谭科；范义湘；缪景霞；吕成伟；严晓；罗荣城
目的通过与化学发光法比较,了解双色红外荧光技术在目标蛋白磷酸化检测中的优势.方法分别取内毒素休克小鼠不同时间肺组织,制备组织匀浆蛋白样品.用SDS-PAGE电泳分离后转膜,将膜分别与磷酸化的或/和总的p42/44 MAPK抗体孵育,二抗用耦联有Alexa Fluor 680和IRDye 800的荧光抗体或辣根过氧化物酶抗体,通过双色红外荧光系统和化学发光法进行蛋白质磷酸化检测.结果红外荧光检测技术和化学发光检测结果均显示内毒素处理后小鼠肺组织p42/44 MAPK磷酸化水平发生了改变,1 h高,12 h以后逐渐恢复到接近正常水平.两种方法检测结果显示了较好的一致性,相比之下双色红外荧光技术具有更高的灵敏度、操作方便、节省时间及可以同时检测两种蛋白等优点.结论双色红外荧光技术在蛋白磷酸化的检测方面具有较好的应用前景.
作者：刘靖华；唐靖；蓝兴国；刘亚伟；李志杰；陈芳；邓鹏；姜勇 刊期： 2006年第02期
目的研究131I标记的rituximab对CD20高表达的B细胞淋巴瘤细胞的生物学效应,为放射免疫导向治疗提供实验依据.方法IODO-GEN法将131I标记于抗CD20单抗rituximab,用Annexin V-FITC/PI双染法检测131I-rituximab对Raji细胞的诱导凋亡作用,PI染色法检测细胞周期分布.结果Annexin V-FITC/PI双染法检测凋亡率:131I-rituximab组凋亡率为51.99%,1311I组为42.71%,rituximab组为29.42%,对照组为26.17%.对照组和rituximab组凋亡率明显低于131I组和131I-rituximab组(P＜0.05).PI染色法对比各组的凋亡率(亚二倍体峰):131I-rituximab组细胞凋亡率为4.32%,131I组为1.47%,rituximab组为1.39%,对照组仅0.37%,131I-rituximab组凋亡率明显高于其他各组(p＜0.05).131I-rituximab组Raji细胞周期发生变化,细胞大部分被阻滞于G1/G2期.结论131I-rituximab能够调控Raji细胞的细胞周期并诱导其凋亡,从而抑制Raji细胞增殖.
作者：魏莉；罗荣城；张军一；严晓；方永鑫；费丽华 刊期： 2006年第02期
目的应用动态比浊法鲎实验定量测定血液透析滤过液中的细菌内毒素含量.方法对血液透析滤过液中定量添加标准内毒素进行干扰预试验,将血液透析滤过液原液及稀释成5、10、20倍液,定量添加标准内毒素,其回收率分别为58.17%、106.7%、99.00%和98.79%;从中筛选出佳的稀释倍数为10倍,进行3个批号血液透析滤过液(040408、040511、040527)正式干扰试验,血液透析滤过液中定量添加标准内毒素,其回收率分别为76.32%、99.00%和96.24%.结果标准内毒素使用1.00、0.125、0.0156Eu/ml,将血液透析滤过液稀释成10倍,滤过液中定量添加标准内毒素,回收率均为50%～200%,认为血液透析滤过液对试验无干扰作用,可用于样品检查.结论动态比浊法可以测定血液透析滤过液的细菌内毒素含量.
作者：劳海燕；林秋晓；杨敏；梁馨苓；史伟；李慧；冯聚锦 刊期： 2006年第02期
目的探讨Herceptin与阿霉素序贯应用对乳腺癌细胞株的杀伤效应.方法应用Herceptin、阿霉素及二者联合序贯应用于对数生长期的乳腺癌BT-474细胞,光学显微镜下观察各组细胞用药前后细胞形态变化,流式细胞仪检测各组细胞HER-2/neu的表达率、HER-2/neu表达的平均荧光强度及各组细胞的死亡率.结果光学显微镜下各用药组细胞均有不同程度的变暗、细胞碎片增多、细胞外形部分不规则、细胞内颗粒增多;流式细胞仪检测表明各组间细胞HER-2/neu表达率无显著性差异,但各用药组细胞HER-2/neu表达的平均荧光强度明显低于对照组(P＜0.05);流式细胞仪检测表明各用药组细胞的死亡率明显高于对照组,Herceptin后续应用阿霉素组细胞的死亡率明显高于阿霉素后续应用Herceptin组(P＜0.05).结论应用Herceptin后再辅以阿霉素化疗,对乳腺癌细胞杀伤效应强,为临床乳腺癌生物化疗的序贯应用模式提供了实验依据.
作者：谭科；范义湘；缪景霞；吕成伟；严晓；罗荣城 刊期： 2006年第02期
目的观察补阳还五汤对缺血性脑卒后遗症大鼠神经增殖作用的影响.方法采用机械开颅电凝法阻断大脑中动脉24 h后,用随机电脉冲刺激仪每天刺激2 h,连续刺激20 d,造成大鼠缺血性脑卒后遗症模型.治疗组在造模结束后灌服补阳还五汤水煎液,连续给药15 d.给药结束后处死大鼠,并取出大脑,处死前均腹腔注射5-溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU),用免疫组织化学方法检测大鼠脑组织中BrdU的表达.结果与模型组相比,补阳还五汤治疗组BrdU阳性细胞数量显著增多.结论补阳还五汤对缺血性脑卒后遗症大鼠神经增殖具有促进作用.
作者：谭县辉；曲宏达；彭康；陈育尧；佟丽；沈剑刚；朱传武 刊期： 2006年第02期
目的探讨人表皮生长因子受体2(Her-2)、表皮生长因子受体(EGFR)、雌激素调节蛋白(PS-2)、雌激素受体(ER)在乳腺癌中的表达及其临床意义.方法用免疫组织化学方法检测108例乳腺癌患者Her-2、EGFR、PS-2、ER的表达情况,并进行比较.结果Her-2、EGFR、PS-2、ER表达阳性者分别为40例(37.0%)、44例(40.7%)、62例(57.4%)和58例(53.7%).Her-2的表达与EGFR无相关性(P＞0.05),与PS-2呈负相关(P＜0.05),与ER呈负相关(P＜0.05).Her-2、EGFR、PS-2、ER表达与乳腺癌的组织学分级相关(P＜0.05).Her-2、EGFR、ER表达与淋巴结转移相关(P＜0.05),Her-2、EGFR、PS-2、ER与乳腺癌的病理学类型、患者年龄及肿瘤大小无关(P＞0.05).结论乳腺癌中Her-2、EGFR表达提示患者预后不良;PS-2、ER表达提示患者预后良好;Her-2、EGFR、PS-2、ER是判断乳腺癌预后的有效指标.
作者：徐蕾；白中红；许软成；闫辉；王方聚；罗荣城 刊期： 2006年第02期
目的采用RNA干扰技术(siRNA)阻断survivin基因的表达,观察其抑制胰腺癌细胞增殖及诱导胰腺癌细胞凋亡的作用.方法构建靶向survivin的siRNA质粒表达载体,采用LipofectamineTM2000转染胰腺癌细胞PC-2,采用半定量RT-PCR、免疫组化技术检测转染前后PC-2细胞survivin基因表达的变化;采用MTT法检测对PC-2细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术检测其诱导PC-2细胞凋亡的作用.结果靶向survivin的序列特异性的siRNA可以高效地抑制PC-2细胞survivin基因表达,在mRNA水平其表达抑制率为81.25%,在蛋白质水平其表达抑制率为74.24%.转染靶向survivin的siRNA质粒表达载体可以显著抑制PC-2细胞的增殖,细胞接种24、48 h后其增殖抑制率分别为28.00%和33.38%;转染后24、48 h可以诱导8.46%、7.53%的细胞凋亡.结论所构建的靶向survivin的siRNA质粒表达载体可以有效地阻断PC-2细胞survivin基因表达,阻断survivin基因表达可以显著地抑制PC-2细胞的增殖并在一定程度上诱导其凋亡,靶向survivin的siRNA在胰腺癌的基因治疗中具有一定的价值.
作者：管海涛；薛兴欢；王西京；李昂；秦兆寅 刊期： 2006年第02期
目的在原核系统中克隆、表达并纯化巢蛋白(nestin),制备特异性nestin抗体,用于研究nestin在中枢神经系统发育中的生物学特性,探索神经发育及再生规律.方法采用RT-PCR方法由人神经干细胞中获取nestin cDNA,与原核表达载体pQE30连接,构建重组载体pQE30-nestin.测序后,将重组质粒转入大肠杆菌M15,IPTG诱导表达His融合蛋白.Ni-NTA亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定.用此蛋白免疫BALB/c小鼠,获得抗血清.Western blotting、ELISA和免疫组织化学分析鉴定获取的抗血清.结果成功由人神经干细胞中克隆nestin cDNA片段.IPTG诱导重组质粒pQE30-nestin表达出一相对分子质量约25 000的His融合蛋白并被Ni-NTA成功纯化,Western blotting证明其确为nestin蛋白.动物免疫后,经Western blotting、ELISA和免疫组化鉴定,获得的抗血清可特异性结合重组nestin蛋白、发育期人及大鼠脑内的nestin蛋白.结论获得了重组人nestin蛋白,制备的抗血清不仅可识别重组nestin蛋白,亦可识别人及大鼠脑组织内的nestin蛋白.
作者：陈新林；刘勇；肖新莉；张瑾；吕海侠；张蓬勃；刘建新；赵建军 刊期： 2006年第02期
目的探讨胞二磷胆碱对大鼠局部脑缺血后空间学习和记忆能力的影响.方法实验分为正常对照组、缺血对照组和胞二磷胆碱组.线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞模型,术后2周内腹腔注射胞二磷胆碱,第15天开始采用Morris水迷宫装置评价大鼠的空间学习和记忆能力.结果脑缺血对照组大鼠在定向航行试验和空间探索试验中均表现出明显的空间认知功能的障碍,胞二磷胆碱组大鼠平均逃避潜伏期与缺血对照组比较明显缩短(P＜0.01).在空间探索试验中,胞二磷胆碱组大鼠原平台象限停留时间百分比以及穿过原平台位置次数均大于脑缺血对照组(P＜0.01).缺血对照组多采用边缘式和随机式搜索策略;正常对照组多采用直线式和趋向式搜索策略;胞二磷胆碱组采用趋向式和随机式搜索策略的频数较多.结论胞二磷胆碱可以明显改善大鼠永久性局部脑缺血后空间学习和记忆能力.
作者：赵建军；刘勇；陈新林；刘建新；田英芳；张蓬勃；康前雁；邱芬 刊期： 2006年第02期
目的探讨断指再植术后注射神经生长因子对感觉恢复的作用.方法2000～2004年48例断指再植成活者,其中24例常规术后肌肉注射神经生长因子,另24例未给予任何神经生长药物作为对照组.两组术后平均随访8.5个月,均以术后12周随访时测试患指指端的两点分辨觉为统计数据.结果神经生长因子注射组两点分辨觉的距离明显小于对照组(P＜0.01).结论再植指术后给予神经生长因子有助于患者感觉功能的恢复.
作者：赵广跃；闫铭；杨旻；孟国林；朱庆生 刊期： 2006年第02期
目的探讨难诊性肺结核CT引导下经皮肺穿刺活检(PCNB)的临床应用价值.方法回顾分析了2003年2月至2004年10月在我科行PCNB诊断的15例肺结核病人.活检前全部病例均经其他方法检查而无法明确诊断,其中10例痰涂片、12例纤支镜、13例胸片、15例CT扫描、1例PET-CT检查.结果痰涂片、纤支镜检查结果均为阴性;胸片、CT及PET-CT示肺内和/或纵隔肿物;15例肺穿刺活检物送病理组织学检查确诊为肺结核,穿刺术后发生气胸3例、咳血1例.结论对影像学和其他检查方法难于确诊的肺结核病例,PCNB是一种安全有效的确诊手段.
作者：李基根；陈龙华；吴德华 刊期： 2006年第02期
目的检测及克隆小鼠B淋巴瘤A20细胞株mCD99L2基因,构建真核表达载体.方法设计寡核苷酸探针,应用原位分子杂交方法检测A20细胞中mCD99L2基因的mRNA表达,RT-PCR法从A20细胞总RNA中获取mCD99L2基因含编码区全长cDNA,克隆入T载体,筛选阳性克隆、酶切鉴定并经序列测定;设计含酶切位点的PCR引物,PCR获取含mCD99L2基因编码区片段,用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切取所需目的片段,利用分子克隆技术与pcDNA3.1/MycHis C(+)质粒重组,对产生的重组子进行PCR、双酶切鉴定,并经过测序证实.结果原位杂交方法检测A20细胞中mCD99L2基因mRNA呈阳性表达;RT-PCR法成功获得mCD99L2基因编码区全长cDNA序列,DNA序列测序结果与GenBank提供的已知序列(NM_138309)比较,结果完全一致;重组质粒pcDNA3.1-mCD99L2中的插入片段经DNA测序后与GenBank中mD99L2基因相应序列比较,100%同源.结论小鼠B淋巴瘤A20细胞株存在mCD99L2基因,采用RT-PCR和T-A技术克隆了A20细胞的mCD99L2基因,成功构建了pcDNA3.1-mCD99L2真核表达载体,为下一步探索mCD99L2基因在小鼠B淋巴瘤A20细胞株中的功能奠定了实验基础.
作者：沈丽佳；方唯意；谢思明；何滢；蒋会勇；赵彤 刊期： 2006年第02期
1临床资料患者,男性,20岁,体质量55kg.2005-10-01因双肺侵润型肺结核入院行抗结核治疗.2005-11-10出现右下肢肿胀,B超示右下肢浅、深静脉血栓形成.予尿激酶、肝素溶栓、抗凝治疗,无好转.2005-12-09突然出现晕厥倒在地上,主诉胸痛、呼吸困难,伴有咯血、口唇轻度紫绀和颈静脉怒张,随即出现血压下降(70/40 mmhg),心率140次/min,室性早搏呈二联律.
作者：肖祥胜；林博云；章跃民；谭松涛；黄旭杰 刊期： 2006年第02期
目的应用限制性显示(RD)PCR技术筛选细胞松弛素B(CytochalasinB,CB)诱导K562细胞脱核前后的差异基因,探讨CB诱导细胞脱核的分子机制.方法用CB(终浓度为10μg/ml)处理K562细胞24 h,分别提取对照组和处理组细胞总RNA,将两组等量的细胞总RNA纯化为mRNA,反转录为cDNA,利用RD-PCR技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、筛选CB处理前后差异表达的基因.对筛选出的差异表达基因进行克隆、测序,在GenBank检索进行序列同源性分析.结果筛选及克隆了7个差异表达基因,其中水通道蛋白1(AQP1)基因经反转录PCR验证在CB诱导脱核的K562细胞中表达上调.结论AQP1基因在CB诱导K562细胞脱核过程中特异性高表达,提示其可能与细胞脱核及增殖抑制密切相关.
作者：危敏；马文丽；宋艳斌；毛向明；李凌；郑文岭 刊期： 2006年第02期
目的明确是否存在症状轻微或无症状SARS冠状病毒感染者.方法以SARS冠状病毒全病毒裂解液作抗原,利用ELISA技术检测血清中SARS冠状病毒抗体,调查具有明显传染特征和呼吸道症状的SARS患者以及无明显临床症状表现的医务人员血清中SARS冠状病毒抗体的存在情况.结果共调查SARS患者19例,血清中抗SARS冠状病毒抗体全部阳性;因工作需要与SARS患者或患者的血、尿、粪、痰等排泄物有接触的医务人员共200名,发现血清中抗SARS冠状病毒抗体阳性20例.结论在部分无症状医务人员血清中存在低水平的抗SARS冠状病毒IgG抗体,SARS冠状病毒感染可仅引起轻微的症状,甚至可无临床表现.
作者：司建华；谭家驹；杨光；汤丽霞 刊期： 2006年第02期
目的观察比较等效剂量舒芬太尼和芬太尼用于开胸术后病人自控静脉镇痛(PCIA)的效果及其不良反应.方法选择ASAⅠ～Ⅱ级、年龄20～60岁择期全麻下行开胸手术患者60例,随机分为芬太尼组(F组)和舒芬太尼组(S组),每组30例.全麻诱导后双腔管气管内插管,两组术中吸入异氟烷、间断肌肉注射罗库溴铵维持全麻.病人清醒拔除气管导管后接韩国奥美2300电子镇痛泵行PCIA.F组:芬太尼2 mg、咪唑安定10 mg、生理盐水稀释至200 ml;S组:舒芬太尼0.2 mg、咪唑安定10 mg、生理盐水稀释至200 m1.背景剂量2.5 ml/h,指令剂量2.5 ml/次,锁定时间15 min.所有病人术后鼻导管吸氧2～3 L/min,分别记录术后24、48 h的疼痛[视觉模拟评分(VAS)法]、镇静、恶心和呕吐评分,记录脉搏氧饱和度、心率、呼吸频率、平均动脉压和累计镇痛药消耗量.结果S组术后24、48 h镇痛药耗量和VAS评分均低于F组,其中术后48 h VAS评分有显著性差异(P＜0.05);S组术后24 h镇静优于F组(P＜0.05);S组术后48 h恶心、呕吐者明显少于F组(P＜0.05);两组术后48 h内无一例呼吸抑制(脉搏氧饱和度持续低于90%者)发生.两组术后24、48 h脉搏氧饱和度、心率、呼吸频率和平均动脉压均无显著差异(P＞0.05).结论等效剂量的舒芬太尼用于开胸术后PCIA,镇痛、镇静效果优于芬太尼,而恶心、呕吐发生率较芬太尼低,是开胸术后更为安全、有效的镇痛方法.
作者：林春水；卢刚；阮骆阳；古妙宁 刊期： 2006年第02期
目的探讨逆行交锁髓内钉治疗股骨远端骨折的疗效与特点.方法2003年1月～2005年1月间对3l例股骨远端骨折患者采用逆行交锁髓内钉进行手术治疗,术后持续被动运动功能锻炼.结果所有病例进行半年以上的随访,骨折愈合良好,膝关节功能较满意.结论逆行交锁髓内钉治疗股骨远端骨折结合膝关节持续被动运动功能锻炼可以获得满意疗效.
作者：魏巍；李健；庄岩；张堃；王浩；赵恺 刊期： 2006年第02期
NMDA受体的激活在缺血性脑损伤神经元死亡中起重要作用.本研究利用NMDA诱导大鼠培养海马神经元凋亡,模拟建立缺血性脑损伤的细胞模型,观察了3种氯通道阻断剂对神经元凋亡的保护作用.离体培养12 d的SD大鼠海马神经元,在NMDA处理前和处理后使用氯通道阻断剂,对神经元的存活率影响不同,仅NMDA处理前给药才有保护作用.SITS对NMDA诱导神经元凋亡的保护作用强并有浓度依赖性,DIDS次之,NPPB没有明显的保护作用.结果表明,SITS和DIDS可阻断NMDA的毒性效应,作用机制可能与NMDA的效应和氯通道活动均被阻断有关.
作者：常全忠；胡德辉；陈明；王颖；高天明 刊期： 2006年第02期
目的评价柴胡有效成分中柴胡总皂甙对戊四氮(PTZ)慢性点燃大鼠痫性发作及脑电图的影响.方法将48只健康SD大鼠随机等分为6组,即空白组、生理盐水组、丙戊酸钠(VPA)组和柴胡总皂甙高、中、低3种剂量组,除空白组不做处理外,其他组采用腹腔注射PTZ进行慢性点燃造模,造模同时给予以上不同处理因素,连续4周,在此期间记录大鼠痫性发作级别及次数,后描记大鼠脑电图.结果柴胡总皂甙高、中、低3个剂量组在实验2周时可以降低大鼠的痫性发作率,其中以高剂量组显著(P＜0.05),柴胡皂甙高剂量组应用4周时能明显降低PTZ慢性点燃大鼠的点燃率(P＜0.05),并明显降低痫性发作级别(P＜0.01);各组间脑电图也存在一定差异.结论柴胡总皂甙可拮抗PTZ慢性点燃大鼠的痫性发作,并有一定的对抗PTZ慢性点燃作用.
作者：谢炜；鲍勇；于礼建；侯光男；谭红香 刊期： 2006年第02期
目的应用CT技术测量股骨假体和胫骨假体旋转角度,探讨假体旋转性和髌股关节并发症之间的关系.方法以股骨上髁轴和胫骨结节为参考点,对股骨假体和胫骨假体的旋转性进行测量,并比较了20例功能良好膝关节和30例产生髌股关节并发症的膝关节的假体旋转性.结果髌股关节并发症组的假体(股骨+胫骨)存在过度内旋,其内旋度数和值与髌股关节并发症的严重程度成正相关.轻度假体内旋(和值1°～4°)导致髌骨倾斜和轨迹外移;中度假体内旋(和值3°～8°)导致髌骨半脱位;重度假体内旋(和值7°～17°)导致早期的髌骨脱位和晚期的髌骨置换失败.功能良好组的假体旋转度和值为10°～0°外旋.结论在轴向力线正常时,假体的内旋放置可能是导致髌股关节并发症的主要原因;利用CT扫描图像,行假体旋转度测量可用于术中以指导手术,术后也可以作为是否需要翻修的评价指标.
作者：罗吉伟；余存泰；覃健；徐达传 刊期： 2006年第02期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
