G1期.结论RNAi沉默EGFR表达可抑制鼻咽癌细胞生长,并诱导癌细胞停止在G1期,RNAi可作为探索鼻咽癌发生发展机制和基因治疗的有效工具.
作者：翁德胜；吴正蓉；王爽；丁彦青 刊期： 2006年第01期
目的探讨黑斑息肉综合征(PJS)临床分类方法.方法回顾分析1980～2003年间治疗的52例PJS患者的临床资料.结果24位患者有家族史,平均年龄19岁.胃息肉的发生率为64.4%,大肠息肉的发生率为76%,小肠息肉的发生率为95%.19/31位患者胃息肉在50颗以上,18/38位患者大肠息肉在50颗以上,8/19位患者小肠息肉数量在50颗以上,病理以错构瘤性息肉(63/108)为主,恶性肿瘤发生率13.5%(7/52).结论PJS患者可以依患者息肉的部位、数量及病理情况进行分类.息肉数量50颗以上的PJS患者大部分需要手术配合治疗,建议以50颗息肉作为多息肉型和少息肉型PJS的界线.少息肉型患者以内镜下治疗为主,对多息肉型患者及小肠息肉型患者选择剖腹探查,配合手术中的内镜治疗.
作者：戴益琛；宋于刚；肖冰；张亚历；智发朝；姜泊；周殿元 刊期： 2006年第01期
目的测定9种药材中有机氯农药的残留量.方法以正已烷/丙酮(8/2)混合溶剂,在Florisil固相萃取柱上净化提取,采用毛细管气相色谱柱分离样品和电子捕获检测器进行检测.结果11种农药能较好地分离,峰面积与其浓度均具有良好线性,两个水平的加样回收率分别为79.9%～89.0%和86.3%～104.8%,相对标准偏差为1.8%～7.1%,检测限为2g/kg;广藿香和三七中有机氯农药残留超过国家标准.结论所建GC-EC'D法能满足药材中有机氯农药残留量的检测,药典应制订药材中农药残留量的标准.
作者：杨雪梅；钟怀宁；严佚琛；易容；徐江平 刊期： 2006年第01期
本文介绍一种基于Hermite微分算子用于MR图像分割的水平集方法.该方法采用Hermite微分算子来代替传统一阶差分算子,即在水平集曲线演化时函数微分用像素点的二阶邻域差值求得,而不是传统方法由一阶邻域决定.实验结果表明,对于相同的分割过程,运用了Hermite微分算子的水平集方法,其分割结果更加精确.尤其是对于由噪声等因素所引起的退化图像,其分割效果明显优于传统方法,而运算速度与传统方法相差无几.
作者：杨丰；金大年；陈武凡；罗敏 刊期： 2006年第01期
目的建立实时定量PCR检测小鼠胸腺及脾脏T淋巴细胞中信号结合T细胞受体删除环(sjTRECs)水平的方法,推测其中的初始T细胞的数目,评价胸腺功能,从而为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法.方法提取小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞基因组DNA,PCR扩增目的片段.纯化构建标准质粒的RAG2片段,构建标准重组质粒并鉴定.优化PCR体系后,实时定量PCR反应建立标准曲线,并检测不同品系(BALB/c和C57BL/6)成年小鼠胸腺及脾脏淋巴细胞siTRECs含量.结果成功构建标准质粒.确定适实时定量PCR反应条件后,在实时定量PCR中建立可信度高的标准曲线.建立的方法分析表明,这两个不同品系的sjTRECs含量统计学差异不显著.结论成功建立定量检测小鼠T淋巴细胞中sjTRECs含量从而推测其中的初始T细胞数目的方法,为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法.
作者：张华华；曾耀英；何贤辉；刑飞跃 刊期： 2006年第01期
目的探讨脑卒中后患者焦虑与抑郁状况,为临床心理护理提供依据.方法采用Zung氏焦虑自评量表(SAS)和抑郁自评量表(SDS)对69例脑卒中患者进行问卷调查.结果和结论69例脑卒中患者中存在抑郁状态39例(占56%),焦虑状态30例(占44%),进行统计分析,脑卒中SAS、SDS的评分结果均高于国内常模.了解脑卒中患者的心理状况,开展有针对性的心理护理,有助于提高患者的生活质量.
作者：刘丽红；张文静；徐清秀 刊期： 2006年第01期
目的探讨海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸微囊在胰岛细胞冷冻保存过程中的作用.方法将分离纯化后的大鼠胰岛细胞分为微囊化组和游离组.经冷冻保存1月后在RPMI 1640中培养过夜,分别测定两组的胰岛细胞回收率、胰岛细胞直径并进行胰岛素刺激释放试验.结果微囊组胰岛细胞回收率为98.2%±1.4%,较游离组71.6%±2.9%显著提高(P＜0.05).在高糖(16.7mmol/L)刺激下,微囊组胰岛素分泌量较游离组高(22.6±1.8mU/L vs 11.7±1.5mU/L,P＜0.05).在含有茶碱的高糖溶液中,微囊组的刺激指数为游离组的3倍.结论海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸微囊可显著提高胰岛细胞冷冻保存后的回收率,并改善胰岛细胞的功能.
作者：侯军；薛武军；田小辉；庞新路；藤焱；冯新顺 刊期： 2006年第01期
目的研究TGF-β1mRNA在皮肤创伤愈合中的表达变化规律及其在损伤时间推断中的价值.方法用实时PCR技术检测不同造创时间(生前伤15 min～2周,死后伤1～6h)小鼠皮肤切创创缘组织TGF-β1mRNA含量,并同时检测GAPDH含量对结果进行均一化.结果TGF-β1mRNA于伤后24 h显著增高(和对照组比较P＜0.01),48 h和72 h时还保持在较高水平.死后伤1 h和3 h时,TGF-β1mRNA的表达有增高的趋势,6 h则降至对照水平.结论TGF-β1mRNA在小鼠皮肤创伤后有明显的规律性表达,能作为一种代表性细胞因子参与有一定存活时间(6 h以上)的生前伤损伤时间的推断.实时PCR技术能对mRNA的表达水平进行较为精确的检测,是目前损伤时间推断研究中用于细胞因子定性和定量研究的有效方法.
作者：李学锋；王慧君；罗红 刊期： 2006年第01期
目的报道动脉化静脉皮瓣在修复手部软组织缺损中的临床应用.方法选取前臂远端及足背、趾蹼处静脉皮瓣用于修复手指及手背皮肤软组织缺损52例.结果其中50例皮瓣存活.其余2例皮瓣周缘皮肤0.5 cm宽坏死,约3周脱痂后,创面愈合.结论用动脉化静脉皮瓣修复手指及手背软组织缺损是一种比较适宜的术式选择.
作者：谢广中；李敬矿；陆晓强；王光耀；黄潮桐 刊期： 2006年第01期
目的观察新型合成三肽[Arg(NO3)-Lys(OCH3)-Arg(NO3)]对巨噬细胞株(RAW264.7)左旋-精氨酸/一氧化氮(L-Arg/NO)途径的影响.方法培养的巨噬细胞(培养液中含L-Arg 0.5 mmol/L)加入脂多糖(LPS,1μg/L)随机分为3组(每组n=6),分别加入双蒸水、三肽(1×10-4mol/L)、NG甲基-L-精氨酸(L-NMMA,1×10 -4 mol/L),对照组只含L-Arg(n=6),作用24 h后,检测亚硝酸盐(NO2-)、3H-L-Arg转运量;培养的巨噬细胞[培养液中含L-Arg(0～2 mmol/L)]加入LPS(1μ/L)24 h后,检测NO2-;培养的巨噬细胞(培养液中含L-Arg 0.5mmol/L)加入LPS(1μg/L)后分别加三肽[(0～10)×10-4mol/L]24 h后,检测NO2-、3H-L-Arg转运量.结果LPS刺激细胞产生NO的量和L-Arg率转运分别为非刺激组的50倍和2.7倍,三肽(1×10-4mol/L)即可明显降低NO的生成及抑制L-Arg的转运(分别降低71%、67%),较L-NMMA(1×10.mol/L)作用要强(P＜0.05);NO的生成依赖于细胞外L-Arg,并成浓度依赖性,其米氏常数(Km):(0.162±0.015)mmol/L、大转运速率(Vmax):(91.2±2.3)μmol/(24 h·106cells);三肽成浓度依赖性的降低细胞L-Arg转运和NO的生成,半数有效抑制剂量(EC50)分别为0.21×10-4mol/L、1.27×10-4mol/L.结论LPS作用于巨噬细胞引起L-Arg转运增加;三肽通过抑制细胞L-Arg转运及与L-Arg竞争性结合一氧化氮合酶作用位点,影响NO的生成.
作者：王辉清；吴赛珠；阮云军；程宇宁；孙飞；容志毅；银孟卓 刊期： 2006年第01期
目的应用siRNA沉默HeLa细胞MAPKP42,研究其对细胞存活的影响.方法体外合成靶向MAPK p42的siRNA-1和siRNA-2,并用脂质体转染HeLa细胞,Western印迹法和免疫组织化学法检测p42MAPK的表达;电镜观察,TUNEL法测定细胞凋亡,Annexin-PI法测定不同凋亡时期细胞的分布.结果siRNA-1和siRNA-2均可使HeLa细胞MAPKp42沉默,使p42MAPK表达下调,与阴性对照组相比分别降低2.5倍和3.2倍.电镜观察证实,siRNA-1和siRNA-2转染组部分细胞丧失表面微绒毛,细胞内空泡增加,细胞核染色质边集.处理组HeLa细胞早期凋亡率显著增加,其中siRNA-1组晚期凋亡率也明显增加.结论siRNA介导的MAPKp42沉默可以诱导HeLa细胞凋亡.
作者：黄辰；刘利英；宋土生；倪磊；宋丽萍；司履生 刊期： 2006年第01期
目的研究HPV16 E5蛋白的生物学特性及其细胞转化机制,对HPV16 E5蛋白原核和真核表达质粒进行构建、表达和鉴定.方法以临床确诊的HPV16感染患者子宫颈细胞DNA为模板,采用PCR方法扩增HPV16 E5基因,经BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后插入相同酶切的pET32a(+)载体,转染JM109感受态细胞,并进行阳性克隆筛选.经IPTG对重组质粒进行蛋白诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting检测目标蛋白表达情况.将BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切pET32(+)/E5质粒后取得的E5全基因片段转入pcDNA3.1(+)空质粒,构建pcDNA3.1(+)/E5真核表达质粒并对NIH3T3细胞进行转染,后用G418进行稳定表达株的筛选,并采用RT-PCR鉴定细胞内HPV16E5基因表达情况.结果成功构建了原核表达质粒pET32/E5,在1 mmol/LIPTG、28℃诱导条件下BL21(DE3)菌体中HPV16 E5-TRX融合蛋白占菌体总蛋白的10%左右.真核表达质粒pcDNA3.1(+)/E5在成功转染NIH3T3细胞后于250μg/ml G418浓度时筛选21d得到了E5基因稳定表达株,RT-PCR产物测序得到了HPV16 E5基因全序列.结论成功构建了pET32/E5原核和pcDNA3.1(+)/E5真核表达质粒,HPV16E5蛋白在大肠杆菌和NIH3T3细胞中的稳定表达,这些结果为进一步深入研究HPV16 E5蛋白的生物学特性及其致细胞转化的作用奠定了坚实基础.
作者：施桥发；魏晓丽；李虹；王保宁；张卫东；蒋忠华；曹康；李明远 刊期： 2006年第01期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
